最有效的多糖多酚植物RNA提取方法

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植物多糖的提取方法

植物多糖的提取方法

植物多糖的提取方法
植物多糖的提取方法包括以下几种:
1.水浸法:将植物材料粉碎,加入适量的水,反复浸泡、过滤,然后用高温高压蒸馏干燥。

2.酸碱法:将植物材料经过脱色、清洗后再进行酸、碱处理,酸法将其浸泡于酸性溶液中,碱法将其浸泡在碱性溶液中,然后加热、搅拌,过滤后后再进行脱色、浓缩、干燥。

3.酶解法:将植物材料粉碎后,加入适量的水和酵素,经过酶解反应,然后脱色、浓缩、干燥。

4.超声波法:将植物材料加入酸性或碱性溶液中,然后使用超声波振荡器进行振荡,使多糖物质分离出来,再进行脱色、浓缩、干燥。

5.微波辅助提取法:将植物材料加入适量的水或有机溶剂中,加热至一定温度并进行微波辅助提取,然后进行脱色、浓缩、干燥。

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

q ai RNAs e e u c s f l ioa e u d r t i meh d fo uly t w r s c e sul s lt d n e h s y t o r m b n n e f a s v la n b n n o t a a a l a ,c s a a e f a d a a a r o .Al l t e e r s l h we h t te mo i e i NA r p r t n me h d i n v ra o ioa e h g - u l y RNA f m h s e u t s o d t a h d f d L Cl R s i p e a a i to s u ie s l t s lt i h q a i o t r o
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热带 作物 学 报 2 1 ,3 ( ) 7 4 1 0 0 1 2 9 :10 — 7 7
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种适 用于多糖 多酚植物 的高质量 R A快速提取 方法 N
阮孟 斌 ,李 文彬 ,于 晓玲 ,彭 明
Ra i s l to f Hi h q a i p d Io a i n o g - u l y RNA r m t fo
H ih e o 一,Po y a c a i e Pl nt g Ph n l ls c h rd a s

一种适合富含多糖、多酚植物的RNA提取方法

一种适合富含多糖、多酚植物的RNA提取方法

摘 要 : 究 了一种适 合 富含 多糖 、 研 多酚植 物 的 R NA提 取 方 法 。采 用 CT AB( 六烷 基 十
溴化 三 甲胺 ) 裂解植 物 材 料 , 细 胞 中的 核 酸 形 成核 酸一 TAB复 合 体 , 与 C 然后 用 氯仿一 戊 异
醇去 除 细胞 裂解液 中的蛋 白, 最后 采 用 LC 选择 性 沉 淀其 中的 RNA。此 方 法 适 用 于 多 il 种植 物 组织 包括根 、 、 、 、 实等 的 总 R 茎 叶 花 果 NA提 取 , 所提 RNA 适合 进行反 转录 聚合 酶
Pl ntTis e c n PO y a c a i e n l p n l a s u s Ri h i l s c h r d s a d Po y he o
GE a - ig HIYa -ig Xiop n ,S njn
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植物rna提取方法

植物rna提取方法

植物rna提取方法
植物RNA的提取方法可以分为以下几个步骤:
1. 组织采集:选择适当的组织部位,如叶片、茎、花等,使用无菌工具采集样品,并迅速转移到液氮中保存。

2. 细胞破碎:将采集的组织样品放入液氮中或使用研钵将样品研磨成细胞浆。

3. 细胞破碎液的配制:在-80C保存的异丙醇中加入等体积的冷高盐缓冲液(主要成分为0.1M Tris-HCl pH 8.0、0.1M LiCl、1% SDS),混匀后在4C条件下保存。

4. 细胞破碎液的加入:将细胞破碎液加入研钵中的细胞浆,迅速混匀,转移到离心管中。

5. rRNA的酶解:向离心管中加入SDS、EDTA和酶RNase A,使细胞骨架和蛋白质颗粒发生变化。

6. RNA的提取:使用酚/氯仿提取法将RNA提取出来。

将等体积的酚和砂糖溶于RNA提取液中,将提取液加入到离心管中,混匀后进行离心。

7. RNA沉淀:将上清液转移至新的离心管中,加入等体积的异丙醇,混匀后放
置于-20C冰箱中沉淀RNA。

8. RNA的洗涤和溶解:将沉淀的RNA用70%乙醇洗涤,最后将RNA溶解在RNase-free water中即可得到纯净的RNA。

此外,还可以使用商业化的RNA提取试剂盒进行植物RNA提取,根据试剂盒说明书进行操作即可。

一种简单有效的植物RNA提取方法

一种简单有效的植物RNA提取方法

遗 传HEREDIT AS (Beijing )28(5):583~586,2006技术与方法收稿日期:20051106;修回日期:20060118基金项目:国家自然科学基金(编号:30270090)和四川大学科研启动基金资助项目[This Work was Supported by G rant from the National NaturalScience Foundation of China (No.30270090)and Fund for Promoting Scientific Research from Sichuan University]作者简介:张 容(1977—),女,重庆人,硕士研究生,专业方向:植物分子生物学。

Tel :028*********;E 2mail :zhangrong7710@ 通讯作者:王胜华(1957—),男,湖南人,副教授,博士,研究方向:植物分子生物学。

Tel :028*********;E 2mail :shwang200@ 致 谢:感谢四川大学生命科学学院罗通先生、张颖女士在实验过程中给予的支持和帮助。

一种简单有效的植物RNA 提取方法张 容,郑彦峰,吴 瑶,王胜华,陈 放(四川大学生命科学学院,成都610064)摘 要:在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse ,建立了一种高效的植物R NA 提取方法。

以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL ,异硫氰酸胍法,SDS 2K Ac 法和新创皂土法提取总RNA 进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA 。

进一步以皂土法提取的18SrR NA 为模板的RT 2PCR 结果分析表明,用该法提取的RNA 能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。

该方法简便,快速,不失为一种经济高效的R NA 提取方法。

关键词:皂土;R NA 提取;麻疯树中图分类号:Q781 文献标识码:A 文章编号:0253-9772(2006)05-0583-04A Si mp l e a n d Effici e nt Me t h o d f o r Pr ep a r a ti o n of Pla nt RNAsZH ANG Rong ,ZHE NG Y an 2Feng ,WU Y ao ,WANG Sheng 2Hua ,CHE N Fang(College of Life Science ,Sichuan University ,Chengdu 610064,China )Abs t ra ct :A new and efficient method for isolation of plant R NAs was developed by adding bentonite into extractionbu ffer in order to get rid of protein and re strain RNAse.The electrophoretic patterns of nucleic acids and absorbance at 230nm ,260nm and 280nm in a UV 2Vis spectrophotometer revealed the extraction with this method can obtain RNAs with good integrity and purity without any apparent DNA contamination from the plant materials rich in with polysaccha 2ride and polyphenol like J atropha curca s leave s ,to which TRIZOL reagent ,SDS 2K Ac solution and G uanidine isothiocy 2anate solution failed.Furthermore ,the result of nuclear gene (18S rRNA gene )amplified by RT 2PCR indicated that the RNAs prepared with this method can meet the needs of most molecular biological experiments including gene cloning and expre ssion analysis.Ke y w or ds :bentonite ;RNA isolation ;J atropha curcas 要了解生物某个器官或结构的功能和作用机理,一个重要的方式就是从分子角度去研究其功能基因的表达和调控,而分离得到高质量的RNA 是进一步研究进行的首要条件。

多糖多酚植物RNA提取的利器

多糖多酚植物RNA提取的利器

[交流分享]多糖多酚植物RNA提取的利器众多文献报道,许多植物由于未能有效地分离纯化出其组织中的RNA,而阻碍了其分子生物学方面的研究进展。

比如Northern杂交分析,体外翻译分析或建cDNA文库,RT-PCR及差异显示分析等研究,都需要高质量的RNA。

因此,提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。

RNA提取的常见难点研究表明,一些植物组织之所以比较难提取出高质量的RNA与这些植物组织中富含的一些成份有关,常见的有酚类化合物,多糖以及某些尚无法确定的次级代谢产物,另外还有就是富含较高活性RNase的组织。

在完整的细胞内,这些物质与核酸是分离的,一旦细胞破碎,这些物质就会与RNA相互作用。

酚类化合物的干扰许多植物组织特别是果实(如苹果、樱桃、李子、葡萄等)及树木类植物中富含酚类化合物。

随着植物的生长,酚类物质的含量也会增加,因此幼嫩的植物才是最佳的提取材料。

此外,针叶类植物的针叶中多酚的含量要比落叶植物的叶子中高很多。

植物材料经过前期的破碎处理后,酚类物质会释放出来,氧化(见下图)后处理液变为褐色,并随氧化程度的增加而加深,这一现象被称为褐化效应(browning effect)。

被氧化的酚类化合物(如醌类)能与RNA不可逆地结合,导致RNA活性丧失,而在用苯酚、氯仿抽提时,RNA还会丢失或形成不溶性复合物,从而影响RNA的分离纯化。

Newbury等还发现RNA提取的难易与材料中酚类化合物总量之间并无直接相关性,而是与所谓的“缩合鞣质”即聚合多羟基黄酮醇类物质(如原花色素类物质)有关。

多糖的干扰多糖是植物RNA提取时另一常遇问题。

植物组织中往往富含多糖,而多糖的许多理化性质与R NA很相似,因此很难将它们分开。

如果要去除多糖,RNA也会随机被带走,造成RNA得率降低;而沉淀RNA时,也往往产生多糖的凝胶状沉淀,这种沉淀难溶于水,或溶解后产生粘稠状的溶液,所以也很难有效地将其与RNA分开。

一种多酚多糖植物RNA的提取方法[发明专利]

一种多酚多糖植物RNA的提取方法[发明专利]

专利名称:一种多酚多糖植物RNA的提取方法专利类型:发明专利
发明人:贾雪荣,张文宝,王亚周
申请号:CN201710794930.2
申请日:20170906
公开号:CN107475247A
公开日:
20171215
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明公开了一种多酚多糖植物RNA的提取方法,包括(1)将植物组织碾磨后放入离心管中,向离心管加入buffer A进行匀浆处理,得到匀浆液;(2)向匀浆液中加入buffer B,并颠倒混匀后对其进行离心;(3)将步骤(2)中的上清液取出并加入新的离心管中,并缓慢加入0.3‑0.7倍无水乙醇,轻柔混匀后将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中进行离心,倒掉与该吸附柱配套的收集管中的废液等步骤。

本发明提供了一种多酚多糖植物RNA的提取方法,不需使用酚、氯仿等有毒的刺激性试剂,更好的保护了操作人员的安全,而且操作简单,提取时间短,提取的RNA完整性好,大大提高了RNA 的提取速度与提取质量。

申请人:成都晟博源生物工程有限公司
地址:610000 四川省成都市中国(四川)自由贸易试验区成都高新区天府大道北段1480号1栋2层7号
国籍:CN
代理机构:成都新驱科为知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人:成实
更多信息请下载全文后查看。

多糖多酚植物提取rna

多糖多酚植物提取rna

多糖多酚植物提取RNA的方法主要包括以下步骤:
1. 准备植物样品:选择适量的植物组织,如叶片、根、茎等,用清水清洗干净并擦去表面水分。

2. 研磨:将植物组织在液氮中迅速研磨,以破碎细胞壁和细胞膜。

3. 提取总RNA:依据百泰克生物公司的植物多糖多酚RNA提取试剂盒的操作步骤提取总RNA。

4. 去除基因组DNA:利用无RNA酶的脱氧核糖核酸酶(DNase I)去除基因组DNA。

5. 反转录:利用TaKaRa公司的PrimeScript反转录酶,按照该试剂盒提供的反应条件和步骤进行实验操作,将RNA反转录成第一链互补链DNA(cDNA)。

6. 完整性检测:通过1%的琼脂糖电泳检测反转录后的cDNA完整性。

以上步骤仅供参考,具体操作请根据实际情况和试剂盒说明书进行。

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法

一种适用于多糖多酚植物的高质量RNA快速提取方法阮孟斌;李文彬;于晓玲;彭明【摘要】植物总RNA的提取是进行下游分子生物学实验的关键基础,高质量的RNA是下游实验成功的保障.许多植物由于其体内含有酚、多糖以及其他的一些次生代谢物,要获得这些植物高质量的总RNA比较困难.本文在多次实验的基础上,提出了改良LiCl沉淀法,该方法步骤少、效率高,使用此方法得到的棉花幼苗总RNA 经检测表明其质量比使用冷酚法提取的RNA要高得多,且完全满足后续实验的要求.使用此方法成功提取了香蕉叶片、根、木薯叶片的RNA,经检测表明,所得到的RNA完整性好,完全可以满足后续实验的要求,说明改良LiCl沉淀法是一种适用于多酚多糖植物的快速RNA提取方法.%High-quality biologically active RNA isolation is crucialin plant molecular biological experiment. Many plants have high levels of endogenous phenolics, polysaccharides, and secondary metabolityes, so isolating high-quality biologically active RNA from these plants is very difficult. In this paper, a modified IiCl RNA preparation method was developed to isolate RNA from cotton young plant, to yields high-quality total RNA. Then the high-quality RNAs were successfully isolated under this method from banana leaf, cassava leaf and banana root. All these results showed that the modified LiCl RNA preparation method is universal to isolate high-quality RNA from those plants that have high levels of endogenous phenolics and polysaccharides.【期刊名称】《热带作物学报》【年(卷),期】2011(032)009【总页数】4页(P1704-1707)【关键词】RNA;LiCl沉淀法;多酚多糖植物;快速提取方法【作者】阮孟斌;李文彬;于晓玲;彭明【作者单位】中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101;中国热带农业科学院热带生物技术研究所,海南海口571101【正文语种】中文【中图分类】Q522;Q942.6植物RNA的提取是进行植物分子生物学研究的一个重要前提,高质量、具有生物学活性的RNA是下游相关分子生物学实验成败的关键。

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华越洋多糖多酚植物RNA提取试剂盒
(Quick RNA isolation Kit)
由于一些植物组织中富含多糖、多酚类物质,细胞破碎后多酚类物质极易被氧化成红褐色物质,然后和核酸不可逆地结合;多糖与RNA共沉淀,对RNA提取造成很大的干扰。

另外,RNA 极不稳定,易降解,因此,从富含多糖、多酚植物组织中获得高质量的RNA比较困难。

针对多糖、多酚植物组织RNA的提取,华越洋自主研发生产,博取众家之长,根据多年来市场反馈不断进行技术升级和改良得来。

具有操作步骤少,实验快捷,RNA产量纯度高,充分满足后续实验要求的需要,适用提取样品广泛等特点。

产量:每100mg样品提取的RNA平均值在20-50ug不等。

纯度:OD值一般在1.9以上。

得到的RNA无DNA污染,可直接用于反转录,实时荧光定量PCR(尤其对RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后续实验。

1、快速:本试剂盒提取RNA的整个实验操作步骤简化快捷从时间因素考量上最大限度的防止RNA在提取中的降解(一般样品十多分钟就能完一个样RNA的提取,大大缩短了一般试剂盒提取所需要的半小时甚至更长的时间,)。

2、高产量:试剂盒拥有超强细胞裂解液,保证后续RNA提取的得率。

(能完全通过化学方法彻底裂解细胞让RNA释放完整,并且有效成分能抑制内源RNA酶的降解作用)。

3、高纯度:进口吸附柱具有的专一吸附特性和强吸附力。

三管齐下保证所提取RNA的产量和纯度,前期得到的高质量RNA才能保证后续实验成功,尤其是对荧光定量PCR实验等。

4、无DNA污染可直接用于荧光定量PCR:目前市面上的试剂盒大多提出的RNA会出现DNA污染其结果严重影响后续实验,特别是非常灵敏的荧光定量PCR的实验。

一些市面上单独卖的去DNA污染的试剂,效果不稳定,去除DNA污染不彻底。

本产品操作简单,去除DNA 彻底,得到的RNA样品可直接用于荧光定量PCR,反转录等各种后续实验。

5、产品整合了在提取过程中去除干扰物的技术,有去除多糖多酚类的植物RNA提取试剂盒,已成功用于葡萄,中草药等多糖含量高的样品,成功用于棉花等多酚含量高的样品。

华越洋还开发了有强力去腐殖酸型的土壤DNA,RNA提取试剂盒,技术国内领先。

另外华越洋还开发了糖类清除剂,腐植酸去除剂,核酸提取优化剂,样品核酸稳定剂,组织核酸保存液等核酸提取辅助产品。

6、适用材料广泛:本产品尤其适合植物组织,全血和病毒等样品的RNA提取,另有专门针对难提材料的RNA升级版试剂盒(已成功用于棉花、葡萄、番茄等多糖多酚类植物,小麦,水稻,玉米等农作物,果实、干枯树皮、病毒、全血、微量细胞、水溶液、土壤、粪便、岩石样本等),动物组织,微量细胞等45种复杂样品的核酸提取。

另有microRNA.SiRNA提取试剂盒。

姊妹产品推荐:Trizol 用法和质量与进口同类产品一致,华越洋常年特价销售。

反转录试剂盒(RT):用于第一连CDNA合成,低拷贝基因的检测。

本试剂盒所含的反转录酶与市面上的常用的反转录酶相比有更高的效率和延伸能力和稳定性。

合成CDNA长度最高可达15KB。

普通PCR扩增用MIX:本混合液优化了体系中Taq酶,DNTP,Mg离子浓度,电泳染料等各种试剂比例,用户不需要摸条件只需要引物和模板就可轻松完成PCR的扩增。

荧光定量PCR试剂(一般实验室常用版本):属于经典的SybrGreen荧光染料的高效高活性荧光定量检测试剂。

用于绝大多数的CDNA模板和不同长度的CDNA片段高质量扩增。

试剂配方含有多种增强剂和稳定剂,灵敏度和稳定性均超过同类型产品。

新型快速DNA提取试剂盒系列产品:
本系列产品系华越洋自主研发产品,具有提取速度快,DNA产量和纯度高,机械破碎细胞的物理方法和裂解液,溶菌酶等破碎细胞的化学方法结合,让细胞破碎更彻底核酸产量更高。

对目前市面上国产和进口类试剂盒提取困难的难提材料能成功克服提取的干扰因素,有效提取到高质量的核酸。

已成功用于土壤(去腐殖酸型),粪便,病毒,细菌,真菌,血液,水液等样品。

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