微生物分离培养和菌种保藏
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微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
图－1 土壤稀释液的制备和稀释液的取样
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—平板涂抹法
每组取无菌培养皿2付。在皿底贴上标签，注明分离 菌名、稀释度、组别、班级。 凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀释 液0.2mL放在平板上。 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒 置于28～30℃条件下培养6～7d，观察放线菌菌落 形态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量 （方法同上）。 挑取单个菌落，接种于相应的斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化，至最后得到纯培养为止。
制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤0.5g，放入50mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－2的土壤悬液。 2. 另取装有4.5mL无菌水试管4支，用记号笔编上10－3、10 －4、10－5、10－6。取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水 的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成 10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 、10－5、10－6 土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，应用一支吸管由浓到稀，稀释到底， 稀释方法见图-1。
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序
微生物的分离 微生物的接种方法（示范） 微生物培养中的氧气条件 微生物的菌种保藏方法 四大类微生物菌落形态的比较和识别
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序1
（微生物的分离）
用平板涂抹法分离土壤中的放线菌 用平板划线法分离污水中的细菌
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—稀释平板法
微生物的分离、培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离、培养和菌种保藏
目的要求 实验材料 试验程序 思考题
微生物分离培养和菌种保藏
目的要求
初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏 的基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。
微生物分离培养和菌种保藏
实验材料
样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1 号培养基。 无菌水：装有50mL无菌水三角瓶（配土壤悬液使 用）、装有250mL无菌水三角瓶（梯度稀释使 用）、4支空的无菌试管。 其它：取液器(5000 μl, 1000 μl, 各一支);无菌培 养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、天平、记号笔、 接种环ຫໍສະໝຸດ Baidu酒精灯、火柴、水浴锅。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—平板划线法
每组取无菌培养皿1付，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化 的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 凝固后，用接种环取相应的 菌液一环（10－5或10－6）在平板上 划线（教师作示范）。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续 划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在 培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C 角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作 第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖 上皿盖，倒置于28～300C温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最 后得到纯培养。
微生物分离培养和菌种保藏
无菌操作简介
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的接种方法—液体接种和穿刺接种
液体接种法：包括从斜面菌种接入培养液，或从液体菌 种接入液体培养液，两种情况都可以用接种环接种。但 在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。 穿刺接种法：用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种， 垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后沿着原接 种线将针拔出，要做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上 棉塞。再将接种针上残留的菌体在火焰上烧掉。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
高氏培养基用于涂布平板（梯度稀释法取 0.2ml，用推棒推匀）（浅色培养基） 牛肉膏培养基用于划线分离（分离所使用 的污水在试管架的试管中）
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序2
（微生物的接种方法—斜面接种法）
左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种 试管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时 向上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有 可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心 将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然 后让试管口缓缓过火焰。 将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却， 而后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽 出试管。
微生物分离培养和菌种保藏
迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部， 轻轻向上划线（直线或曲线）。 接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。 将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 28～37 ℃ 恒温培养。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序3
（微生物培养中的氧气条件）
参观培养设备：包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液 体发酵——摇床、厌氧培养罐等。 好氧培养：例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体 振荡培养或通气搅拌培养等都属于好氧培养的方法。 厌氧培养：除了最简便的深层液体培养以外，可以采用物理、 化学或生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧 气，创造厌氧条件。对于严格厌氧的微生物，要用化学和物 理并用的方法。厌氧培养罐（图－9），以某种气体取代培养 容器中空气，并添加还原剂，如产气袋法和换气法。在进行 厌氧培养时，可以用指示剂检查系统中的还原条件，一般实 验室中常用的如葡萄糖——美兰指示剂。
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微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
图－1 土壤稀释液的制备和稀释液的取样
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—平板涂抹法
每组取无菌培养皿2付。在皿底贴上标签，注明分离 菌名、稀释度、组别、班级。 凝固后，另取一支吸管吸取10－3或10－4的土壤稀释 液0.2mL放在平板上。 用无菌三角玻棒将稀释液在平板表面涂抹均匀。倒 置于28～30℃条件下培养6～7d，观察放线菌菌落 形态及计数菌落，并计算出每g土壤中放线菌的数量 （方法同上）。 挑取单个菌落，接种于相应的斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化，至最后得到纯培养为止。
制备土壤稀释液：(无菌操作过程见教师示范） 1. 称取土壤0.5g，放入50mL无菌水的三角瓶中，振荡 10min，即为稀释10－2的土壤悬液。 2. 另取装有4.5mL无菌水试管4支，用记号笔编上10－3、10 －4、10－5、10－6。取已稀释成10－2的土壤液，振荡后静止 0.5min，用无菌吸管吸取0.5mL土壤悬液加入10－3的无菌水 的试管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成 10－3土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－4 、10－5、10－6 土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，应用一支吸管由浓到稀，稀释到底， 稀释方法见图-1。
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序
微生物的分离 微生物的接种方法（示范） 微生物培养中的氧气条件 微生物的菌种保藏方法 四大类微生物菌落形态的比较和识别
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序1
（微生物的分离）
用平板涂抹法分离土壤中的放线菌 用平板划线法分离污水中的细菌
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—稀释平板法
微生物的分离、培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离、培养和菌种保藏
目的要求 实验材料 试验程序 思考题
微生物分离培养和菌种保藏
目的要求
初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏 的基本方法。 练习微生物接种、移植和培养的基本技术， 掌握无菌操作技术。
微生物分离培养和菌种保藏
实验材料
样品：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏1 号培养基。 无菌水：装有50mL无菌水三角瓶（配土壤悬液使 用）、装有250mL无菌水三角瓶（梯度稀释使 用）、4支空的无菌试管。 其它：取液器(5000 μl, 1000 μl, 各一支);无菌培 养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、天平、记号笔、 接种环ຫໍສະໝຸດ Baidu酒精灯、火柴、水浴锅。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的分离—平板划线法
每组取无菌培养皿1付，在皿底贴上标签，注明事项。取已熔化 的牛肉膏蛋白胨培养基，倒入平皿，制成平板。 凝固后，用接种环取相应的 菌液一环（10－5或10－6）在平板上 划线（教师作示范）。 1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作连续 划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。 2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环，先在 培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿约600C 角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作 第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划线。划线完毕，盖 上皿盖，倒置于28～300C温室培养。 挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化，最 后得到纯培养。
微生物分离培养和菌种保藏
无菌操作简介
微生物分离培养和菌种保藏
微生物的接种方法—液体接种和穿刺接种
液体接种法：包括从斜面菌种接入培养液，或从液体菌 种接入液体培养液，两种情况都可以用接种环接种。但 在培养量比较大的情况下，液体接种宜采用移液管接种， 同时要求无菌操作。 穿刺接种法：用接种针经火焰灭菌后，沾取少量菌种， 垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后沿着原接 种线将针拔出，要做到手稳、动作轻巧迅速，最后塞上 棉塞。再将接种针上残留的菌体在火焰上烧掉。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
高氏培养基用于涂布平板（梯度稀释法取 0.2ml，用推棒推匀）（浅色培养基） 牛肉膏培养基用于划线分离（分离所使用 的污水在试管架的试管中）
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序2
（微生物的接种方法—斜面接种法）
左手平托两支试管，拇指按住试管底部。外侧使是菌种 试管，内侧是待接的空白斜面。（两支试管的斜面同时 向上），右手将棉塞旋松，以便在接种时容易拔出。 右手拿接种环，在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有 可能伸入试管的其余部位也过火灭菌。 将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心 将两支试管的棉塞一并夹住拔出，棉塞仍夹在手中，然 后让试管口缓缓过火焰。 将已灼烧过的接种环伸入外侧的菌种试管内。先冷却， 而后再用环沾取一定量的菌苔，将沾有菌苔的接种环抽 出试管。
微生物分离培养和菌种保藏
迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部， 轻轻向上划线（直线或曲线）。 接好种的斜面试管口再次过火焰，棉塞底部过火焰后立即 塞入试管内。 将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼， 使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，使菌体爆 溅，造成污染。 放下环后，再将棉塞旋紧，在试管斜面上距试管口2～ 3cm处贴上标签。 28～37 ℃ 恒温培养。
微生物分离培养和菌种保藏
微生物分离培养和菌种保藏
实验程序3
（微生物培养中的氧气条件）
参观培养设备：包括接种室、恒温培养室、恒温培养箱、液 体发酵——摇床、厌氧培养罐等。 好氧培养：例如平板培养、斜面培养、浅层液体培养、液体 振荡培养或通气搅拌培养等都属于好氧培养的方法。 厌氧培养：除了最简便的深层液体培养以外，可以采用物理、 化学或生物学的方法来排除培养容器中的空气或空气中的氧 气，创造厌氧条件。对于严格厌氧的微生物，要用化学和物 理并用的方法。厌氧培养罐（图－9），以某种气体取代培养 容器中空气，并添加还原剂，如产气袋法和换气法。在进行 厌氧培养时，可以用指示剂检查系统中的还原条件，一般实 验室中常用的如葡萄糖——美兰指示剂。