ISO6579食品和动物饲料微生物学沙门氏菌检测

ISO 6579：2002 食品和动物饲料微生物学—沙门氏菌检测

序

ISO是国际标准的全球性组织。准备国际标准这项工作通常由ISO技术联盟来完成。每一个团体成员负责各自的学科。与ISO有合作的国际性机构、政府与非政府机构，也有参与这项工作。ISO与国际电子组织（IEC）在电子标准化方面有着密切的合作关系。

国际性标准的起草原则在《ISO/IEC 细则》第三部分中有给出。

起草的国际性标准被技术委员会采用是通过全体成员投票决定的。发布一个国际性标准需要至少75％成员投赞成票。

由于某些学科涉及到专利权。而ISO没有责任去鉴别这些专利。ISO 6579是ISO/TC 34起草的。

这个第四版取代了第三版（ISO 6579:1993），由于它在技术上已经落后了。

附录A和B是本标准的标准化部分。附录C只为了提供信息。

绪论

由于食品与饲料的种类繁多，这个标准不一定适合某一类产品。在这种情况下，可使用不同的方法，但必须有绝对的技术上的理由。否则，要尽可能地完全遵循本标准。

当这个标准下一次回顾时，将会对这个标准的使用做数据统计，特殊产品偏离本标准使用也会做相关统计。

同一类产品的检测方法也有可能不统一，国际性标准和/或国家标准也不一定完全与本标准相符合。希望相关标准做回顾时，会遵循本标准做出相关的修改，以使只有已被证明的技术上的理由才能与本标准偏离。

警告——为了保护实验室人员的安全，必须确保沙门氏菌的检测，特别是伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌，必须在一个有经验的微生物学家的指导下，在适当的实验室设备中进行，并处理好实验室废弃物。

1 范围

这个国际标准主要提供沙门氏菌的检测方法，包括伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌。局限性已在绪论中给出，本标准适用于

——用于人类消耗和动物饲养的产品；

——食品生产和食品加工的环境样品。

警告——本方法可能不能复苏所有的伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌。

2 参考标准

以下标准文件是本标准的参考标准。已过期的文献，后来改善或修订的，部分这种文献已经不适用。然而，有大部分学者正在争取发布最新版的文献如以下列出。对于无限期的文献，最新版本都是适用的。ISO和IEC成员保存当前有效国际性标准的记录。

ISO 6887-1，食物与动物饲料原料微生物学——样品准备原则，微生物检测样品原液及十倍法稀释——第一部分：样品原液和十倍法稀释的指导准则。

ISO 7218，食物与动物饲料原料微生物学——微生物检验指导准则。

ISO 8261，牛奶和奶制品——微生物检测样品准备、品原液和十倍法稀释的指导准则。

3 术语和定义

以下术语和定义适用于本标准。

3.1 沙门氏菌

按照本国际标准操作，在固体选择性培养基上形成典型或略典型的菌落，并且生物学反应和血清学反应符合要求。

3.2 检测沙门氏菌

按照本国际标准操作，检查一定重量或体积的样品存在或不存在沙门氏菌。

4 原理

4.1 概述

沙门氏菌的检测有四个必须的连续阶段（也可见附录A）。

注意：沙门氏菌可能以很少数量存在，并伴随大量的肠杆菌属或其它属细菌存在。此外，检测低数量的受损的沙门氏菌，前增菌是必要的。

4.2 使用非选择性液体培养基前增菌

缓冲蛋白胨水环境温度培养是检测的一部分，然后37℃±1℃培养18h±2h。对于特定的食品，使用其它的前增菌是必要的（见9.1.2）。如果是大量的样品，在接种前，缓冲蛋白胨水必须先预热至37℃±1℃。

4.3 选择性液体培养基中增菌

使用RV大豆培养基（RVS肉汤）和MK连四硫酸盐/新生霉素（MKTTn肉汤）肉汤。RVS肉汤41.5℃±1℃，24h±3h。MKTTn肉汤37℃±1℃，24h±3h。

4.4 平板划线和鉴定

使用两种选择性固体培养基：

——木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD琼脂）；

——任何对XLD琼脂做补充的固体选择性培养基，并能分离乳糖阳性的伤寒沙门氏菌和副伤寒沙门氏菌。实验室可以自己选择使用哪一种培养基。

XLD琼脂37℃±1℃培养24h±3h。另一种培养基根据生产商的要求培养。

注意：如亮绿琼脂（BGA），亚硫酸铋琼脂可供选择。

4.5 确认试验

假定沙门氏菌菌落进行次培养，做适当的生化学和血清学试验来鉴定。

5 培养基和试剂、血清

5.1 概述

一般实验室实践，参照ISO 7218。

5.2 常规培养基和试剂

注意：由于需使用到大量的培养基和试剂，其成分和准备查看附录B。

5.2.1 非选择性钱增菌培养基：缓冲蛋白胨水

见B.1。

5.2.2 第一个选择性增菌培养基：RV大豆培养基（RVS肉汤）

见B.2。

5.2.3 第二个选择性增菌培养基：MK连四硫酸盐/新生霉素（MKTTn肉汤）肉汤

见B.3。

5.2.4 固体选择性平板培养基

5.2.4.1 第一个培养基：木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂（XLD琼脂）

见B.4。

5.2.4.2 第二个培养基

第二种适当的培养基的选择取决于试验室的判断。必须按照生产商的要求配制培养基。

5.2.5 营养琼脂

见B.5。

5.2.6 三糖铁琼脂（TSI琼脂）

见B.6。

5.2.7 尿素琼脂（西蒙氏）

见B.7。

5.2.8 L－赖氨酸脱羧酶培养基

见B.8。

5.2.9 牛乳糖检测试剂

见B.9。

5.2.10 VP反应试剂

见B.10

5.2.11 吲哚反应试剂

见B.11。

5.2.12 半固体营养琼脂

见B.12。

5.2.13 生理盐水溶液

见B.13。

5.3 血清

一般可买到含有一种或多种O抗原的血清。例如：抗体血清包含一种或多种“O”，称为单价或多价“O”抗体血清，“Vi”血清。还有包含一种或多种H抗原的血清。

必须确认所使用的血清适合检测所有类型的沙门氏菌。

6 设备和玻璃器皿

使用一般微生物实验室设施（见ISO 7218）,另有以下增加。

6.1 干热灭菌或湿热灭菌设备

见ISO 7218。

6.2 干燥箱或烘箱，鼓风式，能达到37℃～55℃

6.3 培养箱，可恒温37℃±1℃