5.常见微生物标本的采集、保存与送检

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呼吸道灌洗液的采集

将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管 （约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通 负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取 的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用 小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集）
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常用的病毒采样保存液成分
127C Soft aluminum wire - green cap 软金属，易弯曲.
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143C Regular aluminum wire - orange cap 男性尿道拭子 2013-8-1
195C Flexible twisted wire - blue cap
Designed specifically for nasopharyngeal sampling. Very flexible, will bend and yield when in contact with posterior nasopharyngeal wall. Features a safe loop shaped wire tip covered with soft rayon.
鼻咽拭子标本
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Stuarts——主要成 分

甘油磷酸钠 硫代硫酸钠 氯化钙 亚甲兰 琼脂 炭粉
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Stuarts运送培养基
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Cary-Blair运送培养基


克服在运送肠道菌时，因这些菌含有甘 油磷酸脱氢酶，造成低度氧化，使细菌 能代谢而生长。 特别适合于运送含弧菌的标本。研究显 示，在28℃情况下，Cary-Blair可维持弧 菌活力22天，沙门氏、志贺氏菌49天； 70～80℃副溶血弧菌可达35天。


75%酒精、压脉带、记号笔等。
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运送培养基的选择

维持活力，不增菌的非营养性半固体培 养基 Stuarts, Cary-Blair, Amies, STGG 四种主要的运送培养基。

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139C Double plastic swabs - red cap 咽拭子、阴道拭子、伤口和皮肤
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采多少

所有标本在采集时立即分装，一式
N 份(不同检验项目、重复实验、其
它实验室复核、留样)
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样本采集的一般需要量 样品种类 检验目的 样品量 饮用水 全分析及致病菌 >5 l 液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200ml 固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物>200g 呕吐物 致病菌或毒物分析 >50g(ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 >200ml 腹泻物 致病菌或毒物分析 >50g(ml) 血液 病原分离、抗体分析 >5ml 脑脊液 病原分离 >2ml 皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取
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标本标签内容
– – –
最小包装（每个标本） 每个包装箱 每批样本后要附上一个样本清单，详 细列出此批样本的名称、状态和注意 事项。
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– – – – – – –
样本编号——唯一性 样本来源——从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝 脏就可标注为某某患者肝脏 样本数量——包装中样本的数量，如：此包装中同时采集了2 块肝脏样本，就要标注为2 采样时间： 采样地点： 采样人： 样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品）
肺组织活检标本
尽早采集上述标本，发病一至两周也可采集
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呼吸道标本
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拭子的选择

应使用头部为合成纤维的拭子（例如， 聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐 棉拭子和木柄。
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急性呼吸道综合症的可疑暴发
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Cary-Blair运送培养基
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Amies运送培养基---Stuarts的改良产品
（含活性炭）用磷酸盐缓冲液代替甘油磷酸钠等
100株菌 Stuart's Amies
时间
24 小时 48小时 72小时
菌株存活数
91 79 56
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菌株存活数
98 87 77
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实验室对病原体的快速确诊依靠
技术和试剂储备充分
收集适当的、足够的标本 正确的包装和快速运送到实验室
适 当 的 生 物 安 全 和 消 毒 措 施 ， 以 减 少 疾 病
进一步扩散的可能。
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围绕病因假设,确定检验项目，采集标本

专业知识、经验 充分物质准备
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鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集
用与负压泵相连的收集器从鼻 咽部抽取粘液或从气管抽取呼 吸道分泌物。将收集器头部插 入鼻腔或气管，接通负压，旋 转收集器头部并缓慢退出，收 集抽取的粘液，并用3ml采样 液冲洗收集器1次（亦可用小 孩导尿管接在50ml注射器上来 替代收集器）。
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第二份血清应在发病后第3～4周采集
在病愈出院或死亡前采集血标本1份
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血液标本的采集
目的：血培养、分离血清 血培养：怀疑是细菌性疾病，特别是脑膜炎 或疑似菌血症的病人均要抽血。 在病人高热时可采取静脉血3ml，注入双相血 培养瓶（也可用盛有30ml葡萄糖肉汤的三角 瓶）内增菌培养。 分离血清用于抗体检测。在疾病急性期和恢 复期各采血2-3ml
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咽拭子的采集


对健康人群或病人密切接触者进行带菌 检验时一般采咽拭子。 用无菌棉拭子擦取悬雍垂后之鼻咽部粘 膜数下，应避免接触口腔内其它部分， 直接接种到巧克力双抗平板或0.5%葡萄 糖增菌肉汤中。
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干采 用2根聚丙烯纤维头 的塑料杆拭子同时擦 拭双侧咽扁桃体及咽 后壁，将拭子头浸入 含3ml采样液的螺口 管中，尾部弃去，旋 紧管盖。
可能的病原体
肺链 军团 肺炭疽 肺鼠疫 支原体 血培养 血清 痰、尿 肺泡灌洗液
白喉 链球菌性咽炎 猩红热
流感 禽流感
汉坦 病毒 肺综 合症
百日咳 嗜血流感杆菌 呼吸道合胞病毒
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喉拭子 血清
咽拭子 气管吸取物 血清 血清 2013-8-1
鼻咽拭子 血清
需要准备的材料

运送培养基、拭子、压舌板 消毒的螺旋盖管、真空采血管、5ml注射器
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咽拭采集的正确与 否？
wrong
right
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Байду номын сангаас
鼻拭子的采集

将1根聚丙烯纤维头的塑 料杆拭子轻轻插入鼻道 内鼻腭处，停留片刻后 缓慢转动退出。取另一 根聚丙烯纤维头的塑料 杆拭子以同样的方法采 集另一侧鼻孔。上述两 根拭子浸入同一含3ml 采样液的管中，尾部弃 去，旋紧管盖。

pH7.0～7.6的Hanks液或MEM/DMEM液
或生理盐水。在采样液中需加入抗菌素，可用
青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素 （终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度 为2µg/ml）
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病毒采样盒
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咽拭子
出血点渗液
血液
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接种0.5% 葡萄糖增 菌肉汤或 直接接种 含双抗巧 克力平板 和血平板
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STGG运送保存培养基(Skimmilktrytone glucose glycerol, STGG）
脱脂牛奶粉（Difco） 胰酶大豆肉汤(TSB,Oxoid) 葡萄糖 甘油 消毒蒸馏水 2g 3g 0.5g 10ml 100ml
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STGG运送保存培养基

鼻咽拭子插入STGG培养基后，可立即冻存标本。 报告显示，臵冰上几小时后再放臵-70℃，肺炎链 球菌、嗜血流感杆菌的活力仍能维持，在-20℃环 境可达8周。

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臵于-70℃的STGG中保存的鼻咽分泌物，其肺炎 链球菌的分离率与直接接种平板相似，保存于20℃分离率亦可接受,而4℃环境保存5天，分离 率不理想。
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需要采集的标本
上呼吸道感染：



鼻咽拭子 咽拭子 血
下呼吸道感染：

痰标本 支气管灌洗液 胸液 血
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血培养瓶含有0.025%SPS（聚茴香脑磺酸钠 sodium polyanethol sulfonate SPS），可以 起到抗凝、抗吞噬、抗鳌合的作用；还含有树 脂、炭颗粒，可吸收血液中的抗生素，提高细 菌培养的阳性率。 血量>3ml时，将血分别放入两个血培养瓶， 若瓶子装血太多将降低降低阳性率。
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用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静 置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收 集血清于2ml无菌螺口塑料管中
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标本种类和采集时间
呼吸道标本
上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、
咽漱液、深咳痰液
下呼吸道标本：呼吸道抽取物、支气管灌洗液、
采样基本原则
尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集 时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守 无菌操作、正确保存和运送。 容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和 外壁。


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标本种类和采集时间
血液标本
全血标本采集
血清标本采集 第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集
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咽漱液的采集

用10ml不含抗菌素的采样 液漱口。漱口时让患者头部 微后仰，发“噢”声，让洗 液在咽部转动。然后将咽漱 液收集于50ml无菌的螺口 塑料管中。无条件的可用平 皿或烧杯收集咽漱液并转入 10ml螺口采样管中。
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2013-8-1
深咳痰液的采集

要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于 50ml含3ml采样液的螺口塑料管中
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标本的保存、包装、运送

样品的保存—容器、介质、温度
样品的包装—感染性样本
样品的运送—标本应由专业人员专人运送，最好使用 专车
交接手续
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怎么检
对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时 送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开 展工作，避免因实验室管理和技术因素对 结果的影响。
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接种培养板的选择

根据所要检测的目的菌而定，一般选择 两种平板：血平板和巧克力平板


链球菌属：新鲜绵羊血（或马血）平板 奈瑟氏菌属：巧克力平板（CAP），不 含抗生素
常见微生物标本的采集、保存与送检
茂名市CDC流行病学培训班 麦充志 2011、3
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碗与筷子的关系
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标本采集

采集时间----何时采 采集种类----采什么


采集方法----怎么采
采集数量----采多少
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怎么采

样品采集程序
采样用物品准备 采样程序方法 采样记录 样品编号 样品保存 样品送检
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上呼吸道可能的致病菌

β-溶血性链球菌：A、B、C、G群链球菌等； 肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌； 白喉棒状杆菌、百日咳等
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下呼吸道感染性疾病可能的致病菌



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肺炎链球菌 嗜血流感杆菌 肠球菌 肺炎克雷伯氏菌 β-溶血性链球菌 军团菌 百日咳菌属 金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈瑟氏菌属 假单胞菌 肺炎支原体 肺炎衣原体
涂片G 染色
接种增菌肉汤 或直接接种巧 接种血 克力平板和血 培养瓶 平板
分离血 清检测 IgG
2013-8-1
痰标本的采集
患者站立或床上坐直，在收集前嘱咐患 者用开水含漱口腔；深呼吸，从深部咳 痰，将痰吐入已消毒的广口螺旋盖管 （25～50ml）内；痰量1-2ml，如不 足，应重复上述步骤。

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要达到有效控制疫情的目的，必须做到
早期发现和报告可疑病例； 快速的流行病学调查； 实验室对病原体的快速确诊； 实施有效的控制措施。
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实验室诊断的目的意义





识别暴发、确定病因 确定传染来源 确定流行范围 确定传播链 发现特殊的毒株 判断院内交叉感染 疫苗实施项目的考核 仲裁依据


高度的责任心
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在去现场之前，应考虑到以下的问题
在进行临床和流行病学信息评估时，需考虑
引起暴发的潜在病原体； 地方性疾病谱和流行季节谱可进一步缩小可 能的因素； 同时还必须考虑到多种病原体感染可出现相 似的临床表现，因而需要采集多种类型的标本 用于定义暴发的原因。
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