delta位点 酿酒酵母
酿酒酵母细胞结构特点
酿酒酵母细胞结构特点酿酒酵母是一种微生物，属于真菌界酵母门酵母纲酵母科酵母属（Saccharomyces cerevisiae）。
它是酿酒、发酵食品和面包的重要微生物资源之一。
酿酒酵母具有一系列特殊的细胞结构，这些结构赋予了它独特的生物学特性和功能。
酿酒酵母细胞的外形呈椭圆形或卵圆形，通常直径约为3-5微米。
它们通常以单细胞形式存在，但在适宜的环境条件下，也可以形成菌丝。
酿酒酵母细胞的外部由细胞壁包裹。
细胞壁是由多糖和蛋白质组成的复杂结构，具有保护细胞、维持细胞形态和抵抗外界压力的功能。
细胞壁中的多糖主要是β-1,3-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖，而蛋白质包括酵母蛋白和外源蛋白。
细胞壁的组成和结构决定了酿酒酵母的抗逆性和发酵能力。
细胞壁内部是细胞膜，细胞膜是由磷脂双分子层构成的。
它起着维持细胞结构完整性、调节物质的进出和细胞内外环境的沟通的作用。
细胞膜上还有许多转运蛋白，用于负责物质的运输和信号的传导。
酿酒酵母细胞内部含有细胞质，细胞质是细胞内的液体环境，其中溶解了许多生物分子。
细胞质中含有各种细胞器和细胞器的相关分子，例如核糖体、线粒体、内质网和高尔基体等。
这些细胞器在细胞代谢和生物合成过程中起到重要的作用。
酿酒酵母细胞的核是其最重要的结构之一。
核是细胞中负责遗传物质存储和遗传信息传递的中心。
酿酒酵母细胞的核呈椭圆形，直径约为2-3微米。
核内含有基因组DNA，这些DNA编码了细胞所需的蛋白质和RNA分子。
核内还含有核仁，核仁是蛋白质和RNA的合成场所。
酿酒酵母细胞中还含有线粒体，线粒体是细胞内的能量中心。
线粒体是细胞呼吸和能量产生的主要场所，通过氧化糖类物质来产生ATP（细胞能量的主要形式）。
酿酒酵母细胞的线粒体呈椭圆形，大小约为1-2微米。
除了上述结构，酿酒酵母细胞还含有其他一些细胞器和细胞结构，例如内质网和高尔基体。
内质网是细胞内蛋白质合成的重要场所，它由一系列平滑或粗糙的膜片组成。
高尔基体则参与蛋白质的修饰和分泌。
发酵工业中常用常见的酵母菌
发酵工业中常用常见的酵母菌（一）酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）这是发酵工业上最常用的菌种之一（图2-84）。
按细胞长与宽的比例可将其分为三组。
1）细胞多为圆形或卵形，长与宽之比为1～2。
这类酵母除了用于酿造饮料酒和制作面包外，还用于乙醇发酵。
其中德国2号和12号（RasseII和RasseXII）最有名，但因其不能耐高浓度盐类，故只适用于以糖化的淀粉质为原料生产乙醇和白酒。
2）细胞形状以卵形和长卵形为主，也有些圆形或短卵形细胞，长与宽之比通常为2。
常形成假菌丝，但不发达也不典型。
这类酵母主要用于酿造葡萄酒和果酒，也可用于酿造啤酒、蒸馏酒和酵母生产。
葡萄酒酿造业称此为葡萄酒酵母（Sac．ellisoideus）。
3）大部分细胞长宽之比大于2，它以俗名为台湾396号酵母为代表。
我国南方常将其用于糖蜜原料生产乙醇。
其特点为耐高渗压，可忍受高浓度盐类。
该酵母原称魏氏酵母（Sac．willanus）。
在啤酒酿造中最早采用的酵母是卡尔斯伯啤酒厂的E．C．Hansen（1842～1909年）在1883年分离的卡尔斯伯酵母（Saccharomyces carlsbergensis），这是一种底面发酵酵母。
酿酒酵母也可用于啤酒酿造，但属上面发酵酵母，这两种酵母发酵的过程和啤酒风味都有所不同。
目前在分类上皆采用酿酒酵母的学名。
底面发酵酵母其细胞为圆形或卵圆形，直径为5～10μm。
它与酿酒酵母在外形上的区别是，卡氏酵母部分细胞的细胞壁有一平端。
另外，温度对这两类酵母的影响也不同。
在高温时，酿酒酵母比卡氏酵母生长得更快，但在低温时卡氏酵母生长较快。
酿酒酵母繁殖速度最高时的温度为33℃，而卡氏酵母需在36℃。
但在8℃时卡氏酵母较酿酒酵母繁殖速度几乎快一倍。
（二）异常汉逊酵母（Hansenula anomala）细胞为圆形，直径4～7μm，椭圆形成腊肠形，大小为（2.5～6）μm×（4.5～20）μm，甚至有长达30μm的长细胞，多边芽殖，发酵，液面有白色菌醭，培养液混浊，有菌体沉淀于管底（图2-85）。
酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒的构建与鉴定
酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒的构建与鉴定摘要：采用PCR扩增酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Ⅲ号染色体ARS304序列（S1）及以ARS304为核心上下游延伸1 kb的侧翼序列（S2），并将目的片段分别构建到酵母整合载体pRS405中，获得重组质粒pRS1和pRS2。
质粒电转化试验发现重组质粒pRS2的转化率大于pRS1，说明ARS304侧翼序列能显著提高ARS304在酿酒酵母中自主复制的能力。
关键词：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）；自主复制序列（ARS）；重组质粒；复制起始活性Construction and Identification of Recombinant Plasmids of Saccharomyces cerevisiae ARS304 and Its Flank SequenceAbstract：ARS304 gene（S1）and its flank sequence（S2）of Saccharomyces cerevisiae were cloned by PCR，and then connected into the shuttle vector pRS405. Recombinant plasmids pRS1 and pRS2 were successfully constructed and used for electroporation of S. cerevisiae. Results showed that the electricity transformation rate of pRS2 was higher than that of pRS1，indicating that flank sequence could improve the autonomously replicating activity of ARS304 in S. cerevisiae.Key words：Saccharomyces cerevisiae；autonomously replicating sequence （ARS）；recombinant plasmids；replication origins activity复制起始的调控涉及细胞周期的调控、基因扩增、肿瘤发生等重大生物学问题，是真核生物基因表达调控的重要内容。
酿酒酵母基因组编辑技术原理
酿酒酵母基因组编辑技术原理基于Red同源重组和CRISPR/Cas9的酿酒酵母基因组编辑服务。
成熟的酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）编辑体系，助您成功实现基因敲除、基因插入和点突变。
基于Red同源重组法的酿酒酵母基因组改造酿酒酵母基因敲除的传统方法是利用自身的Red系统对外源进入的DNA进行同源重组，从而实现目标基因的等位替换。
通过设计靶基因的同源融合片段，将其克隆至自杀载体中，自杀载体通过接合输入到靶细菌。
通过抗生素筛选细菌基因组靶位点整合有自杀载体的插入突变株。
在第二轮反向选择压力下，只有酿酒酵母基因组发生第二次同源重组并丢失自杀质粒才可以存活。
基于CRISPR/Cas9平台的酿酒酵母基因组改造CRISPR/Cas9系统是细菌和古细菌特有的一种天然防御系统,用于抵抗病毒或外源性质粒的侵害。
研究内容•酿酒酵母基因敲除（Saccharomyces cerevisiae gene knockout）•酿酒酵母基因敲入（Saccharomyces cerevisiae gene knockin）•酿酒酵母基因点突变（Saccharomyces cerevisiae gene point mutation）下游应用•发现新的基因功能•优化代谢通路，提升代谢产物产量，实现工业化生产参考文献：•Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.•Zerbini, F., Zanella, I., Fraccascia, D., König, E., Irene, C., &Frattini, L. F., et al. (2017). Large scale validation of an efficient CRISPR/Cas-based multi gene editing protocol in Escherichia coli. Microbial Cell Factories, 16(1), 68.。
构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素
构建酿酒酵母细胞工厂生产番茄红素为构建高效生产番茄红素的酿酒酵母细胞工厂，本研究首先在酿酒酵母中引入番茄红素生物合成途径基因CrtB和CrtI，获得能生产0.17 mg·L-1番茄红素的初始工程菌ZD-L-000。
在此基础上，在工程菌ZD-L-000中分别过表达MV A途径中的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因tHMG1、萜类合成调控的转录因子编码基因upc2.1、二萜生物合成的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶与法呢基焦磷酸合酶编码基因BTS1-ERG20，以及来自嗜酸热硫化叶菌的牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶编码基因SaGGPS，考察这些基因过表达对番茄红素合成的影响，结果发现过表达upc2.1基因未能提高番茄红素的产量，但过表达tHMG1、BTS1-EGR20和SaGGPS基因均能显著提高番茄红素的产量，分别为初始菌株的2.0，16.9和20.5倍。
在进一步研究中，tHMG1、BTS1-EGR20和SaGGPS等有效基因被一同整合入工程菌ZD-L-000，获得的高产菌株ZD-L-201中番茄红素的产量提高77.0倍，达到13.23 mg·L-1；在高密度-两相发酵体系中工程菌ZD-L-201的番茄红素产量能进一步提高到135.21 mg·L-1 （提高10.2倍）。
本研究获得的工程菌为微生物发酵法生产番茄红素提供了基础。
标签：番茄红素；酿酒酵母；合成生物学；甲羟戊酸途径番茄红素（Lycopene）是一种抗氧化活性很强的功能性天然色素，在癌症预防，抗衰老和增强机体免疫力等方面有广泛应用，市场巨大[1]。
目前主要在番茄中直接提取，或利用三孢布拉氏霉菌Blakeslea trispora、欧文氏菌Erwinia uredovora和成团泛菌Pantoea agglomerans等野生微生物来发酵生产番茄红素[1]。
然而直接提取法存在的资源依赖和环境破坏，野生微生物菌种性能差、产量低、难以工业化生产等问题影响番茄红素的生产[2]。
酿酒酵母26SrDNAD1／D2区域序列分析及其系统发育研究
酿酒酵母26SrDNAD1／D2区域序列分析及其系统发育研究第34卷第1期2007年1月酿LIQUOR酒MAKING文章编号:1002—8I10(2007)0I一0037-03酿酒酵母26SrDNAD1/D2区域序列分析及其系统发育研究★李金霞,刘光全,程池(rfI国1r业微生物菌种保藏管理中心,中冈食品发酵T业研究院,北京100027)V o1.34.№.1JlTJ.,2007摘要:利用26SrDNADI/D2区序列分析法对中国_Z-,lk微生物菌种保藏管理中心(cIcc)保藏的22株酿酒酵母(Sacchatomycescerevisiae)和】株威尔酵母fs.willianus)进行了复核鉴定,通过序列比对及构建系统发育树分析后,结果显示:2l株菌株与原名称一致,与酿酒酵母CBS117序列相似性在99.0%以上;CICC1313原定名为威尔酵母.此次鉴定结果为酿酒酵母,与酿酒酵母CBS117IT序列相似性为99.8%:C1CC1859与异常毕赤酵母fPichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定为异常毕赤酵母.进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的发育关系进行了分析,通过构建酵母属内各菌种模式林的26SrDNADI/D2区系统发育树,发现酿酒酵母与属内其他菌种间差异均大于1%,表明26SrDNAD1/D2区域序列分析方法能够应用于酿酒酵母的分子生物学鉴定.关键词:酿酒酵母;26SrDNADI/D2区;序列分析;系统发育树中图分类号:TS26111文献标识码:A酿酒酵(Saccharomycescerevisiae)是人类应用于T业发酵最早的一种微生物,至今仍广泛应用于各种酒的酿造,制作面包及生产单细胞蛋白等,是一种重要的丁业微生物资源啦J.酿酒酵母在分类学上隶属于真菌界(Fungi),子囊菌门(Aseomyeot~,半子囊菌剁(Hemiascomyeetes),酵母目(Saecharomycetales),酵母科fsa(,char(】mycetaceae),酵母属(Saeeharomyees),是酵母属的的模式种.由于酵母属菌种菌落形态相似,显微形态主要以单细胞形式存在,且细胞形状很接近,凶此形态学观察不能提供的有效分类学信息.对于种级水平的分类来说,一一般以菌种对各种糖类的发酵和对不同碳源,氮源等化合物的同化能力以及在不同温度下的生长能力等生理学特征为依据.但是,酵母属各种间生理生化差异有限,而且这些菌种的表型性状不稳定,Seheda和Y arrow(1968)比较研究了酵母属中几个种的同一株菌的冷冻干燥保藏备份和斜面保藏备份的发酵和同化碳源性状,发现经长期的麦芽汁斜面保藏后,有些菌株可获得国家科技基础平台建设项目(2005DKA21204)收稿日期:2006—12—10作者简介:李金霞(1977-),女,硕士,~-3-4L.,L,工程师,现工作于中国食品发酵工业研究院中国工业微生物菌种保藏管理中,,12.发酵或同化某些糖的能力,而根据这些发酵或同化性状,有时甚至可将同一菌株的冷冻干燥保藏株和经多代斜面保藏株鉴定为不同的种,因此,仅将生理生化特征差异作为酵母属各种问的分类依据有时是不可靠的.近些年来,应用于酵母菌分类的快速鉴定系统不断面市,目前常用的有Biolog系统,API20C,ATB32C,VitekYBC和APICandida系统,在这些快速鉴定系统中,Biolog系统以其数据库大,鉴定范围广,鉴定快速等优点,日前已成为国际上酵母菌多相分类鉴定常用的技术手段[.已有文献表明,Biolog系统对于酿酒酵母的鉴定具有很好效果,鉴定准确率可达looq~驯.但对于某些单倍体菌株和基因工程菌株,由于菌种生长较弱,基因工程改造可能会改变其对某些碳源的利用能力,因此造成鉴定结果的偏差.为了弥补传统分类方法和快速鉴定系统对酿酒酵母鉴定的不足,新的分类技术,尤其是分子生物学技术,被不断的应用到酵母菌的分类研究中.随着DNA序列分析技术的日趋成熟和简易化,rRNA基因(rDNA)的序列分析被越来越多的应用于酵母菌的分类学研究中.Kuttzman&Robnett(1998)~tJ定了大约500种酵母的大亚基(26S)rDNADI/D2町变区的序列,包括假丝酵母和其他有性BlendingandFlavorAdjustmentofBandongjingLiquorW ANGFeng-liAbstract:Asafalnoti8distilledspiritsinNorthChina,Band0ningIiqu0risweIIs0Id0verthec ountryforitsgoodflavor,softtasteandrefreshingfeeling,ThereasonforsellingwellisduetothefinebIendingtechn010gy.Blendingandnav0r adjustmentisthebasisofimprovingBandongjingIiqu0rquaIityc0nsistentIy.Keywords:Bandongjingliquor,blending,nav0radjustmenI37?第一期雨良酒2007型及无性型子囊菌酵母几乎所有已知种的模式菌株,发现用这段序~J(5oo600bp)可以将绝大部分种区分开,同一种内不同菌株问D2区的核苷酸差异不超过1%J.由于这些序列均已公布在CenBank等国际核酸序列数据库中,因此给酵母菌的分子生物学分类研究提供了很大方便.本研究利用26SrDNAD1/D2区序列分析法对CICC保藏的22株酿酒酵母和l株威尔酵母进行了复核鉴定,进一步对酿酒酵母与酵母属内其他种之间的系统发育关系进行了比对分析.1材料和方法1.1菌种来源和培养条件实验所用菌株共23株,均来自CICCl11J'有明确来源登记或经生理生化等鉴定为酿酒酵母.实验菌株培养所用培养基为5Be'麦芽汁培养基.保藏菌种经平板划线分离后,挑取单菌落接种到5ml液体培养基中,28℃200rpm条件下培养12h.1.2试剂Taq酶,dNTP,DNAmarker购自天为时代生物有限公司; GoldView购白北京塞百盛基因技术有限公司;其他试剂均购自北京华绿渊生物技术发展公司.】.3基因组DNA提取和26SrDNAD1/D2区序列的扩增及检测基因组DNA提取方法参照文献141.26SrDNAD1/D2区序列扩增引物由上海生物工程有限公司合成.38?引物序列如一F:正向弓I物NL..1:5I_GGATA TCAATAAGCGGAGGAAAAG-3', 反向引物NL一4:5'-GGTCCGTGmCAAGACGG一3?1101.反应条件:94℃for1min,52℃for1min,72℃for1rain30see,36cycles;4℃保存.1.4序列测定,比较分析及系统发育树的构建将PCR产物纯化后直接由上海基康生物工程有限公司用ABI3700基因测序仪进行测序,测序结果用Chromas参照正反序列图谱人工校对.用校正后的26SrDNAD1/D2区序列在GenBank数据库中进行同源序列搜索(BLAST),比较供试菌株与已知酵母菌相应序列的同源性.为进一步显示实验菌株与已知酵母菌的亲缘关系及其分类地位,根据同源序列搜索结果,下载相关酵母菌菌种的26SrDNAD1/D2区序列,与实验菌株序列一起用ClustalX软件进行匹配排列(a1ign),用MEGA3.1软件中的neighbor-joining分析法构建系统发育树,并进行1000次Bootstraps检验.下载酵母属14个相关菌种模式株的26SrDNAD1/D2区序列,采用同样方法进行序列分析和系统发育树的构建.2结果与讨论2.1实验菌株的序列分析和系统发育树的构建构建了包括23株实验菌及相关菌种模式株在内的26SrDNAD1/D2区序列系统发育树(见图1),系统发育树以粟酒裂T————————0.02图1基于26SrDNAD1/D2区域序列和neIghbor-jong分析法绘制的酿酒酵母和相关菌种模式株系统发育树第一期李金霞,等:酿酒酵母26SrDNAD1/D2区域序列分析及其系统发育研究200768f--,Sbc~llanJnL"…1V"(!IS!17fLⅢscBS432,L."sc日∞'∞I,2-9astorianusGB81538厂一.....100L-SumsporusCBS398一scastel#iCBS430996L—一sdairenen$i,sCBS421一SmsmiiC88712747L——————一SspencemnmCBS3019L一～…s一m{厂__SbamettiiCBS6946————一cBs379r—_---Sk/u/yenC883082图2基于26SrDNAD1/D2区域序列和neighbor-joining分析法构建的酵母属菌种间系统发育树殖酵母(schizosacchammvcespombe)26SrDNAD1/D2区序列作为外群,序列一致长度为571bp.由图1系统树可以看出2l株酿酒酵母和1株威尔酵母被聚在以酿酒酵母CBSl171T为代表的分枝中,其中CICC1794与CICCl369与模式株的距离较远,其同源性分别为99.0%和99.2%,符合Kuttzman&Robnett所定的同种内不同菌株问差异不超过1%的标准.c1CC1916fMata,ura3,tri)l,ile2—111为基因1-程改造的单倍体菌株,在文献【2忡曾提到朋Biolog系统鉴定没有结果,但经26SrDNADl/D2区序列鉴定后为酿酒酵母,不受其是否为单倍体或基因工程菌的限制.CICC13l3与酿酒酵母模式株CBS1171T的同源率为99.8%,鉴定结果为酿酒酵母,原来经生理生化鉴定定名为威尔酵母CletusP.Ku~zman和JackW.Fell所着的第4版{TheY easts,a TaxonomicStudy>>(1998)中威尔酵母被作为是酿酒酵母的同物异名,因此认为与原鉴定结果一致.CICCl859与异常毕赤酵母(Pichiaanomala)CBS5759T相似性为100%,鉴定结论为异常毕赤酵母,进一步需以其他鉴定方法进行验证.2.2酿酒酵母与酵母属内其他种问26SrDNADI/D2区序列系统发育树的构建为进～一步分析酿酒酵母与酵母属内其他种问26SrDNAD1/D2区序列的进化关系,构建了酵母属内各菌种间遗传进化关系的系统发育树(见2).由图中呵以看出酵母属14个种主要分为7个分支,其中S.eerevisiae和S.pm'adoxus,S.bayanus,S.pastorianus为一个大分支,S.cerevisiae与S.paradoxus亲缘关系最近,同源率为98,8%,与其他模式株问的差异性均大于2%,㈥此根据Kuttzmaiq&Rolmett所定的同种内不同菌株间差异一般不超过1%的标准,完全可以Ⅲ26SrDNADI/D2区域序列分析法将酿酒酵母与酵母属内其他种区分开来.【参考文献】【1]H.J.法犬等.酵母菌的生活fM].王民俊等译.贵阳:《酿酒科技》编辑部,l984.程池,李金霞,姚粟,胡海蓉.Biolog微生物自动分析系统往酿酒酵母攘定中的应用.酿酒科技IJ).2006,145(7):58—643CletusP.Kurtzman,JackW.Fel1.TheYeasts,aTaxonomieStudy(4thedi fion)[M].1998.[4]自逢彦,贾建华,梁慧燕.假丝酵母属疑难菌株大亚基rDNADI/D2区域序列分析及其分类学意义【J1.2002,21(1):27—32.W.Praphaihmg,M.V anGestel,G.H.Fleet,G.M.Heard.Evaluationofthe Bilolgsystemfi)rtheidentifieatignoffoodandbeverageyeasls【JJ.Letters inAppliedMicrobiology,1997,24:455—459.I6]6王丽敏,李军,胡小松.苹果原料中酵母菌的分离鉴定【Jj.中网农业大学,2004,9(41:14-17.[7]Shan—HuaY ang,Pi-llanWang.ThreespeciesofyeastsnewstoTaiwanⅢ.Taiwania,2003.48(2):99—105.[8]Kang,Heui—Ytin,Y ong—SungKim,GCUB—JoongKim,Jin—HoSet,, Y eon—WooRyuScreeningant]characterizationoffloeeulentyeast.Candidasp.HY200,fortheproduetianofxylitolformD-xylose『J1.J.Microbio1.Bioteehno1.,2005,15(21:362—367.[9]李运,盛慧,赵荣华.Biolog微生物鉴定系统在菌种鉴定c}l的应用酿酒科技,2005133(71:84—85.[10]CletusP.Kurtzman&ChristieJ.Ro}mett.Identificationandphylogenyof aseonqycetousyeastsfromanalysisofnuelearlargesubunit(26S)rilu)so realDNApartialseqlleneeslJ1.AntonievanI~euwenhoek.1998,73:331-371.【11]中国微生物菌种保藏管理委员会:业微生物菌种保藏管理中心.巾国工业微生物菌种目录,食品与发酵'1:业,2001增刊,第二一t±:卷:23—34 TheIdentificationofSaccharomycescerevisiaebySequenceAnalysisof26SrDNAD1/D2DomainGeneLlfln-xia,LIUGUANG——qlzall,~CHENGChi(CICC,ChinaNationalReseaI℃hInstituteofF00dandFermentationIndustries.Beijing100027.China)Abstract:22Saccharomyeescerevisiaestrainsand1Swillianuswereidentifiedby26SrDNA D1/D2domainsequencesallalysis.whichwere depositedinChinaCenteroflndustrialCultureCollectionfcmc)Thesimilaritiesof2.1strains withthetypestrainofS.cerevisiaeCBS1171Tarefrom99.0%to100%Theresultindicatedthatthe21strainssuppofltheoriginalidentifieati0nr esuits:CICC1313.whichwasnamedasS.willianusoriginally,wasclusteredwithS.cerevisiaecloselyinthephlogenetictreeandexiblt ed99.8%similaritywithtypestrainC13S1171TThesimilarityofCICC1859andPichiaanomalaCBS5759Twas100%.Fherelationshipof26 SrDNAgeneDI/D2domainsequencesamong SaccharomycesstrainswasanalyzedfurthermoreandthedivergenceofS.cerevisiaewiththe otherSaecharomycesstrainsweregreaterthanl%.whichindicated26SrDNAD1/D2domainsequencesanalysisisfitforS.cerevisiaeidenti fication.Keywords:Saceharomyeescerevisiae;26SrDNAD1/D2domaingene;sequenceanalysis;p hylogenetietree39?。
酿酒酵母缺陷型菌株的筛选
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3.活菌计算（用没有经紫外线处理的菌液作对照）
• （l）从30℃水浴中取出一支菌悬液，然后用生理盐水稀 释到10-4、10-5（稀释方法：在菌悬液中加入生理盐水至 10ml作为A液，吸0.1mlA液于1支灭菌离心管中加入生理 盐水至10ml作为B液，再吸0.1mlB液于1支灭菌离心管中 加入生理盐水至10ml作为C液，再吸0.1mlC液于1支灭菌 离心管中加入生理盐水至10ml作为D液）。 • （2）将熔化不烫手的完全培养基倒入灭菌培养皿中（每 皿15—20毫升），放平待凝，共4皿。从D液中吸取0.1和 0.5ml于上述预先倒好的培养皿中，各做2皿，共4皿。 • （3）用灭过菌的Y形涂棒将菌液涂匀，先涂布低浓度小剂 量的，再涂布高浓度大剂量的，30℃培养2天，计算活菌 数。
?3将灭菌的丝绒布放在圆本柱上用橡皮筋扣住注意绒面不能用手摸先取母平板倒复在绒面上然后用铅笔轻轻在皿底上均匀地敲几下取下母平板放冰箱保存起来立即把mm平板基本培养基平板按箭头标记的相同方向复印上去方法同上取下mm平板再把cm平板完全培养基平板也按上述同样方法复印印毕30培养23天
啤酒酵母菌营养缺陷型菌株的筛选
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1.制备菌悬液
（1）将酵母菌单倍体菌株从保存斜面上，用接种环 挑一些菌，接种到盛有5ml完全液体培养液的灭菌 离心管中，28℃—30℃培养16—18小时，共接2 支。
• （2）将培养过的菌液倒入盛有玻璃珠的灭菌三角 瓶中，振荡10分钟，使酵母菌充分均匀分散。
• （3）将上述菌液各吸4ml于2支灭菌离心管中离 心（3500转/分，10分钟），倒去上清液，各加无 菌水至5ml制成菌悬液，打匀菌块，并存放在 30℃水浴中备用。
2.诱变处理
• • （1）从30℃水浴中取出另一支菌悬液，倒入灭菌培养皿中。将培养皿至于紫 外灯下，打开紫外灯照射1h，打开培养皿盖照射。 （2）等待时间进行对照组处理。时间到关闭紫外灯，盖上培养皿盖。将培养 皿中液体吸回原离心管中，用少量生理盐水冲洗培养皿并定容到10ml刻度处。 立即离心（3500转/分10min），弃去上清液，加无菌水至5毫升打匀菌块， 再加生理盐水至10ml，制成菌悬液（号液）。 （3）将熔化不烫手的完全培养基倒入灭菌培养皿中（每皿15—20毫升）， 放平待凝，共6皿。 （4）将经紫外线处理过的菌液稀释为10-3（希望每只培养皿中长50—100个 菌落。稀释方法：吸取号液0.1ml于1支灭菌离心管中，加生理盐水至10ml 刻度处作为号液，吸取号液0.1ml于1支灭菌离心管中，加生理盐水至 10ml刻度处作为号液，吸取号液0.1ml于1支灭菌离心管中，加生理盐水 至10ml刻度处作为号液），吸取0.1ml号液于上述预先倒好的培养皿中。 （5）用灭过菌的Y形涂棒将菌液涂匀，30℃培养3—4天，计算活菌数。 （6）计算杀菌率及存活率（从诱变组中选择不污染、菌落分布均匀、菌数适 中的培养皿留作下步影印备用）。
酿酒酵母表达系统
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酿酒酵母鉴定引物-概述说明以及解释
酿酒酵母鉴定引物-概述说明以及解释1.引言1.1 概述酿酒酵母鉴定引物是一种用于鉴定酿酒酵母的DNA引物。
它们通过识别和放大特定的DNA片段，可以确定酿酒酵母的种类和品种。
酿酒酵母在酿造过程中发挥着至关重要的作用，它们通过发酵作用将糖分转化为酒精和二氧化碳，并赋予酒类独特的风味和香气。
在传统的酿酒过程中，酿酒师通常会使用自然发酵的方式，即通过自然环境中存在的酵母菌开始发酵。
然而，随着科技的进步，鉴定酿酒酵母的方法也得到了不断改进和创新。
现代的酿酒业越来越重视酿酒酵母的选择和鉴定，以保证酿造出高质量的酒品。
酿酒酵母鉴定引物的设计和应用对于酿酒业具有重要意义。
通过使用特定的引物，可以快速准确地确定酿酒酵母的种类和品种。
这样一来，酿酒师可以更好地控制发酵过程，以确保所产出的酒品质量的稳定性和一致性。
本文将首先介绍酿酒酵母的重要性，以及酿酒酵母鉴定的必要性。
然后，我们将详细探讨酿酒酵母鉴定方法的原理和技术。
最后，我们将讨论酿酒酵母鉴定引物的设计原则和实际应用，以及其在酿酒业中的前景和潜力。
通过对酿酒酵母鉴定引物的研究和应用，我们可以为酿酒业提供更多的选择和可能性。
同时，这也将有助于推动酿酒技术的发展和创新，为酿酒师们提供更多的工具和资源，以生产出更加优质的酒品。
让我们一起深入研究酿酒酵母鉴定引物的相关知识，为酒类产业的发展做出贡献。
1.2 文章结构本文将按照以下结构组织内容，以全面介绍酿酒酵母鉴定引物的重要性、鉴定方法、设计原则以及实际应用。
第一部分是引言，主要包括以下内容：1.1 概述：对酿酒酵母鉴定引物进行简要介绍，并指出其在酿酒业中的重要性。
1.2 文章结构：明确阐述本文的结构，以便读者能够清楚了解各个部分的内容。
1.3 目的：阐明本文的目的，即通过详细探讨酿酒酵母鉴定引物，为酿酒业提供更准确、高效的酵母鉴定方法。
第二部分是正文，主要包括以下内容：2.1 酿酒酵母的重要性：详细介绍酿酒酵母在酿酒过程中的作用，包括发酵、产酒精等关键过程，并强调其对酿酒品质的影响。
酿酒酵母ARS305侧翼序列对其自主复制活性的影响
酿酒酵母ARS305侧翼序列对其自主复制活性的影响真核生物染色体中存在多个复制起始位点，能够使真核生物巨大的基因组在较短时间内完成复制。
酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）的复制起始位点称为自主复制序列（Autonomously replicating sequence，ARS），首次在酿酒酵母的TRPI基因紧密连锁DNA序列中发现，含有ARS的质粒转化酵母后能独立存在于宿主染色体外且能自主复制。
此后，Irene等从酿酒酵母Ⅲ号染色体中共发现有19个ARS，约为150 bp，其中含有一段11 bp富含A/T的保守序列ACS[5′-（A/T）TTTA（T/C）（A/G）TTT （A/T）-3′]。
然而含有保守序列ACS的不同片段在ARS活性方面却表现出明显的差异，部分活性高的ARS却没有ACS保守序列。
说明DNA复制起始功能不仅由ACS保守序列决定，还需核心序列3′和5′侧翼序列的参与。
在酵母遗传工程中，不考虑载体-宿主系统的类型、外源基因产物的性质和工程菌的培养条件等因素，重组质粒的稳定性可以从功能上鉴定复制起始位点的活性。
通过DNA重组技术将可能含有ARS的DNA片段构建到缺失复制起始位点的质粒后转入1/ 7细胞，如果它有较高的细胞转化率并且表现为遗传不稳定性，就表明该片段在宿主菌中可能有复制起始位点活性。
本研究扩增了以ARS305为核心的不同长度侧翼序列，并将其构建到酵母整合型载体pRS405中，通过电转化法转入酿酒酵母细胞中，测定了不同ARS片段对酵母转化效率及质粒在酵母中稳定性，为后续以酵母作为模式生物研究真核基因的复制与转录机制提供了参考。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株和质粒Esherichia coli DH5α为内蒙古科技大学生物工程与技术研究所基因工程实验室保藏。
酿酒酵母YPH499（MATα ura3-52 lys2-801 anber ade2-101 ochre trp1-Δ63 his3-Δ200 leu2-Δ1）、整合型载体pRS405由美国新泽西州医学院微生物学与分子遗传学部Newlon教授馈赠。
酿酒酵母2B-39 sam2在大肠杆菌中的克隆及表达
酿酒酵母２Ｂ－３９ｓａｍ２在大肠杆菌中的克隆及表达作者：安胜欣江章应彭成松来源：《安徽理工大学学报·自然科学版》2008年第03期摘要：构建S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（sam2）的基因工程菌，为S-腺苷甲硫氨酸(S-ade nosylmethionine，SAM)的工业化生产提供参考。
应用PCR技术从酿酒酵母的总DNA中扩增出 1.2 kb的sam2，构建重组载体pET28a-sam2，将其转入大肠杆菌进行表达和分析。
SDS-PAGE显示重组克隆表达的SAM2分子量约47 kD，重组蛋白量约细菌总蛋白的20.1% ，酶活达到19.6 nmol/(h•mL)，大肠杆菌表达出了具有生物活性的sam2。
关键词：酿酒酵母；SAM；克隆中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1672-1098(2008)03-0065-04SAM是生物体内一种重要的生理活性物质，参与体内40多种生化反应［1-4］，对关节炎、抑郁症、肝功能紊乱等均有较好的疗效，而且还是预防癌症、心血管疾病和抗衰老的高级保健品［5］。
因此，研制、开发SAM具有重要理论和实际意义。
尽管SAM的疗效已得到人们的认可，但生产成本昂贵使其应用受到限制。
目前国内外都在竞相开发廉价的SAM合成工艺。
SAM的制备主要有发酵法和酶促合成法［6-8］，后者虽具有终产物积累量高，易分离纯化等优点，但因原料ATP成本高，已很少使用。
发酵法因其生产工艺简单、成本低成为较为有效的工业化生产方法，但受微生物自身条件的限制，如SAM 合成酶含量少、酶活不高［9］，而且分离纯化困难。
随着基因工程技术的发展，利用高活力的腺苷甲硫氨酸合成酶基因工程菌发酵生产SAM以提高其产量成为可能。
而酿酒酵母sam2的活力较其它微生物高成为理想的酶源［10］。
就目前已经构建的基因工程菌［11-13］来说，大肠杆菌具有生产周期短、工艺操作简单、原料成本低等优点，是较为理想的宿主来源。
一种高产类胡萝卜素的酿酒酵母Delta-M3及其应用[发明专利]
![一种高产类胡萝卜素的酿酒酵母Delta-M3及其应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f3709ef4370cba1aa8114431b90d6c85ec3a8872.png)
专利名称：一种高产类胡萝卜素的酿酒酵母Delta-M3及其应用
专利类型：发明专利
发明人：姚雨欣,项琪,黄亚东
申请号：CN202210495625.4
申请日：20220509
公开号：CN114574376A
公开日：
20220603
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种高产类胡萝卜素的酿酒酵母Delta‑M3及其应用。
酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）Delta‑M3，其于2022年2月10日保藏于广东省微生物菌种保藏中心（GDMCC），地址：广东省广州市越秀区先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编510070，保藏编号为：GDMCCNo:62247。
本发明通过pCas9‑Delta质粒介导的基因组进化筛选获得一株酿酒酵母突变菌株Delta‑M3。
该菌株在摇瓶发酵条件下，YPD培养基中类胡萝卜素含量可以达到7.7mg/g，比出发菌株（酿酒酵母BL03，Cit1‑tHMG1，ΔAld6菌株）提高1.85倍。
申请人：暨南大学
地址：510632 广东省广州市天河区黄埔大道西601号
国籍：CN
代理机构：广州科粤专利商标代理有限公司
代理人：刘明星
更多信息请下载全文后查看。
酿酒酵母的检测方法
酿酒酵母的检测方法1、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下。
1.1恒温培养箱：28℃士1℃。
1.2冰箱：2℃～5℃。
1.3天平：感量为0.1g。
1.4均质器及无菌均质袋、均质杯。
1.5振荡器。
1.6无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。
1.7无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。
1.8无菌培养皿：直径90mm。
1.9显微镜：10倍～100倍。
1.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。
2、培养基和试剂2.1 孟加拉红琼脂培养基2.1.1 孟加拉红琼脂培养基成分蛋白胨5.0g 葡萄糖10.0g 磷酸氢二钾1.0g 硫酸镁0.5g 琼脂20.0g 孟加拉0.033g 氯霉素0.1g 蒸馏水1000mL 2.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min，避光保存备用。
2.2 麦芽汁液体培养基2.2.1 麦芽汁液体培养基成分麦芽浸粉130.0g 氯霉素0.1g 蒸馏水1000mL2.2.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，补足蒸馏水至1000mL，于25℃时调节pH至5.6±0.2，分装于适宜容器中，121℃灭菌30min。
2.3无菌生理盐水2.3.1成分氯化钠8.5g 蒸馏水1000mL2.3.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。
2.4酵母菌生化鉴定试剂盒。
3检验程序酿酒酵母检验程序见图1。
4操作步骤4.1样品制备4.1.1固体和半固体样品称取25g样品，置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min制成1：10的样品匀液；或置于盛有225mL灭菌生理盐水的无菌均质杯中，8000r/min～10000r/min均质1min～2min制成1：10的样品匀液。
4.1.2液体样品应先将其充分摇匀后，以无菌吸管吸取样品25mL放入装有225mL生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。
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delta位点酿酒酵母
酿酒酵母的delta位点是一种基因组重复率较高的区域，通常包含多个反向重复序列。
这些重复序列可以转录为RNA，并被逆转录酶识别和逆转录为双链DNA拷贝，插入到靶位点。
在酿酒酵母中，delta位点的高拷贝插入可以提高外源基因的表达量。
具体来说，delta位点可以被视为一种载体，用于构建多拷贝表达型整合型表达质粒。
通过将外源基因插入到delta位点高拷贝插入的细胞中，可以实现外源基因的高效表达。
这为代谢工程、合成生物学和基因治疗等领域提供了新的工具和策略。
然而，值得注意的是，酿酒酵母的delta位点也存在一些潜在的风险和限制。
例如，由于delta位点的重复序列结构，可能会导致染色体不稳定性和重组率增加。
此外，由于delta位点的插入会导致基因组扩增，可能会对细胞的生长和代谢产生负面影响。
因此，在使用酿酒酵母的delta位点进行基因表达时，需要综合考虑各种因素，并进行充分的实验验证和安全性评估。
同时，对于delta位点的应用和潜在风险，还需要进一步的研究和探索。