组织学制片技术(本科)

显微镜下观察的骨、牙磨片标本。
5．分离标本：将极小组织块用化学药物的水
溶液浸泡后，溶去其细胞间质，采用机械分 离方法（如振荡、针拨等方式）使之分离成 单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片 上进行镜检。

6．压片标本：组织经化学药物软化及染色 后，用盖片压封于载玻片上进行镜检的标 本。如运动终板的制作。
商品石蜡的处理： 反复溶化、过滤以增加石蜡
的硬度和密度，并除去杂质。
浸蜡 ：
温度最好不超过该石蜡溶点 的2℃以上；1~2h 。
包埋：通常使用包 埋盒。
包埋通常使用组织包埋机、包埋盒及配套使用的
不锈钢模具。把熔蜡倒入模具内，再用加热的弯曲钝
头镊子夹取已经过浸蜡的组织块，使切面朝下平正地
置放于模具底面的中央处，然后放上包埋盒，继续加
2．铺片标本：将肠系膜或皮下组织铺于载 玻片上，经固定、染色、封固而制成的
标本。
3．涂片标本：主要是将液态组织如血液、骨 髓、痰液、腹水、精液等液体涂抹于载玻片 上，经固定、染色制成的组织标本，以供观 察细胞的形态与其微细结构。
4．磨片标本：不经脱钙及切片手续，而直 接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在
粘膜
粘膜 下层
胃 壁 结 构 模 式 图
肌层
浆膜
（三）标本的固定
1．固定的目的 使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源 性和内源性酶活性，防止组织自溶；使组织 成份转变为不溶性物质从而有利于保存。这 就是固定的基本意义。
2．固定的注意事项
(1) 组织块不宜太大，一般以厚度为 2 毫米，长 度不超过0.5厘米*0.5厘米。
组织病理学常用技术基本理论
——第2节、第3节
目的要求
1、了解组织学制片的基本程序；
2、熟悉HE染色的步骤；
3、掌握HE染色结果的观察。
第二节 组织学常用的几种标本类型
见视频“组织学制片方法”
第二节 组织学常用的几种标本类型
1．切片标本：组织经固定、切片（包括冰冻 切片、石蜡切片及火棉胶切片）染色、封固 而制成的各种玻片标本。它为组织学中最常 用的标本。
7．整装标本：一种是将很小的动物或早期胚 胎经固定、染色后，封固于载玻片上。另 一种是将小动物、胚胎或病变器官经固定 后，保存于固定液中瓶装供肉眼观察用。 可了解胚体的表面立体形态特征及病变部 位与周围组织的毗邻关系。
8．活体标本：如将蛙的口腔粘膜取下放于 载玻片上，迅速滴加生理盐水或 Ringer 氏液以观察其纤毛运动。其它如精子运
所支配组织或器官的相互关系。
第三节
组织切片的常规制作 （一） 概述
组织切片的制作方法有：石蜡切片、冰
冻切片、火棉胶切片、明胶切片、振动切片、
塑料切片（半薄切片）、超薄切片（电镜标
本）、碳蜡切片等。石蜡切片是最常用的方法，
本节将较详细讲授其制作步骤。
组织切片制作方法的基本程序：
取材→固定→脱水→透明→包埋→切片
（3）4%多聚甲醛磷酸缓冲液（pH7.4） （4）Bouin’s液：苦味酸饱和水溶液75份，甲
醛25份，冰醋酸5份配制而成。
4．固定方法
（1）灌注法（Irrigation method）自左 心室插入主动脉，先以生理盐水冲冼血液后， 注入固定液，30min后取材，置同一固定剂 后固定。 （2）浸入法（Immersion method） 。
则采用由气管注射固定液后再投入固定液为好。
3．固定剂
用以固定组织的药剂，称为固定液。
常用的固定液有： （1）10%福尔马林液：商品甲醛（36%—40%甲醛 水溶液）配成固定液其浓度为3.6%—4%，也就是习 惯上称为10%的福尔马林液。 （2）10%中性缓冲福尔马林液：商品甲醛10ml，
0. 1mol/L pH7.4 PBS 90ml。
→染色→封固。
（二）动物的致死与取材
1、动物致死法：
（ 1） （ 2） （ 3） 断头法： 麻醉法： 空气栓塞法：
2、组织取材时应注意：
(1) 所取材料越新鲜越好； (2) 切取组织的刀剪刃口必须锋利 ； (3) 取材时必须考虑切面的方向 ； (4) 组织块应力求小而薄 ； (5) 收缩较大的新鲜组织 ； (6) 注意清洁 ； (7) 用作免疫组化的组织取材 ； (8) 病理取材 。
间可以延长至24小时也无妨。
（五）包埋
1． 目的：由于生物体的组织有各种硬度不同 的成份，必须加石蜡等作支持物质渗入组织块 内部，并将组织块包埋起来，然后用切片机以 制作极薄的切片。 2． 种类：包埋物质目前广泛采用的除石蜡外， 还有火棉胶、炭蜡、明胶以及环氧树脂、
OTC(冰冻切片包埋剂）等。
石蜡包埋法：
5．固定后处理
材料固定后，药剂继续留在组织中，易使
组织破坏，必须用水或酒精洗去。 三种方式进行处理： （1）流水冲洗； （2）酒精充分洗涤； （3）直接入脱水剂。
（四）脱水与透明
1、脱水的意义和目的 ：固定后组织其硬度不 能达到切薄片的要求，须进行除固定以外的其
他处理．脱水就是继固定后的重要步骤．脱水
必须从低浓度开始，逐渐转入高浓度脱水剂。
另外脱水必须进行得很彻底。
2、常用脱水剂： （1）酒精： （2）丙酮：
3、透明的意义和作用：
透明剂能够同时溶解于脱水剂及包埋剂当中， 它能逐渐渗入组织，最终将脱水剂完全排出。 4、常用的透明剂有二甲苯、甲苯、氯仿等。 二甲苯：透明组织的能力强，但易使组织 收缩和变脆，故在二甲苯中不宜搁置太久。 氯仿：其透明能力远比二甲苯慢，透明时
(2)固定液的量一般以组织块大小的30倍为宜，
最好在固定组织的瓶底垫上脱脂棉或几层纱布 以使固定液能从上下左右前后各方都能渗入组 织块。 (3)固定的时间，一般以24小时为宜。
(4)后固定：柔软组织在新鲜时不易切成小块，
往往采用重新固定法处理。 （ 5 ）特殊固定：神经组织以在活体动物灌流
固定ห้องสมุดไป่ตู้再重新投入固定液为佳，有些组织如肺
动亦可按此方法进行观察。
9 ．血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经
血管灌注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织 而制成的血管铸形标本，可瓶装供肉眼观察或 进一步处理后作扫描电镜观察。另一种是将染
料加明胶配制成染色液注入血管内，然后取材、 固定、包埋、切片和封固所制成的组织切片标 本。这类标本主要用于了解血管的走行及其与