DNA电泳常见问题分析
DNA测序常见问题分析及解决办法总结
请提供详细资料我们会根据结果具体分析。
常见问题
具体情况
可能的原因
处理办法
备注
样品准备问题
菌培养不好或失败
抗性不对或菌已死
核对抗性，尽可能提供载体信息。
或菌培养条件特殊
重新提供菌液，或提供2ug纯化质粒。
质粒提不出
质粒拷贝数极低或
客户自己采取大量提取的方法提供2ug纯化质粒。
培养方式不当
质粒产量很低
低拷贝数质粒或
客户自己采取大量提取的方法提供2ug纯化质粒。
培养方式不当
自带质粒或已纯化PCR产物量极低
是否为电泳法定量，
质粒：电泳检测浓度大于100ng/ul，体积大于20ul。
测OD值法不可靠,电泳检测
总量是否足够
已纯化PCR产物：根据片段长度提供足够量的模板，一般要求是100ng/反应/Kb，进行多个反应的应相应增加量。
测序出现双峰或信号中断
双峰
重复序列，如polyT、polyA或几个碱基重复
质粒产量极低
客户自己提供2ug纯化好的质粒
PCR产物定量极低
重新电泳检测已纯化的PCR产物，确认有足够的量，或提供PCR原液由公司进行纯化
测序结果正常，与预期不符
找不到引物
质粒模板
检测是否为空载体，从其互补链上寻找，克隆位点离测序引物太近，长插入片段未测通。
PCR模板
不可能找到所用的测序引物，短片段可以从互补链上找到另一段的引物，长片段由于测不通，无法找到相应序列想得到全序列，短片段可以从两端进行测序，长片段需要经克隆后进行测序。
用反向引物中出现套峰
可能是样品非单克隆，挑其他克隆测序。
PCR产物测序中，某一点后序列变乱
DNA电泳常见问题分析
DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。
4、样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5、 DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、 DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。
沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。
在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。
12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。
电泳常见问题
Marker参考见解：marker有时会出现这样的问题,应该是时间久了。
新买时跑胶在点样孔没有,过一段时间就会在点样孔出现亮点。
也可能是蛋白，有时DNA提的不纯含有蛋白时就会出现上样孔有条带的现象琼脂糖凝胶电泳检测DNA时,跑出的带后面出现拖尾现象,什么原因造成的?参考见解：DNA带模糊??：1、DNA降解??避免核酸酶污染。
2、DNA上样量过多??减少凝胶中DNA上样量。
3、所用电泳条件不合适??电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃,巨大DNA链，温度应＜15℃，核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
4、DNA样含盐过高??电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
5、有蛋白污染??电泳前酚抽提去除蛋白。
6、DNA变性，?电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。
将从组织提取的DNA进琼行脂糖凝胶电泳，用的1.5%的胶加了EB，80V跑1小时，溴酚蓝已经跑到头了，在紫外灯观察什么带也没有，只见孔里面有橘红色的亮光。
好象没跑出来，是怎么回事？参考见解：1、根据目的条带长度来调整凝胶浓度，一般1.5％左右，也不一定。
2、紫外灯下没见带，不一定没有出孔，而是量少看不到，可以测一下浓度看一下，或直接试跑一下PCR。
3、最好加一个marker孔，尤其你第一次跑胶时。
4、电泳时间可能过长，一般75v×30min左右，但是具体看溴酚蓝的离孔距离和目的条带离孔距离。
怎样根据目测条带亮度来判断DNA浓度？参考见解：1、跑胶时候marker 可以加成定量marker，如1kb、100bp等marker，按说明书的量上样电泳，如加500ng量的DNA marker，电泳完毕后，就可将目的DNA条带和MARKER 条带的亮度做个大致的比较，找出两者最接近亮度的条带。
因为marker的各条带都已知所含的DNA浓度（说明书中详细注明），因此根据条带的亮度、大小大致就可推测目的DNA的浓度。
2、在通过目测DNA浓度的时候，最好要把加样量设一个梯度，比如从0。
DNA电泳常见问题分析
D N A电泳常见问题分析The final revision was on November 23, 2020DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。
4、样品加入量：一般情况下，宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。
沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯，含有蛋白质等杂质。
在这种情况下，应加入SDS至终浓度为%，并重复步骤2～8。
12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵胶聚时间很长如何解决过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。
DNA测序结果中常见的几个问题
1 、为什么开始一段序列的信号很杂乱，几乎难以辨别这主要是因为残存的染料单体造成的干扰峰所致，该干扰峰和正常序列峰重叠在一起；另外，测序电泳开始阶段电压有一个稳定期，所以经常有20-50 bp 的紧接着引物的片段读不清楚，有时甚至更长。
2 、为什么在序列的末端容易产生 N 值，峰图较杂由于测序反应的信号是逐渐减弱的，所以序列末端的信号会很弱，峰图自然就会杂乱，加上测序胶的分辨率问题，如果碱基分不开，就会产生 N 值，正常情况下ABI377测序仪能正确读出500个碱基的有效序列。
3 、测序结果怎么找不到我的引物序列如果找不到测序所用的引物序列。
这是正常的，因为引物本身是不被标记的，所以在测序报告中是找不到的；如果找不到克隆片段中的扩增引物，可能是您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到扩增引物；另外插入片段的插入方向如果是反的，此时需找引物的互补序列。
4 、测序结果怎么看不到我克隆的酶切位点可能的原因同上，您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到酶切位点。
通常我们会尽量选择距离酶切位点远点的引物，当然，若是样品出现意外原因，如空载、载体自连等，克隆的酶切位点也是看不到的。
5 、你测出的结果与我预想的不一致，给我的结果与我需要的序列有差距，这是怎么回事首先，我们会核实给您的测序结果是否对应您的样品编号，如果对应的是您的样品，由于不知您的实验背景，测得的序列是否与您预想的结果一致我们无法判断，我们能做到的是检查发送给您的测序结果和您提供来的样品是否一致。
6 、序列图为什么会有背景噪音(杂带)是否会影响测序结果序列图的背景杂带是由荧光染料引起，如果太强会影响测序结果，要看信噪比，我们给的结果信噪比大都在98%以上。
7 、测序结果为什么与标准序列有差别原因可能有：样品个体之间的差别、测序准确率的问题，自动测序仪分析序列的准确并非100%，建议至少测一次双向，通过双向测序可以最大限度减少测序的错误。
琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因
琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分析和分离生物大分子的方法。
然而，有时候在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们可能会遇到条带不清晰的问题，这给结果的解读和分析带来了困扰。
下面我将介绍一些可能导致琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因。
1. DNA样品质量不佳琼脂糖凝胶电泳的前提是获得高质量的DNA样品。
如果DNA样品质量不佳，比如存在脏带、降解或者污染，都会导致条带不清晰。
因此，在进行实验之前，我们需要对DNA样品进行质控，确保其质量符合要求。
2. 样品预处理不当在进行琼脂糖凝胶电泳之前，我们通常需要对DNA样品进行一些预处理，比如酶切、PCR扩增或者纯化等。
如果预处理过程中存在问题，比如酶切反应时间过长、PCR扩增过程中出现非特异性扩增等，都会导致条带不清晰。
3. 聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当琼脂糖凝胶电泳中，聚丙烯酰胺凝胶的浓度是影响条带清晰度的重要因素之一。
一般来说，较低浓度的凝胶适用于较大的DNA片段分离，而较高浓度的凝胶适用于较小的DNA片段分离。
如果选择的凝胶浓度不合适，就会导致条带模糊不清。
4. 电泳条件设置不当电泳条件的设置也是影响琼脂糖凝胶电泳结果的重要因素。
比如，电泳电压、电泳时间和电泳缓冲液的配制等都会影响条带的清晰度。
如果电压过高或者电泳时间过长，都会导致条带模糊不清。
此外，如果电泳缓冲液的配制不正确，比如pH值不稳定或者离子浓度不合适，也会影响条带的清晰度。
5. 负载样品量过多或过少在进行琼脂糖凝胶电泳时，负载样品量的选择也是非常关键的。
如果负载样品量过多，会导致条带扩散，模糊不清；如果负载样品量过少，条带可能会变得非常弱或者根本看不到。
因此，在进行负载样品时，需要根据实验的需要选择适当的样品量。
琼脂糖凝胶电泳条带不清晰的原因可能是多方面的，包括DNA样品质量不佳、样品预处理不当、聚丙烯酰胺凝胶浓度选择不当、电泳条件设置不当以及负载样品量过多或过少等。
在进行琼脂糖凝胶电泳实验时，我们需要仔细检查每一个步骤，确保实验条件的准确性和合理性，从而获得清晰可靠的结果。
DNA电泳Marker条带模糊的原因
a. 电泳的电压太高，不要超过20V/cm。 b. 电泳时间长，产热多，导致胶部分融化。 c. 电泳仪电压不稳。 d. 电泳缓冲液陈旧。1X TAE，100V不能使用超过50分钟。
其中，红色标记的更为常见。
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DNA电泳 Marker条带模糊的原因
1. Marker质量问题： a. Maker被DNA酶污染，已经部分降解。 b. 如果是自制的marker，可能粘性末端重新结合。煮沸3-6分钟，冰水骤冷，可使之重新分开。
2. 凝胶质量问题：
a. 凝胶质量不好。 b. 配胶的水不干净。 c. 胶不均匀，煮沸的时候要多煮沸一段时间（4-5分钟）。 d. 凝胶放置时间太久，被部分降解。 e. EB浓度太高，降低胶中EB浓度到0.1-0.2ug/ul。 f. 凝胶被DNA酶污染。
分子生物学实验的常见问题与解决方案范文
分子生物学实验的常见问题与解决方案范文一、Southern杂交问题1：电泳后发现凝胶中DNA扩散，导致结果难以确定，如何解决这一问题？解决方案：（1）在操作上：电泳时隔孔上样，电泳后要对凝胶及时处理使凝胶干燥；（2）琼脂糖的质量应该较好，尤其是不应含有内切酶，否则有时将使低拷贝数基因的杂交结果难以解释。
问题2：传统方法中转膜不完全的问题如何克服？解决方案：经典的向上转移法会使凝胶短时间内变薄,此时即使延长转移时间至24小时以上,也不能使大分子DNA良好地转移出去,因此,转膜不完全。
向下转膜法由于不需在吸水纸上增加重量,凝胶基本不变形；加之吸水纸的吸力与水受到的重力方向一致,故可以良好地完成DNA的转移,它不需要特殊的仪器,转移速度较快,转移效率高。
利用地高辛标记探针进行Southern杂交时，对于大于15kb的DNA片断，转膜之前用盐酸进行脱嘌呤可以促进转膜效率,但脱嘌呤过度可导致分子量相对较小的DNA被打断成过小的片段而难以和尼龙膜结合。
如果实验转膜过程中同时含有大于15kb的DNA(通常为基因组)和小片段DNA(通常是基因组酶切产物)，那么在转移的过程中倾斜容器，仅使凝胶上半部分浸泡于盐酸，这样既可以提高大片断DNA的转移效率，又不会打碎小片段DNA。
另外，等采用琼指糖凝胶直接杂交的方法，来解决这一难题：以转基因鼠的检测为例，实验步骤如下：1.转基因鼠的建立：以鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5’调控区指导人G-CSF基因为构件，建立转基因小鼠。
转基因小鼠的检测采用剪取鼠尾DNA做Southern进行鉴定。
2.琼脂糖凝胶直接杂交:(l)用BanHI(150U)对由假孕鼠产生的仔鼠剪尾提取基因组DNA10μg酶切过液，取少量电泳检查酶切完全后，上样电泳8小时，(2)将电泳槽板连同凝胶置50℃放置3小时，用镊子轻轻揭起凝胶，放于变性液(0.5MNaOH，0.5MNaCl)20分钟，转置中和液(0.5MTriHCl，0.15MNaCl)20分钟，将胶放于玻璃板上沥干液体，室温放置30分钟。
琼脂糖凝胶电泳分离纯化DNA步骤和问题分析
琼脂糖凝胶电泳分离纯化DNA步骤和问题分析琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。
其分析原理与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。
对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。
琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。
但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动，一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb~50kb范围内的DNA片段，三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为：超螺旋DNA＞线型DNA＞开环DNA.琼脂糖预制胶一、选择适合的电泳缓冲液：1、较高浓度的胶有利于提高小分子量核酸的分辨率，常规一般使用TBE缓冲液。
（即Tris 硼酸盐溶液）2、电泳时使用新制的缓冲液可以明显提高电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，PH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
二、选择适合的Marker：DNA电泳一定要使用DNA marker或已知大小的正对照DNA来估计DNA片段大小。
Marker的选择要适中，Marker应该选择在目标片段大小附近ladder较密的，这样对目标片段大小的估计才比较准确。
如果marker太大就可能跑不开，挤到一起，起不到marker的作用。
三、设备和耗材：移液器、电泳仪电源、水平式凝胶电泳槽、凝胶成像系统、样品、枪头。
电泳原因分析
1.cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反应起始时RNA的总量及纯度有关*建议在试验中加入对照RNA*第一链的反应产物在进行PCR扩增时，在总的反应体系中的含量不要超过1/10*建议用Oligo(dT)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于第一链合成。
由于RNA 模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP无法与模板退火；或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。
*目的mRNA中含有强的转录中止位点，可以试用以下方法解决：a. 将第一链的反应温度提高至50℃。
b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。
3. 产生非特异性条带*用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。
如果RT阴性对照的PCR结果也显示同样条带，则需要用DNase I重新处理样品。
*在PCR反应中，非特异的起始扩增将导致产生非特异性结果。
在低于引物Tm 2至5℃的温度下进行退火，降低镁离子或是目的DNA的量将减少非特异性结果的产生。
*由于mRNA剪切方式的不同，根据选择引物的不同将导致产生不同的RT-PCR结果。
4. 产生弥散（smear）条带*在PCR反应体系中第一链产物的含量过高*减少引物的用量*优化PCR反应条件/减少PCR的循环次数*在用DNase处理被DNA污染的RNA样品时，其产生的寡核苷酸片段会产生非特异性扩增，一般会显示为弥散背景。
5. 产生大分子量的弥散条带*大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的*对于长片段的PCR，建议将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10（或1:100-1:200）6. 在无反转录酶的情况下，对照RNA获得扩增结果*通常是由于对照RNA中含有痕量DNA而导致的。
dna模板电泳降解
DNA模板电泳降解是指在进行DNA电泳分析时，由于某些原因导致DNA分子发生断裂和降解的现象。
这种现象会影响DNA的迁移速度和迁移距离，从而影响实验结果的准确性。
DNA模板电泳降解的原因可能包括以下几个方面：
- DNA样品的质量不佳：如果DNA样品中含有杂质、RNA污染或者酶切不完全等问题，就会导致DNA模板的降解。
- 电泳条件不当：如果电泳缓冲液中的pH值、温度、电流强度等参数设置不当，也会导致DNA模板的降解。
- 电泳时间过长：如果电泳时间过长，就会导致DNA模板在电场中受到过度拉伸和摩擦，从而导致其断裂和降解。
为了减少DNA模板电泳降解的影响，可以采取以下措施：
1. 选择高质量的DNA样品进行分析。
2. 优化电泳条件，如调整缓冲液的pH值、温度和电流强度等参数。
3. 控制电泳时间，避免过长的电泳时间。
4. 使用适当的保护剂，如乙二醇或甘油等，来保护DNA模板免受损伤。
琼脂糖核酸电泳中的疑难问题及其解决方案
琼脂糖核酸电泳中的疑难问题及其解决方案一、分辨率问题问题描述：琼脂糖核酸电泳中，条带分辨不清，无法准确区分不同的DNA 片段。
解决方案：1.调整琼脂糖浓度：增加琼脂糖浓度可以提高分辨率。
2.调整缓冲液浓度：降低缓冲液浓度可以提高分辨率。
3.增加电压：适当增加电压可以提高迁移速率，从而提高分辨率。
二、迁移速率不均一问题描述：琼脂糖核酸电泳中，不同DNA片段的迁移速率不一致，导致条带不整齐。
解决方案：1.调整缓冲液浓度：适当增加缓冲液浓度可以提高迁移速率的一致性。
2.控制温度：保持恒温可以减少温度对迁移速率的影响。
3.更换电泳槽：电泳槽老化或污染可能导致迁移速率不均一，需要更换新的电泳槽。
三、拖尾现象问题描述：琼脂糖核酸电泳中，某些DNA片段出现拖尾现象，影响条带分析。
解决方案：1.调整琼脂糖浓度：适当增加琼脂糖浓度可以减少拖尾现象。
2.控制温度：保持恒温可以减少温度对DNA片段的影响，从而减少拖尾现象。
3.检查缓冲液：缓冲液不纯或被污染可能导致拖尾现象，需要更换新的缓冲液。
四、条带弥散问题描述：琼脂糖核酸电泳中，某些条带出现弥散现象，影响分辨率。
解决方案：1.调整琼脂糖浓度：适当增加琼脂糖浓度可以减少弥散现象。
2.控制温度：保持恒温可以减少温度对DNA片段的影响，从而减少弥散现象。
3.检查缓冲液：缓冲液不纯或被污染可能导致弥散现象，需要更换新的缓冲液。
五、背景问题问题描述：琼脂糖核酸电泳中，背景较深，影响条带分析。
解决方案：1.调整缓冲液浓度：适当降低缓冲液浓度可以减少背景问题。
2.控制温度：保持恒温可以减少温度对背景的影响。
3.检查电泳槽：电泳槽老化或污染可能导致背景问题，需要更换新的电泳槽。
六、染色不均一问题描述：琼脂糖核酸电泳后，某些条带染色不均一，影响分析结果。
解决方案：1.调整染色时间：适当延长染色时间可以提高染色效果。
2.更换染色剂：染色剂不纯或被污染可能导致染色不均一，需要更换新的染色剂。
DNA电泳常见问题分析
D N A电泳常见问题分析 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
2、?凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
3、?电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。
4、?样品加入量：一般情况下，宽的梳子可加μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5、?DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、?DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。
沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于；不纯，含有蛋白质等杂质。
在这种情况下，应加入SDS至终浓度为%，并重复步骤2～8。
12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1? 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵胶聚时间很长如何解决过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。
dna电泳实验报告
dna电泳实验报告
《DNA电泳实验报告》
DNA电泳是一种常用的实验技术，用于分析DNA分子的大小和形状。
通过电
泳实验，可以帮助科学家们研究DNA的结构和功能，从而深入了解生物学和遗传学的基本原理。
在本次实验中，我们使用了聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，将DNA样品加载到凝胶中，并通过电场作用使DNA分子在凝胶中移动。
根据DNA分子的大小和形状，不同的DNA片段会在凝胶中以不同的速度移动，最终形成不同的条带。
通过观察电泳结果，我们可以得到DNA分子的大小和形状信息。
在实验中，我们使用了不同长度的DNA标准品作为参照，以便测定待测DNA片段的大小。
通过比对标准品和待测样品的电泳结果，我们可以确定待测DNA片段的大小和浓度。
在实验过程中，我们发现了一些有趣的现象。
例如，一些DNA片段在电泳过程中呈现出多个条带，这可能是由于DNA分子具有不同的构象或构象异构体。
通过进一步分析，我们可以深入了解这些DNA片段的结构和功能。
此外，我们还发现了一些待测样品中可能存在的杂质或附加物。
这些杂质可能
会影响DNA的电泳行为，因此需要进一步的实验和分析来确定它们的来源和影响。
总的来说，本次DNA电泳实验为我们提供了宝贵的数据和信息，有助于我们更深入地理解DNA分子的特性和行为。
通过进一步的研究和分析，我们可以将这些数据应用到生物学、医学和遗传学等领域，为科学研究和医学诊断提供更多
的信息和帮助。
DNA电泳技术的不断发展和应用将为我们带来更多的科学发现
和医学进步。
DNA电泳结果分析
DNA电泳结果分析
(供参考)
首先看第二泳道，能够看见两条带，一般的质粒跑完电泳都是这种情况，因为质粒容易开链，变成线性的，或者是半线性半环状，而环状的比线性的跑的快，所以上面那条浅的应该是开链的质粒，下面的是环状的质粒，不过不要紧，一般都是这样。
看第三条泳带，说明你的目的条带大约在750bp。
再看第四个泳带，靠近点样孔的是你切掉了目的基因的质粒，此时为线性的质粒，能够看见它比第二条泳道那条亮带跑的要慢一些，这是对的结果。
还是因为环状的比线性的跑的快。
而第四条泳带下面那个浅带，是你的目的基因，它与你PCR产物大小一样。
因此说明了你的重组质粒构建成功，目的基因已经连入质粒了。
精选。
DNA电泳常见问题分析
DNA电泳常见问题分析DNA电泳常见问题凝胶电泳操作注意事项1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。
4、样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5、DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。
沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。
在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。
12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量DNA电泳常见问题分析之一1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。
DNA电泳条带indel百分比分析
DNA电泳条带indel百分比分析
一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）：
形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。
处理办法：待其充分凝固再做实验。
二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：
形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。
处理办法：可在两板之间加入适量缓冲液，以排除气泡。
三、区带拖尾：
形成原因：主要是由样品溶解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液放置时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。
四、区带出现纹理：
形成原因：主要是由样品不溶性颗粒引起的。
处理办法：加样前离心，加适量样品促溶剂。
五、鬼带：
形成原因：主要是由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，
致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量比目标区带大，有时不能进入分离胶。
但它与目标区带有相同的免疫学活性，在免疫印迹反应中可见，能与目标区带对应的抗体作用。
处理办法：加热煮沸后再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。
dna提取的电泳呈弥散状的原因
dna提取的电泳呈弥散状的原因DNA电泳是一种常用的生物分析技术，通过电场作用下的DNA分子的迁移速度差异来分离和检测DNA片段。
在电泳过程中，有时我们会观察到DNA在凝胶中呈现出弥散状的现象，本文将探讨这种现象的原因。
我们需要了解DNA电泳的基本原理。
DNA是双螺旋结构的大分子，由两条互补的链组成。
在电场作用下，DNA分子会迁移到电场的正极或负极方向，取决于DNA分子的电荷性质。
一般来说，DNA分子带有负电荷，所以会向电场的正极方向迁移。
然而，DNA电泳呈弥散状的现象并不常见，通常DNA在电泳过程中会形成清晰的条带。
那么，为什么有时候DNA会呈现出弥散状呢？一种可能的原因是DNA样本中存在着高分子杂质。
DNA提取过程中，我们通常使用各种试剂和方法来纯化DNA样本，以去除杂质。
然而，完全去除杂质是非常困难的，即使是微量的高分子杂质也足以影响DNA的电泳结果。
这些杂质可能会与DNA分子发生相互作用，导致DNA分子的迁移速度减慢或受阻，进而导致电泳呈弥散状。
另一个可能的原因是DNA分子本身的特性。
DNA分子具有一定的长度和结构，这些特性会影响DNA的迁移速度。
一般来说，较短的DNA片段会迁移得更快，而较长的DNA片段会迁移得更慢。
当DNA样本中存在不同长度的DNA片段时，较长的片段会被较短的片段“拖累”，导致电泳呈现出弥散状。
凝胶浓度也会影响DNA电泳的结果。
凝胶是DNA电泳中的重要载体，它能够形成一个网状结构，限制DNA分子的迁移。
当凝胶浓度较高时，DNA分子受到的阻力也较大，迁移速度会减慢，从而导致电泳呈弥散状。
除了上述原因，实验操作中的一些因素也可能导致DNA电泳呈弥散状。
例如，电泳过程中的电场强度、电泳时间和电解质浓度等参数的选择都会对电泳结果产生影响。
不同的实验条件可能导致DNA 分子的迁移速度差异，进而影响电泳结果。
在实际实验中，我们可以采取一些措施来解决DNA电泳呈弥散状的问题。
一种方法是优化DNA提取和纯化的步骤，尽量去除高分子杂质。
dna电泳maker条带缺失
dna电泳maker条带缺失DNA电泳是一种常用的分子生物学技术，用于分离和检测DNA分子。
DNA电泳的原理是根据DNA分子的大小和电荷差异，在电场中进行迁移，从而实现DNA分子的分离。
DNA电泳技术在基因检测、疾病诊断和法医学等领域有着广泛的应用。
DNA电泳的结果通常通过观察DNA条带的形状和大小来判断样品中DNA分子的特征。
正常情况下，DNA电泳的结果应该呈现出清晰、连续的条带。
然而，在实际操作中，有时会出现DNA电泳结果中的条带缺失现象。
DNA电泳结果中的条带缺失可能有多种原因。
首先，样品中的DNA浓度可能过低，导致电泳结果中的条带过于模糊，甚至无法观察到。
其次，DNA样品可能存在降解或污染，导致电泳结果中的条带出现缺失。
此外，实验操作中的技术问题，如电泳时间、电场强度等参数的设置不当，也可能导致DNA电泳结果中的条带缺失。
DNA电泳结果中的条带缺失对于实验结果的解读和分析有着重要的影响。
首先，条带缺失可能导致某些DNA分子无法被检测到，从而影响对样品中DNA分子的定量和质量分析。
其次，条带缺失可能掩盖了样品中存在的某些DNA分子的特征，从而影响对样品的进一步研究和分析。
为了解决DNA电泳结果中的条带缺失问题，可以采取一些措施。
首先，可以优化DNA提取和纯化的方法，确保样品中的DNA浓度和质量达到要求。
其次，可以调整电泳条件，如电泳时间、电场强度等参数，以提高DNA分子的迁移速度和分离效果。
此外，还可以采用其他分子生物学技术，如聚合酶链式反应（PCR）等，对DNA进行扩增，从而增加检测的灵敏度和准确性。
总之，DNA电泳结果中的条带缺失是实验中常见的问题，可能由多种原因引起。
条带缺失对于实验结果的解读和分析有着重要的影响，需要采取相应的措施进行解决。
通过优化实验条件和采用其他分子生物学技术，可以提高DNA电泳结果的准确性和可靠性，从而更好地开展相关研究和应用。
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DNA电泳常见问题
凝胶电泳操作注意事项
1、琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
2、凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶化的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，以免影响电泳结果。
3、电泳缓冲液：为保持电泳所需的离子强度和pH，应经常更新电泳缓冲液。
4、样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5μg的DNA量,加样量的多少依据加样孔的大小及DNA 中片段的数量和大小而定.当加样孔大时,样品上样量应相应加大,否则会造成条带浅甚至辨认不清;反之则应适当减少加样量，但是上样量过多会造成加样孔超载，从而导致拖尾或弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5、 DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
6、 DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辩范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段DNA的检测应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，以提高分辨率。
7.选择的实验材料要新鲜，处理时间不易过长。
8.在加入细胞裂解缓冲液前，细胞必须均匀分散，以减少DNA团块形成。
9. 提取的DNA不易溶解：不纯，含杂质较多；加溶解液太少使浓度过大。
沉淀物太干燥，也将使溶解变得很困难。
10. 电泳检测时DNA成涂布状：操作不慎；污染核酸酶等。
11.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8；不纯，含有蛋白质等杂质。
在这种情况下，应加入SDS至终浓度为0.5%，并重复步骤2～8。
12.酚/氯仿/异戊醇抽提后，其上清液太黏不易吸取：含高浓度的DNA，可加大抽提前缓冲液的量或减少所取组织的量
DNA电泳常见问题分析之一
1 请问配制聚丙烯酰胺凝胶电泳胶时，促凝的是TEMED还是过硫酸铵？胶聚时间很长如何解决？
过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所需的自由基，而TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速它俩的聚合。
胶聚合时间长可能是TEMED失效了，过硫酸铵固体时间过久也会失效的。
一个让PAGE胶很快聚合的方法：
不要先配AP（过硫酸铵）溶液，因为AP很容易变质。
在保证TEMED和AP质量的情况下，每次配胶时，直接称一定量的AP粉剂溶入液体状态的PAGE中，这样可以保证AP的催化能力，而且可以多加一点。
配25ml的PAGE胶，加0.03克AP粉剂，最后加入25ulTEMED，20分钟左右就可以凝固（当然这个时候拔梳子，会有少量未凝固的PAGE在孔里形成丝状干扰，使加的样品看起来不太漂亮，但一般不影响跑胶效果和条带的形状和位置）。
2 DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？
1、配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm
即可。
2、电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。
3、上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。
3 跑出的DNA带模糊？
1、DNA降解：避免核酸酶污染。
2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。
建议经常更换电泳缓冲液。
3、所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。
4、DNA上样量过多：减少凝胶中DNA上样量。
5、DNA样含盐过高：电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
6、有蛋白污染：电泳前酚抽提去除蛋白。
7、DNA变性：电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA。
4 有不规则DNA带迁移?
1、对于λ/Hind III片段cos位点复性：电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟。
2、电泳条件不合适：电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液。
3、DNA变性：以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热。
5 跑出的DNA条带带弱或无DNA带？
1、DNA的上样量不够：增加DNA的上样量；聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低。
2、DNA降解：避免DNA的核酸酶污染。
3、DNA走出凝胶：缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度。
4、对于EB染色的DNA，所用光源不合适??应用短波长（254nm）的紫外光源。
6 跑出的DNA带缺失不完整是怎么回事?
1、如果是小DNA带走出凝胶，可以缩短电泳时间或降低电压或增强凝胶浓度。
2、分子大小相近的DNA带不易分辨??增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度。
3、DNA 变性：电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA。
DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适??在脉冲凝胶电泳上分析。
7 做PCR电泳后跑电泳，目的基因是489BP的，结果每次切胶回收后再跑电泳就变成500多了，快到600了？为什么？
有时只靠电泳结果判断是不准确的，同样的片段每次跑的远近会有不同。
有经验显示目的片段是1300多，结果就跑到1000的marker下面去了，后来证实片段没有问题。
也有做的一个片段也是这样，是490BP.理论上两个条带一样，可是PCR结果显示就是大小不一致。
然后回收以后的检测结果又全部都一样了，后来又拿去做了下一个测序，才知道根本没有问题。
8：为什么marker条带非常模糊，无法辨别具体条带？
A：出现上述情况，可能有以下几个原因：
1. marker条带出现了降解。
请确保在使用过程中避免核酸酶污染；
2. 电泳缓冲液陈旧。
电泳缓冲液多次使用后，离子浓度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液；
3. 电泳条件不合适。
电泳时电压应不超过20V/cm，温度应低于30℃；
4.marker上样量过多。
请根据说明书选用合适上样量；
5. 凝胶质量不好。
建议使用质量较好的琼脂糖；此外，凝胶凝固不均匀也会导致条带模糊。
9：为什么marker条带出现不规则的条带（如哑铃状等）？
A：出现上述情况，多与以下几个原因有关：1. 电泳缓冲液陈旧。
老化的电泳缓冲液离子浓度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液；2. 电泳条件不合适。
电泳时电压应不超过20V/cm，电压太高可能也会导致marker条带出现不规则现象。
此外，凝胶质量差以及凝胶冷却时凝固不均匀也会导致该现象出现。
10为什么marker条带非常弱或者根本没有条带？
A：出现上述情况可能是：1. marker上样量较低，可适当增加上样量；2. 凝胶质量较差或凝胶凝固不均匀也会导致电泳条带弱或根本没有条带；3. 电泳时间过长导致marker条带跑出凝胶，可缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。
11：为什么marker缺带？
A：对于含有较小片段的marker，如果出现缺带现象，可能是因为：
1. 小条带跑出凝胶或分子量大小非常相近的条带不易辨认所致，可适当缩短电泳时间，降低电压，同时增加凝胶浓度；
2. 凝胶中EB含量过低，导致大片段结合EB量太少或没有，在紫外光下亮度太低，可适当增加EB用量。