第2章 临床微生物检验标本的采集

• 入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2 份。 6.标本运送
• 采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。
二、血液中常见的病原体
种 类
革兰阳性球菌 革兰阳性杆菌 革兰阴性球菌 革兰阴性杆菌 真菌
病
原
菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓链球菌、草绿 色链球菌、肠球菌 结核分枝杆菌、产单核李斯特菌、阴道加特纳菌 脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉菌 大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、克雷伯杆菌、肠杆菌、变形杆菌、沙雷菌、 沙门菌、不动杆菌、嗜肺军团菌、嗜血杆菌 念球菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
第七节
尿液
一、标本采集
• 采集方法 采集清洁中段尿。
• 必要时导尿或膀胱穿刺留尿标本，但要注意导 尿容易引起逆行性感染。
• 采集容器的要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防
渗漏、广口、容积应> 50 ml、盒盖易于开启，不
含防腐剂和抑菌剂。
• 标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存
时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或
2.采血部位
• 通常采血部位为肘静脉。 • 疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。 • 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后） 上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。
3. 静脉穿刺和培养瓶接种程序
(1) 在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手 套固定静脉，不可接触穿刺点。 (2) 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。 (3) 血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。 立即送检，切勿冷藏。
杆菌
结核分枝杆菌、非结核分 大肠埃希菌、铜绿假单胞 枝杆菌、 破伤风杆菌、 菌、流感嗜血杆菌、拟杆 产气荚膜梭菌、炭疽芽胞 菌、 梭杆菌 杆菌 放线菌（衣氏放线菌、诺 卡菌）
其他
三、临床意义
• 由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最
为常见。细菌造成伤口感染一般认为需每克组织内细菌数
量在105 ～106个以上。 • 外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，且易发生混合 感染。 • 烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染，如铜绿假单胞菌等，
• 真菌性脑膜炎：最常见于隐球菌脑膜炎，其他的
真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子性脑膜炎 日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者 易并发，如AIDS、恶性肿瘤，严重糖尿病、SLE 等患者易发生。
• 流行性乙型脑炎：是一种人兽共患的自然疫源性
疾病。传染源为患者和家禽、家畜及野生动物， 蚊虫为传播媒介，经蚊虫叮咬、吸血而传播，人 群对本病普遍易感，感染后多数人无症状而成为 隐性感染。但可获得持久免疫力，再次发病者极
• 患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，
都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁， 容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。
• 临床常见微生物学检验标本通常有血液、脑脊液、
尿液、伤口的脓液、胸水、腹水、粪便、痰液及 泌尿生殖系统的分泌物等，下面分别介绍各种标 本的采集方法及检测出不同病原体的临床意义。
不动杆菌 肺炎克雷白杆菌 流感嗜血杆菌
狂犬病毒
三、临床意义
• 细菌性脑膜炎：是中枢神经系统感染的常见类型，
其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，有的呈暴发型，
病情严重，病死率较高；多发年龄在5～29岁，
冬春季多发，可用青霉素类、磺胺类、头孢霉素
类抗生素治疗。结核性脑膜炎最常见，近几年呈 回升趋势，为防治重点。
真菌
白假丝酵母菌、隐球菌、曲霉菌和毛霉菌等
病毒
腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨 细胞病毒、单纯疱疹病毒、冠状病毒和麻疹病毒等。
三、临床意义
• 下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，主要指 肺实质性炎症的肺炎和支气管黏膜炎症的支气管 炎，是我国常见病和病死率高的感染性疾病。 • 痰标本的细菌学检查对呼吸道感染的诊断有重要 意义。
若从患者血液中检出细菌，一般视为病原菌感染，提示有 菌血症。
常见的菌血症或脓毒症有：
• 葡萄球菌菌血症
由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及凝
固酶阴性葡萄球菌引起的菌血症和脓毒症逐年增多，
占菌血症的10%~15%，临床表现明显，发病急，中
毒症状重。
• 肠球菌菌血症
近年来明显增多，约占菌血症的10%。常见泌
第2章
临床微生物检验标本 的采集
中国医科大学
褚云卓
在临床微生物检验工作中，标本的正确选择、 采集和运送是保证实验室质量的重要环节，是实 验室工作准确和有效的前提。
第一节 标本的采集和处理原则
一、标本采集的一般原则
1.早期采集
2.无菌采集
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集
4.采集适量标本
5.安全采集
腹泻。
• 细菌性食物中毒 常可危及生命，常见于沙门菌、副溶血 弧菌、致病性大肠埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭 菌、腊样芽胞杆菌食物中毒。多发生在夏秋季，
以暴发和集体发病为特征，是一种严重的病症。
• 致病性大肠埃希菌的肠道感染 可分为5类，详见 第八章。
• 消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要部位是胃及十二
指肠球部，大量研究及临床证明胃炎、消化性溃 疡主要是HP所引起，因此消化性溃疡经抗感染 治疗取得很好的疗效。
尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并发心内
膜炎。此菌可对多种抗生素耐药，病情较重。
• 革兰阴性杆菌菌血症
主要侵犯危及机体免疫功能低下的患者。常可
引起泌尿生殖道、胃肠道、胆道及呼吸道感染。
• 厌氧菌菌血症 厌氧菌常寄居于口腔、肠道和泌尿生殖道， 并引起相应部位的感染。 • 真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有假丝酵母菌、 曲霉菌和毛霉菌等，以白假丝酵母菌最多见，多
第二节
血液
一、 标本采集
1.皮肤消毒程序
严格执行以下三步法:
(1) 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒以上。
(2) 1%～2%碘酊作用60秒或10 %碘氟60～90秒，
从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。
(3) 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70%酒精消
毒60秒，待酒精挥发干燥后采血。
• 消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等
部位各一块胃黏膜活检标本，置入无菌生理盐水 中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4℃保 存，24h内送检。
二、粪便中常见的病原体
肠毒素为主的病原菌 霍乱弧菌、志贺菌 （福氏、宋内）、大肠 埃希菌（ETEC、EHEC、 EAEC）、金黄色葡萄球 菌、难辨梭菌、产气荚 膜梭菌 侵袭性为主的病原 菌 沙门菌、大肠 埃希菌（EPEC、 EIEC）、志贺菌 （鲍氏、志贺）、 弯曲菌、副溶血弧 菌、小肠结肠炎耶 尔森菌、结核分枝 杆菌、白假丝酵母 菌 病毒 轮状病毒、 埃可病毒、 Norwolk病毒、 甲型肝炎病毒、 戊型肝炎病毒、 腺病毒
二、标本的处理
• 一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病 奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 • 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送， 有时可直接用抽取标本的注射器运送。
• 其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不
能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、 心包液、痰、尿等标本应保存在4℃环境中，脑脊液等则 要在25℃保存。
二、脑脊液中常见病原体
`
革兰阴性菌 脑膜炎奈瑟菌 大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 卡他布兰汉菌
病毒 乙型脑炎病毒 柯萨奇病毒A 柯萨奇病毒B 脊髓灰质炎病毒
真菌及其他 新生隐球菌 白假丝酵母菌 钩端螺旋体
肺炎链球菌 B群链球菌 A群链球菌 消化链球菌
结核分枝杆菌
拟杆菌
新肠道病毒68～71
产单核细胞李斯特菌 炭疽芽胞杆菌 葡萄球菌
冷藏保存），4℃冷藏保存时间不得超过8小时。
但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。
二、常见病原体
尿液中常见病原体：
80%为革兰阴性杆菌，其中以大肠埃希菌最 为常见。 20%为革兰阳性菌，其中以肠球菌为多见。
三、临床意义
厌氧菌
拟杆菌、产气荚膜梭菌
三、临床意义
• 血液感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验， 提供病原学的诊断极为重要。 • 当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖， 不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症,若有全身 性炎症反应的表现称为脓毒症。
• 血液标本的细菌培养是诊断菌血症的基本而重要的方法，
次为革兰阳性球菌感染，可单独也可混合细菌感染。
• 急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、溶血
性链球菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌感染所致。
• 放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙、
口腔黏膜损伤时。
第五节
痰液
一、标本采集
• 自然咳痰法 以晨痰为佳，尽可能在用抗菌药物之前采集 标本。用力咳出呼吸道深部的痰，将痰液直接吐
病毒性肺炎
支原体肺炎
细菌性肺炎 真菌性肺炎
第六节 粪便
一、标本采集
• 用药前自然排便，采集脓血、黏液部分2～3g。
• 外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。
• 液体便取絮状物1～2ml,置无菌容器内送检。
• 如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集
标本。
• 粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内 粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件 的提倡使用运送培养基。
舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送
检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。
注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、 肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。
二、痰标本中常见病原体
细菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、肺炎链球菌、A 群链球菌、肠球菌卡他莫拉菌、脑膜炎奈瑟菌、白喉棒 状杆菌、类白喉棒状杆菌、结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆 菌、流感嗜血杆菌、克雷伯杆菌、铜绿假单胞菌、大肠 埃希菌、百日咳杆菌、军团菌、支原体和衣原体等
三、临床意义
• 细菌、真菌、病毒引起的胃 • 细菌性痢疾 （bacillary dysentery） 肠炎 简称菌痢，主要是指 由志贺菌引起的肠道传染 此症最为常见，由多种 病原体感染所致，临床常表 现为腹泻、呕吐、高热等症 状。胃肠炎的病毒感染常见
病，是肠道感染性腹泻最
常见的病种。
于轮状病毒等，常引起幼儿
物，也可以用拭子在伤口深部采集渗出物。
• 脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可由排液法取得。 • 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。特别要注意避免 正常菌群所污染以及由采集至接种前尽量避免接触空气。
二、脓液中常见病原体
细菌种类 球菌 革兰阳性菌 革兰阴性菌
金黄色葡萄球菌、凝固酶 肺炎克雷白杆菌、变形 阴性葡萄球菌、化脓链球 杆菌、 脑膜炎奈瑟菌、 菌、肺炎链球菌、肠球菌、淋病奈瑟菌、卡他布兰汉 消化链球菌、四联球菌 菌
数伴有细菌感染。
第三节
脑脊液
一、标本采集
• 采集脑脊液一般用腰椎穿剌术获得，特殊情况可采用小
脑延髓池或脑室穿刺术。 • 标本采集后要立即送检、化验，一般不能超过1小时。 • 腰穿法无菌取脑脊液3～5ml，置无菌管内立即送检。培 养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本 置于35℃条件下保温送检，不可置冰箱保存。但做病毒 检查的脑脊液标本应放置冰块，可在4℃保存72h。
4.采血量
自动化仪器要求成人采血量是8～10 ml/瓶，儿童1～5 ml/瓶。
5.血培养次数和采血时间 • 只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。 • 采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集2～3 次做血培养。
• 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1h 采
集血液，或于寒战或发烧后1h进行。
入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带
盖的容器中，标本量应≥1ml。
• 支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺
经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡 灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须 注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。
• 小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压
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少见。少数患者病情严重，病死率高，可留有后
遗症。
• 肠道病毒对中枢神经系统的危害性已逐渐引起人
们的关注和重视。除原有脊髓灰质炎常见外，还 可见多种病毒引起脑膜炎或脑炎，还不断发现新 的肠道病毒（新肠道病毒68～71型）引起的脑膜 炎及脑炎。
第四节
脓液
一、标本采集
• 先清洗，再采集。
• 脓性标本是用针和注射器抽吸采集，如果没有得到抽吸