第八章 高效液相色谱法
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流动相为液体，固定相为固体吸附剂 1、分离机制：组分在固体吸附剂上的吸附与解吸，利用溶质 分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异
Vs t R t 0 (1 K ) Vm Vs k K Vm
分离前提：K不等或k不等
2、固定相（粒径：<10μm） 1）硅胶 A、表孔硅胶（薄壳硅胶）30~70μm B、全多孔硅胶 无定形 YWG 5~6μm 球形 YQG 3~4μm C、堆积硅珠 YQG 3~4μm 原理：吸附 特点：峰易拖尾 适用：分离溶于有机溶剂的极性至弱极性的分子型化合 物，包括某些几何异构体。 2）高分子多孔小球：YSG 原理：吸附+分配，兼小孔凝胶作用 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物
8— 4
各类高效液相色谱法及其固定相、流动相
按固定相的聚集状态： LSC、 LLC
按分离原理： 吸附色谱法、分配色谱法 离子交换色谱法、空间排阻色谱法 其他色谱类型：亲和色谱法、手性色谱法 胶束色谱法、电色谱法
常见色谱类型： 一、化学键合相色谱 二、液固吸附色谱法 三、液液分配色谱法
一、液固吸附色谱法（LSC）
ODS：十八烷基键合相，十八烷基氯硅烷与硅胶表面的硅醇基反应键合而成
1）分离机制： 双重分离机制：分配 + 吸附（以LLC为基础） （键合基团的覆盖率决定分离机理） 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主；
2）特点： A、不易流失 B、热稳定性好 C、化学性能好 D、载样量大 E、适于梯度洗脱
2、反相键合相色谱 1）分离机制：疏溶剂理论 2）固定相：极性小的烷基键合相 C2、C8柱，C18柱（ODS柱：HPLC约80%）C30柱、苯基柱 键合相的键合基团的碳链长度增长后极性减小 3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性 底剂（水）+ 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇、乙腈、THF等 4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5）出柱顺序： 极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6）适用：非极性~中等极性组分
3、流动相： 基本要求： 1）与色谱柱不发生不可逆的化学变化； 2）溶解被分离的样品； 3）与所用检测器匹配 基本原则： 极性大的试样用极性较强的流动相； 极性小的试样用低级性的流动相 要精细的调节流动相的极性，可用混合溶剂法； 如果样品中组分的极性相差太大，可用梯度洗脱。
4、影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关 溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑ 溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓， tR↓ 注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间 5、出柱顺序：弱极性组分先出柱，强极性组分后出柱 6、硅胶含水量较小，吸附色谱，硅胶极性较大 硅胶吸水量↑，LSC→LLC 硅胶含水量>17%，分配色谱，硅胶失活→载体，吸附 的水→固定液
GC
分析对象
HPLC
热稳定性好、沸点较低、分 能溶于流动相的样品，不受样品挥发性和 子质量小的样品，占有机物 热稳定性的限制，占有机物的80% 的20% （1）气体（H2、He、N2）； （ 2 ）组分与流动相无亲合作 用力，只与固定相作用，通 过改变固定相提高分离选择 性； （ 3 ）流动相种类少，可选择 范围小 加温操作 柱温 H=A+B/u+Cu（填充） H= B/u+Cu（空心毛细管） （1）液体； （ 2 ）流动相与组分间有亲合作用力，可 选用不同性质的溶剂作为流动相，提高分 离效率； （3）流动相种类多，选择范围广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重 要作用 室温；高压 流动相 H=A+Cu=A+Cmu+Csmu
5、数据记录与处理系统（工作站）：将色谱系统的检测信 号转变为下一步使用的永久性的记录装置。
检测器性能比较
性能
类型 梯度洗脱
紫外可见
选择型 可以
荧光
选择型 可以
示差折光
通用型 不可以
蒸发光散射
通用型 可以
最小检出量
对流速敏感度 对温度敏感度
0.1-1ng
不敏感 不敏感
10-3-10-2ng 102-103ng
二、液液分配色谱法（LLC） 固定相与流动相均为液体
1）作为固定相的液相与流动相不互溶； 2）固定液对被分离组分是很好的溶剂。
1、分离机制：利用组分在两相间有不同的分配系数——分配定律 2、固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 3、分类 1）正相色谱：固定液极性 > 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 2）反相色谱：固定液极性 < 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离弱极性、中等极性组分
n理 (
) 2 5.54(
neff
' ' t t ( ) 2 16( R ) 2 5.54( R ) 2 W W1 2
tR '
H eff L / neff
neff/n理 = (tR’/tR)2 = {tR’/[tM(1+k)]}2 = [k/(1+k)]2
neff k 2 n理 ( ) 1 k
2）涡流扩散项（多径扩散项）：A
产生原因：载气携样品进柱，遇到来自固定相颗粒的阻力 → 路径不同→涡流扩散
涡流扩散系数 A 2 dp
— 填充不规则因子
dp — 填充颗粒直径
讨论：
，dp A H n 柱效
，dp A H ，n 柱效
经典LC 用途 柱内径 固定相粒径 柱效 流动相的输送 分离混合物 1~15 cm 不均匀，>100μm 低（H↑，n↓） 1~6 mm 球形，均匀，<10μm 高（H↓，n↑） HPLC 分离、分析混合物
wk.baidu.com
常压（重力或毛细作用） 高压（高压泵）
分析周期
能否在线检测
长
否
短
能
二、HPLC与GC的异同
相同点：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象、流动相以及操作条件
3）荧光检测器（FD）：只能分析自身或是衍生化后能够产生荧光的物 质，灵敏度高（专属） 原理：利用某组分在溶液中受光激发后，能发射荧光的性质来进行检测。 优点：灵敏度高；选择性好 缺点：只适合具有荧光性的物质
4、检测器：将流出色谱柱的洗脱液中组分的量或浓度定量 转化为电信号
4）示差折光检测器（RID）：利用折光率的差别，灵敏度低，温度要 求严格（通用） 原理：利用纯流动相和含有待测组分流动相之间折射率的差别进行检测 的。 优点：灵敏度适宜；通用型检测器 缺点：对温度变化敏感；不能用于梯度洗脱法中 5）电化学检测器（ECD） 6）化学发光检测器 7）MS、FTIR、NMR等
dp 2 C Dm
Dm
T
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效
T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3、HPLC降低板高、提高柱效的方法 1）采用小粒度、颗粒均匀的球形固定相，首选化学 键合相； 2）用低黏度的溶剂作流动相； 3）流动相采用低流速（1mL/min）； 4）适当提高柱温，25—30º C。
1）储液瓶 惰性材料制成，坚固，易清洗，有足够的容积，滤棒/膜过滤器， 可滤去颗粒状物质 2）脱气装置： 氦气脱气，超声脱气， 真空脱气，在线脱气（膜过滤器）。 3）高压输液泵 • 主要部件之一，压力：150~350MPa • 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10um)，液体的流动相高 速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特 点之一。 • 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调，耐腐蚀等特点
流动相
操作条件 柱效主要 改善途径 速率理论 表达式
三、HPLC的特点和应用 三高、一快、一广 高柱效：n = 104 /米，分离柱效高 高灵敏度（检测器灵敏度高） 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） 能与HPLC联用的波谱仪：NMR、MS、FTIR 流动相选择范围宽
色谱柱可以反复使用
第八章 高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
8—1 8—2 8—3 8—4 8—5 8—6 8—7 概述 HPLC色谱仪 HPLC基本理论 各类HPLC及其固定相、流动相 HPLC分析条件的选择 定性与定量分析 液相色谱—质谱联用技术
8— 1
7—2 高效液相色谱仪 一、HPLC流程图 1、输液系统 1 ）流动相储器（滤棒， 可滤去颗粒状物质） 2）脱气装置 3）高压泵（输液泵） 4）梯度洗脱装置 2、进样装置 3、色谱分离系统 4、检测系统 5、数据处理与记录系统
二、各部分作用 1 、输液系统：将流动相过滤、脱气并将样品和流动相输送 到色谱柱
三、化学键合相色谱法（BPC）
1、化学键合相 2、反相键合相色谱 3、正相键合相色谱 4、离子对色谱和离子抑制色谱
1、化学键合相：目前应用最广、性能最佳的固定相； 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 A、硅氧碳键型： ≡Si—O—C B、硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 C、硅碳键型： ≡Si—C D、硅氮键型： ≡Si—N
影响因素： dp：降低dp，采用小粒度固定相，常用3-5m。 ：降低，球形、粒度均匀的固定相。 使用小而均匀的填充颗粒能改善柱效
3）传质阻抗项
C Cm Csm Cs Cm Csm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗 忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
保护柱、色谱柱、恒温装置、连接阀 常用：直径4~6mm，柱长10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验： R ， n ， T （拖尾因子） 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗 发展趋势：减小填料粒度和柱径以提高柱效
4、检测器：将流出色谱柱的洗脱液中组分的量或浓度定量转 化为电信号
各种检测器： 1）紫外检测器（UVD）：适于具有紫外吸收的物质（常用、专属） 原理：基于待测组分对特定波长的紫外光有选择性的吸收，被测物浓度与 吸光度的关系服从比尔定律。 优点：灵敏度高、噪声低、线性范围宽、对温度及流动相流速变化不敏感 缺点：不适用于无紫外吸收的物质；流动相的截止波长应小于检测波长 常用仪器：可变波长型检测器（VWD）、二极管阵列检测器（PDAD） 2）蒸发光散射检测器（ELSD）：适用于挥发性低于流动相的组分，特 别适用于无紫外吸收的样品。（通用）
二、速率理论
B 2 Dm
Dm
T
柱温T 低，流动相 大 B相忽略
HPLC：H A C u
1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）
u 1mL / min 时，H u u H ，n 柱效 ，但t R
兼顾柱效和分析时间，选择u 1ml / min
4）梯度洗脱装置
洗脱方式——等度和梯度两种
洗脱装置——低压梯度和高压梯度装置 低压梯度 高压梯度
高压泵 混合阀 高压泵 混合阀 高压泵
梯度洗脱剂
一台高压泵，常压下通过比例调节阀，将各种不同极性的溶剂按一 定的比例混合后，再被抽入高压泵中增压送入色谱柱
利用两台高压输液泵，程序控制每台泵的输出流量，在泵后的高压 状态下混合，混合后进入色谱柱
不敏感 不敏感 不敏感 敏感
0.1-10ng
不敏感 不敏感
8—3 HPLC基本理论
热力学理论：塔板理论——平衡理论
动力学理论：速率理论——Van deemter方程 一、塔板理论
二、速率理论
一、塔板理论
n理 L H理
tR
或 H 理 L / n理
tR 2 t ) 16( R ) 2 W1 2 W
概述
高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱
实验和技术基础上，以高压泵输送流动相，采用高效固 定相以及高灵敏度检测器发展而成一种液相色谱法。
一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别
三、特点
一、HPLC与经典LC的异同
相同点：流动相都是液体，分析对象相同
区别：固定相差别，输液设备和检测手段
二、各部分作用 2、进样系统：将试样引入色谱柱 1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室） GC系统压力较小，可以 HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 2）阀进样：不必停泵，六通阀 现在：六通进样阀、自动进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进 样装置，其结构如图所示：
3、色谱分离系统：分离混合成分
Vs t R t 0 (1 K ) Vm Vs k K Vm
分离前提：K不等或k不等
2、固定相（粒径：<10μm） 1）硅胶 A、表孔硅胶（薄壳硅胶）30~70μm B、全多孔硅胶 无定形 YWG 5~6μm 球形 YQG 3~4μm C、堆积硅珠 YQG 3~4μm 原理：吸附 特点：峰易拖尾 适用：分离溶于有机溶剂的极性至弱极性的分子型化合 物，包括某些几何异构体。 2）高分子多孔小球：YSG 原理：吸附+分配，兼小孔凝胶作用 特点：柱选择性好，峰形好，柱效低 适用：分离弱极性化合物
8— 4
各类高效液相色谱法及其固定相、流动相
按固定相的聚集状态： LSC、 LLC
按分离原理： 吸附色谱法、分配色谱法 离子交换色谱法、空间排阻色谱法 其他色谱类型：亲和色谱法、手性色谱法 胶束色谱法、电色谱法
常见色谱类型： 一、化学键合相色谱 二、液固吸附色谱法 三、液液分配色谱法
一、液固吸附色谱法（LSC）
ODS：十八烷基键合相，十八烷基氯硅烷与硅胶表面的硅醇基反应键合而成
1）分离机制： 双重分离机制：分配 + 吸附（以LLC为基础） （键合基团的覆盖率决定分离机理） 高覆盖率：分配为主； 低覆盖率：吸附为主；
2）特点： A、不易流失 B、热稳定性好 C、化学性能好 D、载样量大 E、适于梯度洗脱
2、反相键合相色谱 1）分离机制：疏溶剂理论 2）固定相：极性小的烷基键合相 C2、C8柱，C18柱（ODS柱：HPLC约80%）C30柱、苯基柱 键合相的键合基团的碳链长度增长后极性减小 3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 > 固定相极性 底剂（水）+ 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇、乙腈、THF等 4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5）出柱顺序： 极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6）适用：非极性~中等极性组分
3、流动相： 基本要求： 1）与色谱柱不发生不可逆的化学变化； 2）溶解被分离的样品； 3）与所用检测器匹配 基本原则： 极性大的试样用极性较强的流动相； 极性小的试样用低级性的流动相 要精细的调节流动相的极性，可用混合溶剂法； 如果样品中组分的极性相差太大，可用梯度洗脱。
4、影响k的因素：与固定相性质和流动相性质有关 溶质分子极性↑，洗脱能力↓，k↑，tR↑ 溶剂系统极性↑，洗脱能力↑，k↓， tR↓ 注：调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间 5、出柱顺序：弱极性组分先出柱，强极性组分后出柱 6、硅胶含水量较小，吸附色谱，硅胶极性较大 硅胶吸水量↑，LSC→LLC 硅胶含水量>17%，分配色谱，硅胶失活→载体，吸附 的水→固定液
GC
分析对象
HPLC
热稳定性好、沸点较低、分 能溶于流动相的样品，不受样品挥发性和 子质量小的样品，占有机物 热稳定性的限制，占有机物的80% 的20% （1）气体（H2、He、N2）； （ 2 ）组分与流动相无亲合作 用力，只与固定相作用，通 过改变固定相提高分离选择 性； （ 3 ）流动相种类少，可选择 范围小 加温操作 柱温 H=A+B/u+Cu（填充） H= B/u+Cu（空心毛细管） （1）液体； （ 2 ）流动相与组分间有亲合作用力，可 选用不同性质的溶剂作为流动相，提高分 离效率； （3）流动相种类多，选择范围广 流动相极性和pH值的选择也对分离起到重 要作用 室温；高压 流动相 H=A+Cu=A+Cmu+Csmu
5、数据记录与处理系统（工作站）：将色谱系统的检测信 号转变为下一步使用的永久性的记录装置。
检测器性能比较
性能
类型 梯度洗脱
紫外可见
选择型 可以
荧光
选择型 可以
示差折光
通用型 不可以
蒸发光散射
通用型 可以
最小检出量
对流速敏感度 对温度敏感度
0.1-1ng
不敏感 不敏感
10-3-10-2ng 102-103ng
二、液液分配色谱法（LLC） 固定相与流动相均为液体
1）作为固定相的液相与流动相不互溶； 2）固定液对被分离组分是很好的溶剂。
1、分离机制：利用组分在两相间有不同的分配系数——分配定律 2、固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：系统内部压力大，易流失，不实用 3、分类 1）正相色谱：固定液极性 > 流动相极性（NLLC） 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分 2）反相色谱：固定液极性 < 流动相极性（RLLC） 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 适于分离弱极性、中等极性组分
n理 (
) 2 5.54(
neff
' ' t t ( ) 2 16( R ) 2 5.54( R ) 2 W W1 2
tR '
H eff L / neff
neff/n理 = (tR’/tR)2 = {tR’/[tM(1+k)]}2 = [k/(1+k)]2
neff k 2 n理 ( ) 1 k
2）涡流扩散项（多径扩散项）：A
产生原因：载气携样品进柱，遇到来自固定相颗粒的阻力 → 路径不同→涡流扩散
涡流扩散系数 A 2 dp
— 填充不规则因子
dp — 填充颗粒直径
讨论：
，dp A H n 柱效
，dp A H ，n 柱效
经典LC 用途 柱内径 固定相粒径 柱效 流动相的输送 分离混合物 1~15 cm 不均匀，>100μm 低（H↑，n↓） 1~6 mm 球形，均匀，<10μm 高（H↓，n↑） HPLC 分离、分析混合物
wk.baidu.com
常压（重力或毛细作用） 高压（高压泵）
分析周期
能否在线检测
长
否
短
能
二、HPLC与GC的异同
相同点：兼具分离和分析功能，均可以在线检测 主要差别：分析对象、流动相以及操作条件
3）荧光检测器（FD）：只能分析自身或是衍生化后能够产生荧光的物 质，灵敏度高（专属） 原理：利用某组分在溶液中受光激发后，能发射荧光的性质来进行检测。 优点：灵敏度高；选择性好 缺点：只适合具有荧光性的物质
4、检测器：将流出色谱柱的洗脱液中组分的量或浓度定量 转化为电信号
4）示差折光检测器（RID）：利用折光率的差别，灵敏度低，温度要 求严格（通用） 原理：利用纯流动相和含有待测组分流动相之间折射率的差别进行检测 的。 优点：灵敏度适宜；通用型检测器 缺点：对温度变化敏感；不能用于梯度洗脱法中 5）电化学检测器（ECD） 6）化学发光检测器 7）MS、FTIR、NMR等
dp 2 C Dm
Dm
T
dp C H ，n 柱效
Dm H ，n 柱效
T Dm C ，但易产生气泡 T Dm ， ，柱阻
3、HPLC降低板高、提高柱效的方法 1）采用小粒度、颗粒均匀的球形固定相，首选化学 键合相； 2）用低黏度的溶剂作流动相； 3）流动相采用低流速（1mL/min）； 4）适当提高柱温，25—30º C。
1）储液瓶 惰性材料制成，坚固，易清洗，有足够的容积，滤棒/膜过滤器， 可滤去颗粒状物质 2）脱气装置： 氦气脱气，超声脱气， 真空脱气，在线脱气（膜过滤器）。 3）高压输液泵 • 主要部件之一，压力：150~350MPa • 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10um)，液体的流动相高 速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特 点之一。 • 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调，耐腐蚀等特点
流动相
操作条件 柱效主要 改善途径 速率理论 表达式
三、HPLC的特点和应用 三高、一快、一广 高柱效：n = 104 /米，分离柱效高 高灵敏度（检测器灵敏度高） 高选择性 分析速度快 应用范围广泛（可分析80%有机化合物） 能与HPLC联用的波谱仪：NMR、MS、FTIR 流动相选择范围宽
色谱柱可以反复使用
第八章 高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
8—1 8—2 8—3 8—4 8—5 8—6 8—7 概述 HPLC色谱仪 HPLC基本理论 各类HPLC及其固定相、流动相 HPLC分析条件的选择 定性与定量分析 液相色谱—质谱联用技术
8— 1
7—2 高效液相色谱仪 一、HPLC流程图 1、输液系统 1 ）流动相储器（滤棒， 可滤去颗粒状物质） 2）脱气装置 3）高压泵（输液泵） 4）梯度洗脱装置 2、进样装置 3、色谱分离系统 4、检测系统 5、数据处理与记录系统
二、各部分作用 1 、输液系统：将流动相过滤、脱气并将样品和流动相输送 到色谱柱
三、化学键合相色谱法（BPC）
1、化学键合相 2、反相键合相色谱 3、正相键合相色谱 4、离子对色谱和离子抑制色谱
1、化学键合相：目前应用最广、性能最佳的固定相； 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 A、硅氧碳键型： ≡Si—O—C B、硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si — C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广 C、硅碳键型： ≡Si—C D、硅氮键型： ≡Si—N
影响因素： dp：降低dp，采用小粒度固定相，常用3-5m。 ：降低，球形、粒度均匀的固定相。 使用小而均匀的填充颗粒能改善柱效
3）传质阻抗项
C Cm Csm Cs Cm Csm
注：只考虑流动相和静态流动相的传质阻抗 忽略固定相传质阻抗
HPLC：H A Cm u Csm u
保护柱、色谱柱、恒温装置、连接阀 常用：直径4~6mm，柱长10~30cm 柱效评价：色谱系统适应性试验： R ， n ， T （拖尾因子） 柱再生：维护、保养、柱子的冲洗 发展趋势：减小填料粒度和柱径以提高柱效
4、检测器：将流出色谱柱的洗脱液中组分的量或浓度定量转 化为电信号
各种检测器： 1）紫外检测器（UVD）：适于具有紫外吸收的物质（常用、专属） 原理：基于待测组分对特定波长的紫外光有选择性的吸收，被测物浓度与 吸光度的关系服从比尔定律。 优点：灵敏度高、噪声低、线性范围宽、对温度及流动相流速变化不敏感 缺点：不适用于无紫外吸收的物质；流动相的截止波长应小于检测波长 常用仪器：可变波长型检测器（VWD）、二极管阵列检测器（PDAD） 2）蒸发光散射检测器（ELSD）：适用于挥发性低于流动相的组分，特 别适用于无紫外吸收的样品。（通用）
二、速率理论
B 2 Dm
Dm
T
柱温T 低，流动相 大 B相忽略
HPLC：H A C u
1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比）
u 1mL / min 时，H u u H ，n 柱效 ，但t R
兼顾柱效和分析时间，选择u 1ml / min
4）梯度洗脱装置
洗脱方式——等度和梯度两种
洗脱装置——低压梯度和高压梯度装置 低压梯度 高压梯度
高压泵 混合阀 高压泵 混合阀 高压泵
梯度洗脱剂
一台高压泵，常压下通过比例调节阀，将各种不同极性的溶剂按一 定的比例混合后，再被抽入高压泵中增压送入色谱柱
利用两台高压输液泵，程序控制每台泵的输出流量，在泵后的高压 状态下混合，混合后进入色谱柱
不敏感 不敏感 不敏感 敏感
0.1-10ng
不敏感 不敏感
8—3 HPLC基本理论
热力学理论：塔板理论——平衡理论
动力学理论：速率理论——Van deemter方程 一、塔板理论
二、速率理论
一、塔板理论
n理 L H理
tR
或 H 理 L / n理
tR 2 t ) 16( R ) 2 W1 2 W
概述
高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相色谱
实验和技术基础上，以高压泵输送流动相，采用高效固 定相以及高灵敏度检测器发展而成一种液相色谱法。
一、HPLC与经典LC区别 二、HPLC与GC差别
三、特点
一、HPLC与经典LC的异同
相同点：流动相都是液体，分析对象相同
区别：固定相差别，输液设备和检测手段
二、各部分作用 2、进样系统：将试样引入色谱柱 1）隔膜进样（高分子有机硅胶垫→进样室） GC系统压力较小，可以 HPLC系统压力太大，必须停泵进样（早期） 2）阀进样：不必停泵，六通阀 现在：六通进样阀、自动进样装置
流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进 样装置，其结构如图所示：
3、色谱分离系统：分离混合成分