表面微生物监测标准操作规程

版药典表面微生物检测操作规程

1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.2表面微生物：4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

4.3.2采样点选择：洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

注：表面微生物监测的取样点数应依下列因素确定：1.洁净区（室）的大小；2.设备、管路等的复杂程度；3.生产活动的重要性；4.易受污染的部位等。

表面微生物测定操作规程

文件制修订记录一、目的：建立表面微生物测定操作规程，使操作标准化，规范化。

二、范围：各生产车间、化验室。

三、责任人：质控部检验员。

四、管理内容：1 洁净区微生物监测的动态标准如下：2 检测方法2.1 培养皿接触法培养皿接触法(Rodac Plate法)最为简单，但仅适用于平的表面。

在层流下开启表面接触碟，碟内无菌琼脂培养基 (通常直径为50mm)直接与设备表面接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖；用蘸有75%酒精的棉球擦拭被取样表面，除去残留琼脂。

将取样后的接触碟置于预定时间内和规定温度下(例如30～35℃或20～25℃)进行培养，用肉眼对微生物计数并识别，有疑似控制菌应鉴别菌种。

此方法要求将培养基倒人培养皿中并使之隆起，应防止培养基溢出。

2.2 棉球擦抹法对洁净区消毒结束后，可对洁净室内的机械表面＼内部及缝隙间、墙壁、窗台、试验台等量取25cm2的面积，用事先经过灭菌的生理盐水、精制水或缓冲液(例如磷酸缓冲生理盐水)润湿的适当大小的灭菌纱布或灭菌脱脂棉充分擦拭，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内振摇(或作超声波洗涤)，再对浸出液进行增菌培养。

棉签取样能用于 Rodac 盘无法进行取样的场合，例如角落、缝隙等处。

棉签可以由棉花和涤纶制成。

如果棉签是由海藻酸钙做成的那就最好不过，因为这种材料可溶于稀释液，这样便于将微生物释放在溶液中。

擦拭时棉签要随时转动，保证擦拭的准确性。

对每个擦拭点应详细记录所在房间的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间。

2.3 浸渍法棉签先用灭菌稀释液(如注射用水)湿润，然后擦拭取样区域，最后放入一个装有灭菌稀释液的试管中。

样品应在2小时内进行测试，以免在稀释液中增加微生物数量。

试管经搅动从棉签上释放出微生物，稀释液则注入培养基盘内，经培养，然后计数并鉴别。

根据USP中表面微生物的检测，面积为25～30平方厘米，一个点使用一根棉签，擦拭完毕后将棉签剪断到5ml生理盐水中，分注到5个平皿中。

物体表面微生物监测标准操作规程

物体表面微生物监测标准操作规程1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程。

2.适用范围2.1医院感染高风险部门，每季度进行检测。

2.2 发生有暴发流行。

3.采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样，清洁区根据现场情况确定。

4.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序。

5.采样面积被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。

6.采样方法用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样1~4个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检。

门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。

若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

见表（5.5）。

表5.5化学消毒剂的常用中和剂消毒剂相应中和剂浓度（%）含氯消毒剂硫代硫酸钠0.2～1.0复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.2～1.0+2.0+0.3过氧乙酸硫代硫酸钠0.1~0.5过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂0.5～1.0+2.0+0.3碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温80 0.5+2.0甲醛双甲酮+马林 1.0+0.6戊二醛甘氨酸+吐温80 2.0+2.0乙醇吐温80+卵磷脂 3.0+0.3氯已定吐温80+卵磷脂注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液（PBS）为基础溶剂。

7. 检测方法将采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0ml接种平皿，将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。

8.结果计算：8.1规则物体表面物体表面菌落总数计算方法见式（A.2）：物体表面菌落总数(CFU/cm2)= 平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数.........（A.2）采样面积(cm2)8.2小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基2.1培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿2.2培养基：营养琼脂培养基2.3生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

2.4自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数3.1根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

3.2表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

3.3不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试6.1依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

6.2将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

6.3将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

6.4翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

6.5擦拭方法如图：6.6擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

药典表面微生物检测操作规程

题目：洁净区（室）表面微生物监测标准操作规程编码：颁发部门：质量部起草：日期：2015年月日修订日期：年月日审核：日期：2015年月日生效日期：2016年月日批准：日期：2015年月日发放份数：版次：第1版分发部门：质量部、中心化验室1.目的：建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2.范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

3.责任：表面微生物检测员。

4.内容：4.1基本概念：4.1.1菌落:细菌培养后,由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落,简称CFU.通常用个数表示。

4.1.3表面微生物菌落数:规定面积的洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面，用接触平皿法或擦拭法检测的微生物的菌落数目，以个/皿表示。

4.2测试原理:本测试方法利用接触平皿法或擦拭法收集洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物，经若干时间，在适宜的方法和条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。

4.3测试方法：4.3.1使用的仪器设备和培养基:高压消毒锅:使用时应严格按照操作规程进行。

恒温培养箱:必须定期对培养箱的温度计进行检定。

培养皿:一般采用φ90mm×15mm玻璃培养皿。

使用前将培养皿置于160℃干热灭菌120min。

接触碟：一般采用φ55mm无菌接触碟。

培养基:胰酪大豆胨琼脂培养基。

将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。

待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入32℃恒温培养箱中培养72小时若培养基平皿上确无菌落生长即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2-8℃的坏境中存放。

洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：空调系统验证的结果房间的用途与产品的距离人流物流方向如何布点：对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

表面微生物测试标准操作规程

1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。

4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向同一种培养基（对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

）5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。

5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。

5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。

取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。

表面微生物检测标准操作规程

目的：建立洁净室（区）中表面微生物测试标准操作规程，保证药品在规定洁净级别内进行生产。

范围：适用于洁净室（区）表面、设备以及与产品接触表面的微生物量的测试。

职责：质量管理部、QA检测员内容：1、测试方法:擦拭法2、仪器、设备、培养基培养皿：Φ90mm×15mm 培养皿培养基：营养琼脂培养基生化培养箱：必须定期对生化培养箱进行校验。

自动台式灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。

3、采样位置和采样点数根据洁净区内设施、设备等表面对产品和洁净室环境的影响程度，通常将表面分为三类：关键表面（与产品、容器及密封件直接接触或暴露于产品、容器及密封件的表面）、一般表面（如设备的外表面、墙壁等）和地板。

表面微生物监测的取样点数依据下列因素确定：3.2.1洁净区（室）的大小；3.2.2设备、管路等的复杂程度；3.2.3生产活动的重要性；3.2.4易受污染的部位。

如关键功能间的门、地面、墙面、生产设备的关键部位等。

不宜每次固定在同一点取样，应在取样点附近的不同位置取样，使测试结果更具代表性。

4、采样量：表面微生物取样面积宜控制在25cm2左右。

5、测试状态及时间：动态测试。

6、测试依据测试区域的取样点数，按照《培养基配制标准操作规程》制备适量的营养琼脂培养基。

将灭菌的棉签用灭菌注射用水润湿（棉签容易脱落纤维，故在使用前应先用注射用水预先清洗，以免纤维遗留在取样表面），并将其靠在瓶上挤压以除去多余的水分。

将棉签按在取样物表面上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面约25cm2，擦拭过程应覆盖整个表面。

翻转棉签，让棉签的另一面也进行擦拭。

但与前次擦拭移动方向垂直。

擦拭方法如图：擦拭完成后，将棉签放入无菌试管中并密封，检测时，加入15ml灭菌生理盐水，充分振荡混匀，取1ml样液注入到培养平皿中，加入约15ml配置好的营养琼脂培养基充分混匀，待培养基凝固。

7、培养：取样结束后将平皿复倒置于生化培养箱内35℃培养72小时，并以未采样的营养琼脂平皿作对照皿。

物体表面微生物污染检测标准操作规程

物体表面微生物污染检测标准操作规程一、采样方法
二、检测方法
充分震荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0 ml接种平皿，将冷却至40~45 ℃的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15~20 ml，36±1 ℃恒温箱培养48小时，计数菌落数。

三、结果计算
物体表面菌落总数计算方法：
1、规则物体表面：
细菌菌落总数（CFU/ cm²）：平均每皿菌落数×稀释倍数/
采样面积（cm²）；
2、不规则物体表面的结果计算，用CFU/件表示。

四、判定标准
1、Ⅰ、Ⅱ类环境：洁净手术部、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器
官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表
面细菌菌落总数≤5 CFU/cm²。

2、Ⅲ、Ⅳ类环境：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人工流产室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心检
查包装灭菌区和无菌物品存放区、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm²。

五、采样中的注意事项
1、采样时机：日常常规检测时可在消毒后采样，怀疑医院感
染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被污染时，应随机采样。

2、常规对环境物体表面消毒效果检测时可不进行致病性微生物检测，疑似医院感染暴发、进行医院感染暴发调查或工作中怀疑物体表面被微生物污染时，应进行目标微生物的检测。

3、采样、接种中严格遵守无菌技术操作规程。

洁净室(区)表面微生物检测操作规程

标准操作规程（STANDARD OPERATING PROCEDURE ）题目洁净室（区）表面微生物检测规程编码SOP-QC-011-00 文件属性■新订；□确认；□修订，第次，替代起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期颁发部门品质管理部颁发日期2018.07.23 生效日期2018.08.01 分发部门品质管理部1份，检验检测部2份，行政人事部1份，共印4份1. 目的：规范洁净室（区）表面微生物检测程序，以确切反映生产活动对环境的影响程度。

2. 适用范围：适用于洁净室（区）内包括设施、墙面、地面、设备表面和洁净服、操作手套等表面的微生物监测。

3. 责任人：QC：负责培养基的准备及取样后培养观察记录结果。

负责培养皿（液）的中间转运、记录填写及报告发放。

各车间工序指定人员：负责正常生产时对无菌注射剂车间动态洁净区的表面微生物检测。

4. 正文：4.1 测试条件：4.1.1 被测洁净室（区）温、湿度、静压差、换气次数和空气的流速必须控制在规定范围内；4.1.2 测试前，被测试洁净室（区）已经消毒；4.1.3 被测净化空调系统正常运行不少于30min后开始测定。

4.2 测试人员：测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服；4.3 测试前准备：4.3.1 定量法培养皿的准备：为购买的预灌装表面接触碟平皿，成分为大豆酪蛋白琼脂营养基（TSA），具有三层包装且经钴60辐照的预灌装表面接触碟平皿，可供采样用。

4.3.2 定性法培养基的准备：4.3.2.1 取250ml锥形瓶加入200ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.2 取500ml锥形瓶加入400ml营养肉汤培养基后，置121℃湿热灭菌20min后备用；4.3.2.3 取20ml试管注入10ml营养肉汤培养基后加塞，置121℃湿热灭菌20min后备用。

4.3.3 擦拭工具准备：4.3.3.1 擦拭用洁净棉签放在烧杯里包裹后，经过121℃湿热灭菌20min后备用。

物体表面微生物监测标准操作规程作业指导书

物体表面微生物监测标准操作规程作业指导书
目的：正确进行物体表面微生物监测
内容：
一.采集指征
1．医院感染监控重点科室，每月常规监测。

2．发生医院感染暴发流行时。

二.采集方法
采样时间:在消毒处理后进行采样。

采样方法:用5cm×5cm 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样 4 个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。

三.结果计算方式：平板菌落数*稀释倍数/采样面
积（cm2）
四.结果判断
Ⅰ、Ⅱ类区域工作人员：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

Ⅲ类区域：细菌总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。

表面微生物测试标准操作规程

1．目的建立表面微生物测试标准操作规程，保证测试人员操作规范化、标准化。

2．依据《药品生产质量管理规范》（2010年修订本）3．范围本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测。

4．责任质量控制化验员负责实施，QC主管负责监督执行5．内容5.1洁净区微生物测试点选择表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置：5.1.1空调系统验证的结果5.1.2房间的大小和布局5.1.3房间的用途5.1.4与产品的距离5.1.5人流物流方向对于同一洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地方采2个样。

如墙面2个采样点，地面2个采样点，洁净区主要设备2个采样点。

5.2洁净区微生物测试频率和限度5.2.1日常监控一月一次5.2.2接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。

5.3洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法）5.3.1洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。

5.3.2仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac（Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。

5.3.3取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。

取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。

5.3.4取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

5.3.5培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～28℃培养5天，以所有采样点的平均值加和报告最终结果。

5.4偏差纠正一旦发现表面微生物检测结果超标，可以采用以下行动进行调查和评估：5.4.1检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质是否确认；5.4.2回顾最近一次的悬浮粒子数的检测结果；5.4.3回顾最近一次的沉降菌的检测结果；5.4.4检查人员的更衣程序是否正确；5.4.5检查清洁设备和消毒剂的质量；5.4.5查看操作员工的培训记录。

物体表面微生物监测标准操作规程

物体表面微生物监测标准操作规程1.目的规范物体表面采样及监测标准操作规程.2.适用范围医院感染高风险部门,每季度进行检测.发生有暴发流行.3.采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样,清洁区根据现场情况确定.4.职责医院感染管理专职人员或兼职人员应遵守本程序.5.采样面积被采表面＜100cm2,取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2.6.采样方法用5 cm×5 cm灭菌规格板放在被检物体表面,用浸有无菌 mol/L磷酸盐缓冲液PBS或生理盐水采样液的棉拭子1支,在规格板内横竖往返各涂抹5次,并随之转动棉拭子,连续采样1~4个规格板面积,剪去手接触部分,将棉拭子放入装有10 ml采样液的试管中送检.门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样.若采样物体表面有消毒剂残留时,采样液应含相应中和剂.见表.含氯消毒剂硫代硫酸钠～复合含氯消毒剂硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂～++过氧乙酸硫代硫酸钠~过氧化氢硫代硫酸钠+吐温80+卵磷脂～++碘酊碘伏硫代硫酸钠+吐温80+甲醛双甲酮+马林+戊二醛甘氨酸+吐温80+乙醇吐温80+卵磷脂+氯已定吐温80+卵磷脂苯扎溴铵吐温80+卵磷脂注：配制各种中和剂均使用磷酸盐缓冲液PBS为基础溶剂.7. 检测方法将采样管充分振荡后,取不同稀释倍数的洗脱液接种平皿,将冷至40℃~45℃的熔化营养琼脂每皿倾注15ml~20ml；36℃±1℃恒温箱培养48h,计数菌落数,必要时分离致病性微生物.8.结果计算：规则物体表面物体表面菌落总数计算方法见式：物体表面菌落总数CFU/cm2=平均每皿菌落数×洗脱液稀释倍数.........采样面积cm2小型物体表面的结果计算,用cfu/件表示.9.结果判定I、II类环境：物体表面细菌菌落总数≤5 cfu/cm2.III、IV类环境：物体表面细菌菌落总数≤10 cfu/cm2.参考文献GB15982-2012 医院消毒卫生标准。

洁净室(区)表面微生物的检验操作规程

洁净室(区)表面微生物的检验操作规程.doc洁净室（区）表面微生物检验操作规程1. 目的确保洁净室（区）表面微生物的检验操作标准化，以评估和控制洁净环境的微生物污染。

2. 适用范围适用于所有需要进行微生物污染控制的洁净室（区）。

3. 责任质量管理部门：负责制定和更新检验操作规程。

检验人员：负责执行检验操作，并记录检验结果。

4. 术语和定义洁净室（区）：指按照特定要求控制空气、表面等微生物污染的封闭空间。

表面微生物检验：指对洁净室（区）内表面进行取样和分析，以评估微生物污染程度的过程。

5. 检验准备5.1 检验人员：检验人员应经过专业培训，熟悉检验操作规程。

5.2 检验工具和材料：准备必要的检验工具和材料，如无菌棉签、无菌生理盐水、培养基、手套、口罩、工作服等。

5.3 检验环境：确保检验环境符合洁净室（区）的要求，如温度、湿度、空气洁净度等。

6. 检验操作步骤6.1 表面取样6.1.1 取样点选择：根据洁净室（区）的布局和使用情况，合理选择取样点。

6.1.2 表面消毒：对取样点进行消毒，以减少非目标微生物的干扰。

6.1.3 取样：使用无菌棉签蘸取无菌生理盐水，轻轻擦拭取样点表面，收集样本。

6.2 样本接种6.2.1 培养基准备：根据需要选择合适的培养基，如琼脂平板。

6.2.2 接种：将取样棉签在培养基上轻轻涂抹，确保样本均匀分布。

6.3 培养6.3.1 培养条件：将接种后的培养基放入恒温培养箱中，设定适宜的温度和时间进行培养。

6.3.2 观察记录：定期观察培养基上微生物的生长情况，并记录数据。

6.4 结果分析6.4.1 计数：根据培养基上的菌落数，计算每平方厘米的微生物数量。

6.4.2 鉴定：对菌落进行形态学观察和必要的生化试验，以鉴定微生物种类。

6.4.3 数据分析：分析检验结果，评估洁净室（区）的微生物污染状况。

7. 检验结果的评估7.1 标准对比：将检验结果与洁净室（区）的微生物污染标准进行对比。

洁净区表面微生物检测方法标准操作规程

目的：建立检测洁净区的表面微生物污染的检测方法，保证洁净区达到要求。

应用范围：适用于洁净室的质量控制责任人：化验室微生物检验员。

内容：1 仪器与材料灭菌的培养皿及营养琼脂培养基，每个培养皿中倒入20ml培养基、121℃灭菌30分钟，然后30～35℃培养24小时，如无菌生长，则可用于试验。

2 取样检测方法包括：接触平皿法、棉签擦拭法及表面冲洗法。

取样人员于取样前检查琼脂平皿。

不得使用被污染、水汽过多、过于干燥或分装不均的平皿。

同一物体应在其不同的地方采2个样。

2.1 接触平皿法2.1.1 适用于对平整的有规则性表面进行取样。

碟子为直径50～55mm，培养基充满碟子并形成圆顶，取样面积一般约为25cm2。

2.1.2 取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，再盖上碟盖。

2.2.3 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。

2.2 棉签擦拭法2.2.1 适用于平皿接解法不适用的设备和不规则表面取样。

2.2.2 棉签的种类可选棉质、涤纶等。

将100个棉签用无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约50ml浸湿，包上铝箔放入不锈钢饭盒中，121℃灭菌30分钟。

2.2.3 取样时，握住棉签柄，以30角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积24～30 cm2，然后将取样头折断放入浸湿溶液中，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。

2.3 表面冲洗法2.3.1需要确定设备内表面的生物载荷或面积较大时采用此法。

2.3.2用经121℃灭菌30分钟无菌水冲洗内表面，刻度吸管吸取淋洗液1ml，膜过滤后，检测。

3 培养 30～35℃培养48小时。

4 采样量每个采样点分别用棉签法取样或使用接触平皿法充分接触。

5 采样结果每个培养皿中的菌落数与限度比较得出最后的评判。

6 偏差纠正发现表现检测结果超标，可以采取以下行动进行调查和评估6.1 检查取样和样品的处理是否正确，包括取样人员的资质等。

表面微生物监测标准操作规程

表面微生物的监测标准操表面微生物的监测标准操作规程作规程作规程作规程目的目的??建立表面微生物测试标准操作规程保证建立表面微生物测试标准操作规程保证测试人员操作规范化标准化测试人员操作规范化标准化依据依据??药品生产质量管理规范药品生产质量管理规范2010本本2010年修订年修订范围范围??本规程适用于本公司对洁净区的表面微生本规程适用于本公司对洁净区的表面微生物的检测物的检测物的检测物的检测洁净区微生物测试点选择洁净区微生物测试点选择??表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方表面微生物监测的采样点数目及其布局根据以下几个方面设置
▪ 日常监控一月一次 ▪ 接触碟（ 55mm）50cfu/25cm2，警戒40cfu/25cm2，纠偏45cfu/25cm2。 ▪ 洁净区表面微生物测试方法（接触平皿法） ▪ 洁净区表面微生物测试必须在动态下监测。 ▪ 仪器与材料：如使用自制培养基，须按照《中国药典》2010版药典制备营养琼脂培
养基和玫瑰红钠琼脂培养基，灭菌制备成Rodac （Replicate Organism Detection and Counting）的培养皿，也可在外购买。 ▪ 取样：表面微生物监测用于表面菌监测，接触平皿法广泛应用。取样时，打开碟盖，无菌培养基表面与去仰面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触，接触约5秒钟，再盖上碟盖。 ▪ 取样后，需要立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以除去残留琼脂。 ▪ 培养：收好的营养琼脂接触碟在30～35℃培养3天，玫瑰红钠琼脂培养基在23～ 28℃培养5天，以所有采样点的平均值总和为最终结果。
洁净区ห้องสมุดไป่ตู้面微生物的趋势分析
▪ 定期（建议每年）应对洁净区表面微生物惊醒趋势分析。如果发现表面微生物有增加的趋势，应立即通知质量部，展开调查。根据调查结果采取相应的行动对系统进行纠正。