第三章 药物的杂质检查..

（4）峰面积归一化法：
L% = ∑Ai /(∑Ai + A主）×100%
使用限制：本法通常只能用于粗略考察供试品中的 杂质含量。除另有规定外，一般不宜用 于微量杂质的检查。
葡萄糖中重金属的检查： 取本品4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5) 2ml,依法检查（第一法），含重金属不得过百万分之五。求 应取标准氯化钠溶液（10μgCl/ml）的体积。 已知：S = 4.0g；C = 10μg/ml；L = 5×10-6
求： V = ？
解：V = L×S / C = 5×10-6×4.0/10×10-6 = 2.0(ml)
生产 制剂过程 杂 过程 试剂、溶剂、还原剂残留 质 异构体、多晶体 的 使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质 来 源 储藏 在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或 过程 因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、
异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化
1. 生产过程中引入的杂质 主要指药物在合成过程中，未反应的原料、中间体和副产物
主要指外界条件的变化或微生物的作用可能使药物发生的 水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等变化而产生的有关杂 OC2H5 OC2H5 胺化 质。 环合
ClCH2 CH CH NH ，CH OH H3CHN 3 2 3 OC2H5 CH2 CH OC2H5 KSCN
CH3 N N SH 缩合 ClCOOC2H5,C5H5N （甲巯咪唑）
比较法：测定特定待测杂质的参数（如吸光度）， 与规定的限量比较，不得更大。 特点：准确测定杂质的量，不需要对照品
第二节

杂质的检查方法
一般有化学方法、色谱方法、光谱方法、物理方法
一、化学方法： 显色反应
盐酸普萘洛尔中游离α-萘酚检查：利用后者可与重氮盐
发生重氮化-偶合反应，生成偶氮染料。 ChP规定：供试品20mg+乙醇与10%NaOH液各2ml+重氮苯
C酮体=? V样品=100 ml S样品=0.2 g
磷酸可待因中吗啡的检查： 取本品 0.1g ，加盐酸 … 与吗啡溶液 (0.02mg/ml)5.0ml 用同一方法制成的对照液比较，不得更深。求吗啡限 量。 已知：V = 5.0ml；C = 0.02 mg/ml；S = 0.1g 求： L = ？ 解： L = C×V / S = 5.0×0.02/0.1×1000 ×100% = 0.1%
注意点 ①单位一致 ②稀释倍数 ③表示方法（%，ppm）
返 回
计算题 1.取乙酰唑胺2g，加水100ml加热溶解后，迅 速放冷，滤过，取滤液25ml，依法检查氯 化物，规定含氯化物不得超过0.014%，应 取标准氯化钠溶液（每1ml相当于0.01mgCl） 多少ml？ 2.溴化钠中检查砷盐杂质，规定含砷量不得 超过百万分之四，取标准砷溶液（每1ml相 当于0.001mgAs）2ml，依法检查，应取供 试品多少克。
第三章
第一节 第二节 第三节 第四节
药物的杂质检查
药物杂质与限量 杂质检查方法 一般杂质的检查 特殊杂质的检查
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第一节
药物的杂质与限量
一、药物的杂质与纯度
1．药物纯度的概念：药物的纯度是指药物的纯净程度。 反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响纯度的主要因素。 2. 药物纯度的要求不断提高： 例如：杜冷丁(I)1948年收入BP，1970年经GC分离鉴定出两种 无效异构体（Ⅱ）和（Ⅲ），有时高达20%～30%。
H3C N COOC2H5
.HCl
(I)
H3C N
.HCl COOCH3 (II)
C2H5
N COOC2H5
.HCl
(III)
3．药物纯度的评价：
应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等 作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。
4．临床用药纯度与化学试剂纯度的区别：
药 物：对生物体引起的生理和毒副作用加 以考虑。药物只有两个等级：合格 或不合格。
得多于2个，其颜色
与对照品主斑点相 比较，不得更深。
地塞米松磷酸钠 20mg/ml
地塞米松 0.20mg/ml
例如:盐酸异丙嗪中有关物质的检查 有多个杂质而且结构不清
样品10mg/ml;对照品(1)0.15mg/ml
(2)0.05mg/ml
..
.
.
. . . .
.
硅胶G
.. .
己烷:丙酮:乙胺
样品液 对(1) (2)
茶苯拉明中氯化物检查
取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵 溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水 浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放 置15min，滤过，取续滤液25ml置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸 10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶 液(10μg Cl-/ml)1.5 ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。
H2N COOCH2CH2N(C2H5)2 H2N COOH
-CO2 [O]
O
O
H2N
生产过程中所用试剂、溶剂、还原剂等可能残留成为杂质。
药物中无效、低效异构体或晶型的检查
例如：无味氯霉素存在A、B晶型，其中B为有效，A为低效。
甲苯达唑有A，B，C三种晶型；驱虫率20%；40%～60%；90%
2.贮藏过程引入的杂质
(1)杂质对照品法
例如:盐酸左旋咪唑中检查
2,3-二氢-6-苯基咪唑[2,1-b]噻唑盐
样品
· ·· 。 · · 对招品
硅胶G
苯:甲醇:冰HAC
枸橼酸乙胺嗪 I2蒸气显色
CON N N CH3
C2H5 C2H5
供试品10µl N-甲基哌嗪 10µl 50mg/ml 50µg/ml
规定： 如显杂质斑点，不
（3）加校正因子主成分对照法
进行杂质检查时，可以不用杂质对照品；但在建立方法时，需 利用杂质对照品。 供试品液进样测校正后Ai 其Ai＜ A主即为合格. 例如:红霉素中检查红霉素B、C组分及有关物质:
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
对照品液(0.2mg/ml)进样20μl,样品液(4mg/ml)进样20μl,红 霉素A、B、C校正因子分别为1.0、0.7、1.0，各杂质峰面积校正后 不得过主峰面积（5.0%）
磺酸试液1ml,放置3min；如显色，与0.3ml α-萘
酚对照液（20μg/ml)比较不得更深。
药物：氯硝柳胺 Cl CO NH OH 杂质：5-氯水杨酸 O Cl OH
+
NO2 Cl
杂质：2-氯-4-硝基苯胺 O Cl
FeCl3 O
O Fe/3
OH 杂质：5-氯水杨酸
紫色配合物
NHCH2CH2NH2
供试液杂质斑点不多于3个;杂质斑点与对照(2)的主斑点比
较,不得更深;如有一点超过,应不深于对照液(1)的主斑点.
2.高效液相色谱法(HPLC)
（1）外标法测定供试品中杂质的含量
比较准确，须使用杂质对照品。 例：卡托普利中检查二硫化物 供试品浓度：2mg/ml；二硫化物外标浓度：30ug/ml 规定：如含二硫化物，其含量不得过1.5%
化学试剂：对化学使用的目的考虑，对生物体 引起的生理和毒副作用不考虑。化 学试剂有很多等级：基准试剂、优 化学试剂 级纯、分析纯、化学纯、色谱纯、 不能代替 药品！ 光谱纯。
二、杂质的来源
杂质的概念 药物中存在的无治疗作用，影响药物的疗效和稳 定性，甚至对人体健康有害的物质，称为药物的 杂质。
合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、 副产物在精制中未除尽
生成气体
滴定法
如硫酸亚铁中的高铁盐检查
2Fe3+ + 2KI I2 + 2Na2S2O3 2Fe2+ + I2 + 2K+ 2NaI + Na2S4O6
碘的显色
二、色谱法
吸附或分配性的差异 1.薄层色谱法(TLC)
Rf
比移值
原点至斑点中心的距离 原点至溶剂前沿的距离
常 用 方 法： 杂质对照品法 供试品自身对照法 对照药物法
（反应不完全引入邻二氯苯） SO2Cl 氯磺化 ClSO3H Cl 胺化 NH4OH SO2NH2 胺化 NH4OH Cl Cl SO2NH2 SO2NH2
Cl
Cl Cl
SO2Cl
Cl Cl
SO2Cl
（未洗净引入氯化物）
（分解产生氯化铵）
双氯非那胺
再如制剂中生成的杂质：盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸 和二乙氨基乙醇的检查。
（2）不加校正因子主成分对照法
对照品液为供试品的稀释液进样测得A主 供试品液进样测得∑Ai 其∑Ai＜ A主即为合格. 例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑: 对照品液(0.001mg/ml)进样20μl,调灵敏度，主峰达10%～30% 样品液(0.1mg/ml)进样20μl,杂质∑Ai＜A主（限量1.0%.）
谷氨酸钠中重金属的检查：取本品1.0g，加水23ml溶解 后，加醋酸盐缓冲溶液（pH3.5)2ml，依法检查，与标准 铅溶液（10μgPb/ml）所呈的颜色相比不得更深，已知 重金属的限量为百万分之十，求算应取标准铅溶液（V） 多少毫升？ CV LS L= S ×100% V = C ×100%
10 ×10-6×1.0 LS V= ×100% = = 1.0(ml) -6 C 10 ×10
肾上腺素上酮体的检查 取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并稀释 至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的 百分吸收系数为435，求酮体的限量 A=ε bc
1% E 1cm = ε bc = ε × 1×
1 100
ε = 100 E 1% g/ml,b=1cm ） 1cm （1%： C酮体 = A ε 0.05 -6 A 10 1.15 × = = g/ml = 1% 100 E 1cm 435×100 C样品= 0.2 =2.0× 10-3g/ml 100 C酮体 L= C样品 × 100% = 1.15 ×10-6 =0.06% 2.0 × 10-3
CH3 N N 重排 SCOOC2H5
COOC2H5 N N S CH3
三 、药物杂质的分类
四、杂质的限量
1．杂质限量的概念
药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量。通常
用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。
2．杂质限量的计算 杂质限量的计算公式：
杂质最大允许量 杂质限量(%) 100% 供试品量 标准溶液的浓度 标准溶液的体积 100% 供试品量 CV 100% S
+ O2N Cl 杂质：2-氯-4-硝基苯胺 O2N Cl N N NHCH2CH2NH2 NH2
+
NaNO2
+
2HCl
O2N Cl
N2Cl + NaCl + 2H O 2
2.产生沉淀
例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者+Pb(Ac)2
不得发生浑浊，即为合格。 例二、硝酸毛果芸香碱其他生物碱的检查：后者+氨水+K2Cr2O7 ∴ChP规定：本品0.2g+20mlH2O两份；1份+数滴氨试液；另
白色
∴ ChP规定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸+0.5ml Pb(Ac)2
1份+数滴K2Cr2O7试液 ，均不得发生浑浊。
盐酸肼屈嗪中游离肼的检查:
CHO H2NNH2· H 2O CN HCl
盐酸肼屈嗪 N N ． HCl
NHNH2 CHO H2NNH2 + 杂质：游离肼 OH HC NNH2 OH + H 2O
3．杂质的检查法 限量检查法 定量测定杂质
限量检查法：对照法、灵敏度法、比较法 特点：不需知道杂质的准确含量
NaCl对照液
葡萄糖
稀硝酸10ml 硝酸银1ml
稀硝酸10ml 硝酸银1ml
对照液浊度 > 供试液浊度
灵敏度法：在供试品溶液中加入试剂，在一定的反 应条件下，不得有正反应出现； 特点：不需要对照品 如：乳酸中枸橼酸的检查：取本品0.5g，加水适量 使成5ml，混匀，用氨试液调至微碱性，加氯化钙试液1ml， 置水浴中加热5min，不得产生浑浊。
C=10 μg/ml V=1.5 ml S=?
（标准溶液浓度）（标准溶液体积） 10 ×10-6 × 1.5 CV L= × 100% = × 100% = 0.04% S 25 — 0.30 ×200 （供试品量）
茶苯海明中氯化物的检查： 已知：S = 0.30g×25/200；C = 10μg/ml；V = 1.5ml 求： L = ？ 解： L = C×V/S×100% = 10×1.5/（0.30×106×25/200）×100% = 0.04%