微生物学实验：实验二 细菌的单染色与革兰氏染色
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➢ 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。
操
作
步
采用三区涂片法制片
骤
大肠杆菌
大肠杆菌与枯草芽孢杆菌 混合涂片
枯草芽孢杆菌
操 作 步 骤
萌发芽孢的枯 草芽孢杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂 片油镜下形态（革兰氏染色）
实验结果
➢ 列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革 兰氏染色反应。
实验二 细菌的单染色及革兰氏染色
（一）简单染色法
目的要求
➢ 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的 简单染色法；
➢ 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。
基本原理
➢ 借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛 细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如： 正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。
实验器材
➢ 菌种 藤黄八叠球菌
➢ 染色剂 草酸铵结晶紫染液 番红染液
➢ 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。
涂片
干燥
操
固定
作 步
染色
骤
水洗
干燥
镜检
实验结果
➢ 根据观察结果，绘出细菌形态图。
思考题（P76五、2. （１）（2）（3））
➢ 在进行细菌涂片时应注意哪些环节？ ➢ 细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固
菌种
形态
颜色
结果（Ｇ＋、Ｇ－）
思考题
➢ 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确 性？其中最关键的环节是什么？
➢ 在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太 老，用老龄细菌染色会出现什么问题？
➢ 你认为革兰氏染色中，哪Baidu Nhomakorabea个步骤可以省去而 不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
定时应注意什么？ ➢ 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
（二）革兰氏染色法
目的要求
➢ 学习并初步掌握革兰氏染色法； ➢ 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中
的重要性。
实验器材
➢ 菌种 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物
➢ 染色剂 草酸铵结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 番红染色液
操
作
步
采用三区涂片法制片
骤
大肠杆菌
大肠杆菌与枯草芽孢杆菌 混合涂片
枯草芽孢杆菌
操 作 步 骤
萌发芽孢的枯 草芽孢杆菌
大肠杆菌
大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合涂 片油镜下形态（革兰氏染色）
实验结果
➢ 列表说明你所观察到的细菌形状、颜色和革 兰氏染色反应。
实验二 细菌的单染色及革兰氏染色
（一）简单染色法
目的要求
➢ 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的 简单染色法；
➢ 巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。
基本原理
➢ 借助物理因素（如：细胞及细胞物质对染料的毛 细现象、渗透、吸附作用等）和化学因素（如： 正负离子之间的相互吸引等）的作用而进行的。
实验器材
➢ 菌种 藤黄八叠球菌
➢ 染色剂 草酸铵结晶紫染液 番红染液
➢ 仪器或其他用具 显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、无菌水等。
涂片
干燥
操
固定
作 步
染色
骤
水洗
干燥
镜检
实验结果
➢ 根据观察结果，绘出细菌形态图。
思考题（P76五、2. （１）（2）（3））
➢ 在进行细菌涂片时应注意哪些环节？ ➢ 细菌制片时为什么要进行加热固定？在加热固
菌种
形态
颜色
结果（Ｇ＋、Ｇ－）
思考题
➢ 你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确 性？其中最关键的环节是什么？
➢ 在革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太 老，用老龄细菌染色会出现什么问题？
➢ 你认为革兰氏染色中，哪Baidu Nhomakorabea个步骤可以省去而 不影响最终结果？在什么情况下可以采用？
定时应注意什么？ ➢ 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
（二）革兰氏染色法
目的要求
➢ 学习并初步掌握革兰氏染色法； ➢ 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中
的重要性。
实验器材
➢ 菌种 枯草芽孢杆菌12-18h营养琼脂斜面培养物 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物
➢ 染色剂 草酸铵结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 番红染色液