微生物及检测习题

微生物检验习题：
一、填空题
1、我国卫生部颁布的食品微生物指标有 、 和 三项。
2、薄层色谱法检测有机氯农药残留时采用的显色液是 阳性斑点显 色。
3、细菌染色的基本方法有 、 、细菌持殊结构的染色法和荧光染色法。
4、细菌染色的步骤包括：涂片 、 、 、 、 、 和镜检。
5、革兰氏阳性菌呈 色，革兰氏阴性菌呈红色。
6、微生物常用的计数方法有两种，即 和 。
7、凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌 性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为 性。 。
8、沙门氏菌检测中前增菌的目的是 。
9、沙门氏菌检测中增菌的目的是 。
10、检测经过加工的食品中的沙门氏菌需要前增菌主要因为 。
二、选择题　
1、耐酸性染色法是（　）
A.单染色法 B.复染色法　C.荧光染色法 D.特殊结构的染色法
2、革兰氏染色的关键步骤是（　）
A.脱色 B.媒染 C.复染 D.固定
3、稀释度的选择
3、活菌计数法检测细菌总数应选择平均菌落数在（　）的稀释度，乘以稀释倍数报告之。
A 10～20之间 B. 200～500之间 C. 30～300之间 D. 5～10之间
4、血球计数板25格×16格（ ）。
A大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格 B. 方格内分为25中格，每一中格又分为16小格 C.大方格的长和宽　D.小方格的长和宽
5、乳糖初发酵试验通常在（ ）检测中用到。
A 乳酸菌 B. 酵母菌 C. 细菌总数 D. 大肠杆菌
三、问答题
1、 叙述食品微生物检验的意义。
2、 食品微生物指标菌落总数、大肠菌群和致病菌的具体含义是什么？
3、 比较单染色法和复染色法。
4、叙述棉拭采样法和检样处理的方法。
5、叙述细菌的简单染色的操作方法。
6、叙述菌样经涂片、干燥和固定后的革兰氏染色步骤。
7、目镜测微尺的标定如何操作？
8、如何使用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数？
9、简述菌落总数检验程序。
10、菌落总数检验中若有两个以上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，如何报告？
四、综合题
1、 采用活菌计数法测定食品中细菌总数的测定，以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。（1）以后的操作步骤是什么？（2）结果如何报告？
2、 进行大肠杆菌检测时经乳糖初

发酵实验结果有乳糖胆盐发酵管都产气，（1）说明什么问题？接下来应该如何进行分析？（2）革兰氏染色在何时进行？有什么意义？
答案：
一、填空题
1、菌落总数、大肠菌群和致病菌
2、硝酸银显色液，黒
3、单染色法，复染色法
4、干燥，固定，染色，媒染，脱色，复染
5、紫，红。
6、直接计数法，间接计数法
7、阳，阴
8、使沙门氏菌恢复其活力。
9、沙门氏菌以外的细菌（主要是艾希氏菌属）受到抑制，而使沙门氏菌得到一定的增殖，提高沙门氏菌的检出率。
10、由于加工过程中沙门氏菌受到损伤而处于濒死状态。　
二、选择题
1B 2 A 3 C 4 B 5 D
三、问答题
1、
答：食品微生物检验方法为食品监测必不可少的重要组成部分。
(1)它是衡量食品卫生质量的重要指标之一，也是判定被检食品能否食用的科学依据之一。
(2)通过食品微生物检验，可以判断食品加工环境及食品卫生环境，能够对食品被细菌污染的程度做出正确的评价，为各项卫生管理工作提供科学依据，提供传染病和人类、动物和食物中毒的防治措施。
(3)食品微生物检验是以贯彻“预防为主”的卫生方针，可以有效地防止或者减少食物中毒人畜共患病的发生，保障人民的身体健康；同时，它对提高产品质量，避免经济损失，保证出口等方面具有政治上和经济上的重要意义。

2、
答：(1)菌落总数：菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数。
(2)大肠菌群：大肠菌群是寄居于人及温血动物肠道内的肠居菌，它随着的大便排出体外。食品中如果大肠菌群数越多，说明食品受粪便污染的程度越大。
(3)致病菌：致病菌即能够引起人们发病的细菌。对不同的食品和不同的场合，应该选择一定的参考菌群进行检验。
3、
答：单染色法：单染色法是用一种染料染色的方法。例如用美蓝或稀释击炭酸复红等，使各种细菌染成间—种颜色。故此法只显小细菌的形态和大小，对细菌鉴别价值较小。在染色过程中常加入媒染剂如碘、石炭酸、明矾或者加热的方法，以增加染料对细菌的亲和力。
复染色法：复染色法是用两种以上染料染色的方法，此法除显示细菌形态大小外，不同类型的细菌可以染上不同的颜色，从而具合鉴别细菌种类的价值，因此也称鉴别染色法。
用复染色法染色时，所用的脱色剂如酒精、丙酮或酸类，用于检查染料和细菌结合的牢固程度，最后用与初染色剂颜色有鲜明对比的染料进行复染，以便进行观察，区别细菌种类。
所以两者的染色步骤和目的都不一样。
4、
答：检验肉禽及其制品受污染的程

度，一般可用板孔5cm2的金属制规板，压在受检物上，将无菌棉拭稍沾湿，在板孔5cm2的范围内揩抹多次，然后将板孔规板移压另一点，用另一棉拭揩抹，如此共移压揩抹10次，总面积50cm2，共用10只棉拭。每支棉拭在揩抹去完毕后应立即剪断或烧断后投入盛有50mL灭菌水的三角烧瓶或大试管中，立即送检。检验时先充分振摇吸取瓶、管中的液体，作为原液，再按要求作10倍递增稀释。
检验致病菌，不必用规板，在可疑部位用棉拭揩抹即可。
5、
答：涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
(1)涂片：在载玻片的中央滴一滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量菌种与玻片上的水滴混匀后，在载玻片上涂布成一均匀的薄层。
(2)干燥：涂片最好在室温下使其自然干燥。
(3)固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2～3次，共约2～3s，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜,放置待冷后，进行染色。
(4)染色：在涂片薄膜上滴加染色液一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
(5)水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
(6)干燥：用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。
(7)镜检：用显微镜观察。
6、
答：初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察
(1)取大肠杆菌和枯草杆菌分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。
(2)用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。
(3)加碘液媒染1min后水洗。
(4)斜置载玻片，滴加乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20～30s，随即水洗。
(5)用蕃红染液复染1min，水洗。
(6)用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。
(7)镜检。
7、
答：①取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内。
②将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。
③先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。
④记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。
8、
答：（1）样品稀释，以每小方格内含有4～5个酵母细胞为宜。（2）将血球计数板用擦镜纸擦净，

在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。（3）将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。（4）计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。（5）当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。（6）对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数。
9、
答：菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2～3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃适量营养琼脂→菌落数→报告。
10、
答：若有两个以上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。


四、综合题
1、
解：（1）步骤如下：A 用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。B另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。C根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。D稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在（46±1）℃]水浴锅内保温]注入平皿15ml～20mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1g（1mL）样品所含菌落总数。
(2) 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。
2、
解：（1）可能有大肠杆菌存在，应该进行分离培养和乳酸复发酵实验。将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂板或麦康凯琼脂平板上，置（36±1）℃温箱内，培养18h～24h，然后取出，观察菌落形态并作革兰氏染色镜检和复发

酵试验。乳糖复发酵试验， 即通常所说的证实试验，其目的在于证明从乳糖初酵管试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。在上述的选择性培养基上，挑取可疑大肠菌群1～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36±1）℃的温箱内培养（24±2）h，观察产气情况。凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠杆菌阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠杆菌为阴性。（2）在进行乳糖复发酵实验的同时就可以进行。和复发酵的结果一起最后确定样品大肠杆菌是否为阳性。