菌种的衰退、复壮和保藏

菌落纯
细胞纯
三、菌种保藏
基本要求：
在一定时间内使菌种不死、不变、 在一定时间内使菌种不死、不变、不乱
培养基传代培养 斜面、平板 生活态 寄主传代培养 冷冻 干燥
液氮、低温冰箱 沙土管、冷冻真空干燥
基本方法：
休眠态
学习情景法
菌种保藏
（一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意
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（一）保藏目的及原理 目的 不死亡 不生长 不污染
课外学习资源
中国工业微生物菌种保藏管理中心 http://www.china-cicc.org/
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1. 衰退的表现 1）原有形态形状变得不典型； 2）生长速度变慢； 3）代谢产物生产能力下降； 4）致病菌对宿主侵袭力下降； 5）对外界不良环境的抵抗力下降。
2. 衰退的原因
1）根本原因在于基因自发突变 根本原因在于基因自发突变； 根本原因在于基因自发突变 2）传代次数的影响，使负突变株的比例逐渐占 了优势； 3）与培养条件有关。
微生物学
菌种的衰退、复壮和保藏（ 课时） 第八章 菌种的衰退、复壮和保藏（4课时）
食品教研室
Leabharlann Baidu
性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本 要求，否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素：
a）变异； ）变异； b）污染； ）污染； c）死亡. ）死亡
一、菌种的衰退(degenration)
使菌种 不降低或不丧失其优良性 原理 以尽量延长使用时间
创造不利于菌种生长的一切条件， 使其代谢处于休眠状态。
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低温
缺营养
不利 条件
干燥
无氧
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（二）常用保藏法（以CICC为例） 以母种形式保藏 1.斜面低温法 斜面菌种置4~6℃冰箱中（3~6个月） 简便 保藏时间短 易污染及退化 不适于草菇等菌类
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（三）保藏注意
用保种培养基 及时保藏（菌丝占斜面2/3） 最好换胶塞 用时活化 严防棉塞受潮
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作业题
1.设计菌种保藏的依据是什么？ 2. 怎样防止菌种的衰退？ 3.怎样判断菌种的衰退？ 4.自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？
思考、讨论题
1.栽培时为何不用母种作菌种？ 2.母种扩成原种的目的是什么？ 3.接种操作应注意哪些环节？
特点
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2.矿油保藏法
矿油 处理 灭菌：152kpa、30min 去水：40~50℃烘至无色透明
无菌检验 ？ 注入种管 口堵胶塞 淹没斜面约1cm 用时转管再转管
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3.自然基质保藏法
麦粒浸透、煮熟 基质的处理 麸皮拌湿 灭菌 接种 培养 装管
干燥器去水
防衰老 特点 保藏时间长 转接后生长旺 易污染，灭菌要彻底
衰退是发生在微生物细胞群体中的一 个由量变到质变的逐步演变的过程。
3.衰退的防止
保证菌种的纯培养 严格控制传代次数 用适宜菌龄的菌种 用适宜培养条件及保藏条件
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二、菌种的复壮（rejuvenation） 菌种的复壮
1. 从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有 从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来， 狭义复壮， 原有典型性状的菌种(狭义复壮 消极措施)。 原有典型性状的菌种 狭义复壮，消极措施 。 a）纯种分离;
b）通过寄主体进行复壮； 2. 有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种 有意识地利用微生物会发生自发突变的特性， 维护工作中不断筛选“正变”个体(广义复壮 积极措施) 广义复壮， 维护工作中不断筛选“正变”个体 广义复壮，积极措施 。
纯种的分离方法
平板划线分离法 平板涂布分离法 平板倾注分离法 用“分离小室”进行单细胞分离 显微操纵器进行单细胞分离 菌丝尖端切割法进行单细胞分离