猪乙脑抗体检测卡说明书(完整版)
猪的疾病 猪流行性乙型脑炎 的知识和防治
猪的疾病猪流行性乙型脑炎的知识和防治一、概述：猪流行性乙型脑炎(Swine epidemic encephalitis B)是由流行性乙型脑炎病毒引起的一种人、畜共患传染病。
猪感染后表现为高热、流产、产死胎及公猪睾丸炎。
本病由蚊虫传播，常于夏末初秋流行，有明显的季节性。
从1871年首次在日本发现至1934年在日本分离出乙脑病毒，已有过十几次大流行。
现在东南亚地区的日本、朝鲜、菲律宾、泰国、印度尼西亚、印度及我国都有发生，其他国家称为日本脑炎，为了与日本冬春季流行的一种嗜眠性脑炎(称流行性甲型脑炎)相区别，故将本病称为乙型脑炎。
本病分布很广，主要在亚洲各国发生，我国较多地区都有发生，人畜共患，危害甚大，被世界卫生组织列为需要重点控制的传染病。
也是我国重点防制的传染病之一。
二、病原：流行性乙型脑炎病毒属黄病毒科(Flavividae)、黄病毒属(Flavivirus)，是一种小的病毒。
病毒粒子直径约30～40nm，呈球形，20面体对称，为单股RNA。
在氯化铯中的浮密度为1.24～1.25g/cm3。
有囊膜，外层为含糖蛋白的纤突。
外层纤突是具有血凝活性，能凝集鹅、鸭、鸽、绵羊和雏鸡的红细胞。
但不同毒株的血凝滴度有明显的差异。
本病毒能在多种细胞上培养繁殖。
可在鸡胚卵黄囊内繁殖，在鸡胚成纤维细胞、猪肾细胞、仓鼠肾细胞、牛胚肾细胞以及BHK21、PK15、Hela、Vero等传代细胞中增殖，并产生细胞病变和形成蚀斑。
马、牛、羊、猪、鸡都有相当高的隐性感染率，病毒在感染动物血液内存留的时间很短，主要存在于脑、脑脊髓液和死产胎儿的脑组织，以及血液、脾、肿胀的睾丸，以肿胀睾丸的含毒量最高。
流行地区的吸血昆虫，特别是伊蚊属和库蚊属昆虫体内常能分离到病毒。
试验动物中，各种年龄的小鼠都有高度的易感性，是常用来分离和繁殖病毒的实验动物，其中以1～3日龄的乳鼠最易感。
小鼠脑内接种最好，接种后2～4天发病，并于1～2天死亡。
十六、乙型脑炎检测方法
十六、乙型脑炎检测方法猪乙型脑炎乳胶凝集试验（LAT）诊断试剂盒使用说明书猪乙型脑炎是由流行性日本乙型脑炎病毒（JEV）引起的猪的一种繁殖障碍性疾病。
此病引起妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎，公猪睾丸肿胀，萎缩、丧失配种能力及新生仔猪痉挛死亡。
临床上该病多呈散发，流行常发生于蚊虫滋生的炎热季节，，患畜病初体温升高、精神沉郁、跛行、有神经症状，病愈后隐性带毒，种猪表现繁殖障碍，该病给养猪业带来较大的经济损失。
猪乙型脑炎乳胶凝集试验是用乙脑弱毒疫苗毒株经纯化、浓缩等程序后致敏乳胶，制成乳胶凝集试验用抗原，用于检测动物血清中的乙脑病毒抗体，可在现场进行，具有安全、简便、快速、特异、敏感之优点。
1．试剂盒的内容：本品包括猪乙型脑炎致敏乳胶抗原、阳性血清、阴性血清、稀释液、玻片、吸头及使用说明书。
2．制品用途：用于猪乙脑血清学诊断。
3．使用方法：3．1 定性试验：取待检样品（血清）、阳性血清、阴性血清、稀释液各一滴（约15微升左右），分别置于玻片上，再各加乳胶抗原一滴，用牙签混匀，搅拌并摇动1~2分钟，于3~5分钟内观察结果。
3．2定量试验：先将血清作连续稀释，各取1滴依次滴加于乳胶凝集反应板上，另设对照同上，随后再各加乳胶抗原一滴，如上搅拌并摇动，判定。
4．结果判定：4．1对照试验：出现如下结果试验方可成立，否则应重试：阳性血清加抗原呈“++++”；阴性血清加抗原呈“—”；抗原加稀释液呈“—”。
4．2 判定标准：“++++”全部乳胶凝聚，颗粒聚于液滴边缘，液体完全透明；“+++”大部分乳胶凝集，颗粒明显，液体稍混浊；“++”约50%乳胶凝集，但颗粒较细，液体较混浊；“+”有少许凝集，液体呈混浊；“—”液滴呈原有的均匀乳状。
以出现“++”以上凝集为阳性。
5.贮藏:在2-8℃冷暗处保存，有效期暂定1年。
6.附注：被检样品采集及处理方法。
6．1 血清：按常规方法分离血清，要求无腐败。
6．2 使用前应轻轻摇匀乳胶抗原。
猪乙型脑炎的诊断与防治
３ 病理 变化
每天 用量最 多不 超过 １ ０ ｍ ｇ 。
患病猪脑 和脊髓膜充血 ，脑室和脊髓腔液增 多。公猪睾丸 ６ ． ３ 缓解神经症状 不 同程度 肿 大 ，睾 丸 实质 充 血 、出 血和 出现坏 死 灶 睾丸 鞘膜 腔 内 脑水肿或脑疝时，应立即采用脱水剂治疗。一般可用２ ０ ％ ５ ％山梨 醇 ，静 脉注 射 ，ｌ ０ —２ ０ ｍｇ ／ ｋ ￣ 次 ，１ ５— ３ ０ｒ ａ ｉ ｎ 推 有大量粘液 ，副睾边缘和鞘膜脏层出现纤维性增厚 ，子宫内膜充 甘露 醇或２
病毒的贮存宿主。本病有 明显的季节性，流行高峰期主要在夏季 力 ，有较好 的预 防效果 。 至初 秋 ，８ ０ ％的病 例 发生 在 ７ ～９ 月份 。本病 的发 生有 一 定 的年 龄 ５ ． ２ 消灭传 染媒 介和 传染源 关系 ，与性成熟的时期基本符合 ，多在出生后６ 个月或更早一些发 预防 乙型脑炎 的最有效 、最简单 、最 经济 的方法是防蚊灭 生 。本 病有 一 定 的地 区性 ，常在 低 洼 地 区呈散 在 性 发生 ，或呈 地 蚊 ，注 意环 境 卫 生 ，疏通 沟 渠 ，排 除 积水 ，彻 底 消 除蚊 子 的滋 生
血 、 出血 和有 粘液 。流产 或早 产 胎 儿脑 水 肿 ，皮 下 血样 浸润 ，肌 完 ，６ ｈ 后再 注 射 １ 次 。或 者 用 异戊 巴 比妥 钠 （ 阿米 妥 钠 ），２ —５
方性 流行猪舍卫生 。认真落实消毒制度 ，猪圈及用具要按照要 求经常消毒 ，同时也可使用菊酯类喷雾剂对猪舍 内外进行经常性
生猪常突然发病 ，体温升高至４ Ｏ ℃ 一４ １ ℃ ，呈稽留热 ，持续 喷洒 以消灭 蚊子 。 几天至十几天 ；病猪精神萎顿 ，嗜眠喜卧，食欲减少 ，口渴 ；眼 ５ ． ３ 生物无 害化 处理 结膜充血潮红 ；粪便干燥呈球形 ，表面常附有灰黄色或灰 白色的 严格贯彻落实防疫制度 ，妥善处理好病死猪尸体、死胎、胎 粘液 ；尿 呈深 黄 色 ；有 的 病 猪 后 肢 呈 轻 度 麻 痹 ，步 态 蹒 跚 ，关 盘和阴道分泌物等，将死胎 、木乃伊 、胎衣等深埋 ，对被污染 的 节肿大 ；有 的病猪表现精神兴奋 ，出现神经症状 ，横 冲乱撞 。 场地 、用具等进行彻底的消毒 ，用常用消毒药即可将乙型脑炎病
生猪乙型脑炎抗体消长规律及蚊子携带乙脑病毒调查
生猪乙型脑炎抗体消长规律及蚊子携带乙脑病毒调查向卫军;杨涛涛;刘浩;罗季伟;余兴龙【摘要】为探寻猪场仔猪乙型脑炎抗体消长与蚊子携带乙型脑炎病毒的之间的关系,4月份选取一批约15日龄仔猪共24头,每隔20d采血1次,至7月共采血6次,用间接ELISA方法检测血清乙型脑炎抗体,且不同时间在跟踪猪舍共捕获约3720只蚊子,用RT-PCR方法鉴定乙型脑炎病毒核酸;结果表明,该批猪乙型脑炎抗体阳性率总体呈现先下降后升高规律,阳性率先后为83.3％、66.7％、41.6％、25％、50％、91.6％,生猪体内母源抗体水平在75日龄(6月20日)达到最低,阳性率降至25％,然后呈现明显的上升趋势,115日龄(7.月30日)检测阳性率高达91.6％;37份蚊子样品,JEV核酸阳性样品16份,阳性率高达43.2％,其中7月份所采集14份蚊子样品检出7份,乙型脑类病毒(JEV)阳性检出率最高达50％,表明在乙型脑炎流行季节,受蚊子携带病毒及其叮咬影响,当仔猪JEV抗体下降最低时JEV易感,后期感染抗体升高.【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2017(053)004【总页数】4页(P27-30)【关键词】乙型脑炎病毒;仔猪;抗体;蚊子【作者】向卫军;杨涛涛;刘浩;罗季伟;余兴龙【作者单位】湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;长沙市动物卫生监督所,湖南长沙410013;湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128;湖南农业大学动物医学院,湖南长沙410128【正文语种】中文【中图分类】S852065+1流行性乙型脑炎是由黄病毒科黄病毒属的乙型脑炎病毒引起的一种重要的蚊媒性人兽共患传染病，多种动物易感。
对于易感动物来说，乙型脑炎是一种潜在的致死性病毒性感染疾病，也是严重威胁人畜健康的一种中枢神经系统的急性传染病，同时也是亚洲病毒性脑炎的主要原因。
乙型脑炎以三带喙库蚊为主要传播媒介，属于自然疫源性疾病，猪是乙型脑炎病毒的重要贮存宿主与增殖宿主，是乙型脑炎的主要传染源，也是对人类威胁最大的扩散宿主，主要流行模式是JEV在“蚊-猪-蚊”中循环繁殖。
猪免疫球蛋白A
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
8、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次(也可用洗板机按说明书操作洗板)。
9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液50μL，平板混匀器混匀30s (或用手轻轻震荡混匀30s)，37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应(颜色由蓝色立转黄色)。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值(OD值)。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。
最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。
【猪免疫球蛋白A(IgA)Elisa试剂盒样本要求】1、样本不能含叠氮钠(NaN3)，因为叠氮钠(NaN3)是辣根过氧化物酶(HRP)的抑制剂。
2、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能立即试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
3、样本应充分离心，不得有溶血及颗粒。
【猪免疫球蛋白A(IgA)Elisa试剂盒注意事项】1、实验严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准。
2、酶标包被板开封后如未用完，应立即装入密封袋中加干燥剂保存。
3、建议所有的标准品、样本和空白对照都做双份检测，取平均值，以减小实验误差。
4、牢记样本已经稀释5倍，计算结果乘以5才是样本实际浓度。
5、本试剂盒定量范围为2.5-80μg/mL，超过此范围，为标准曲线延伸计算所得，不做为准确定量结果，请用特殊稀释液稀释后测定准确结果(2.5-80μg/mL范围内)，乘以总稀释倍数即为样本最终浓度。
脑易净 猪用乙脑疫苗 说明书
脑易净猪乙型脑炎活疫苗（SA14-14-2株）说明书兽用【兽药名称】通用名：猪乙型脑炎活疫苗（SA14-14-2株）商品名：脑易净英文名：Swine Japanese Encephalitis Vaccine ,Live（SA14-14-2 Strain）汉语拼音：Zhu Yixingnaoyan Huoyimiao (SA14-14-2 Zhu)【主要成分与含量】含乙型脑炎病毒SA14-14-2株，每头份病毒含量≥105.0PFU。
【物理性状】本品呈乳白色或浅黄色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解。
【作用与用途】用于预防猪乙型脑炎。
对仔猪的免疫期为6个月，对母猪的免疫期为9个月。
【用法与用量】用法：按瓶签注明头份，用本品专用的稀释液，稀释后肌肉注射。
用量：仔猪、母猪、公猪均注射1头份。
推荐免疫程序为：种用公、母猪于配种前（6-7月龄）或每年蚊虫出现前20-30日肌注1头份，热带地区每半年接种一次。
在乙脑重疫区，对其他类型猪群也应预防接种。
【不良反应】一般无可见的不良反应。
【注意事项】⑴疫苗在运输、保存、使用过程中应防止高温、消毒剂和阳光照射。
使用本疫苗前应仔细检查包装，如发现破损、标签不清、过期或失真空现象时禁止使用。
⑵被注射猪必须健康，如体质瘦弱、有病、食欲不振者均不应注射。
⑶免疫所用器具均应事先消毒，用过的空疫苗瓶及器具应及时消毒处理。
每注射一头猪必须更换一次消毒过的针头。
⑷本疫苗必须用专用的稀释液稀释，应随用随稀释，并保证在稀释后2小时内用完。
⑸其他注意事项见兽用生物制品一般注意事项。
【规格】2头份/瓶、5头份/瓶、10头份/瓶、20头份/瓶。
【包装】10瓶/盒，20瓶/盒。
【贮藏与有效期】在2-8℃避光保存，有效期为9个月。
在-20℃避光以下保存，有效期为18个月。
【批准文号】兽药生字(2011)090201068。
猪瘟抗原检测卡说明书(完整版)
猪瘟抗原快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书【名称】通用名称：猪瘟抗原快速检测试剂盒（胶体金法）英文名称：Rapid CSFV Test汉语拼音：Zhuwen Kangyuan Kuaisu Jiance Shiji He(Jiaoti Jin Fa)【用途】用于检测猪血清/血浆/全血样品中猪瘟病毒(Classical Swine fever virus, CSFV)抗原，用于猪瘟的辅助诊断。
【实验原理】猪瘟病毒抗原快速检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维纸上预包被金标记鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Au-Ab1），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Ab2）和羊抗鼠IgG，检测样品为阳性时，样品中的猪瘟病毒抗原（Ag）可与包被在试纸条前端的胶体金标记的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Au-Ab1）结合，形成免疫复合物，由于层析作用，复合物沿膜带向前移动，经过检测线时与预包被的鼠抗猪瘟病毒单克隆抗体（Ab2）形成“Au-Ab1-Ag-Ag2-固相材料”免疫复合物而凝聚显色，游离金标记抗体在对照线处与羊抗鼠IgG体结合而富集显色。
阴性样品则仅在对照线处显色。
检测时只需将血清/血浆/全血加在检测卡的加样孔内，操作简便、快速，结果直观、准确，灵敏度高，容易判定。
【试剂盒组成】1.猪瘟抗原检测卡50头份2.说明书1份3.一次滴管50根【试验方法】1、将检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并做好标记。
2、在检测卡的加样孔内加入2滴（70-100ul）待检血清/血浆/全血标本。
3、20分钟内观察并记录实验结果。
【结果判定】阳性：对照线区（C）和检测线区（T）各出现一条紫红色线。
阴性：只有对照线区（C）出现一条紫红色线。
无效：未出现紫红色线或只在检测区(T)出现紫红色线，对照线区(C)未出现紫红色线。
【注意事项】1. 操作前请仔细阅读说明书；2. 检测样品可以是血清/血浆/全血；3. 检测卡从铝箔袋中取出后，应尽快进行试验，避免放置于空气中过长时间，试剂吸潮后将失效；4. 实验环境应保持一定湿度，避风，避免在过高温度下进行试验；5. 试剂盒在室温下保存，如在2-8℃冷藏，使用前应平衡至室温后方可打开铝箔袋进行检测操作。
国内猪传染性乙型脑炎的检测及预防
传染 性 乙型脑 炎又称 日本 乙型脑 炎 （ ） 是 一 增区域 。崔奕杰 ［ 吕晓丽同 Ｊ ， Ｅ ５ ３ 与 分别利用针对 Ｅ蛋 白基 因的引物扩 增出特 异性片段 ３２ｂ 和 ３９ｂ ， ６ Ｄ ４ ｐ 后者 种人畜共 的大范 围应用， 近年来发生率大幅下 降。 但因 还 同时 建立 了可 定量 的荧 光 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ法及 可 同 时 为猪和蚊 虫的储 存与传 播作用，导致 该病 并不能完 检测 乙脑 、猪 流感 和蓝 耳病 ３种 病毒 的 多重 Ｒ — Ｔ
全 消灭 。 调查发现 ， 人群中该病 的发生通常要较猪群 的感染晚 ３ ４周左右 ，因此加强猪群 的检测 对人群 ～ 的防控 具有重要指导意义 ，而 做好猪 群的预防工作 则可 以进 一步减少发生几率 。本文仅就近年来有关 猪传染性 乙型脑 炎检测 及预防方面的国 内相关研究 进 行综述 ， 以期能够为临床应用提供 一定参考 。 １ 检测方 面
１０ ｌ
养 猪 Ｓ Ｎ Ｒ Ｄ Ｃ ＩＮ （ ＷＩＥＰ Ｏ Ｕ ＴＯ ２ ）
２ ｌ ０２
国 内 猪 传 染 性 乙 型 脑 炎 的 检 测 及 预 防
朱 秀高 （． １山东滨州沃华生物工程有限公司， 山东 滨州 ２ ６ ０ ；． ５ ６ ０２山东滨州博莱威生物技术研究所， 滨州 ２ ６ ０ ） ５ ６ ０
Ｐ Ｒ； Ｃ 孙圣福［ ７ １ 使用针对 Ｎ １ Ｓ 基因保守区的特异性 引 物 建立 了一种 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ方法 ，其 扩增 片段 大 小 为 ４ ０ｂ 。Ｒ — Ｃ ３ Ｄ Ｔ Ｐ Ｒ方法 除在研 究中使用外 ， 目前 Ｇ ／ Ｂ Ｔ ２３ ３ ０ ８和 Ｓ ／ ４ ２ ２ １ ２ ３ —２ ０ ＮＴ ２ ７ － ００均 已将 其 作 为 标准检测方法进行推广 。临床 中， 吕晓丽等＿ 利用 ８ 还 ｌ 建立的 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ法 对发 生于 新郑 地 区 的一例 初产 母猪 流产病例 的病料进 行检测 ，结果显 示为 Ｊ Ｅ阳 性。 在引物设计参考区选择上 ， 唐青海等［ ９ １ 选用 ３ 末 １１ 病 原 检 测 ． 通过对 乙脑病 毒 的检测 可 以进行 疾病 诊 断及 端 保 守区建 立 的 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ方 法也 具 有高特 异 性和 ２ｐ ） 流行病 学调查 。在进 行抗原检 测时 ， 从疾病 诊断角 灵敏 性 （ ｇ 。 度考虑 ，可 以只对流 产胎儿等病 料组 织进行检 测 ； １２ 抗 体 检 测 ． 如果要进行 的是流 行病学调 查 ， 则应 扩大检 测范 围 抗 体检测 即检验血 清 中抗 体有无及 其含 量 ， 由 至蚊 虫及猪 群 附近 其他 易感 动物 。时问安排 上 ， 疾 于 不伤 害动物 生命 及方法 简单多样等特 点 ，成为 目 病诊 断应遵 循 随到 随检原则 ； 病原追 踪则应 考虑 乙 前流 行病 学调查及 血清 学诊断的主要措施 ，同时也 ｔ 。 ｏ 脑发 生的温 度相 关性 （ 在一 定区域表 现为季 节性） 可以作为评价疫苗免疫效果的重要手段［ ｑ检测 中， ， 在发 生前 、 后 一定 时 间 内对 处于 流行环 节 上 的 时间及对 象的选择 是影响结果的主要因素 。流行病 中、 相关 动物 进行 随 机检测 ，以确定 一 定区 域范 围 内 学调查方面 ，中间宿主蚊 在乙型脑炎的发生中起到 该 病 的流 行趋 势 及 规律 ， 为 乙脑 的 防治 提 供数 重要作用，而蚊 虫的出现 与活动 受到环境温度 的显 ］ ， 据参考 。 著制 约 ， 研 究 ， 温 ２ 据 气 ５℃～ ０℃ 、 对 湿 度 大于 ３ 相 ０ 随着分 子生物学 技术 的飞速 发展 ， 近年 来早 期 ７ ％为蚊虫 的最 适繁殖条件 ，因此 时间的选 择上应 病 原检测技术如免疫细胞化 学法 、荧光抗体染色 法 该考虑 当地气候条件 ， 在蚊虫 出现之前 、 出现之后及 及 反 向被动血凝试验等 由于操作 复杂等 因素逐 渐被 消失之后的一定时 间内进行相关检测工作 ；另一方 更加灵敏 、 确、 准 简便 的 Ｒ — Ｃ ［ Ｔ Ｐ Ｒ４ １ 方法取代 ， 过 由 面 ，蚊虫孳生季节 由于环境 中野毒 的持续刺激可 能 不 于前者 的经济性 ， 一些基层地 区还在使 用。 采用 Ｒ — 使猪体 内含有一定水平抗体 ，如果此时进行疫苗免 Ｔ Ｐ Ｒ时 ， Ｃ 扩增 片段 的选 择及 引物 设计是影 响结果 准 疫 效果 监测 则应 在免 疫前 后分 别进 行抗 体水 平测 确性 的重要 因素 。 目前研 究 已知 乙脑病 毒有 ３ 结 定 。目前 国内大部分猪场及散养户都较 为重视该病 个 构基因 （、ｒ ／ Ｅ 和 ７个非结构基 因（Ｓ 、 Ｓ Ａ 的预 防， ｃｐｅ Ｍ、 ） Ｍ Ｎ １Ｎ ２ 、 一般初春后母猪配种前均会给其注射疫 苗， Ｎ ２ Ｎ ３ Ｎ ４ 、 Ｓ Ｂ Ｎ ５ 组 成 ， 中 Ｅ 和 Ｎ １ 仔猪 出生后可通过母 乳中的母源抗体获得 对 乙脑病 Ｓ Ｂ、 Ｓ 、 Ｓ Ａ Ｎ ４ 、 Ｓ ） 其 Ｓ 因此对仔猪进行抗体检测 时， 应在 母源 基 因 由于在 刺激 机 体产 生保 护性 免疫 反应 上 的重 毒 的抵抗力 ， 一般在 出生 ６ ０ｄ以后） 进行 。 规模 化 要性而研究最 多，也经常 被用来 作为分子检 测的扩 抗体消 失之 后 （ 猪场 中， 除仔猪外 ， 还应选择 一部 分肥育猪及 后备种
猪乙型脑炎防控
２ ０ １ ３ ｏ ｌ ｌ 期 ． 总 第 ｚ Ｉ Ｉ Ｉ
侯 巍 ， 阳爱 国 ， 邓永强， 郭 莉 ， 文 豪， 罗 毅 （ 四川省 动物 疫病预 防控 制中心 ， 四川 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ） 中图分 类号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ ８ ５ ． ３ 文 献标 识码 ： Ｃ 文章编 号 ： １ ０ ０ １ — ８ ９ ６ ４ （ ２ ０ １ ３ ） １ １ － ０ ０ ５ ５ — ０ ｌ
中枢 神 经 系统 的急 性 、 人畜 共 患
弱毒 疫 苗 （ 主 要 在 气 候 湿 热 的
地区 ， 重 点 对 种 公 猪 进 行 预 防
免疫 ） 。加 强 饲 养 管 理 ， 提 高 猪
只 抵 抗 力 ， 定 期 进 行 环 境 消
的 自然 疫 源性传 染病 。
１ 流 行 病 学
收 稿 日期 ： ２ ０ １ ３ — ０ ９ — ２ ９
炎减毒疫苗 （ Ｓ Ａ １ ４ — １ ４ — ２株 ） 和 灭活疫苗 （ Ｐ 一 ３株 ） 均 安 全
有效。 ，
一
种 。可 在 乙脑 流 行 季 节 来 临 前
・
一
５ ５—
动物保健 －
脑 的传统检测 方法，其操作相对
费时 费 力 ， 临 床检 测感 染脑 组织 ， 胎 盘 ，木 乃伊 化 的胎 儿 及体 液也 有重 要 的诊 断 意 义。
可采 集 ２ ～ ３ ｄ内死 亡 或濒 死
毒 。做 好 灭 蚊 、 防蚊 工作 ， 切 断
该 病 的传 播途 径 。
１ ． １ 特征
该 病 以 蚊 为传 媒 ， 多
种 动 物均 可感 染 ， 其 中人 猴、 马 和 驴 感 染 后 会 出 现 明 显 的脑 炎
检测猪乙型脑炎抗体胶体金免疫层析法的建立与初步应用
行胶体金 点样和配 比优化 ，制备 Ｇ Ｉ Ｃ Ａ试纸条。结果最优 浓缩样品配 比构 成是 Ｐ Ｂ Ｓ １ ． ３ ２ ｍ Ｌ 、灭活病毒液
２ ４ ｍ Ｌ 、３ ０ ％ 蔗糖 ２ ． ６ ｍ Ｌ 、５ ５ ％ 蔗糖 ６ ． ６ ｍ Ｌ ； 用 于 胶体 金 偶 联 的抗 原 浓 度 约 ２ ． ８ Ｏ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ 。 试纸 条 能 明显 区别
Ｔ ｉ ａ ｎ Ｃ ｈ ｕ ￣ｉ ａ ｎ ， Ｊ ｉ ａ Ｋ ｕ ｎ ， Ｌ ｉ ｎ Ｚ ｈ ｉ ｘ ｉ ｏ ｎ ｇ ， Ｈ ｅ Ｘｉ ａ ｏ ｍｉ ｎ ｇ ， Ｌ ｕ ｏ Ｑ ｉ ｏ ｎ ｇ ， Ｌ ｕ ｏ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｂ ａ ｏ ， Ｙ ｕ Ｈ ａ ｉ ｑ ｉ ｏ ｎ ｇ ， Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｒ ｕ ，
Ｐｅ ｎｇ Ｙｕ ｎｐ ｉ ｎ ｇ ， Ｗ ｕ Ｘｉ ａ ｏ ｗｅ ｉ
（ １ ． Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｉ ｎ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｑ ｕ ａ ｒ ａ ｎ ｔ ｉ ｎ ｅ Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ６ ２ ３ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ；２ ． Ｓ ｏ ｕ ｔ ｈ Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ，
Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５１ ０ ６ ４ ２ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ； ３ ． Ｗｏ ｎ ｄ ｏ ｆ ｏ Ｂｉ ｏ ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ ＣＯ． ， Ｌ ＴＤ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ １ ０ ５ ３ ０ ， Ｃｈ ｉ ｎ ａ）
Ａｂ ｓ ｌ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｉ ｎ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ ｇ ｅ ｎ ｓ ｏ ｆ Ｊ Ｅ Ｖ Ｓ Ａ１ ４ 一 ｌ ４ － ２ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｃ ｕ ｌ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ ｖ ｅ ｔ ｏ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｐ ｕ ｒ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｕ ｃ ｒ ｏ ｓ ｅ
三分钟帮您看懂抗体检测报告——猪瘟篇
三分钟帮您看懂抗体检测报告——猪瘟篇各位猪友在看完前几期中牧生物平台推送的内容后,是否对猪场防疫与疫苗使用有了更全面的认识呢?小编我是获益匪浅。
那么各位猪友在因地制宜地采用综合性的管控措施之后，又是否对即将获得的收益多了一份期待？等等……先别着急。
在无限的期许当中，由提升生产管理所带来的滚滚财源，是否真的能化虚为实？进一步的说，如何检验我们在猪场防疫方面所取得的成果呢？科学准确的抗体检测报告给您答案！最近几年，一些有条件的养殖场已经定期开展抗体检测工作。
那么在投入大量人力、物力后拿到手的抗体检测报告，您是否真的读的懂呢？本期中牧生物的专题，小编就与您一起来探究抗体检测报告里的门道。
目前，市场上最为常见的抗体检测报告主要有：猪瘟，蓝耳病，伪狂犬，口蹄疫，乙脑，细小,圆环等。
本次我们就选取公认的猪瘟阻断Elisa检测方式，以猪瘟抗体检测的金标准IDEXX检测试剂盒为例。
首先，从原理出发，通过一张图来看看猪瘟抗体检测。
上图所示的阻断法检测猪瘟疫苗抗体的原理，可以简单的概括为：第3步中加入的酶标记物（抗猪瘟病毒的单克隆抗体），与被检血清中的抗猪瘟病毒抗体，两者竞争与包被抗原结合。
而第2步加入的被检血清中如果大量含有抗猪瘟病毒抗体，就会阻断酶标物抗体与包被抗原的结合。
最后加入底物显色。
被检血清中猪瘟病毒抗体越多，阻断率越高，颜色越浅。
猪瘟疫苗的免疫评估一般关注两点：1.阳性率：猪瘟抗体（阻断率（Blocking）≥40%，判为阳性结果；30%＜Blocking＜40%，判为可疑结果；Blocking≤30%，判为阴性结果）。
免疫合格率：阻断率（Blocking）≥50%的，即为免疫合格（断奶仔猪猪瘟第一次免疫受母源抗体干扰，≥30%可视为合格）。
免疫合格的比例即为免疫合格率。
2.变异系数：Coefficient of Variation(CV)变异系数计算的是平均个体的变化，以平均滴度背离的百分数来表示公式如下：变异系数 CV = 标准偏差（STDEV）/平均阻断率×100%CV≤40%,显示了群内猪只有一个均衡的、相似反应。
猪流行性乙型脑炎防治
该病主要发生在夏秋季节，蚊子是主要的传播媒介。猪只感染后，病毒在猪体 内繁殖，再经蚊子叮咬传播给其他健康猪只，形成病毒的传播循环。
临床症状与危害
临床症状
病猪常表现为高热、头痛、抽搐、昏迷等症状。严重病例可出现呼吸困难、瘫痪 ，甚至死亡。
危害
猪流行性乙型脑炎可导致猪群大量死亡，严重影响养猪业的经济发展。同时，该 病也可能传染给人类，对人类健康构成威胁。
灭鼠防蚊
定期灭鼠，减少蚊虫孳生 地，防止病毒通过蚊虫传 播。
环境消毒
定期对猪场、猪舍及周围 环境进行消毒，杀灭病毒 和其他病原微生物。
饲养管理防控措施
饲料管理
提供营养均衡的饲料，增强猪只 的免疫力，降低感染风险。
密度控制
合理控制猪只饲养密度，减少应激 ，提高猪群体健康水平。
疫病监测
定期对猪群进行疫病监测，及时发 现并处理疑似病例，防止疫情扩散 。
多价疫苗
开发包含多种病原体的多价疫苗，以扩大疫苗保 护范围，降低猪流行性乙型脑炎的发病率。
个性化疫苗
针对不同年龄、品种的猪，研发个性化疫苗，以 提高疫苗的针对性和保护效果。
防控技术创新与推广
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智能化监测技术
利用大数据、人工智能等技术手段，建立猪流行 性乙型脑炎的实时监测和预警系统，实现疫情的 早发现、早报告、早处置。
从业人员培训
定期举办针对畜牧兽医从业人员、屠宰场工人等的培训班，提升他 们的专业技能和防控水平。
社会宣传
通过媒体、宣传册等多种渠道，向社会公众普及猪流行性乙型脑炎 的防控知识，增强公众的认知度和配合度。
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未来展望与研究重点
新型疫苗研发与应用
基因工程疫苗
利用基因工程技术，研发出更安全、有效的猪流 行性乙型脑炎疫苗，以提高预防效果。
瘦肉精(盐酸克伦特罗)快速检测卡
猪瘟抗体快速检测试剂盒——（胶体金法）使用说明书一、原理：本试纸采用酶联免疫原理和胶体金层析技术制成快速检测猪血清中的猪瘟抗体。
将猪瘟抗原包被在硝酸纤维素膜的检测线（T）上，兔抗猪瘟抗体包被在硝酸纤维素膜的质控线（C）上，用胶体金标记的猪瘟抗原干燥后置于玻璃纤维素膜下端。
当血清加入加样孔内，由于层析的原理，血清开始沿纸条移动，当遇上干燥的金标抗原，将其溶解，并带着金标抗原继续往上移动，至硝酸纤维素膜的检测线。
如果样品中有猪瘟抗体存在时，会与玻璃纤维素上的金标猪瘟抗原和包被在检测线上的猪瘟抗原，在检测上形成一个夹心的免疫复合物，呈一条紫红色线。
样品中的抗体越高，色线颜色越深，判定为阳性。
如果样品中没有猪瘟抗体，检测线（T）线上没有色带出现，判定为阴性。
样品和金标抗原继续往上移至质控线时，此处的兔抗猪瘟抗体将会同金标猪瘟抗原结合，在质控线（C）上形成一条紫红色线，证明本试纸有效。
整个试验仅需20分钟。
操作简便、快速、准确、灵敏度高，直观、结果容易判定。
二．产品组成：1、检测卡(1个)：由一特制的塑料检测卡将猪瘟抗体检测试纸条夹于卡内，卡面上设有加样孔和观察孔。
加样孔作为加入待检血清，观察孔内为试剂检测线（T），试剂质控线（C）。
一个检测试剂卡用一个铝箔袋包装，内装干燥剂。
2、吸样管1个；3、5份塑料手套；4、使用说明书一份。
三．操作方法：1．用1.5ml样品管，采血0.5~1ml待检测血清自然析出或用离心机离心10分钟左右，使血清析出。
2．将检测卡平置于桌面上，用吸样管吸取被检血清，在检测卡的椭圆形加样孔内加入2滴约80~100ul。
在室温下反应20分钟判定结果。
（检测卡如在4℃保存，必须恢复至室温后方可进行检测）四．结果判断：1．阳性：在检测线（T）处，质控线（C）处，各出现一条紫红色条带，判定为阳性；检测线（T）处条带色泽的深浅，依检测样品中猪瘟抗体效价的高低而变化，效价越高色带越深，反之越浅。
猪乙型脑炎的诊断和综合防治
一、病原乙脑病毒属披膜病毒科黄病毒属，呈球型，直径20～30nm，核心含单股RNA，有衣壳。
在脂蛋白囊膜表面有血凝素刺突，能凝集鸡、鹅、羊等动物红细胞。
抗原性稳定，但近年有报告以具有中和作用的单克隆抗体（McAb）检测15株国内的乙脑病毒时，可将其分为4个抗原组。
人和动物感染本病毒后，均产生补体结合抗体，中和抗体和血凝抑制抗体。
本病毒在外界环境中抵抗力不强，56℃30分钟或100℃2分钟即可灭活。
但对低温和干燥的抵抗力很强，用冰冻干燥法在4℃冰箱中可保存数年。
日本乙型脑炎病毒，与圣路易斯脑炎病毒，墨累河谷脑炎病毒及西尼罗病毒同属一个复合群，均为人蓄共患病毒，但只有本病对家蓄有明显致病性。
猪是日本脑炎病毒（JEV）在自然界最重要的扩增动物。
在怀孕母猪中此病很重要，因为感染导致死产和其他繁殖障碍；感染的公猪显示睾丸急性炎症。
马被感染后，在中枢神经系统（CNS）产生病损，类似病损民发现于驴和猴。
在其他动物中常呈亚临诊感染。
二、流行病学本病是自然疫源性疫病，许多动物和人均可感染本病毒，但多为隐性感染，特别是牛和羊。
病畜以及隐性感染的人畜在病毒血症阶段都可成为传染源，其中猪是最主要的传染源。
本病主要通过蚊虫的叮咬经皮肤传播。
蚊子不仅是传染媒介，也是病毒的贮存宿主。
本病有明显的季节性，流行高峰主要在夏季至初秋，80％的病例发生在7～9月份。
本病的发生与年龄有一定关系，与性成熟的时期基本符合，多在出生后6个月或更早一些发生。
本病有一定的地区性，常在低洼地区呈散在性发生或呈地方性流行。
三、临床症状生猪常突然发病，体温升高至40～41℃，呈稽留热，持续几天至十几天。
病猪精神萎顿，嗜眠喜卧，食欲减少，口渴，眼结膜充血潮红，粪便干燥呈球形，表面常附有灰黄色或灰白色的粘液，尿呈深黄色，有的病猪后肢呈轻度麻痹，步态蹒跚，关节肿大，有的病猪表现精神兴奋，出现神经症状，横冲乱撞。
仔猪感染乙脑后症状为：病猪体温升高、沉郁、卧地、减食、口渴、结膜潮红、粪呈干球状、尿少色深、少数跛行、行走不稳，部分病猪出现视力障碍、乱冲乱撞；育肥猪主要表现为持续高热。
猪丹毒elisa试剂盒说明书
Precautions for Users
Carefully read this kit insert. Store all reagents between 2 and 8 ºC (do not freeze). Unused strips must be stored between 2 and 8 ºC sealed inside the plastic bag with silica gel as moisture can damage the plates. Even though the antigen has been inactivated during the manufacturing process, the antigen-coated plates should be treated as a potential source of E. rhusiopathiae. Do not expose substrate solution to strong light or any oxidising agents. ABTS substrates are very sensitive even to trace levels of contamination and should not therefore be returned to the bottle once removed. Approximately 25% overage is supplied to allow the removal of a little over the exact requirements. Do not use components past expiry date and do not intermix components from kits with different lot numbers. Careful pipetting and washing throughout the procedure are necessary to maintain precision and accuracy. Do not pipette by mouth. Use gloves during the process. The stop solution is an organic acid, which is toxic, and may be corrosive, handle with care. All waste materials must be properly decontaminated prior to disposal. For veterinary use only. Unopened reagents, correctly stored, are stable until the expiry date printed in the external label.
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猪乙脑抗体金标快速检测卡使用说明书
【简介】
乙型脑炎病毒(简称乙脑，JBEV)是由乙脑病毒导致的中枢神经系统损伤的急性传染性疾病，蚊是传播媒介，猪是扩散宿主，夏秋季乙脑病毒在蚊－猪－蚊之间循环。
猪乙型脑炎能引起母猪繁殖障碍，表现为妊娠母猪流产，产死胎、木乃伊胎、弱仔等，给养猪业带来巨大的经济损失。
目前，养猪场预防猪乙脑除了搞好饲养管理和加强检疫、隔离、消毒外，最主要的预防措施是母猪配种前注射乙脑疫苗，但临床上普遍采用的是猪日本乙型脑炎减毒活疫苗，其免疫效果如何，研究报道甚少。
试验采用乳胶凝集试验(LAT)检测免疫前后血清抗体水平，并以此评价猪乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果，为临床预防该病提供参考。
【操作步骤】
1、采集全血分离血清（2000-3000转/分离心5-15分钟，或4℃过夜自然析出），或采用加抗凝剂的全血作
为检测样本。
也可采用不加抗凝剂的全血，但必须立即进行检测。
2、撕开铝箔包装袋，取出检测卡，放于平整、干净的台面上。
3、采用配套吸管吸取已采集的样本，缓慢、逐滴的准确滴加3滴到有“S”标记的加样孔内。
4、室温下放置10-20分钟判断结果，超过30分钟结果无效。
【结果判定】
1. 阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线。
猪乙脑抗体滴度越高，检测线(T)颜
色越深。
2. 弱阳性：在观察孔内，检测线区(T)及对照线区(C)同时出现紫红色线，但检测线区(T)出现的颜色很浅。
3. 阴性：在观察孔内，只有对照线区(C)出现一条紫红色线。
4. 失效：在观察孔内，对照线区(C)和检测线区(T)都不出现紫红色线；或仅检测线区(T)出现紫红色线。
【诊断参考】
1. 如果该猪未接种过乙型脑炎病毒疫苗:
a) 当被检样品检测线（T）处无明显色带出现，说明被检测样品中没有乙型脑炎病毒抗体。
如果猪群健康，
则表示没有乙型脑炎病毒感染，应当及时进行乙型脑炎病毒疫苗接种。
如果出现相应急性症状，则不能排除有乙型脑炎病毒感染。
b) 当被检样品检测线（T）处有明显色带出现，则该动物存在乙型脑炎病毒野毒感染或既往感染，应进
一步观察验证。
2. 如果该猪已接种过乙型脑炎病毒疫苗:
c) 当被检样品检测线（T）条带的色泽≥对照卡中1：40效价时，说明乙型脑炎病毒抗体的滴度较高，已
达到抵御野毒攻击的保护水平，同时说明猪只感染野毒的可能性较小。
d) 当被检样品检测线（T）条带的色泽＜对照卡中1：40效价时，说明乙型脑炎病毒抗体效价未达到抵御
乙型脑炎病毒野毒攻击的最低保护滴度，存在感染野毒的风险，建议进行疫苗补种。
【有效期】
常温保存，不可冷冻，保质期18个月。