100PI染色液使用说明书
PI染色方法范文
PI染色方法范文PI染色是一种荧光染色方法，利用PI（propidium iodide）作为染料，结合细胞膜的通透性，可以选择性地染色死亡细胞和已被破坏的细胞。
PI是一种均不透过未破损的细胞膜的小分子染料，但能通过受损细胞膜进入细胞内与核酸结合。
在染色过程中，PI会与细胞核中的DNA结合，使细胞核发出红色荧光，从而能够区分活细胞和死亡细胞。
执行PI染色的步骤如下：1.将待染细胞接种于培养皿或载玻片上，使其附着。
2.将细胞固定，常用的固定剂有4%的乙醛或甲醛溶液，固定后洗涤掉余留的固定剂。
3.将细胞膜破坏剂（如0.1%的Triton X-100）加入细胞上，以使细胞膜通透性增强。
4.加入适量的PI染料溶液，通常浓度为50μg/mL，使其完全覆盖细胞。
5.在黑暗条件下孵育细胞20-30分钟，使染料与DNA结合。
6.将细胞置于荧光显微镜下观察，由于PI与DNA结合后发出红色荧光，可直接看到染色的细胞核。
PI染色方法有很广泛的应用领域。
在细胞培养实验中，PI染色可用于评估细胞的存活率、凋亡和细胞周期分布等。
它还可用于细胞计数、细胞分选和细胞术后RNA提取等实验。
在生物医学研究中，PI染色也被广泛应用于细胞凋亡和细胞死亡机制的研究。
虽然PI染色是一种简单易行的染色方法，但也存在一些优缺点。
其优点包括操作简单、有效性高、可观察到染色的细胞核数量和形态等。
缺点包括染色结果受到细胞膜完整性的影响，不能区分早期凋亡和坏死的细胞，染色结果受背景荧光的干扰较大。
为了克服PI染色的缺点，研究人员在实践中进行了一些改进。
例如，通过引入不同颜色的核酸染料，可用以区别细胞的生死情况。
另外，还可以结合细胞凋亡标记物，如Annexin V，来进一步判断细胞的凋亡状态。
综上所述，PI染色是一种常用的细胞染色方法，通过与DNA结合，使细胞核发出红色荧光，可区分活细胞和死亡细胞。
它具有简单易行、有效性高等优点，在细胞培养和生物医学研究中有广泛应用。
甲基绿-派洛宁染色液染色方法及注意事项
甲基绿-派洛宁染色液染色方法及注意事项货号：G1670规格：100mL/500mL保存：室温避光储存，有效期至少12个月。
产品说明：甲基绿-派洛宁染色液(Methyl Green-Pyronin Staining Solution，也称MGP染色液)是一种组织或细胞染色时常用的可以把细胞核染成绿色或蓝绿色，把细胞浆和细胞核中的核仁染成红色的染色液。
甲基绿可以和细胞核中的DNA结合，从而产生细胞核染色；而派洛宁可以和细胞浆或核仁中的RNA结合，从而可以使细胞浆和核仁被染色。
可以和免疫荧光染色或免疫组化染色配合使用。
一方面可以在本甲基绿-派洛宁染色液染色后进行免疫荧光染色或其它染料的染色，另一方面也可以在免疫组化染色后再进行甲基绿-派洛宁复染。
一个包装的本染色液至少可以染色200个样品。
染色方法:（仅供参考）1.样品处理a.对于石蜡切片：二甲苯中脱蜡5-10分钟。
换用新鲜的二甲苯，再脱蜡5-10分钟。
无水乙醇5分钟。
90%乙醇2分钟。
70%乙醇2分钟。
蒸馏水2分钟。
b.对于冰冻切片：蒸馏水2分钟。
c.对于培养细胞：用4%多聚甲醛固定10分钟以上。
蒸馏水洗涤2分钟。
换用新鲜的蒸馏水，再洗涤2分钟。
2.甲基绿-派洛宁染色对于上述处理好的样品：甲基绿-派洛宁染色液染色5分钟左右(可以根据染色结果和要求调整时间)。
蒸馏水洗涤2-3次(每次数秒钟)。
3.脱水、透明、封片或进行其它染色丙酮脱水3次，每次1-2秒。
换用丙酮/二甲苯(1:1)洗涤2次，每次1-2分钟。
二甲苯透明1-2分钟。
换用新鲜的二甲苯，再透明1-2分钟。
用中性树胶或其它封片剂封片。
显微镜下观察，细胞核呈绿色或蓝绿色，而细胞浆和核仁呈红色。
注意事项：1.需自备4%多聚甲醛、70%乙醇和95%乙醇。
如果需要脱水、透明和封片处理，还需自备二甲苯，中性树胶或其它封片剂。
如果样品是石蜡切片，需自备90％乙醇，无水乙醇以及二甲苯。
2.样品数量较多时，可以使用索来宝的染色架和染色缸，便于操作。
细胞周期：PI染色
细胞周期：PI染色
荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是PropidiumIodide。
它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm 和615nm。
实验方法：
取生长期的XXX细胞，加入3mL PBS，去掉液体加入1mL胰蛋白酶消化1~5min。
加入5mL PBS制成细胞悬液，移至15mL离心管中1500rpm离心5min，去上清液。
加入500μL PBS轻轻吹打细胞团成细胞悬液，在旋涡状态下逐滴加入2 mL 20℃95%冷乙醇，混匀后固定30 min。
加入5mL PBS，1500 rpm离心5min，去上清液。
加入5mL PBS重悬细胞，1500rpm离心5min，去上清液。
加入800μL PI染液，用枪轻轻吹打细胞团，混匀，室温避光染色30min。
用流式细胞仪上机检测。
PI染色方法范文
PI染色方法范文步骤：1.准备细胞样品：将要观察的细胞样品固定在载玻片上。
固定方法可以是冷冻固定、乙醛固定、甲醛固定等。
固定的目的是保持细胞结构的完整性和稳定性。
2.渗透处理：将透明质酸和胶原酶等渗透剂加入载玻片上的细胞样品，用以增加细胞膜的通透性，便于PI荧光染色剂的进入。
3.染色：用含有PI荧光染色剂的缓冲液滴在观察细胞的载玻片上，让荧光染料充分进入细胞核内。
通常情况下，PI染色剂会与DNA结合，形成红色荧光。
4.清洗：用PBS等缓冲液洗去多余的PI染色剂，减少背景荧光。
5.封片：加入适当的封片剂覆盖载玻片，保护样品免受光照和氧化的影响。
6.观察：将封片好的载玻片放入显微镜下，使用荧光显微镜（或共聚焦显微镜）观察细胞核染色的结果。
原理：PI染色方法的原理基于PI荧光染色剂与DNA的结合。
在生物样品中，PI能够非选择性地和双链DNA结合，但不能穿透完整的细胞膜。
当样品细胞固定和渗透处理后，PI荧光染色剂可以进入细胞核并与核内的DNA结合形成复合物。
由于PI染色剂的荧光发射峰位于红色波长范围，可以方便地通过荧光显微镜观察到红色荧光。
PI染色方法适用于各种细胞类型的核染色，尤其对于分析细胞核形态的变化、DNA含量的变化以及细胞核凋亡等方面具有重要的应用价值。
此外，PI染色还可以与其他荧光染料如FITC等同时应用，用于多通道荧光染色实验，以获得更多的信息。
需要注意的是，在使用PI染色方法时，应避免PI染色剂的直接暴露在光源下，以免荧光波长的激发光影响染色结果。
另外，封片的过程中也要注意避免氧化和光照的影响，以保持染色的稳定性。
总结起来，PI染色方法是一种简单、易于操作且广泛应用的细胞核染色方法。
通过将PI荧光染色剂与DNA结合，可以获得细胞核的形态和结构信息，对于细胞生物学和病理学研究具有重要的意义。
流式上机前操作（PI染色）
流式上机前操作（PI染色）流式检测细胞周期（PI染色法）准备：1.75%乙醇，由无水乙醇（分析纯）+DDW配制，实验前一天放入4度冰箱预冷保存2.外用PBS（置于4度保存），细胞室PBS3．流式管在公共平台流式机器处领取4．PI粉末用PBS配制成5mg/ml的储存浓度，RNaseA作用终浓度为20ug/ul. PI位于负二十冰箱第一层保存。
步骤：（以LN229 对照组为例）第一天：1．取生长状态良好，细胞活力佳的LN229细胞，6cm dish 中细胞密度约90~95%。
此时细胞密度约在106个/ml.2．用胰酶进行常规细胞消化（注意不要过度），用含血清的培养液终止（尽量将贴壁的细胞吹落下来，动作要轻柔）。
将细胞悬液（15ml离心管中）进行1000rmp离心5分钟.3．用移液器将上层培养液吸取干净，弃去。
加入约7ml的PBS 重悬细胞沉淀，制成单细胞悬液，再次1000rmp,离心5min.4．取出离心管，于外部试验台上用移液器将上层PBS吸取干净，弃去。
再加入50ulPBS，重悬细胞，注意动作轻柔。
重悬要充分，整体呈不透明的浑浊状。
5．先取100ul预冷的75%乙醇沿着管壁缓慢加入（可绕着管壁螺旋加液），重复上述，一共三次，共加入300ul。
期间用移液器进行混匀，防止细胞聚集抱团。
再取700ul的预冷75%乙醇，加入上述约350ul的细胞悬液中，轻轻吹匀。
6．置于试管架上，4度冰箱过夜第二天：7．将4度过夜的细胞沉淀进行再重悬转入1.5ml的EP管中，进行离心：800转/分，5-10min，转速不能太高（用台式低速离心机也可以,约30s）。
弃去乙醇8．加PBS至1ml，将细胞沉淀重悬，再次离心800转/分，5-10min，（用台式低速离心机也可以，约30s）弃去上清，吸干净。
再加入PBS 300ul重悬细胞沉淀。
9加入RNaseA（终作用浓度20μg/ml）0.6ul，用手将沉淀弹匀，37度下作用30min10．向300ul细胞悬液中，加入PI（1mg/ml）10ul左右，用手将沉淀弹匀，使得细胞悬液整体呈粉红色。
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一--PI法
组织中的细胞周期和凋亡检测方法之一－－PI法schoman无论是肿瘤或其它正常新鲜组织均可用PI（碘化丙啶）的方法来检测，这是一种常见而且便宜的方法。
主要操作步骤如下：1、组织块用0.25%胰酶消化30min－1h。
2、200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。
3、75％乙醇（－20度预冷）固定细胞1h。
4、加入PI（终浓度50ug／ml）和无DNA酶污染的RNA酶（终浓度50ug／ml）1ml染色30min－1h。
5、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。
注意事项：1、组织消化后使细胞形成单个细胞悬液是本检测方法的关键。
如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
另外，消化前，用剪刀将组织剪成小块也不要忘了。
2、细胞可尽量的多准备（at least 100 thousand），这样流式检测方便，结果可靠。
3、每次消化的时间等条件应尽量一致，否则使实验结果CV值偏大。
4、细胞用乙醇固定后可以访置48小时（4度保存）后检测，便于无法立即检测的实验者，对实验结果基本没有影响。
其它也有一些检测凋亡的方法，均有商品化试剂盒。
在此不赘述。
yanzishenyang：我看相关的说明：碘化丙啶（propidium iodide,PI）检测早期死亡细胞膜通透性状态的不同是区分细胞凋亡和坏死的一个重要指标，凋亡细胞在进入最终溶解阶段前，胞膜通透性无明显改变，相对分子质量大的与DNA 结合的荧光染料（如PI）不能时入凋亡细胞内，而相对分子质量小的荧光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被细胞摄取。
应用流式细胞仪或荧光显微镜可区分和坏死细胞，细胞内DNA出现Hoechest 3342标记而不出现PI标记的为凋亡细胞。
偶得细胞是用PI染色的，经过流氏细胞仪检测出现一个亚二倍体峰，是否能和坏死区别？因为偶用的作用细胞的蛋白本身可以造成细胞膜的损伤，所以PI可以进入细胞，这是否意味着我检测的结果无法区分凋亡和坏死？hdhdhd0000：用PI法识别凋亡时，有一种方法叫SUB-G1法，这种方法需要在染PI前加入适量的破膜剂（磷酸盐－枸橼酸盐缓冲盐），我们称之为PC液，它会让晚期凋亡所形成的DNA小碎片部分出膜而使胞内的DNA总含量减少，从而使流式上的DNA直方图的G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，也就是SUB－G1峰（凋亡峰）！用荧光2的面积做直方图可以清楚的看见凋亡峰，但是要区分APo和Nec需要少量的经验，而在荧光2高度图上，因为是用的是对数，所以可以把凋亡和坏死拉开，凋亡峰在不同的细胞周期特异性细胞凋亡时，都特异性的出现在10的2次方荧光道数处，坏死在10的1次方处，从而可以清楚的分清它们。
碘化丙啶 PI溶液的使用方及注意事项
碘化丙啶PI溶液的使用方及注意事项
货号：C0080
规格：1ml/1ml×10
保存：-20℃，有效期至少2年
产品说明：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂。
它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。
PI不能穿透完整细胞膜，但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透，并使细胞核红染。
PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。
PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。
常用于流式细胞仪分析和显微镜观察，检测细胞凋亡(apoptosis)或细胞坏死(necrosis)。
本产品为PI水溶液，浓度为1mg/ml。
使用时根据实验不同直接将本产品用相应溶液稀释到工作浓度。
使用方法：（仅供参考）
培养细胞染色
1、取适量PI水溶液加到PBS中，制备成10-50µM（6.7-33.4µg/ml）的PI溶液。
2、将1/10培养基体积的PI溶液加入到细胞培养基中。
3、在37℃培养细胞10-20分钟。
4、用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。
5、置于荧光显微镜下观察，激发波长为535nm，发射波长为615nm。
注意事项：
1.PI被普遍认为具有致癌性，操作时应戴手套，并避免交叉污染。
2.本产品需避光，并尽量避免反复冻融。
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)
产品组成：
名称
编号
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)
使用说明书
PI0015 1ml
PI0015
Storage
5×1mlቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1份
-20℃ 避光
操作步骤（仅供参考）：
1、 开盖前，请低速离心一下，以便将黏附于管壁的液体甩至管底。 2、 使用时, 根据裂解液的用量加入 1%的蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)，使其终浓度达
北京雷根生物技术有限公司
蛋白酶抑制剂混合液(100×PIC)
产品简介：
蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitor)指与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋 白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白变性的物质。蛋白酶抑制剂有很多种，包括 EDTA、 E-64、NaVO3、Bestatin、Leupetin、Pepstatin A、Aprotinin 等，可以有效抑制蛋白的 降解，并维持原有的蛋白间相互作用。
到 1×。
注意事项：
1、 蛋白酶抑制剂混合液有轻微刺激性，小心操作，同时应避免反复冻融。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12 个月有效。
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产品编号 PI0011 PS0013 PT0001
产品名称 苯甲基磺酰氟溶液(PMSF,100mmol/L) RIPA 裂解液(强) BCA 法蛋白定量试剂盒
Leagene 蛋 白 酶 抑 制 剂 混 合 液 (100 × PIC) 主 要 由 Leupetin 、 Pepstatin A 、 Aprotinin、E-64 等组成，不含 EDTA。该混合物可以抑制绝大多数蛋白酶活性，包括丝氨 酸蛋白酶、半胱胺酸蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。该蛋白酶抑制剂混合 液是 100×的浓缩的 DMSO 溶液，适用于从哺乳动物组织、细胞中提取蛋白质，能够更有 效的获得目的蛋白质。提取出来的蛋白可以用于 Western Blot、免疫共沉淀等试验。
PI染色试剂盒
PI染色试剂盒凯基细胞凋亡PI染色试剂盒(Cell Apoptosis PI Detection Kit)Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃for one yearExpire date：试剂盒说明荧光标记是研究细胞凋亡的最基本方法。
细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来，从而区别鉴别出正常细胞、凋亡细胞、坏死细胞以及不同凋亡时期或细胞周期。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为536nm和617nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。
因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
采用流式细胞仪检测细胞周期时，凋亡细胞因内源性核酸酶被激活，使DNA广泛降解、断裂，DNA结构发生剧变，随着凋亡的进程，DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外，细胞总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA 低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）或称A0细胞群，即凋亡细胞群。
用本试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后，进行流式细胞仪分析，即可检测到凋亡细胞DNA的变化。
二、试剂盒组份组分KGA214（100 assays）储存条件Propidium Iodide, PI染液500μL4℃，避光10×Buffer A10 mL4℃注: 1×Buffer A配制：用前用双蒸水将10×Buffer A稀释10倍。
三、试剂盒仪器和试剂荧光显微镜、低速离心机、微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片、流式细胞仪、70%乙醇、RNase A四、用注意事项Propidium Iodide （PI）有毒，操作时要戴手套，需避光。
五、操作方法1．荧光显微镜观察（1）收集细胞，1×Buffer A洗涤细胞一次（离心2000rpm，5min），加适量的1×Buffer A重悬细胞，调整细胞浓度约为106/mL；（2）取95ul细胞悬液，加入5 μL PI染液，轻轻混匀；（3）室温避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；（4）荧光显微镜，激发和发射波长分别为536nm和617nm，绿光*BG12滤光镜观察，拍照。
碘化丙啶PI染色液(1mgml)
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)简介：碘化丙啶染色(PI stain)可以对细胞周期与细胞凋亡进行分析。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可以嵌合到双链DNA 和RNA 的碱基对中并与之结合的荧光染料，无碱基特异性。
碘化丙啶与双链DNA 结合后可以产生荧光，并且荧光强度和双链DNA 的含量成正比。
细胞内的DNA 被Propidium Iodide 染色后，可以用流式细胞仪对细胞进行DNA 含量测定，然后根据DNA 含量的分布情况，可以进行细胞周期和细胞凋亡的分析。
碘化丙啶染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA 的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1～2之间。
碘化丙啶PI 染色液(1mg/ml)主要由PI 、破膜剂等组成，经常用于培养的贴壁或悬浮细胞的细胞周期与细胞凋亡检测， 亦可用于区分细胞凋亡和细胞坏死。
Leagene PI 染色液工作浓度为20～50μg/ml ，不含RNase ，推荐用于RNA 染色，细胞检测含量范围一般为0.1～1×106之间。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、细胞样品的制备：⑴贴壁细胞：① 离心使细胞沉到管底。
小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
② 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
③ 离心使细胞沉到管底。
⑵悬浮细胞：① 离心使细胞沉到管底。
② 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl 培养液，以免吸走细胞。
③ 加入约1ml 提前预冷的PBS ，重悬细胞，并转移至1.5ml 无菌离心管。
④ 离心使细胞沉到管底。
⑤ 小心吸取上清并丢弃，可留大约50μl PBS ，以免吸走细胞。
2、细胞的固定：加入1ml 冰浴预冷70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4℃条件下固定2h 或更长时间。
4℃固定12～24h 可能效果更佳。
PI染色检测
PI染色试剂盒产品组成：产品编号BB-4136规格200-400assaysPI染色液1ml试剂B 10ml说明书 1产品简介：BestBio贝博PI检测试剂盒可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。
Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。
因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。
使用方法：本染色试剂盒用于细胞染色分析，也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。
石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。
染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。
取100μL试剂B加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
荧光显微镜观察1、收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；2、取100ul细胞悬液，加入2-5ul PI染液，轻轻混匀；3、4℃避光放置5 min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；4、荧光显微镜检测。
流式检测：1、收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用染色缓冲液重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；2、500ul细胞悬液中加入5ul PI染液；3、4℃避光放置30 min；4、流式细胞仪检测。
结果分析 ：置于荧光显微镜下用488nm激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
PI单染检测细胞周期
Me PI单染检测细胞周期原理：细胞周期各个时期其DNA含量不同，利用荧光染料碘化丙啶(PI）能够和细胞内DNA结合的特性，根据不同DNA量结合的荧光染料量不同，因而流式细胞仪检测的荧光强度也不一样，可用来反应细胞周期的各个期的状况，即细胞增殖状况。
PI 单染检测细胞周期操作步骤： 1. 收集细胞：1) 悬浮细胞直接离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次。
2) 贴壁细胞用胰酶消化后离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次，胰
酶消化应严格控制，不能消化太过，操作过程要尽可能减少细胞机械损伤。
2. 固定细胞：加入预冷70%乙醇，于4℃固定30min以上或过夜，-20℃也可长时间
固定。
这一步必须说明下，乙醇固定时间不能太短，此步的目的有2个：1) 为
了后续染色时PI能顺利进入细胞。
2) 增加膜通透性后，让小片段核酸游离出细胞，减少非基因组DNA核酸的干扰。
3. 细胞染色：1) 离心收集固定过夜的细胞，以1mL的PBS洗细胞一次；2) 加入
300~400uL含50ug/mL(1:100)溴化乙锭（PI）的PBS缓冲液，加100ug/mL RNase A和0.2% Triton X-100；3) 37℃避光孵育30分钟。
特别说明：RNase A 和Triton两个都是非必须品，实践显示对实验结果没有太大影响。
4. 流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2-3万个细胞，结果用细胞
周期拟和软件分析。
PI单染检测细胞周期特别说明：1) 细胞收集和洗涤操作需尽可能减少细胞的机械损伤，机载损伤可造成细胞DNA丢失而影响结果准确性。
invitrogen_AnnexinV_PI双染试剂盒说明书中文版
流式细胞仪1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗3，准备1X的annexin结合液，例如，对于10个实验来说，加1ml 5X annexin 结合液（组分C）到4ml 去离子水中4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。
没有使用的这部分工作液用于以后的实验。
5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。
调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备100ul 足够的体积。
6，加5ul Alexa Fluor 488 annexin V(组分A)和1ul 100ug/ml PI工作液（4步骤中准备的）到每100ul的细胞悬液中。
7，室温孵育细胞15min.显微镜观察1，使用特定的方法诱导细胞凋亡，设置一个没有处理的control组2，在一定孵育期后收获细胞，用冰冷的PBS清洗3，准备1X的annexin结合液，例如，配置1ml，加200ul 5X annexin 结合液（组分C）到800ul去离子水中4，准备一个100ug/ml的PI工作液，例如，通过稀释5ul 1mg/ml的PI储存液（组分B）到45ul 1X annexin 结合液中。
没有使用的这部分工作液用于以后的实验。
5，再次离心2步骤中洗过的细胞，弃上清用1X annexin 结合液重悬。
调整细胞密度，用1X的annexin 结合液稀释到大约1x106/ml，为每个实验准备足够的体积。
6，加5-25ul的annexin V缀合物（组分A）和1-2ul(100ug/ml)PI工作液到100ul 的细胞悬液中。
高浓度的annexinV缀合物会产生较好的结果；最佳染色浓度需要凭借经验7，室温孵育细胞15min8，1X annexin 结合液清洗细胞9，用一个合适方法使细胞固定在载玻片上，用一个适当的滤镜观察荧光效果。
PH0532 Hoechst 33342 PI 双染试剂盒操作手册
PH0532|Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Detection Kit ）货号：PH0532规格：100T 存储：4℃保存，有效期一年◆产品简介荧光染料Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。
而PI 染料是不能进入细胞膜完整的正常细胞和凋亡细胞中，即活细胞对PI 染料拒染，而坏死细胞由于膜完整性在早期即已破损，可被PI 染料染色。
根据这些特性，用Hoechst 33342结合PI 染料对凋亡细胞进行双染色，就可在流式细胞仪上将正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞区别开来。
在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（Hoechst 33342+/PI+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（Hoechst 33342++/PI+），坏死细胞为低蓝色/高红色（Hoechst 33342+/PI++）。
◆注意事项【试剂盒以外需自备仪器和试剂】荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5mL Microtube 、载玻片、盖玻片1、在红色荧光对兰色荧光散点图上，还可见到细胞凋亡区向细胞坏死区迁移的轨迹，可能是凋亡细胞的DNA 进一步降解的缘故。
试剂组成规格保存Heochst 33342染液1.0mL 4℃，避光Propidium Iodide （PI ）500μL 4℃，避光10×Buffer A 10mL 4℃注：Buffer A 工作液配制用：双蒸水将10×Buffer A 稀释10倍。
Annexin V-FITC PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒说明书
Annexin V-FITC / PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒货号: P-CA-201规格: 20Assays / 50Assays / 100Assays / 200Assays产品编号产品名称20Assays 50Assays 100Assays 200Assays Storage P-CA-101 Annexin V-FITC 染色液100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃. 避光P-CA-151 Annexin V Binding Buffer(10×) 1.4 mL×2 5.5 mL 11 mL 11 mL×2 2~8°C 碘化丙啶(PI)染色液P-CA-161 100 μL250 μL500 μL 1 mL 2~8℃, 避光说明书一份保存条件2~8℃可保存1年。
Annexin V-FITC禁止冷冻保存。
实验原理Annexin V-FITC/PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸(PS) 有高度亲和力。
当细胞发生凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS) 外翻到膜表面，而被荧光染料FITC标记的Annexin V结合，可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）可与双链DNA特异性结合并产生强烈的荧光，与Annexin V搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：Jurkat细胞用 5 μM喜树碱（Camptothecin）(左) 或未加药(右) 处理4 h，本试剂盒染色后流式检测。
Annexin V-FITC单阳细胞为早期凋亡细胞，AnnexinV-FITC和PI双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，PI单阳细胞为裸核细胞。
PI染色检测细胞周期
PI染色检测细胞周期1)细胞样品的准备：（1）对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。
用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
再次收集到离心管内。
1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
（2）对于悬浮细胞：1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
2)细胞固定：将细胞加入到1毫升冰浴预冷70%乙醇中，快速轻轻吹打混匀，4℃固定2小时或更长时间。
固定12-24小时可能效果更佳。
1000g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50微升左右的70%乙醇，以避免吸走细胞。
加入约1毫升冰浴预冷的PBS，重悬细胞。
再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50微升左右的PBS，以避免吸走细胞。
轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团。
3)碘化丙啶染色液的配制4)染色：每管细胞样品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，缓慢并充分重悬细胞沉淀，37℃避光温浴30分钟。
随后可以4℃或冰浴避光存放。
PI染色检测细胞周期protocol
PI染色检测细胞周期protocol1、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞两次。
2、加入预冷70％乙醇，于4℃固定过夜,或-20℃长期固定（4℃过夜一般隔天就进行检测，如果想推迟几天测，那就保存在-20℃，有资料说-20℃可以保存一个月，个人建议尽量在最短时间内检测，有些实验是在不同时间点上收细胞，这时我就等最后一次固定完了一块测，基本上也多在一周内检测完毕，没有特地去比较保存时间对检测结果的影响）。
3、细胞染色离心收集细胞，以1mL的PBS洗细胞一次，加入500uLPBS(含50ug/mL溴化乙锭（PI）, 100ug/mL RNase A，0。
2％ Triton X—100）4℃避光孵育30分钟（PI我是直接用PBS配成工作浓度，然后加入细胞沉淀混匀，RNA酶现加,但有时不加发现对实验结果也没太大的影响）。
4、流式分析以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2-3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件Mod Fit分析.分析时，使用FL2-w和FL2-A显示,去除联体细胞，具体如下图。
细胞周期流式后一般分为G0/G1，S，G2/M期三部份，如果有凋亡，在G0/G1期前面有个凋亡峰(也称sub-G0期），而如果分析时细胞窗口没设置好,可能在最前面还有细胞碎片峰。
结果解读G0/G1期细胞占总的61.2％，峰位于横座标的45.76G2/M期占13.07,峰位于横座标的91.43S期占25。
73G2/G1为2.0（即G2期为4倍体细胞，而G1期为2倍体细胞，比值为2）峰的变异系数为4。
54%(好）细胞碎片为0.48％，细胞聚集体有0。
06％.总的细胞数（仪器检测到的)为17525个，在细胞周期中分析的细胞数为17431个（即排除了碎片及聚集体后)CV是变异系数.一般CV越小，峰形越好,越尖锐。
能控制在5%左右是比较好的结果,一般小于10%就可以认可了.Flow Cytometric Analysis of Cell CycleFixation1）Collect 2×106cells.2) Pellet cells by spinning at 1，000 rpm, 4°C for 5 minutes.3）Resuspend cell pellet in 1 ml of cold PBS。
FDA-PI染色精要
FDA-PI染色精要
FDA/PI染色操作步骤
1、溶液配制
（1）0.65mol/L甘露醇配制：称1.1841g甘露醇加入10mL蒸馏水。
（2）5mg/mL FDA配制：称25mgFDA加入1mL丙酮酸溶解，再加入4mL甘露醇，摇匀，避光4℃保存。
（3）2mg/mL PI配制：称2mgPI加入1mL甘露醇，摇匀，4℃保存。
2、染色
（1）从冰箱中取出FDA及PI，复温摇匀，FDA尽量避光。
（2）取羊膜放置于有0.5 ml生理盐水的EP管中，加入8μL PI和10μL FDA，后用0.6ml生理盐水冲洗管壁，室温放置15min.，要求尽量避光；
（3）1.5ml PBS冲洗，取出羊膜，置于载玻片上，用镊子整平，滴加少量PBS，盖上盖玻片。
3、镜检
（1）染色完成后，将片子放于小盒中避光，迅速送去检验。
（2）由于荧光显微镜是倒置显微镜，所以，盖玻片面要朝下放置。
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100×PI染色液使用说明书
货号：SL7091
规格：1ml
保存条件：-20度保存，有效期1年。
产品内容：
产品内容SL7091
100×PI染色液（1mg/mL）SL7090-1ml
说明书1份
产品简介：
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。
这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。
PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。
水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。
一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。
PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。
PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。
PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。
利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst33258或Hoechst33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。
也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。
PI 的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
使用说明：
可以用PBS稀释到1×使用，或与细胞悬液按照1:100的比例使用。
PI染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。
2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。
4、离心，弃上清液。
5、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。
6、加入RNase A(工作浓度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，离心。
7、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。
8、加入PI(工作浓度50-100ug/ml)于500uL1×PBS中，室温避光孵育30min。
9、混匀，过300目筛网，置流式管中，4℃冰箱保存，待测。
GFP PI染色操作步骤
1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。
2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。
3、加入2ml预冷PFA，PFA的浓度根据细胞的特点进行调节，4℃固定30min。
以下步骤同PI染色操作步骤的（4-9）。