草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究

项

目

总

结

报

告

主持完成单位：商丘市农林科学研究所

二0一0年十二月

一、项目来

源……………………………………………………………………1 二、项

目实施的意义和依据 (1)

（一）品种来源 (1)

1、丰香—草

莓 (1)

2、特征特性 (1)

3、脱毒丰香草莓 (2)

（二）项目实施的目

的..................................................................3 1、总体目标 (3)

2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)

（三）项目实施的意

义 (3)

1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4)

2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4)

（四）项目实施依据 (4)

1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6)

（一）草莓-“丰香”脱毒技术研究……………………………………………

1、研究目的…………………………………………………………………6

2、供试材料…………………………………………………………………6

3、

组织培养环境条件……………………………………………………6 4、

材料的选择与处理……………………………………………………6 5、

生长点的剥取……………………………………………………………7 6、

诱导方法…………………………………………………………………7 7、

病毒的检测……………………………………………………………8 8、

无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、

研究目的 (8)

2、试验材料...........................................................................8 3、试验方法...........................................................................9 4、验结果分析........................................................................9 5、结论与讨论 (13)

（三）组培草莓驯苗基质的研究 (14)

1、材料与方法........................................................................14 2、试验结果分析.....................................................................15 3、综合评述...........................................................................16 4、结论 (17)

（四）抗菌素减少组培草莓苗污染的研究 (17)

1、污染来源与防治措施…………………………………………………17

2、草莓组织培养过程中造成污染的原因……………………………17

3、试验方法…………………………………………………………………20

4、结果分析…………………………………………………………………21 （五）草莓高产栽培试验研究……………………………………………………21 1、温棚种植试验目的………………………………………………………21 2、参试品种…………………………………………………………………21 3、试验时间与地点…………………………………………………………21 4、试验概况及田间管理……………………………………………………21

5、

试验结果与分析…………………………………………………………23 6、

综合评定…………………………………………………………………25 7、

结论 (25)

四、脱毒草莓高产技术规程与规

范……………………………………………26 （一）组织培养基本设施技

术规程 (26)

1、实验室建立 (26)

2、仪器与器材配备 (26)

3、化学药品、试剂购置…………………………………………………28

4、

其他物品的配制………………………………………………………28 （二）

草莓组织培养技术操作规程与规范 (28)

1、培养条件…………………………………………………………………28

2、培养基配制……………………………………………………………29

3、

无菌材料的获得………………………………………………………31 4、

接种………………………………………………………………………31 5、

室内组织培养…………………………………………………………32 6、

瓶苗驯化与移栽…………………………………………………………33 （三）

脱毒草莓栽培技术规程与规范 (34)

1、组织培养瓶苗的栽培技术规程…………………………………………34

2、脱毒丰香草莓苗圃繁殖栽培技术规程………………………………35

3、

脱毒“丰香-草莓”的特征特性与栽培技术规程……………………36 4、

脱毒草莓大棚无公害高产栽培技术规程 (39)

草莓组织培养

草莓的组织培养一、茎尖 1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基．不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。 2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。（3）培养基： ①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。 ②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。 ③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理. （3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。培养温度(25± 2)℃。每日光照12h，光强2 000Lux。（1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理. （3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。 ①用于花药诱导培养基； ②用于花药幺伤组织分化培养； ③、④用于其余5种外植体(叶盘、叶柄、下胚轴、子叶、花蕾)诱导培养；⑤仅用于花蕾培养。（4）条件：培养条件均为12 h光照12 h黑暗。光强度1200-1500lx、温度(25 ±2)℃。三、叶片以红颊、章姬、丰香草莓叶片为试材，对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究，建立了草莓离体叶片的再生体系。试验结果表明，基因型、不同激素种类和配比直接影响了草莓叶片再生芽的发生。基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素，不同激素配比是不定芽产生的关键因素。叶片愈伤组织的诱导培养基以MS+TDZ 2~3mg／1较理想，芽伸长的理想培养基为MS+6一BA 0．3～O．5mg／l，生根培养基以1／2MS+IBA0．3mg／1较适宜，移栽成活率可达90％以上。 2.结论（1）再生途径：先采取当年生匍匐茎茎尖培养繁殖，建立起三个品种的无性繁殖系；再从继代3周的无菌苗上剪取叶片作为外植体，进行不同的处理，每瓶接10片叶盘，每处理重复5瓶。（2）灭菌方法：于121℃下高温高压蒸汽灭菌20min。

植物组织培养研究进展

植物组织培养研究进展摘要植物组织培养技术作为一种科研手段,发展异常迅猛。从组织培养的原理、培养过程中遇到的问题以及前景和展望这3方面综述了我国近几年植物组织培养的新研究。关键词: 组织培养；存在问题；措施；发展 20 世纪后半叶，植物组织培养发展十分迅速，利用组织培养，不仅可以生产大量的优良无性系，并可获得人类需要的多种代谢物质；细胞融合可打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲和性障碍，在植物新品种的培育和种性的改良中有着巨大的潜力；还可获得单倍体、三倍体及其它多倍体、非整倍体；组织培养的植物细胞也成为在细胞水平上分析研究的理想材料[1]。因此，植物组织培养广泛应用于植物科学的各个分支，如植物学、植物生理学、遗传学、育种学、栽培学、胚胎学、解剖学、病理学等，并广泛应用在农业、林业、医药业等多种行业，产生了巨大的经济效益和社会效益，被认为是一项很有潜力的高新技术。 1组织培养的基本原理 1.1植物组织培养的概念植物组织培养技术是指在无菌条件下，将离体的植物器官(如根尖、茎尖、叶、花、未成熟的果实、种子等)、组织(如形成层、花药组织、胚乳、皮层等)、细胞(如体细胞、生殖细胞等)、胚胎(如成熟和未成熟的胚)、原生质体培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱发产生愈伤组织或潜伏芽等，或长成完整的植株的技术[2]。 1.2植物组织培养的依据植物组织培养的依据是植物细胞“全能性”及植物的“再生作用”。1902年，德国著名植物学家GHaberlanclt根据细胞学理论[3]，大胆地提出了高等植物的器官和组织可以不断分割，直到单个细胞，即植物体细胞在适当的条件下具有不断分裂和繁殖，发育成完整植株的潜力的观点。1943年，美国人White在烟草愈伤组织培养中, 偶然发现形成一个芽, 证实了GHaberlanclt的论点[4]。在许多科学家的努力下，植物组织培养技术得到了迅速发展，其理论和方法趋于完善和成熟，并广泛应用产生了巨大的经济效益和社会效益。 1.3培养基的选择组织培养的基础培养基有MT、MS、SH、White等[5]。由于不同植物所需要的生长条件有所不同，会对培养基做一些不同的处理，一般采用较多的是MS。组织培养采用固体培养基的较多，但只有在植物周围的营养物和激素被吸收，如果其他残留的培养基也能被利用，对工厂化生产的成本减少方面有很大的帮助。董雁等[6]利用回收转换后废弃的继代培养基，加入原继代培养基30 %浓度母液的培养基，培养效果与原继代培养基的基本相同，说明继代培养基再利用是可行的，这为规模化组培育苗开辟了新的途径。杜勤[7]等在无外源激素条件下，研究液体和固体培养基对黄瓜子叶培养器官分化的影响，结果用液体培养基直接诱导花芽率更高，分化高峰期出现的时间也更早，说明液体培养基对外植体的生长更有利，只是固体培养基更易操作而被较广泛应用。 2植物组织培养过程中存在的问题 2.1 污染问题组织培养过程中的污染包括内因污染和外因污染。内因污染指由于外植体的表面或者内部带菌而引起的污染；外因污染则是主要由环境污染和操作不当引起，是指在接种或培养过程中病菌入侵，例如培养基、接种工具和接种室消毒不严格以及操作不规范等[8]。针对植物组织培养中污染产生的原因，应从以下2个方而着手来控制污染。一是控制外植体自身带菌，外植体的表而带菌可以经过一系列的杀菌处理来减少；而外植体的内部带菌是不

草莓组培

1、取材。每年的6-8月，选择植株生长健壮，匍匐茎充实，尖端生长良好，无病虫害的优良植株取其茎尖或花药，作为组织培养的外植体。 2、消毒。材料取来修整后用纱布包好放在自来水龙头下冲洗2-4小时（以茎尖为例），然后进行表面消毒。先用70%酒精漂洗半分钟，然后用0.1%的新洁尔灭浸泡15-20分钟，再用0.1%的升汞（氯化汞）消毒5-8分钟，最后用1-2%的过氧乙酸消毒1分钟。每次都要用无菌水冲洗3-4次后再进行下一次消毒。整个消毒过程都应在超净工作台内完成。 3、接种。接种在超净工作台内进行，接种前要先用酒精灯对接种用具（镊子、接种针、接种架等）消毒自然放凉。先用镊子一层层的剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后在解剖镜下找到生长点（可带1-2个叶原基）用接种针挑出生长点（小于0.5毫米），放入事先准备好的盛有培养基的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养成小植株。 4、室内培养。培养室要求干净清洁，室内装有紫外线杀菌灯，每天要对室内进行消毒，以防污染。培养温度20-28℃，最适温度25℃，相对湿度70%，光照强度1000-2000勒克斯，每日光照10小时左右。 5、继代培养。每培养25-30天，培养瓶内的小植株就会分出3-5个小植株，把这些小植株分出放于继代培养基内培养；过20-30天后又会长出小植株，如此反复进行继代培养，增加繁殖系数。 6、诱导生根。根据生产需要可在1-2月份集中一批苗子生根。草莓试管苗生根很容易，有的在继代培养基上便可生根。或者在培养基中加入0.5毫克/升的LBA，经30天左右便可长出6-10条长约2-3厘米的小根。 7、温室驯化。把生好根的小苗经光照锻炼7-10天，从试管内取出，洗净根部培养基，移栽入事先准备好的营养土内，使其逐渐长大发出5-6片新叶的过程称为驯化。驯化用的营养土要求土质以疏松的沙土掺入少量有机质。移栽后要浇透水，支小拱棚覆盖塑料薄膜保湿。驯化温度以15-20℃，前两周空气相对湿度80-100%，第三周开始短时间放风，放风强度逐渐加大，至移栽后第四周可去掉覆盖物。根据情况每天或隔天喷水一次，保持土壤湿润而不积水为宜。驯化一般需2-3个月即可移出。经病毒鉴定，确认无毒后放入网纱大棚内繁殖。 8、病毒鉴定和检验。草莓无病毒苗的鉴定检验手段是采用小叶嫁接法、蚜虫接种鉴定法和电子显微镜检测法。利用电子显微镜检测草莓病毒比前两种更直观，而且速度快。其方法是利用负染色法及超薄切片法处理待测叶片，然后在电子显微镜下观察，如果被测叶片中含有较多病毒颗粒子，可被直接观察到。经检验确认无毒的草莓苗移入网纱大棚进行繁殖。 9、网纱大棚内繁殖。草莓病毒的传播主要靠蚜虫、飞虱等虫媒传播。把无

草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究

1 草莓组织培养脱毒快繁与应用技术研究项目总结报

告主持完成单位：商丘市农林科学研究所二0一0年十二月 2 目录一、项目来源……………………………………………………………………1 二、项目实施的意义和依据 (1) （一）品种来源 (1) 1、丰香—草莓 (1) 2、特征特性 (1) 3、脱毒丰香草莓 (2) （二）项目实施的目的..................................................................3 1、总体目标 (3) 2、研究组织培养脱毒快繁，加速示范推广，促进农村经济发展 (3)

（三）项目实施的意义 (3) 1、提高果品产量和质量，增强市场竞争能力 (4) 2、生产无公害果品，促农民致富................................................4 3、发挥增产增收效益潜力，促进产业结构调整 (4) （四）项目实施依据 (4) 1、研究与实施的理论依据.........................................................4 2、“丰香草莓”组织培养技术路线................................................5 3、草莓组织培养的优点............................................................5 三、丰香-草莓的组织培养技术研究 (6) （一）草莓-“丰香”脱毒技术研究…………………………………………… 6 1、研究目的…………………………………………………………………6 2、供试材料…………………………………………………………………6 3、组织培养环境条件……………………………………………………6 4、材料的选择与处理……………………………………………………6 5、生长点的剥取……………………………………………………………7 6、诱导方法…………………………………………………………………7 7、病毒的检测……………………………………………………………8 8、无病毒原种的保存和繁殖………………………………………………8 （二）“草莓-丰香”脱毒与快繁培养基筛选研究………………………………8 1、

苹果树组培快繁技术实例 · 含配方

苹果的组织培养是采用无菌培养技术，将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、鳞片、块根和球茎等器官以及它们的组织切片进行离体培养，使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。由于离体技术处理严格，所以很容易脱除一些细菌病原及病毒，是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。苹果矮化砧、抗寒砧的组织培养也已成功。苹果脱毒组培技术流程具体如下。

一外植体材料选择与处理早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室，待新梢长出3～5片新叶时，放入热处理箱中，37℃恒温热处理30d或32℃与37℃每8h变换一次，变温热处理60d。脱毒率可达80％以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约2～3cm顶梢，流水冲洗10min，去掉小叶。70％乙醇浸泡30s，蒸馏水冲洗后放入0.1％HgCI。中消毒10min，无菌水冲洗3～5次，解剖镜下迅速剥取1.0mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。

二培养基制备 1.1 芽诱导适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。诱导的芽生长正常可发育成新梢。 1.2 继代培养选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上。适宜的苹果继代培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖4％+琼脂0.36mg/L。培养条件：光照强度2000～ 2500lx，光照时间14～16h/d，适宜温度为25℃±2.0℃。40d后增殖6.1倍。 1.3 生根培养选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：1／2MS+IAA1.5mg/L+蔗糖25％+琼脂0.36％。培养30d后，平均4～6条根／苗，长达0.5～1.0cm。根白且粗，多直接生于茎基部。

植物组织培养之草莓的脱毒与快速繁殖

一、草莓简介草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物。草莓的外观呈心形，鲜美红嫩，果肉多汁，含有特殊的浓郁水果芳香。草莓具有极其丰富的营养价值。 1、（丰富的胡萝卜素）草莓中所含的胡萝卜素是合成维生素A的重要物质，具有明目养肝作用; 2、（滋补调理）草莓对胃肠道和贫血均有一定的滋补调理作用; 3、（治病）草莓除可以预防坏血病外，对防治动脉硬化，冠心病也有较好的疗效; 4、（防癌）草莓是鞣酸含量丰富的植物，在体内可吸附和阻止致癌化学物质的吸收，具有防癌作用; （回主页）草莓营养价值高，口味好，深受消费者喜爱，特别是近几年种植面积大幅提高。但由于病毒病的传播感染，导致草莓品种种性退化，产量、品质下降，商品率降低，严重影响了草莓的发展。下面就简单介绍几种草莓易得的病：二、草莓易得的病 1、叶斑病：又称蛇眼病，主要为害叶片、叶柄、果梗、嫩茎和种子。在叶片上形成暗紫色小斑点，扩大后形成近圆形或椭圆形病斑，边缘紫红褐色，中央灰白色，略有细轮，使整个病斑呈蛇眼状，病斑上不形成小黑粒。 2、白粉病：主要为害叶片，也侵害花、果、果梗和叶柄。叶片上卷呈汤匙状。花蕾、花瓣受害呈紫红色，不能开花或开完全花，果实不膨大，呈瘦长形；幼果失去光泽、硬化。近熟期草莓受到为害会失去商品价值。 3、灰霉病：是开花后的主要病害，在花朵、花瓣、果实、叶上均可发病。在膨大时期的果实上，生成褐色斑点，并逐渐扩大，密生灰霉使果实软化、腐败，严重影响产量。 4、根腐病：从下部叶开始，叶缘变成红褐色，逐渐向上凋萎，以至枯死。支柱在中间开始变成黑褐色而腐败，根的中心柱呈红色。 5、黄萎病：该病是土壤病害，主要症状是幼叶畸形，叶变黄、叶表面粗糙无比。随后叶缘变褐色向内凋萎，直到枯死。 6、除此之外，草莓还容易有一些病虫危害，例如：线虫危害：寄生在草莓组织中，危害叶柄、芽、根等，使被害器官变成红色，严重时植株枯死。蛴螬危害：在草莓收获期和八九月份咬食根、茎，使植株枯死。（回主页）根据报道，侵染草莓的病毒多达二十多种。长期大田分株繁殖容易使草莓植株中病毒积累，导致草莓品种退化,，严重影响经济收益。所以利用先进的技术使草莓脱毒，以及后期的快速繁殖已成为草莓业发展的必要环节。下面就来详细介绍草莓的脱毒与快繁。

满天星组培快繁技术实例 · 含配方

满天星 Gypsophila elegans 满天星，又名为霞草、重瓣丝石竹，原产地中海沿岸，属石竹科多年生宿根草本花卉。为常绿矮生小灌木，其株高约为65～70cm，茎细皮滑，分枝甚多，叶片窄长，无柄，对生，叶色粉绿。由于它花型小、浅色、花姿蓬松具立体感，气质高雅清秀，给人以朦胧感，花序群体效果极佳，是重要的陪衬花，为当今最流行的切花之一，十分畅销。

满天星种苗多采用边生产切花，边利用植株下部发生的腋芽进行插扦获得。用这种方法，满天星繁殖系数较低，种苗品质参差不齐，较难获得大批量的优质种苗。一些单瓣种可用种子繁殖。商品化切花生产的，种苗繁殖以组培为主，采用茎尖培养，繁殖系数高，根系生长状况好，花枝挺拔，色泽纯正，切花质量高。满天星组织培养繁殖速度快，生根率高，无畸形变异，过渡苗驯化成活率高，与其他花卉组培相比，易获得成功，但普遍存在玻璃化现象。 1、初代培养诱导培养基为1/2MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L KT+0.3mg/L NAA，或MS+1.0mg/L 6- BA+2.0mg/L KT+0.3mg/L NAA+0.2mg/L IAA，各培养基加3％～4％蔗糖0.6％～0.7％琼脂。培养温度25～27℃，光照强度2000～2200lx，光照时间每天12～16h。剪取满天星母株上生长较粗壮的嫩梢，剪去展开叶片，留下生长较嫩的叶片，将外植体放在烧杯中，用自来水冲洗10～20min，然后加入少量家用洗衣粉或洗洁精少许，加入少量的水，用小毛刷搅拌2～5min。用此方法重复数次，再用自来水冲洗干净满天星茎尖上的洗涤液。把冲洗净的满天星茎尖外植体放入75％的酒精中约3～5min，再用0.1％的升汞浸泡外植体 5～7min，或在10％的漂白粉清洗液中浸泡10～15min，再用无菌蒸馏水冲洗5～7次，即得无菌外植体，置于无菌操作台中的培养皿中待用。然后将嫩茎切成lcm左右的带芽茎段，腋芽切取0.5～1.0cm长的茎尖，接种到诱导培养基上。

草莓组织培养研究进展

[摘要] 从草莓组织培养类型（草莓茎尖组织培养、草莓花药培养、草莓叶片、叶柄组织培养）开始，介绍了近几十年国内外草莓组培的研究现状和进展。 [关键词]草莓;组织培养; 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一，素有“水果皇后”的美称。草莓果实色泽艳丽，芳香多汁，酸甜适度，鲜美可口，营养丰富，每百克果实内含有蛋白质1g，脂肪，糖4～12g，酸～2g，无机盐，粗纤维，Vc45～120mg，比苹果和葡萄高10多倍，并含有丰富的磷、钙、铁、锌等矿物质，其中锌的含量是香蕉的4倍以上，比柑橘高6倍以上，比苹果高40倍以上。另外食用草莓对肠胃病和贫血病有一定的疗效，对促进智力发育有重要作用。深受国内外消费者的喜爱。草莓作为一种栽培周期短、结果早、见效快的经济作物，近15年来在我国发展迅猛，中国园艺学会草莓分会统计2003年底，我国草莓总面积和总产量均跃居世界第一位。在浆果中，草莓的总产量和总面积仅次于葡萄，成为我国发展农村经济，促进农民增收的重要经济作物。随着草莓在国内栽培面积的扩大和种植年限的延长，草莓的病毒病严重影响草莓的生产。作为高级浆果的草莓，在我国目前的生产栽培上多沿用无性繁殖种苗：主要方法是匍匐茎繁殖和分株繁殖，但这两种方法效率低、种苗易退化、易造成病毒蔓延。王国平（1988）等调查，我国栽培草莓带病毒植株率过80%以上，戴子林（1995）等调查，我国长江流域感染大面积植株感染率在50%以上；感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形、品质差、生长缓慢，一般减产30%-80%，并逐年加重；严重影响草莓的长势、品质和产量，对病毒病目前还没有药剂可以防治。通过草莓组织培养扩繁草莓脱毒苗，可以解决上述问题。近年来在草莓种苗生产中，有关草莓组培快繁技术的研究备受人们的重视，本文就草莓组织培养研究与应用作一综述。一、常见草莓组织培养类型目前，国内外在草莓品种快速繁殖上已有不少报道：常用的外植体主要有：茎尖（Adam，1972；庆子孝，1972；谭兰英等，1981）、腋芽（Boxus，1974、1977；杨乃博，1981）、叶片、叶柄、茎段，花药（Quak,1977；大泽，1972）。常见的草莓组织培养主要的类型：草莓茎尖组织培养、草莓叶片和叶柄组织培养、

草莓脱毒方法

草莓脱毒方法以药剂处理加茎尖培养可增加脱毒效果,如盐酸四环素对草莓的四种病毒都有一定的抑制作用。覃兰英等(1988)将草莓在35℃下热处理7 d后,逐步升温至38℃,在湿度40%～68%、光照度4 000～5 000 Lx条件下热处理35 d后,将长出的新茎茎尖再行组培,可获得100%的脱毒苗。大泽胜次(1982)在进行单倍体育种时发现花培植株的脱毒率达100%。此法不仅可快速繁殖出大量无毒植株,还可省去病毒鉴定工作,在育种与生产应用上可谓一举两得。利用花药培养脱毒苗,其成功与否与花蕾大小的选择有关,应选取处于密封状态的小花蕾,此时的花粉发育期为单核靠边期。花蕾的大小与不同的品种有一定的差异。高庄玉等(1993)用草莓花药组培,其脱毒率达100%，用幼叶和茎尖产生的愈伤组织其再生植株脱毒率只有20%。艾勇、赵佐敏等(2000)用1/2MS+0.1 mg/L IBA+琼脂4.5～7 g/L+白糖20 g/L诱导丰香草莓试管苗生根,生根率可达100%。移栽时不用任何基质处理,采取试管苗一次性入土移栽(适温20～25℃,1周内保持空气湿度在95%以上),幼苗成活率可达85%, 花药培养草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，其优点是操作简单，并能大量繁殖。薜光荣等经花药愈伤组织直接分化出花药植株的途径培育出沙尔普斯等5个品种的脱毒苗，脱毒苗在生长、结果、可溶性固形物含量等方面均超过对照株，果实总产和平均果重均大幅度提高。这表明，实现草莓的无病毒栽培，将会给草莓生产带来很大的经济效益。花药愈伤组织的诱导和再分化培养过程，以添加2 mg/L的6-BA和0.2~1.0 mg/L的NAA 为宜；茎尖分化培养过程中添加6-BA的浓度为0.5~1.0 mg/L；继代分化快繁过程中,6-BA 浓度一定要掌控好，要求6-BA的浓度在0.5~1.0 mg/L范围内不断变换调节，3周左右继代快繁一次,这样苗子在整个继代快繁过程中才能保持生长健壮、分化系数高(达到8~10倍)、无褐化现象发生等。反之，如果6-BA浓度过高(>2 mg/L)时,苗子会出现脆化、黄化、过密、矮化等现象；过低(<0·25 mg/L)时，苗子会出现细弱、弯曲、过高、生根过多等现象，均不利于苗子的分化快繁。生根培养中添加6-BA浓度以0·25 mg/L为最好，苗子生长粗壮、根系发达,发根率为100%。将花药接种到1号培养基（MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.1 mg/L+3%蔗糖）上，1周后花药陆续形成愈伤组织，达78.6%；1个月左右转接愈伤组织到2号培养基（MS+6BA 1 mg/L+NAA 0.l mg/L+3%蔗糖）上。注意观察，当芽长到lmm左右时转接到3号培养基（MS十6-BA 1mg/L+3%蔗塘）上，逐渐形成芽丛，1个月后，把芽丛分开成单芽再分别转接到新的3号培养荃上，让花继续分化生长;以后根据情况每隔10~30天转接一次.这样，年内每个分化组

草莓组织培养研究进展

草莓组织培养 [摘要] 从草莓组织培养类型（草莓茎尖组织培养、草莓花药培养、草莓叶片、叶柄组织培养）开始，介绍了近几十年国内外草莓组培的研究现状和进展。 [关键词]草莓;组织培养; 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一，素有“水果皇后”的美称。草莓果实色泽艳丽，芳香多汁，酸甜适度，鲜美可口，营养丰富，每百克果实内含有蛋白质1g，脂肪0.6g，糖4～12g，酸0.8～2g，无机盐0.6g，粗纤维1.5g，Vc45～120mg，比苹果和葡萄高10多倍，并含有丰富的磷、钙、铁、锌等矿物质，其中锌的含量是香蕉的4倍以上，比柑橘高6倍以上，比苹果高40倍以上。另外食用草莓对肠胃病和贫血病有一定的疗效，对促进智力发育有重要作用。深受国内外消费者的喜爱。草莓作为一种栽培周期短、结果早、见效快的经济作物，近15年来在我国发展迅猛，中国园艺学会草莓分会统计2003年底，我国草莓总面积和总产量均跃居世界第一位。在浆果中，草莓的总产量和总面积仅次于葡萄，成为我国发展农村经济，促进农民增收的重要经济作物。随着草莓在国内栽培面积的扩大和种植年限的延长，草莓的病毒病严重影响草莓的生产。作为高级浆果的草莓，在我国目前的生产栽培上多沿用无性繁殖种苗：主要方法是匍匐茎繁殖和分株繁殖，但这两种方法效率低、种苗易退化、易造成病毒蔓延。王国平（1988）等调查，我国栽培草莓带病毒植株率过80%以上，戴子林（1995）等调查，我国长江流域感染大面积植株感染率在50%以上；感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形、品质差、生长缓慢，一般减产30%-80%，并逐年加重；严重影响草莓的长势、品质和产量，对病毒病目前还没有药剂可以防治。通过草莓组织培养扩繁草莓脱毒苗，可以解决上述问题。近年来在草莓种苗生产中，有关草莓组培快繁技术的研究备受人们的重视，本文就草莓组织培养研究与应用作一综述。一、常见草莓组织培养类型目前，国内外在草莓品种快速繁殖上已有不少报道：常用的外植体主要有：茎尖（Adam，1972；庆子孝，1972；谭兰英等，1981）、腋芽（Boxus，1974、1977；杨乃博，1981）、叶片、叶柄、茎段，花药（Quak,1977；大泽，1972）。常见的草莓组织培养主要的类型：草莓茎尖组织培养、草莓叶片和叶柄组织培养、

草莓组培苗工厂化生产的可行性报告

草莓组培苗工厂化生产的可行性报告学科专业植物细胞工程__ 指导老师范淑芳___ 班级生物技术及应用（1）班学号 2070307030142 姓名关前军_ _

草莓组培苗工厂化生产的可行性报告草莓(Fragaria ananassaDuch)属蔷薇科、草莓属,多年生草本植物,在世界小浆果生产中荣居榜首。含丰富蛋白质、无机盐、维生素C等营养物质, 食之柔软多汁、酸甜适度、芳香浓郁,深受消费者喜爱。草莓传统繁殖方法通常用匍匐茎分株繁殖,此法繁殖速度慢,而且极易感染病毒,母本苗栽植1年后即可被蚜传病毒感染,减产可达20%以上,高者可达60%,染毒植株果小、含糖量低,降低商品价值和食用价值。利用组培育苗,不仅繁殖速度快,而且可获得无毒植株。 1 项目背景 1、1 组培苗工厂化生产受限原因 ①组培生产设备、设施投资大，生产耗费高，导致产品成本较高； ②专业人才少，从业者缺乏生产和管理经验，难以对生产工艺流程进行完善和优化； ③消费者对组培苗的认识不足，产品营销受市场制约严重，价格偏低，限制了组培苗工厂化生产的发展； ④由于组培技术水平的限制，试管苗生产性能不稳定或难以预知，造成消费者不敢大批量应用于生产。 1、2 社会需求脱毒草莓苗具有出生长快，长势旺，茎叶粗壮，繁殖系数高的优良特征，同时具有果子外观好，色泽鲜红，均匀整齐，增产效益高和植株抗病能力强，等许多优点。草莓脱毒苗在生产上极明显的增产效益可连续保持三年以上，是目前农业调整产业结构，发展高效益农业的理想经济作物，故各地果农对脱毒草莓的需求巨大。 1、3 发展前景草莓是国外最受欢迎的保健水果，具有不断增长的出口需求和发展前景草莓被欧美国家誉为“水果皇后”，不仅含有比其他水果高10倍的维生素，而且果实中所含的鞣花酸具有抗癌效果，因此在欧美市场十分畅销，售价是苹果的5倍、葡萄的2倍，而且供不应求。脱毒草莓具有科技含量高、栽培容易、增产效

草莓脱毒苗

1、意义与范围丹东市是全国最大的草莓生产基地，草莓生产技术总体水平在国内处于领先地位，但总体单位生产效益还远不如发达国家高，最突出的瓶颈问题是种苗普遍感染病毒，与全国一样属带毒生产。感染病毒的草莓比未感染病毒的草莓长势弱、抗性差、产量明显下降，果品品质与商品性状变劣，严重影响了这一名特优种植业的稳步发展。草莓脱毒组培技术是目前国际上仍普遍应用的高新实用技术，即通过花药组织培养、微茎尖组织培养等技术脱去病毒病原，使草莓种苗恢复品种原种优良种性，以达到优质、高产之目的。本技术报告以项目单位正在实施应用的微茎尖组织培养技术规定了草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术规范的选择优良品种、生产脱毒组培瓶苗、培育原原种苗、培育原种苗、繁育良种苗规程。应用范围适用于丹东地区。 2、草莓茎尖脱毒组培种苗繁育技术工艺过程品种定向→选取田间健壮株匍匐茎尖或单株→清洗杀菌消毒→超净工作台解剖镜下剥离茎尖→接入接种培养基培养→继代增殖培养→瓶内生根→营养钵培育原原种苗→田间扩繁原种苗→田间扩繁良种苗→生产利用。 3、选择优良品种生产脱毒组培瓶苗 3.1选择优良品种 3.1.1日光温室：目前适宜品种为杜克拉、图德拉、章姬、枥乙女、丰香、幸香、鬼怒甘、宝交早生、安娜等。 3.1.2早春大棚：目前适宜品种为卡尔特一号、艾尔桑塔等。 3.1.3露地生产（加工型）：目前适宜品种为哈尼、森嘎那、达善卡等。 3.2生产脱毒组培瓶苗 3.2.1试验室要求 3.2.1.1无菌室无菌室应设有隔离室，面积不小于10m2，墙壁光滑平整，地面平坦无缝，室内安装紫外线灯和超净工作台。 3.2.1.2试验室试验室面积应不小于30m2，并应具备各种生产用化学药品、玻璃器皿、冰箱、恒温箱、普通天平、分析天平及实验平台等设施。 3.2.1.3培养室培养室面积应不小于20m2，放置多层钢制培养架，采用日光灯补充光照，室内常年保持20-27℃，相对湿度保持在50-60%，每天光照12-14h。 3.2.1.4洗涤灭菌室洗涤灭菌室面积应不小于10m2，有充足自来水，并配有高压灭菌锅、制作培养基平台及放置培养瓶的瓶架。 3.2.2设备要求应具备高压灭菌锅、冰箱、培养皿、镊子、剪刀、普通天平、分析天平、双目解剖镜、显微镜、超净工作台、接种刀、恒温培养箱等设备。 3.2.3培养基制作基本培养基为MS培养基。其中附加吲哚乙酸（IAA）4PPM，6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）2PPM，激动素（KT）2PPM。蔗糖30g/L，琼脂6g/L，PH值6.5。在1个大气压下，高压灭菌20分钟。 3.2.4外植体接入瓶内增殖培养完成的瓶内苗采草莓匍匐茎尖或单株心茎，用自来水（符合饮用水标准）冲洗后在超净工作台上用消毒剂进行杀菌消毒，然后放在双目解剖镜下切0.2-0.6mm的生长点放入盛有培养基的瓶

菊苣的组培快繁技术

菊苣(Cichorium intybus L.)菊科菊苣属多年生草本植物。根肉质、短粗；茎直立，有棱，中空，多分枝；叶互生，长倒披针形；头状花序，花冠舌状，花色青蓝。菊苣为药食两用植物，叶可调制生菜，根含菊糖及芳香族物质，可提制代用咖啡，促进人体消化器官活动；其地上部分及根可供药用，中药名分别为菊苣、菊苣根，具有清热解毒，利尿消肿，健胃等功效。该植物耐寒，耐旱，喜生于阳光充足的田边、山坡等地，具有较强的固土护坡与水土保持作用。为此，艾比蒂繁育大量菊苣组培苗，为大面积的沙漠和退化、沙化土地提供帮助。菊苣の快繁技术材料准备菊苣的种子为外殖体培养条件初代培养基 MS+BA0.5-1.0mg/L+IBA0.05-0.1 mg/L 愈伤组织诱导分化培养基

MS+BA1.0-1.5mg/L+IBA0.05-0.1 mg/L 生根培养基 1/2MS+NAA0.05-1.0 mg/L 以上培养基中加入2-3%的蔗糖和0.7%琼脂，pH 5.8-6.8，培养温度为25±2℃，光照时间12 h，光照强度为1000-2000LX。生长与分化情况 (1) 初代培养：挑选野生菊苣结实饱满的成熟种子，用纱布包好，在超净工作台内，用75% 乙醇消毒30s，再用0.1%的氯化汞浸泡3-5分钟，无菌水冲洗3-5次，种子用滤纸吸干，置于初代培养基上培养。15-20天，菊苣种子萌发生长2cm左右，切取0.5cm左右的叶片接种于诱导分化的培养基上。 (2) 愈伤组织诱导分化培养：15-20天叶片分化为疏松的愈伤组织，有绿点凸起的愈伤组织逐渐长出了小芽。芽生长较快，20天左右长成2-3cm的植株。 (3)生根培养：挑选3-4cm生长健壮的植株转接入生根培养基上，培养10天左右就有根的发生，根生长较快，须根较多。

脱毒苗与草莓脱毒技术

脱毒苗在农业生产中，一些农作物经过几代种植，品质一般都同现不同程度的退化，在马铃薯、蔬菜、果树、花卉等农作物上表现得尤为突出。根据科学家的长期研究，农作物品质衰退的原因主要是植物病毒的感染。为获得高产，生产中就必须培养出无病毒苗木，即脱毒苗木，这就是脱毒苗的概念。我国的农业科技工作者，利用生物技术措施，从感染病毒的植株中获得了无病毒种植的苗木材料。如马铃薯植株的顶端分生组织很少或没有病毒，常采用顶端分生组织培养技术得到无病植株，即脱毒马铃薯。用这种植株结出的薯块来作原种，繁殖更多的无病毒种薯，供生产中大面积推广使用。脱毒苗技术现在也运用到了花卉、果树、魔芋等农业生产中，从而生产出优质无毒花卉球种、无病毒果树苗木等什么是草莓脱毒苗？与草莓组织培养苗有什么区别？对于病毒病，目前还没有药剂可以治理。因此，培育无病毒母本苗，栽培无病毒苗木，是防治草莓病毒病的根本对策。目前，世界上培育草莓无毒苗有3种方法:热治疗法花药培养法和茎尖培养法草莓脱毒苗和草莓组织培养苗不同，在处理技术难度上差异很大。草莓脱毒苗草莓脱毒苗是以脱毒为目的，采用热处理分生组织培养的高技术手段，在无菌条件下切取0.2毫米大小的生长点，在特定的启动培养基上培养。由于切取的生长点很小，培养的难度大，在最佳启动培养基上经过2个月的培育，才仅有少量生长点能长出无病毒的愈伤组织。然后将愈伤组织接种在繁殖培养基上，1个月后才能长出丛生芽。丛生芽再经转代和生根培养基培育后才能获得试管苗，试管苗还需要经过多次反复病毒鉴定，确认已经把草莓体内的病毒彻底去除后，才能加速繁殖出大量试管苗，并进一步繁殖出原种大苗，供生产上推广应用。用茎尖培养法进行无病毒苗的培育，是目前世界上获得草莓无毒苗最普通且最有效的方法。草莓组培苗草莓组培苗仅仅是应用组织培养技术进行草莓的加速繁殖。在操作处理上，只要用草莓的顶芽、叶片、叶柄接种在合适的培养基上都可以培养出试管苗。由于切取的材料大，一般均在1毫米以上，因此培养容易成功。接种在一般的培养基上1个月就能长出丛生芽和试管苗。培养成功率很高。由于技术难度小，只要具有组织培养基本设备的单位都能进行草莓的组织培养工作，获得组织培养苗。由于目的是繁殖大量种苗供出售，因此草莓组培苗基本上没有脱毒效果。有些单位和个人宣传组培苗也是脱毒苗，这不仅混淆了两种难度差别很大的技术，还误导了果农，将基本上没有脱毒效果的组培苗，当作增产的有效手段，不仅生产上没有明显的增产效果，同时损害和降低了脱毒苗的声誉。广大技术人员和果农务必要认识清楚两种苗的区别，一定要引进经过国家正规脱病毒成果鉴定的脱毒苗。草莓脱毒苗有哪些增产效果脱病毒苗在生产上有以下八个优点：脱病毒苗生长快，长势旺，茎叶粗壮，繁殖系数高达50--100倍，在生产上示范推广速度快。

草莓组培实习报告

草莓组培实习华南农业大学李志真一、实习意义植物脱毒苗在农业生产中广泛使用对于降低农业生产成本、提高农产品的品质、改善农业的产业结构、提高农民经济收入都有重要的作用。草莓属多年生草本植物，靠生长出的匍匐茎进行营养繁殖，经多年种植后极易感染多种病毒，致使品质及产量降低，经济效益明显下降。利用组培快繁技术可对草莓脱毒苗进行快速繁殖及推广，出苗整齐，可进行周年生产，不受季节限制，实现新品种的工厂化育苗，并迅速推广。因此在草莓组织培养中，掌握草莓脱毒苗的培养与移栽有重要意义。二、实习内容实习主要掌握草莓脱毒苗的培养及大田移栽方法。移栽的适宜温度为15度到25度。环境温度太高，炼苗不易成活，而环境温度太低，则幼苗生长缓慢。因此，炼苗宜在春秋两季温度适宜时进行。冬季也可以在温室内进行炼苗。炼苗时最好使用由透气性能好、保水能力强的蛭石作为基质配制成的培养体系。蛭石无菌无毒，但亦无营养，因此应定期浇以稀释1倍的MS培养液作为营养液代替水进行浇灌，保证脱毒苗营养及水分的供给。移栽时，先将草莓生根培养瓶上的扎口绳或皮筋松开使组培苗初步接触空气，让植株开始长出角质层。时间约为2～3d。然后移去瓶口包扎物，让组培苗充分接触空气，2～3d后，组培苗对外界环境已逐渐适应，且培养基已开始长出菌类，此时进行组培苗的出瓶炼苗。首先，小心地用镊子夹持组培苗将苗从瓶中移出，用流水慢慢冲净植株根部的培养基，注意切勿伤及根部的根毛，小心地将洗净的脱毒苗移栽到事先已经灭菌处理过的苗床上。栽苗的深度要做到，浅不露根，深不埋心，浇足水，并用塑料膜进行覆盖使棚内的相对湿度保持在80%左右，以后定期放风，逐渐降低棚内的相对湿度，直至将塑料膜去掉。于4月上旬选择透气性良好、疏松肥沃的土壤种植脱毒草莓苗，行距、株距各为1m，浇足水，并用防虫网进行覆盖，防止病虫害感染传毒。于9月上旬取健壮的匍匐茎苗进行大田移栽。三、实习收获

草莓组培苗工厂化生产的可行性报告

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草莓(Fragaria ananassaDuch)属蔷薇科、草莓属,多年生草本植物,在世界小浆果生产中荣居榜首。含丰富蛋白质、无机盐、维生素C等营养物质, 食之柔软多汁、酸甜适度、芳香浓郁,深受消费者喜爱。草莓传统繁殖方法通常用匍匐茎分株繁殖,此法繁殖速度慢,而且极易感染病毒,母本苗栽植1年后即可被蚜传病毒感染,减产可达20%以上,高者可达60%,染毒植株果小、含糖量低,降低商品价值和食用价值。利用组培育苗,不仅繁殖速度快,而且可获得无毒植株。 1 项目背景 1、1 组培苗工厂化生产受限原因 ①组培生产设备、设施投资大，生产耗费高，导致产品成本较高； ②专业人才少，从业者缺乏生产和管理经验，难以对生产工艺流程进行完善和优化； ③消费者对组培苗的认识不足，产品营销受市场制约严重，价格偏低，限制了组培苗工厂化生产的发展； ④由于组培技术水平的限制，试管苗生产性能不稳定或难以预知，造成消费者不敢大批量应用于生产。 1、2 社会需求脱毒草莓苗具有出生长快，长势旺，茎叶粗壮，繁殖系数高的优良特征，同时具有果子外观好，色泽鲜红，均匀整齐，增产效益高和植株抗病能力强，等许多优点。草莓脱毒苗在生产上极明显的增产效益可连续保持三年以上，是目前农业调整产业结构，发展高效益农业的理想经济作物，故各地果农对脱毒草莓的需求巨大。 1、3 发展前景草莓是国外最受欢迎的保健水果，具有不断增长的出口需求和发展前景草莓被欧美国家誉为“水果皇后”，不仅含有比其他水果高10倍的维生素，而且果实中所含的鞣花酸具有抗癌效果，因此在欧美市场十分畅销，售价是苹果的5倍、葡萄的2倍，而且供不应求。脱毒草莓具有科技含量高、栽培容易、增产效果显著、周期短、没有风险和经济效益高等特点，为满足日益增长的社会需求，脱毒草莓苗是发展我国高效农业和绿色有机农业的首选经济作物。 2 生产规模的确定

草莓脱毒技术的研究及应用进展_赵佐敏

[收稿日期]　2001-06-18;2001-08-17修回　[作者简介]　赵佐敏(1967-),女,研究实习员,从事园艺及生物技术研究。　*本文承蒙徐宗俦副研究员指导。 [文章编号]1001-3601(2001)06-0146-0050-03 草莓脱毒技术的研究及应用进展 * 赵佐敏,艾勇 (贵州省安顺市农业科学研究所,普定562109) Progress of R esearch and Application for Virus -free Strawberry ZHAO Zuo -min ,AI Yo ng (An -shun Institute of Agricultural Sciences ,Puding ,Guizhou 562109,China )[关键词]草莓;病毒;脱毒机理;脱毒方法;快繁;病毒检测;生物技术[中图分类号]S 668.4[文献标识码]A 草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物,因其在种苗繁育上长期采用营养繁殖致使病毒不断累积而导致草莓产量降低、品质变劣等退化现象,且一旦感染病毒便会代代相传。因此,培育和应用脱毒苗是改善草莓品质、提高产量的有效途径。最早进行草莓离体培育研究的是日本的下村等(1960),他们的研究表明,热处理茎尖分生组织和组培相结合的方法,排除草莓病毒效果好。70年代国外对此项技术的研究更加趋于完善。我国此项研究始于80年代,北京市林业果树研究所1985年建立国内第一个草莓脱毒试管苗生产基地。其间草莓的各种器官、组织和细胞的培养研究迅速发展起来。同时,北京农林科学院、中国农业科学院等开展利用草莓茎尖分生组织培养、花药培养、热处理等法进行草莓脱毒研究,直到90年代我国才开始先后有几家单位建立起产业化草莓脱毒研究及生产技术体系。本文从以下几方面综述草莓脱毒技术的研究及应用进展。 1　草莓病毒种类、危害症状及对生产的影响草莓病毒属于潜隐性病毒,只是单一病毒感染,一般不表现出症状,几种病毒感染时,植株表现明显的矮小弱化,叶片常表现花叶、皱叶、黄边、褪绿、干枯等多种症状,造成草莓长势削弱,产量大幅降低,品质变劣,果实变小等退化现象,产量可降低20%～80%。目前已发现草莓有12种病毒,其中草莓斑驳病毒(SM DV )、草莓皱缩病毒(L SGV )、草莓镶嵌病毒(SV BV )和草莓轻型黄边病毒(SM Y EV )对草莓生产影响较大。据王国平(1988)报道,我国大量的草莓品种都带有以上4种病毒,老品种带毒率高达100%。草莓主栽区,4种病毒总侵染率为80.2%,其中单独病毒侵染率为41.6%,2种或2种以上病毒复合侵染率为38.6%。据戴子林等(1995)调查,我国长江流域草莓大面积植株病毒感染率在50%以上。陕西省调查,草莓栽培地区病株率一般为5%～ 8%,个别地块达30%,严重地块可高达58%。现在草莓病毒正在向新辟种植区扩展,形势严峻。这些病毒多由蚜虫传播。 2　草莓病毒的脱毒机理、方法与检测 2.1　脱毒机理2.1.1　热处理脱毒机理　由于病毒不耐高温,通过热处理,可使植物组织中的病毒钝化,从而起到脱除病毒的作用。热处理法往往与茎尖组培相结合,以提高植物的脱毒机率和脱毒程度。植物生长的顶端是一段脱毒区,热处理过程中,可使原植物生长点的顶端免疫区得以扩大,使所取茎尖生长点大于未经热处理植株的生长点,以提高外植体培养成活率。热处理最适温度为38℃,但由于病毒的抗热性因其种类而异,一般使用温度范围在35～40℃。2.1.2　分生组织和花药培养脱毒机理　草莓组培脱毒技术主要依据病毒在其体内分布不均匀,某些营养器官或组织如茎尖、花药等不带或少带病毒的特点。其次,草莓植株有突出的发育可塑性,用植株的任何部分作外植体都可能再生完整植株。一方面,分生组织内部不存在维管系统,而通过维管系统在体内移动的病毒不能达到茎尖分生组织;另一方面,分生组织内源生长素含量较高,对病毒有钝化作用;再一方面,分生组织细胞分裂速度超过病毒的繁殖速度。因此,通过茎尖分生组织组培可以获得脱毒苗。利用花药组培再生植株,主要基于植株在形成性器官、性细胞时,部分或全部病毒被脱离。2.2　脱毒方法 2.2.1　小茎尖分生组织培养　法国学者Geo rg ls M o rel 最早应用茎尖培养作为无性系繁殖手段,同时首先证明已感染病毒的植株可以通过茎尖分生组织培养恢复成无病毒植株。下村等(1960)研究指出,如切取0.3mm 以下生长点,则可能达100%的无毒苗。庄子孝一(1978)认为以获得无病毒苗为目的的贵州农业科学　2001,29(6):50～52Guizho u Ag ricultura l Sciences