蛋白质测定实验报告
蛋白质结构测定实验报告
一、实验目的1. 理解蛋白质结构测定的基本原理和方法。
2. 掌握蛋白质一级结构和三维结构的测定方法。
3. 了解蛋白质结构测定在生物学研究中的应用。
二、实验原理蛋白质是生命活动中的重要分子，其结构决定了其功能。
蛋白质结构测定是研究蛋白质结构和功能的重要手段。
蛋白质结构测定主要包括一级结构测定和三维结构测定。
1. 蛋白质一级结构测定：蛋白质一级结构是指氨基酸的排列顺序。
测定蛋白质一级结构的方法有化学裂解法、蛋白酶水解法、高效液相色谱法等。
2. 蛋白质三维结构测定：蛋白质三维结构是指蛋白质分子在空间中的形态。
测定蛋白质三维结构的方法有X射线晶体衍射法、核磁共振法、冷冻电镜法等。
三、实验材料1. 蛋白质样品：人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）等。
2. 试剂：硫酸铵、氯化钠、丙酮、乙腈等。
3. 仪器：高效液相色谱仪、核磁共振仪、X射线晶体衍射仪、冷冻电镜等。
四、实验步骤1. 蛋白质一级结构测定（1）将蛋白质样品进行化学裂解，得到多肽片段。
（2）使用高效液相色谱仪对多肽片段进行分离，得到单个多肽。
（3）对单个多肽进行质谱分析，得到氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定（1）将蛋白质样品进行X射线晶体衍射实验，得到蛋白质晶体。
（2）对蛋白质晶体进行X射线衍射，得到衍射图谱。
（3）根据衍射图谱，计算蛋白质分子的三维结构。
3. 蛋白质结构分析（1）使用核磁共振仪对蛋白质样品进行NMR实验，得到蛋白质分子的三维结构。
（2）将NMR实验结果与X射线晶体衍射结果进行对比，验证蛋白质结构。
五、实验结果与分析1. 蛋白质一级结构测定通过高效液相色谱仪和质谱分析，成功测定了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的氨基酸序列。
2. 蛋白质三维结构测定通过X射线晶体衍射实验，成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
3. 蛋白质结构分析通过NMR实验，成功得到了人血清白蛋白和牛血清白蛋白的三维结构。
与X射线晶体衍射结果进行对比，验证了蛋白质结构。
蛋白物质鉴定实验报告
一、实验目的1. 掌握蛋白质的鉴定方法。
2. 学会使用双缩脲试剂进行蛋白质鉴定实验。
3. 了解蛋白质鉴定实验的原理及注意事项。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸组成的大分子化合物，具有复杂的结构和多种生物学功能。
蛋白质的鉴定主要基于其特有的氨基酸序列和空间结构。
本实验采用双缩脲试剂鉴定蛋白质，原理如下：在碱性条件下，蛋白质分子中的肽键与Cu2+离子发生反应，形成紫红色的络合物。
络合物的颜色深浅与蛋白质的浓度成正比，从而实现蛋白质的定量分析。
三、实验材料1. 蛋白质样品：鸡蛋清、牛奶、豆奶等。
2. 双缩脲试剂：A液（含0.1g/mL NaOH溶液）、B液（含0.01g/mL CuSO4溶液）。
3. pH试纸、试管、移液器、滴管、白瓷板等。
四、实验步骤1. 准备样品：分别取鸡蛋清、牛奶、豆奶等蛋白质样品，用蒸馏水稀释至适当浓度。
2. 检测蛋白质含量：取3支试管，分别加入0.5mL鸡蛋清、牛奶、豆奶样品，再加入1mL蒸馏水。
3. 添加双缩脲试剂：向每支试管中加入1mL A液，摇匀。
4. 观察颜色变化：静置5分钟，观察溶液颜色变化。
5. 比色：取3支试管，分别加入1mL A液、B液，摇匀。
将上述样品试管与比色管进行比对，观察颜色深浅。
五、实验结果与分析1. 鸡蛋清、牛奶、豆奶样品在加入双缩脲试剂后，溶液颜色均呈紫红色，说明蛋白质含量较高。
2. 比色结果显示，鸡蛋清样品颜色最深，牛奶次之，豆奶最浅。
这可能是因为鸡蛋清中的蛋白质含量最高，牛奶次之，豆奶最低。
六、实验讨论1. 本实验中，双缩脲试剂对蛋白质的鉴定具有较高的灵敏度，能够有效区分不同蛋白质样品。
2. 实验过程中，应注意pH值对蛋白质鉴定的影响。
本实验采用碱性条件，有利于蛋白质与Cu2+离子发生反应。
3. 实验结果受蛋白质样品浓度、试剂比例等因素影响。
在实验过程中，应严格控制这些因素，以确保实验结果的准确性。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了蛋白质的鉴定方法，学会了使用双缩脲试剂进行蛋白质鉴定实验。
蛋白质检验实验报告
一、实验目的1. 掌握蛋白质的定性检验方法。
2. 学习使用双缩脲试剂进行蛋白质的定量分析。
3. 了解蛋白质在生物体中的重要功能及其检测的意义。
二、实验原理蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的大分子化合物，具有复杂的空间结构和多样的生物活性。
蛋白质的检验方法主要包括定性检验和定量分析。
1. 定性检验：通过观察蛋白质与特定试剂反应产生的颜色变化，判断蛋白质的存在与否。
2. 定量分析：利用双缩脲试剂与蛋白质中的肽键反应，生成紫色络合物，根据颜色深浅测定蛋白质的含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：鸡蛋清、牛奶、豆浆、大豆粉、玉米粉、牛肉、鸡肉、猪肉、鱼、虾、蛋壳、鱼鳞、羽毛等。
2. 试剂：双缩脲试剂A（硫酸铜溶液）、双缩脲试剂B（氢氧化钠溶液）、无水乙醇、蒸馏水、标准蛋白质溶液（如牛血清白蛋白）等。
四、实验步骤1. 蛋白质定性检验- 取少量待测样品，加入双缩脲试剂A，振荡均匀。
- 加入双缩脲试剂B，振荡均匀。
- 观察溶液颜色变化，与标准蛋白质溶液颜色对比，判断蛋白质的存在与否。
2. 蛋白质定量分析- 准备一系列已知浓度的标准蛋白质溶液。
- 分别吸取一定量的标准蛋白质溶液和待测样品，加入双缩脲试剂A和B。
- 在相同条件下，测定溶液的吸光度。
- 以标准蛋白质溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
- 根据待测样品的吸光度，从标准曲线中查得蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 蛋白质定性检验结果- 鸡蛋清、牛奶、豆浆、大豆粉、牛肉、鸡肉、猪肉、鱼、虾等样品均呈阳性反应，说明这些样品中含有蛋白质。
- 蛋壳、鱼鳞、羽毛等样品呈阴性反应，说明这些样品中蛋白质含量较低或不含蛋白质。
2. 蛋白质定量分析结果- 通过绘制标准曲线，可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。
六、实验讨论1. 本实验采用双缩脲试剂进行蛋白质的检验，操作简便，结果可靠。
2. 蛋白质在生物体中具有重要的生理功能，如构成细胞结构、运输营养物质、调节生理活动等。
蛋白质测定实验报告
蛋白质测定实验报告蛋白质测定实验报告引言：蛋白质是生命体内最基本的有机物之一，具有重要的生物学功能。
蛋白质测定实验是生物化学实验中常见的一种实验方法，通过测定样品中的蛋白质含量，可以了解生物体的营养状况、疾病发展以及药物疗效等方面的信息。
本实验旨在通过比色法测定蛋白质的浓度，并探究实验中可能遇到的问题和解决方法。
实验方法：1. 样品制备：将待测样品制备成适宜的浓度，通常需要进行稀释或浓缩处理。
2. 蛋白质与试剂反应：将样品与试剂按照一定比例混合，使蛋白质与试剂发生特定的反应。
常用的试剂包括伯胺蓝、比酚等。
3. 光度测定：将反应后的样品溶液置于分光光度计中，通过测量吸光度来间接测定蛋白质的浓度。
4. 标准曲线绘制：根据已知浓度的标准品，测定各标准品的吸光度，并将吸光度与浓度绘制成标准曲线。
5. 测定样品浓度：根据标准曲线，通过测定样品的吸光度，反推出样品中蛋白质的浓度。
实验结果与讨论：在本次实验中，我们使用了伯胺蓝作为试剂，制备了一系列不同浓度的标准品，并通过测定其吸光度绘制了标准曲线。
接下来，我们分别测定了三个未知样品的吸光度，并利用标准曲线计算出其蛋白质浓度。
实验中，我们发现了一些问题。
首先，样品的制备过程中，可能会出现蛋白质的损失或者污染，这会导致最终测定结果的误差。
为了解决这个问题，我们可以在制备过程中加入保护剂，如酶抑制剂或蛋白酶抑制剂，来减少蛋白质的降解。
其次，比色法本身对样品的颜色敏感，如果样品本身的颜色较深，会干扰吸光度的测定。
为了解决这个问题，可以通过稀释样品或者使用其他试剂来减少干扰。
在实验结果的讨论中，我们发现样品A的蛋白质浓度较高，样品B的蛋白质浓度较低，而样品C的蛋白质浓度与标准品相近。
这些结果提示我们样品A可能是一种富含蛋白质的食品，样品B可能是一种低蛋白质的食品，而样品C可能是一种未知的食品，需要进一步的研究来确定其成分。
结论：通过本次蛋白质测定实验，我们成功地测定了三个样品中蛋白质的浓度，并对实验中可能遇到的问题提出了解决方法。
蛋白质的定量测定实验报告
蛋白质的定量测定实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过比色法和BCA法两种方法，对蛋白质的定量测定进行实验，以便了解蛋白质含量的测定原理和方法。
二、实验原理。
1. 比色法，比色法是通过测定蛋白质与试剂发生的化学反应后产生的色素溶液的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
常用的试剂有布拉德福试剂和Lowry试剂。
2. BCA法，BCA法是通过测定蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生的紫色螯合物的吸光度，从而计算出蛋白质的含量。
三、实验材料和仪器。
1. 实验材料，蛋白质标准品、蛋白质样品、比色法试剂（布拉德福试剂或Lowry试剂）、BCA试剂、离心管、比色皿等。
2. 实验仪器，分光光度计、离心机、移液器、比色皿架等。
四、实验步骤。
1. 比色法实验步骤：a. 取适量蛋白质标准品和待测样品，分别加入布拉德福试剂或Lowry试剂。
b. 在室温下反应一定时间后，用分光光度计分别测定吸光度。
c. 根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。
2. BCA法实验步骤：a. 取适量蛋白质标准品和待测样品，分别加入BCA试剂。
b. 在室温下反应一定时间后，用分光光度计测定吸光度。
c. 根据标准曲线，计算出待测样品中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析。
通过比色法和BCA法两种方法测定了蛋白质的含量，得到了相应的实验数据。
经过对实验数据的分析，可以得出蛋白质含量的定量结果。
六、实验结论。
根据实验结果，比色法和BCA法都可以用于蛋白质的定量测定，但在实际应用中需要根据具体情况选择合适的方法。
同时，实验结果也验证了蛋白质定量测定方法的准确性和可靠性。
七、实验总结。
本实验通过比色法和BCA法两种方法，对蛋白质的定量测定进行了实验，深化了对蛋白质含量测定原理和方法的理解，提高了实验操作技能和数据处理能力。
八、参考文献。
1. 《生物化学实验技术手册》。
2. Smith, P. K., et al. (1985). "Measurement of protein using bicinchoninic acid." Analytical Biochemistry 150(1): 76-85.以上就是本次蛋白质的定量测定实验报告的全部内容。
蛋白质含量测定实验报告
蛋白质含量测定实验报告
实验目的：测定样品中蛋白质的含量。
实验原理：
蛋白质是生物体中重要的营养成分，其含量的测定对于食品、生物化学研究等都具有重要意义。
本实验采用双氧水法测定蛋白质的含量。
双氧水法原理是将双氧水与被测物中的蛋白质发生氧化反应，生成到氨基酸的过氧化氢，过氧化氢再与钼酸铵生成深蓝色化合物。
根据形成的深蓝色化合物的吸光度与蛋白质的含量成正比关系，可以通过比色法测定样品中蛋白质的含量。
实验步骤：
1. 将待测样品和标准蛋白质溶液分别取1ml到不同的试管中。
2. 加入4ml双氧水试剂，混匀。
3. 在室温下放置20分钟。
4. 加入适量的硫酸试剂，混匀。
5. 在60℃水浴锅中恒温加热10分钟。
6. 冷却至室温。
7. 分别将标准蛋白质溶液和待测样品溶液吸取1ml到比色皿中。
8. 用比色皿中的溶液分别测定吸光度，以比色皿中双氧水试剂为参比。
9. 根据标准曲线计算待测样品中蛋白质的含量。
实验结果：
根据吸光度测定值和标准曲线得到待测样品中蛋白质的含量为X mg/ml。
实验讨论：
蛋白质的含量测定是一项常见的实验，通过双氧水法可以快速准确地测定样品中蛋白质的含量。
在实验过程中，应注意操作的准确性和实验条件的控制，避免测定误差的产生。
此外，标准曲线的制备和测定结果的分析也是关键步骤，应进行仔细的处理和验证。
实验结论：
经过测定，得到待测样品中蛋白质的含量为X mg/ml。
蛋白质含量测定实验报告
一、实验目的1. 理解并掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和操作步骤。
2. 学习使用分光光度计进行比色分析。
3. 通过实验，掌握蛋白质含量测定的实际操作，提高实验技能。
二、实验原理考马斯亮蓝法是一种快速、简便的蛋白质定量方法。
该法基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合，蛋白质含量与染料结合程度呈线性关系。
通过测定溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的含量。
实验原理：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与考马斯亮蓝G-250染料发生结合，形成有色的复合物。
该复合物在特定波长下有特征性吸收峰，其吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
三、实验材料1. 蛋白质标准品（如牛血清白蛋白）。
2. 考马斯亮蓝G-250染料。
3. 6.0mol/L NaOH溶液。
4. 双蒸水。
5. 分光光度计。
6. 试管、移液器、吸管等实验器材。
四、实验步骤1. 标准曲线制作：将不同浓度的蛋白质标准品配制成溶液，分别加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
实验结果显示，待测样品中的蛋白质含量为XX g/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染和误差。
2. 在制作标准曲线时，应选择合适的浓度范围，保证线性关系良好。
3. 待测样品的稀释倍数应根据实际浓度选择，以保证在检测范围内。
4. 在测定吸光度时，应注意仪器校准和操作，避免误差。
七、实验总结本次实验通过考马斯亮蓝法测定了待测样品中的蛋白质含量，实验结果准确可靠。
蛋白质测定实验报告
蛋白质测定方法——化学报告蛋白质的检测酚试剂法灵敏度较高20~250mg 费时蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：1 材料与方法1.1 仪器材料(1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。
(2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0. 050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。
1.2 实验方法(1)凯氏定氮法测定蛋白质含量将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。
为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。
消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。
每个样品做三次重复测定,取平均值。
(2)紫外吸收法测定蛋白质含量蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。
此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。
利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。
紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。
低浓度的盐,例如,生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定,特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。
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蛋白质测定方法——化学报告
蛋白质的检测
酚试剂法灵敏度较高
20~250mg 费时蛋白质在碱性溶
液中其肽键与
Cu2+螯合，形成
蛋白质一铜复合
物，此复合物使
酚试剂的磷钼酸
还原，产生蓝色
化合物
酚类、柠檬
酸、硫酸铵、
tris缓冲液、
甘氨酸、糖
类、甘油等均
有干扰作用
由上表可大致了解五种检测蛋白质的方法，下面以实验的形式进行详细阐述：
1 材料与方法
1.1 仪器材料
(1)仪器:凯氏定氮仪、紫外分光光度计、可见光分光光度计、工作离心机、布氏漏斗、抽滤泵。
(2)试剂及原材料:牛奶、酸奶、豆浆、0.12mol/LpH=4. 7醋酸- 醋酸钠缓冲液、乙醇-乙醚等体积混合液、浓H2SO4 、40%氢氧化钠、30%过氧化氢、2%硼酸溶液、0.
050molPL标准盐酸溶液、硫酸钾- 硫酸铜接触剂、混合指示剂、标准蛋白溶液、双缩脲试剂、考马斯亮蓝G- 250试剂。
1.2 实验方法
(1)凯氏定氮法测定蛋白质含量
将待测样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化) ,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。
为了加速消化,可以加入CuSO4 作催化剂和加入K2SO4 以提高溶液的沸点,而加入30%过氧化氢有利于消化溶液的澄清。
消化好的样品在凯氏定氮仪内经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至定量硼酸溶液中,然后用标准盐酸溶液进行滴定,记录,计算出样品含氮量。
每个样品做三次重复测定,取平均值。
(2)紫外吸收法测定蛋白质含量
蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质,吸收峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。
此外,蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。
利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,可以进行蛋白质含量的测定。
紫外吸收法简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。
低浓度的盐,例如,
生化制备中常用的(NH4)2SO4 等和大多数缓冲液不干扰测定,特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测,因为此时只需测定蛋白质浓度的变化,而不需知道其绝对值。
此法的特点是测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质较多,在用标准曲线法测定蛋白质含量时,对那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异大的蛋白质有一定的误差,故该法适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。
若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。
核酸的干扰可以通过查校正表,再进行计算的方法加以适当的校正。
但是因为不同的蛋白质和核酸的紫外吸收是不相同的,虽然经过校正,测定的结果还是存在一定的误差。
此外,进行紫外吸收法测定时,由于蛋白质吸收高峰常因pH的改变而有变化,因此要注意溶液的pH值,测定样品时的pH要与测定标准曲线的pH相一致。
取待测样品制成蛋白浓度大约在0. 1～1. 0mgPmL的蛋白质溶液,用紫外分光光度计进行比色,对照标准曲线得出样品含氮量。
每个样品做3次重复测定,取平均值。
(3)双缩脲法测定蛋白质含量
双缩脲(NH3CONHCONH3)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4 形成紫色络合物,称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键,或能够以一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
此法的优点是测定较快速,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,以及干扰物质少;主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。
取待测样品制成蛋白浓度大约在1～10mgPmL的蛋白质溶液,加双缩脲试剂染色30min,用可见光分光光度计进行比色,对照标准曲线得出样品蛋白质含量。
每个样品做3次重复测定,取平均值。
(4)考马斯亮蓝法测定蛋白质含量
由于双缩脲法(Biuret 法)存在明显的缺点和许多限制,因此1976年由Bradford建立的考马斯亮蓝法(Bradford法) ,这是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。
这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。
这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
【Bradford法的突出优点是:
a.灵敏度高。
据估计,比Lowry法约高4倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。
这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质- 染料复合物有更高的消光系数,因而光
吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大得多。
b.测定快速、简便,只需加一种试剂。
完成一个样品的测定,只需要5min左右。
由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2min即可完成,其颜色可以在1h内保持稳定,且在5
～20min之间,颜色的稳定性最好,因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。
c. 干扰物质少。
如干扰Lowry法的、离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
此法的缺点是:
a.由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作标准曲线时通常选用γ- 球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差。
b.仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干扰物质有:去污剂、TritonX- 100、十二烷基
硫酸钠(SDS)和0. 1N的NaOH。
(如同0. 1N的酸干扰Lowry法一样) 。
c.标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用Beer定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。
】
取待测样品加入考马斯亮蓝G- 250试剂放置5min后,用可见光分光光度计比色,对照标准曲线得出样品蛋白质含量。
每个样品做3次重复测定,取平均值。
2 结果与分析
2.1 实验结果
表1 样品蛋白质含量的测定结果
2.2实验结果分析
(1)凯氏定氮法可测出全部3种样品的蛋白含量,测试结果准确,只是蒸馏与吸收装置
复杂,不便于操作,实验过程所需时间较长,操作复杂。
(2)紫外吸收法无法测出牛奶、酸奶的蛋白含量,测出的豆浆蛋白含量也与实际值相差
较大,不具实际使用价值。
此方法实验过程简单,适用于测试无色样品,对于有色样品需进行预处理,排除颜色干扰后才适用于此方法。
(3)双缩脲法适用于被测的3种样品,实验操作简便迅速,但其缺点是灵敏度较低,蛋白质量须在1～20mgPmL时测定结果较准确。
因此实验前要估测被测样品的蛋白含量,把样
品稀释至蛋白浓度为1～20mgPmL。
(4)考马斯亮蓝染色法可以测出被测的全部3种样品,此方法快速、灵敏,但只有作微量蛋白测定时的结果才准确,因此在实验前应将样品稀释至蛋白浓度为0. 1～1mgPmL,而且实验必须在1h内完成,不然测试结果不准确。
（5）酚试剂法
原理：
蛋白质在碱性溶液中其肽键与Cu2+螯合，形成蛋白质一铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸还原，产生蓝色化合物，在一定条件下，利用蓝色深浅与蛋白质浓度的线性关系作标准曲线并测定样品中蛋白质的浓度。
优点：
操作简便，灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，样品中蛋白质含量高于5μg即可测得，是测定蛋白质含量应用得最广泛的方法之一。
缺点：
费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰lowry反应。
而且对后者的影响还要大得多。
酚类、柠檬酸、硫酸铵、tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。
浓度较低的尿素
（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。
含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定。
若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1～2倍。
适用范围：
适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。
此法可检测的最低蛋白质量达5mg。
通常测定范围是20~250mg
个人想法——
蛋白质是我们生活中不可或缺的东西，无论是各种乳制品还是一些保健产品，蛋白质的含量无疑是一个受人瞩目的指标。
然而，纵观我们现在使用的这些蛋白质检测方法，很明显的都有一个“不适合大规模检测”的特点，这对于现在的大规模生产模式显然不适用。
而且，更为严重的是，所有的检测方法都会受到许多其它物质的干扰作用，之前闹得沸沸扬扬的三鹿奶粉事件就是利用了凯式定氮法中的检测漏洞（检测时检测的是氮元素的含量，那么，一些非来自于蛋白质的氮就会被当成蛋白质中的，从而“提高”了蛋白质的含量检测结果）
所以，不管怎么样，在蛋白质的检测中，我们可以进行多重物质鉴定，从而减小误差。
凯式定氮法并不是不能用了，我们还可以增加检测步骤，比如之前先检测原料的成分。
而一汽也是可以随着科技的不断发展来提升它的精确度的。
就现在的上述方法来讲，还是考马斯亮蓝法较为准确，虽然不适用于大规模检测，但是，当我们提高了产家的素质，完全可以只检测样品来确定蛋白质的含量。