微生物标本的采集方法.

几种下呼吸道直接采集的标本
◎ 经气管穿刺吸引 ◎经胸壁针刺吸引 ◎经支气管镜采样 支气管肺泡灌洗 经支气管镜直接吸引 ◎开胸肺活检 ◎经人工气道吸引分泌物

☂痰标本采集——吸痰
吸痰：无法咳痰或不合作者、人工气道者，戴好无 菌手套，无菌集痰器分别连接吸引器和无菌吸痰管。 按吸痰法将痰吸入无菌集痰器内，加盖送检 经支气管镜直接吸引： 注意严格无菌操作
什么情况下要求进行环境采样

☂四种状况下要求进行环境采样：
一、是当环境中的宿主或媒介物被认为在疾病传播中有流
行病学意义时，提供疾病或感染爆发的依据
二、是在研究过程中进行适当的环境采样
三、是为了监测潜在的危险环境条件，确认有害的化学或 生物因素的存在，并验证危险因素的成功消除 四、是为了质量保证（QA）而采样，以评估改变感染控制 措施取得的效果或是确保设施或系统按照规范或预期结果执 行。

4、Ⅲ、 Ⅳ类环境、监测标准：儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、 人流室、治疗室、换药室、消毒供应中心、血液透析中心(室)、急诊 室、化验室、各类普通病房、感染疾病科门诊及其病房，空气中的细 菌菌落总数≤4CFU／(5min· 直径9cm平皿)
G B50333-2013《医院洁净手术部建筑技术规范 》3.0.2-2
☂血培养次数和采血时间

※采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在患者发 热期间越早越好，以发热高峰前1h内或病人寒战和发热开 始时采集为宜。在10分钟内与不同部位采集外周血2~3份
培养（有助于判断是污染还是感染，提高检出阳性率）

※注意报阳时间，阳性瓶数。

※在采取血培养后的2---5天内，不需要再重复采取血培养，
一、物体表面采样
☂物体表面细菌总数的检测评价
▲ 被污染程度 ▲ 主要依据 ▲ 消毒效果
物体表面采样--涂抹法

☂涂抹法：将5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检测物品
表面，用浸有无菌生理盐水的棉拭子在规格板内来回均匀涂抹整个方 格，并随之转动棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入盛有10ml生 理盐水的试管中，充分振摇1min,作适量稀释后，接种于普通营养琼 脂平板上进行计数，然后根据平板上菌落数得出物品表面每平方厘米 的细菌数
☂消毒液监测标准范围

1、使用中灭菌剂：无菌生长
2、使用中皮肤黏膜消毒液：≤10cfu/ml


3、其他使用中消毒液：≤100cfu/ml
六、紫外线强调监测方法

1、日常记录：使用后进行消毒时间累积，使用超过
1000小时的应加强监测或更换建立紫外线消毒使用登记本 ，每周用75%酒精擦拭灯管并记录
二、尿标本的正确采集——清洁中段
尿标本


☂应保证尿液在膀胱内至少停留4h以上。最好留取早晨清 洁中段尿标本 ☂方法：患者睡前少饮水，清晨起床后先用肥皂水清洗会 阴部，女性应用手分开大阴唇，男性上翻包皮，仔细清洗， 再用清水冲洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排出，弃 去，不要停顿，直接将中段尿10---20ml直接排入专用的 无菌容器中，立即送检。容器内是无菌的，所以打开容器 盖后，应拿在手中，不要随意乱放。记录留取标本的时间， 保证在留取标本后1小时内送至检验科



五、消毒液监测
源自文库
1、采样方法：用无菌注射器按无菌操作方


法:10ml培养基吸取1ml被检消毒液；5ml培养基 吸取0.5ml被检消毒液，加入培养剂中混匀。 2、消毒液标准： 使用中灭菌用消毒液：无菌生长 使用中皮肤黏膜消毒液染菌量：≤10cfu／ml 其他使用中消毒液染菌量：≤100cfu／ml


☂尿标本正确采集--------留置导尿
※消毒导尿管外部（接头上端近会阴部），按无菌操作方
法用注射器穿刺导尿管吸取尿液10ml，操作时注意防止混 入消毒剂（推荐用三步消毒法：75%酒精---2%碘酒---75%酒精脱碘待干）

※注意不能从收集袋中采集尿液
三、血培养标本采集
1、手清洁：无明显污染使用速干手消毒液进行手卫生 2、血培养瓶口消毒：75%酒精消毒一遍，待干60s 3、静脉穿刺消毒：推荐用三步法 用75%酒精消毒采集部位 用2%碘酒从穿刺点向外画圆消毒，至消毒区域直径达5cm 以上，涂擦穿刺皮肤2遍，待干 75%酒精脱碘：用75%酒精由内向外涂抹去碘酒液，待酒 精挥发干燥后采血
物体表面采样--斑贴法

☂斑贴法：按无菌操作方法将5cm×5cm的无菌滤纸
用灭菌生理盐水浸湿，均匀贴附与物体表面，1min取下放
入盛有25ml灭菌生理盐水试管中，充分振摇1min，作适
量稀释后，接种于普通营养琼脂平板上作菌落计数，同样 得出物品表面每平方厘米的细菌数
二、消毒物品表面的监测：


☂操作注意事项：从静脉采血，不建议从动脉采血 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次 穿刺，应换针头）直接注入消毒后的血培养瓶 血抽到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固，立即 送检，切勿冷藏！ ④多次采血应在不同部位的血管穿刺以排除皮肤菌丛污 染的可能。除非无法作静脉穿刺取血，否则不应从留置 导管内取血。 ⑤抽血前应将标签贴于血培养瓶颈上，标签内容包括病 人基本信息、采血时间、采血部位。注意不要把标签贴 在培养瓶条形码上，否则仪器无法识别。
1、采样时间：消毒处理后4小时内进行采样 2、采样面积：被采面积＜100平方厘米，取全部表面； ≥100平方厘米，取100平方厘米。 3、采样方法：
用5cm*5cm的标准灭菌规格板放在被检消毒物品表面，
用含相应中和剂无菌洗脱液（5ml)的棉拭子在规格板内横竖 往返均匀涂擦各5次并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部 位，将棉拭子投入王景洗脱液中，立即送检。 小型物体表面的结果计算用cfu/件表示。

2、照射强调：普通30W直管型紫外线灯，新灯管的辐照 强度≥90μW／cm2为合格《符合GB19258》要求;使用中 紫外线灯照射强度≥70μW／cm2为合格；
3、强调监测：每半年一次监测前用75%酒精清洁灯管
表面，开灯，待其稳定5分钟后，放置强度监测卡于灯管 下垂直1米处，正面朝上，照射1分钟，取卡，读数。
如何提高细菌阳性检出率
▲、标本采集时机 ▲、标本采集方法 ▲、标本的质与量 ▲、标本的运送与保存 ▲、镜检筛选合格标本 ▲、高质量、多种分离培养基 ▲培养环境
一、痰标本采集
☂关于咳痰标本 ※ 在抗菌素应用前采集标本

※ 标本采集后1—2h内必须立即进行实验室处 理 ※ 痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标 本 ※ 采集标本过程中要有专业的医务人员指导
使下呼吸道感染病原诊断成为难题
◎ 细菌（包括防线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌） ◎ 真菌（包括肺孢子菌） ◎ 病毒 ◎ 支原体、衣原体与立克次体 ◎ 原虫 ◎ 寄生虫

☂痰标本采集——自然咳痰标本 患者清晨起床后，用清水或冷开水反复漱口去除
过量的口腔细菌，有假牙者应取下假牙 先轻咳，咳出口腔中的痰液弃去，再用力深咳， 从气管咳出呼吸道深部的痰，直接吐入清洁、无 菌的容器中 无痰可用3%---5%NaCI 5ml雾吸约5min导痰 也可用物理疗法。体位引流等法取痰
1、监测时间：每季度一次
2、Ⅰ类环境、监测标准：洁净手术部(室)和其他洁净场所，空气中的细 菌菌落总数要求应遵循G B50333-2013《医院洁净手术部建筑技术规 范》3.0.2-2

3、Ⅱ类环境监、测标准：非洁净手术部(室)、产房、重症监护病房，空 气中的细菌菌落总数≤4CFU／(15min· 直径9cm平皿)
手监测标准范围

1、外科手消毒：≤5cfu/cm2
2、卫生手消毒：≤10cfu/cm2


☂ GB15982-2012《医院消毒卫生标准》4.2
四、空气消毒效果监测
1、采样时间段：在消毒处理后，操作前进行采样 2、采样方法：按面积定数、打开、盖搭皿体边缘 3、采样高度：距地面1.5米（80-150㎝） 4、布点方法：室内面积≤30㎡，设内、中、外对角线三点; 室内面积＞30㎡设4角及中央5点均距墙壁1米 5、收取方法：由外往里逐一收取，避免穿过培养皿从里往 外收取
物表监测结果范围

1、Ⅰ类、Ⅱ类环境：≤5cfu/cm2
2、Ⅲ类、Ⅳ类环境：≤10cfu/cm2


☂ GB15982-2012 《医院消毒卫生标准》
4.1.1
三、手消毒效果监测


1、采样时间：在接触病人和从事
医疗活动前进行采样或消毒后立即 采样 2、采样面积及方法（棉拭方法） 被检人五指并拢，用含相应中和 剂无菌洗脱液（5ml)的棉拭子在双 手指

4、注意事项：做好自身防护尤其是眼睛； 检测卡要闭光保存。
七、高度危险性医疗器械

☂手术器械、穿刺针等：无菌生长

GB15982-2012《医院消毒卫生标准》4.3 不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查
八、中度危险性医疗器械：
☂呼吸机管路、口表等：≤20 cfu/件，

不得检出致病性微生物

因为进行治疗后的2---5天血液中的感染细菌不会马上消失。
四、对可疑中心静脉导管相关血流感染


1、保留导管 2、外周静脉血一份，中心静脉导管血1分， 不用弃去导管起始部分的血液。 3、拔除导管： 4、2个外周静脉血、导管尖端5cm
(在进行中心静脉导管血和周围静脉血培养时应记录报阳时间）
☂血管内导管尖段标本的采集、送检程序 用75%酒精清洁导管周围皮肤 无菌操作移动导管，剪取尖端末端5cm,直 接置入无菌试管内或直接置入血平板内。 立即送检（不超过15min),防止干燥


☂ Ⅰ类环境：洁净手术室Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ级：
Ⅰ级 手术区≤0.2cfu/30min. ￠90皿 周边区 ≤0.4cfu/30min. ￠90皿（100级）6号手术间 Ⅱ级 手术区≤0.75cfu/30min. ￠90皿 周边区 ≤1.5cfu/30min. ￠90皿 Ⅲ级 手术区≤2cfu/30min. ￠90皿 周边区 ≤4cfu/30min. ￠90皿（10000级）5号手术间 Ⅳ级≤6cfu/30min. ￠90皿

六、各种标本储存的环境
☂标本采取后应该立即送检，如不能立即送检，储
存的环境要求：
※ 储存环境标本来源4℃冰箱----痰、尿液、粪便、活检
组织、气枪冲洗物、导尿管、心包积液、脓和伤口分泌物等
※ 室温（25℃）---血液培养、脑脊液、泌尿生殖道、
眼、耳、鼻、喉、血管导管尖、体液、厌氧菌培养标本。
美国的理念
如因怀疑CRBSI移除皮下埋置式静脉输液港，港内容物及导 管尖端作定量培养。
☂血培养常见错误

※ 培养瓶放冰箱 ※ 瓶橡胶塞上小盖未打开直接穿刺 ※ 抽血后未及时混匀血液凝固
五、如何正确运送标本
1、运送培养基温度应适当 2、原则：保持细菌活力 3、血培养、脑脊液标本：应及时送检；不能及时送检的 标本应置温箱或室温中，切不能放入冰箱中保存（除病毒、 霉菌、分支杆菌培养样本置4℃) 4、痰、尿等标本：如不能及时送检可置冰箱，以抑制细 菌生长，但时间不能超过6h.
微生物标本采集技术
临床微生物 环境微生物
感染办
张瑞芳
正确的微生物标本采集和运送，是准确的病 原学诊断的前提
基本原则
1、及时采集微生物标本作病原学检查
2、在抗菌药物使用前采集标本 3、采样时严格执行无菌操作 4、采样后立即送检 5、棉拭子标本宜用运送培养基 6、标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂 7、送检标本时应注明来源和检验目的 8、混有正常菌群的标本，不可置肉汤培养
每季度监测
九、低度危险性医疗器械
☂听诊器、血压计袖带等：≤20 cfu/件，

不得检出致病性微生物

每季度监测
十、消毒内镜

☂胃镜、肠镜等：≤20 cfu/件

WS507-2016《软式内镜清洗消毒技术规范》7.3

每季度监测
十一、透析用水

☂细菌：≤100cfu/ml

1970年以前，美国的医院定期对空气和环境表面（如地面、 墙壁、台面）进行培养。到了1970年，CDC和美国医院协 会（AHA）主张停止对环境的常规培养，因为医院感染发
生率与空气或环境表面中总的微生物污染水平不相关。且
环境表面或空气中微生物含量的允许水平也没有有意义的 标准。1970---1975年，美国有25%的医院减少了这种常 规的环境培养工作--------一个已经持续的趋势。