肺炎克雷伯菌的生物危害评估报告

肺炎克雷伯菌

的生物危害评估报告

一、细菌的传播与致病

肺炎克雷伯菌广泛分布于自然界及人和动物的胃肠道内，是临床标本中常见的细菌，可引起典型的原发性肺炎，该菌在正常人鼻咽部的带菌率1%~6%，但在住院病人中可高达20%。该菌是酒精中毒者、糖尿病人和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部感染的潜在危险因素。

肺炎克雷伯菌也能引起各种肺外感染，包括肠炎和脑膜炎（婴儿）、泌尿道感染（儿童和成人）及败血症。近十几年来由该菌引起的免疫低下患者感染和医院感染不断增加，已成为社区感染和医院感染的重要病原菌。其对抗生素的耐药性也不断增强。

二、细菌的生物学特性

肺炎克雷伯菌属于肠杆菌科克雷伯菌属，为革兰氏阴性杆菌，无鞭毛、无芽胞，但有明显的荚膜。兼性厌氧，对营养的要求不高。

三、细菌的实验室检查及其它检查

1.标本采集采自不同感染部位的各种标本，主要是痰标本。

2.分离培养将标本接种于血琼脂和或MAC选择性培养基，于37℃孵育过夜。可分别形成较大的、凸起、灰白色粘液型的菌落以及MAC上红色（易扩散至周围的培养基中）、大而厚实、粘液型光亮的菌落。这些相邻的菌落容易发生融合，用接种针沾取时常可挑出长丝状的细丝。

3.染色镜检可见革兰氏阴性杆菌，无芽胞，但在菌体外有明显的荚膜。

4.生化鉴定该菌氧化酶阴性，发酵葡萄糖产酸产气、动力阴性、吲哚阴性、鸟氨酸脱羧酶阴性、VP试验阳性、脲酶阳性。

5.生长试验该菌不能在5℃和10℃生长，但能41℃生长。

6.荚膜肿胀试验可利用特异性的抗血清进行荚膜肿胀试验以鉴别本菌属及类似菌属。将待测菌接种于华-弗（Worfel-Ferguson）培养基上（有利于荚膜的产生），经35℃、18~24h培养后，取一滴培养物加于载玻片上，加墨汁一滴或美蓝液一滴，再加入抗血清1接种环，混合后加盖玻片，置显微镜油镜下观察。在菌体周围出现较大的空白圈者为阳性。该菌表现为阳性。

7.肠毒素测定对小儿肠炎患者除了要做菌种鉴定外，尚需做肠毒素测定以明确被检菌的致病力。可用兔肠接扎试验、细胞形态变化等方法测定。

四、细菌的防治

目前几乎所有的肺炎克雷伯菌临床分离株都携带有耐氨卞青霉素和羧卞青霉素的R质粒，由于该菌对抗生素的耐药性一直不断增强，所以临床一定要结合药敏试验的结果进行针对性用药。

该菌为条件致病菌，易感人群主要是免疫功能较低下者。因此应及时隔离治疗患者，并作好家庭、社区和医院的消毒。

五、细菌的生物安全防护

根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）肺炎克雷伯菌属于三类，BSL-2。

（1）操作要求

1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。

2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。

3、所有的操作过程应尽量细心，避免产生和溅出气溶胶。

4、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。

5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。

6、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。

7、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。

8、溅出或偶然事件中，明显暴露于传染源时，要立即向实验室主任报告。进行适当的医学评估、观察、治疗，保留书面记录。

9、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。

（2）安全设备

1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或

物理遏制装置。

2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。

3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。

4、当必须在生物安全柜外处理标本时，需采取面部保护措施（跟镜、口罩、面罩、或其他防溅装置），以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。

5、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。

6、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。

我院检验科病原微生物实验室按二级生物安全实验室要求建设和装备。本次评估是从肺炎克雷伯菌生物因子的特性开始，对实验室常规活动和非常规活动存在的风险和潜在的风险进行评估，对所能产生的风险制订了相应的消除、降低或控制风险的管理措施和技术措施，并对所涉及的设施、设备、人员进行了评估，制订了一系列相应文件，已经将已知和未知的风险降到了可接受程度，实验室具备开展肺炎克雷伯菌检测的条件和能力。