口蹄疫监测诊断作业指导书

口蹄疫监测诊断作业指导书

一、口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体检测酶联免疫吸附试验

1. 适用范围

用于检测猪、牛、羊血清中的口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体，与猪、牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用，可区分口蹄疫病毒感染动物及疫苗免疫动物。检测猪血清应用猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒；检测牛、羊血清应用牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒。

2. 检测试剂

口蹄疫病毒VP1 抗原包被板、样品稀释液、酶结合物、阴性对照、VP1阳性对照、酶结合物稀释液、TMB底物A液、TMB底物B液、终止液（I.OMHZSQ）、浓缩洗涤液、稀释板、一次性封板膜、微孔定位标签。

3. 检测步骤

3.1使用前将试剂盒恢复到室温，避免阳光直射或放置在30C 以上的环境中。

3.2取出试剂盒中的样品稀释液。A1、B1 两孔作为阴性对照，

CI 、D1 两孔作为阳性对照孔，其余孔作检测孔，每孔一个样品。

3.3在稀释板的各孔中加200样品稀释液。在相应各孔中分别加

入10 此对照血清或被检血清样品。用加样器重复吹吸数次。稀释每个

样品时必须使用不同的吸头。

3.4取出抗原包被板。

3.5分别从稀释板上取稀释后的对照血清和被检血清各100 此，加至抗原包被板的相应孔中，加益或封膜后，置37 士2C下孵育60 士5 分钟。

3.6洗涤工作液配制：按需要量，用去产离子水或双蒸水将洗涤

液作25 倍稀释。

3.7用洗涤工作液洗涤抗原包被板，每孔300 吨，洗涤6 次，拍干。

3.8酶结合物工作液配制：用酶结合物稀释液将酶结合物作100 倍稀释，现配现用。

3.9每孔加入100此酶结合物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C 下孵育30± 2 分钟。

3.10 重复3.7。

3.1仃MB底物工作液配制：将TMB底物B液和TMB底物A液等量

混合，现配现用。

3.12每孔加入100此底物工作液，加盖或封膜后，置37 士2C下孵育15士1 分钟。

3.13 每孔加入100此终止液，并轻轻振荡混匀。

3.14在15分钟内，用酶联读数仪测定在450nln波长下的OD直。

结果判定4.1 猪口蹄疫病毒vPI 结构蛋白抗体检测结果判定：

4.1.1阴性对照孔平均0D值应续0.15，每个阳性对照孔0D值应妻

0.5，且簇2.0。否则，试验无效。临界值=0.23X阳性对照孔平均

OD值。

4.1.2被检样品孔OD直＜临界值时、判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体阴性。

4.1.3被检样品孔OD直＞临界值，判为阳性。

4.1.4对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体阴性。

4.1.5当猪口蹄疫病毒vPI 结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与猪口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终判定}

4.2 牛、羊口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体检测结果判定：

4.2.1阴性对照孔平均O□值应W 0.2，每个阳性对照孔OD直应＞0.5，且W 2.0。否则，试验无效。

临界值=0.23x阳性对照孔平均OD直。

4.2.2被检样品孔OD值V临界值时，判为阴性，即为抗口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴性。

4.2.3被检样品孔OD直》临界值，判为阳性。

4.2.4 对判定结果为阳性的样品，应用2个孔进行重复检测。重复检测后，若至少有一个孔为阳性，则判为口蹄疫病毒VPI 结构蛋白抗体阳性，若两孔均为阴性，则判为口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体阴

性。

425当牛、羊口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒与牛、羊口蹄疫病毒非结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒联合使用时，按下列标准进行最终判定。