细胞样品收集注意事项

细胞样品收集方法

一、蛋白

以T75培养瓶为例

1.把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS

需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个

50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆；

2.每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞

与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解

液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜

封口后置于-80℃保存；注意做好标记！

（如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶）备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。

表一

培养器皿RIPA裂解液用量备注

6孔板150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml

35mm培养皿150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml

60mm培养皿300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml

100mm培养皿600-1200ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml

T25培养瓶300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml

T75培养瓶600-1000ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol

的最少用量为1ml