云南珍稀植物铁皮石斛研究初报

云南珍稀植物铁皮石斛研究初报

铁皮石斛为传统中药,由于其生长条件要求苛刻，自然繁殖率低，自然产量十分有限，加之其药用价值昂贵，遭到过度采挖，野生资源濒临灭绝.采用组织培养繁育和野生种植技术，成功实现了铁皮石斛人工繁育和大田栽培,组培苗大田移植成活率达95%以上.大田栽种2 a后，可收鲜石斛4 500～7 500 kg/hm2.文中重点阐述了铁皮石斛的组织培养、生根苗炼苗驯化、田间管理及收获加工等人工繁育和大田栽培技术.铁皮石斛种苗人工繁育与农田集约化栽培技术的成功,有效地挽救了这一濒危珍稀物种，为保护生物多样性和铁皮石斛的可持续利用创出了一条新途径.

Key words: Dendrobium Officinale, tissue culture propagation, artificial breeding cultivation techniques

石斛（Dendrobium）是兰科（Orchidaceae）植物，我国常用中药之一，药用始载于《神农本草经》，列为上品,称其“主伤中、除痹、下气、补五脏、虚劳羸瘦、强阴”,历代本草和《中华人民共和国药典》均有记载，早在宋代《名医别录》中就记载“石斛生六安、山谷、水旁、石上”.后有《本草图经》载称“今荆州、充州、寿州、庐州、江州、温州、台州亦有之，以云南广南者为佳”.石斛是滋阴要药，具有厚肠胃、轻身延年、滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、润喉明目、润肤养颜、延年益寿之功效，中医广泛应用.据当代医学实践，铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）还具有提高机体免疫力、抗衰老、降血糖、抗肿瘤等功效.对因工作学习紧张劳累、烟酒过度等引起的虚火上升等有显著的缓解效果.调查发现，目前石斛类植物全球共有1 500多种，我国有84种2变种，其中以铁皮石斛滋阴效果最好，药用价值最高.然而，由于长期采挖，又因森林遭受破坏，生态环境恶化，铁皮石斛野生资源几乎枯竭而处于濒临灭绝的境地.国家第一批《中国珍稀濒危保护植物名录》中将其列为濒危种类之一.石斛种子较小，不含胚乳，在自然条件下很难萌发，分株繁殖很慢.用组织培养方法，大量、快速繁殖性状一致的试管苗是解决种苗不足的有效而实用的技术.石斛试管繁殖技术归纳起来有以下几个方面:在外植体选择上有种子、茎段、茎尖、叶片等，都可诱导分化成苗.由于种子数量大，繁殖率高，繁殖速度快，成苗较整齐，应用得最多.对不同培养阶段（种子萌发、增殖培养、壮苗培养、生根培养），筛选适宜的培养条件（培养基种类、天然添加物、湿度、光照）等，以期缩短试管苗生长周期，提高壮苗率.栽培试验表明，试管苗的质量对移栽成活率和后期生长有很大影响.因此，在试管苗培养中获得整齐一致的壮苗至关重要.选育出产量高、质量稳定、适宜性强的优良品种是发展石斛种植业的基础.云南省农科院农业环境资源研究所特色植物研发中心经过数年的探索，掌握了铁皮石斛组织培养快速繁殖技术，克服了组培苗大田栽培难关，成活率几乎达到95% 以上，栽培2 a 后即可获得商品药材. 1组织培养 1.1外植体类别

采用广南野生铁皮石斛蒴果.1.2培养条件

1）诱导培养基：1/2MS+6-BA 0.5 mg+NAA 0.05 mg/L+马铃薯5%+香蕉2%

2）增殖培养基：1/2MS+6-BA 1.5 mg+NAA 0.10 mg/L+马铃薯5%+香蕉5%

3）生根培养基：1/2MS +NAA 0.20 mg/L+马铃薯5%+香蕉5%

以上培养基均附加0.1%的活性炭、3%的白糖、0.6%琼脂，pH值5.8，培养温度为（25±2）℃，光照12 h/d，光照强度2 000 LX左右. 1.3生长与分化情况 1.3.1外植体的获得

10～11月份，从植株上切取蒴果，在流水下冲洗，用加有少量洗衣粉和1滴吐温-80的水振荡冲洗5 min，然后用水冲洗干净.在无菌的条件下，用75%的酒精消毒30 s，再用加有1滴吐温-80的0.1%升汞溶液浸泡10 min，最后用无菌水冲洗4～5次.用无菌滤纸吸去蒴果表面水分，将蒴果切为两半，把种子均匀播到诱导培养基上. 1.3.2原球茎的诱导

外植体在培养基诱导培养基上培养20 d后，种子转绿，部分种子开始萌动，35 d后80%的种子开始萌发，20%的种子产生具有细小白色绒毛的类原球茎.

1.3.3原球茎增殖培养

将诱导培养中产生的萌动芽和类原球茎分开,接种到增殖培养基上，20 d后萌动芽和类原球茎开始分化产生不定芽（类原球体成芽分化率92.2%），芽健壮，50 d后芽高度达3 cm以上. 1.3.4生根培养

将增殖培养中高度达3 cm以上的芽接种到生根培养基上，15 d后茎节开始生根，30 d后，生根率达95%以上，60 d后，当苗高8 cm以上具6～8片叶，便可将生根瓶从培养车间转移到阳光大棚，进行壮苗培养. 1.3.5壮苗培养

将组培车间达到出瓶标准的生根甁苗转移到阳光温棚，进行阳光壮苗30 d.使苗根系发达，茎秆粗壮，叶片开展度好，叶色油润、浓绿增强适应力，提高驯化苗成活率，驯化苗成活率可达95%以上. 2生根苗炼苗驯化 2.1穴盘选择

不同规格的穴盘对种苗的生长影响差异很大，生产中应根据种苗大小、生长速度等因素来选择适当穴盘，以兼顾生产效能和种苗质量，本研究选用50孔穴盘. 2.2消毒

包括种苗消毒、穴盘消毒、基质消毒、苗床消毒等.种苗消毒采用2 000倍多菌灵药液浸泡10 min，穴盘播种前必须清洗干净，后采用0.1%高锰酸钾药液进行消毒处理，未经消毒的穴盘禁止反复使用.苗床在每育一批种苗后都要进行消毒处理.基质采用2 000倍多菌灵药液浸泡24 h，然后堆捂发酵2～3个月. 2.3基质配制

炼苗基质用纯松树皮，规格大小为0.5 cm×0.5 cm，经消毒、发酵，并喷水充分湿润,不能有块状，使之手握成团,松手即散. 2.4移栽定植

要保证每个穴孔都有种苗，并且都要在孔的正中，移栽深度要适宜，不能埋到茎基部. 3田间管理

根据当地气候特点、并遵循铁皮石斛组培苗生长规律及时进行田间管理,原则如下：移栽的第一步主要是保湿，促进根系生长，提高成活率.移栽成活后，保湿加肥，促进苗生长和分枝,并注意病虫害的防治.此外，要注意及时拔草、打苔、修整、及时剪去枯茎、病茎和生长过密的茎枝以促进萌发健壮的新茎枝.移栽1～1.5 a后，剪枝采收，施肥促长新枝. 3.1移栽定植后管理

移栽定植后，浇透定根水，用遮光网遮光80%,并根据空气温湿度适当进行叶面喷雾，防止叶面脱水.7 d后，逐步适当增强光照，避免强光直射.一般白天棚内保持27℃，夜间不低于15℃,15 d后遮光70%，适时适量补水，防止干燥.每周用75%的百菌清600倍液喷雾一次，防病保苗.

水肥管理是穴盘炼苗驯化能否成功的关键因素，频繁浇水会加速基质养分淋失，降低透气性，不利于根系生长，同时湿度过大会诱致病害发生，增加病害发生的机会，造成根腐、茎腐、叶斑病等病害的发生.但如果水长期没有浇透，则会抑制根系及植株生长，苗生长整齐度差，严重影响苗正常发育，出现落叶、封顶等情况.因此穴盘苗浇水方法很重要，应在早晨浇足、浇透水，不要每天都浇水，做到适时适量浇透水，对水分不足的孔穴，可在下午进行点片补水.炼苗驯化20 d后，施用颗粒缓释肥30 kg/hm2，用0.1%花多多进行叶面喷雾，以保证种苗健壮、整齐. 3.2病虫害防治

搞好大棚的温度湿度调控，以及通风透气工作，以防病虫害发生，倘若发生黑腐病、炭疽病等，常用75%的百菌清600倍液或25%瑞毒霉600倍液，连续喷2～3次，间隔7～10 d.可采用在苗床周围撒生石灰等方法防治蜗牛.

4收获加工

铁皮石斛组培苗通过农田栽培2 a后开始采收.采收时用剪枝剪刀从茎基部剪下.剪割时，应收老留幼，剪大留小.将采收的铁皮石斛剪成一定的长度，放在炭火上烘焙.边搓揉边干燥，使成螺旋状或弹簧状，反复多次，直到不变形，即成传统中药——铁皮枫斗. 5结语

野生石斛为濒危珍稀中药材.应用上述技术，以铁皮石斛蒴果作为外植体进行组织培养可繁育出人工种苗.同时，通过人工集约化栽培技术，模拟野生铁皮石斛自然生长条件，营造适于铁皮石斛生长要求的湿度、温度、荫蔽等的环境，并结合人工配制基质，组培苗移植成活率可达95%以上，生长整齐、健壮，大田栽种2 a后，可收获鲜石斛4 500～7 500 kg/hm2，其主要生物活性成分与野生铁皮石斛相近.铁皮石斛人工繁育与农田栽培技术的成功,有效地挽救了这一濒危物种，为保护生物多样性和铁皮石斛的可持续利用创出了一条新途径. 参考文献:

［1］倪勤武,来平凡,陈益平. 富阳市野生铁皮石斛资源调查与驯化栽培研究