基因工程简答题综述.doc
基因工程简答题
(1)修复反应，制备平末端
可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。
答：
基因型是lac-．原因是在该密码子中插入了两个碱基，造成了移码突变，所以Lac的基因是缺陷的
27．在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA
而不用基因组DNA?为什么要在cDNA前加上细菌的启动子?
答：
这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子之故。
10． 列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
．答：
(1)独立复制； (2)有选择标记； (3)有独特的酶切位点； (4)能转化但不扩散。
11． 什么叫穿梭载体？
答：
含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。
条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星
活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性
内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高pH(8．0
如果你的杂交探针是双链的，可能因为在加人杂交混合物之前忘记将探针变性而得到空白的放射自显影结果。
23．切口移位(nick translation)标记探针的主要步骤有哪些?
基因工程技术考试试题
基因工程技术考试试题一、选择题（共10题，每题2分，共计20分）1. DNA是由以下哪种分子组成的？A. 蛋白质B. 脂质C. 糖类D. 细胞膜2. 下列哪种是基因工程技术的一种应用？A. 组织工程B. 基因治疗C. 生物降解D. 太阳能发电3. PCR技术用于什么目的？A. 基因克隆B. 基因敲除C. 基因突变D. 基因治疗4. 基因工程技术最早起源于哪个国家？A. 美国B. 英国C. 中国D. 日本5. 下列哪种是基因编辑的一种主要方法？A. RNA干扰B. 全基因组测序C. 基因枪D. CRISPR-Cas96. 基因工程技术在农业领域的主要应用是什么？A. 作物抗虫性改良B. 增加作物产量C. 提高作物口感D. 减少作物生长周期7. 双链RNA干扰主要用于什么目的？A. 基因敲除B. 基因突变C. 基因治疗D. 基因表达调控8. 基因工程技术在医药领域的主要应用是什么？A. 生产抗生素B. 疾病诊断C. 组织工程D. 基因改良9. 基因工程技术是否可以用于人类克隆？A. 可以B. 不可以10. 基因工程技术是否会对生态环境造成影响？A. 会B. 不会二、简答题（共5题，每题10分，共计50分）1. 请简要介绍基因工程技术的原理和主要方法。
2. 基因工程技术在农业领域的应用有哪些？请举例说明。
3. 什么是基因编辑？请详细描述CRISPR-Cas9基因编辑系统的工作原理。
4. 简要介绍基因工程技术在医药领域的应用，包括基因治疗和药物生产。
5. 基因工程技术是否存在伦理道德问题？请阐述你的观点。
三、论述题（共1题，30分）请阐述基因工程技术对人类社会和生态环境的影响，包括积极和消极两方面。
生物基因工程知识点总结
生物基因工程知识点总结生物基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质来改变其性状的技术。
它涉及到许多关键的知识点，如下：1. 基因：基因是生物体内控制特定性状的遗传信息单位。
它是DNA分子中的一个特定序列，负责编码产生蛋白质。
2. DNA：脱氧核糖核酸（DNA）是生物体内存储遗传信息的分子。
它由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶）组成的两条螺旋状链结构。
3. 基因表达：基因表达是指基因通过转录和翻译的过程将DNA的遗传信息转化为蛋白质的过程。
4. 转基因：转基因是指将外源基因导入到另一种生物体的基因组中，使其表达新的性状。
转基因技术是生物基因工程的核心。
5. 基因编辑：基因编辑是一种通过直接修改组织或细胞中的基因序列来改变生物体遗传信息的技术。
常用的基因编辑工具包括CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs。
6. 载体：载体是一种用于将外源基因导入到生物体中的工具。
常用的载体包括质粒、病毒和细胞。
7. 克隆：克隆是指通过人工手段复制一个生物个体的基因组。
克隆技术可以用于繁殖优良的动植物品种和疾病模型的制备。
8. 基因检测：基因检测是一种用于检测个体的遗传信息的技术。
它可以用于遗传病的筛查、个体的亲缘关系鉴定和种群遗传学的研究。
9. 合成生物学：合成生物学是一种基于工程原理设计和构建新的生物系统的学科。
它通过组合基因和其他生物部件来设计具有特定功能的新生物体。
10. 生物安全：生物安全是指在进行生物基因工程研究和应用时保护人类和环境的安全。
它包括对实验室条件的控制、对转基因生物体的监管和对风险评估的实施。
以上是生物基因工程的一些主要知识点，它们一起构成了生物基因工程这个学科的基础和核心。
基因工程试题(完整)
答案：基因操作。
将在细胞外产生的核酸（物质）分子插入到病毒，质粒或其它载体系统中，再整合到特定的宿主中，从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
名词解释问题： Interrupted genes参考答案：间断基因。
序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA 间隔区，使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
名词解释问题： Promotor参考答案：启动子。
DNA 分子可以与RNA 聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。
名词解释问题： Subcloning参考答案：亚克隆。
当初始克隆中的外源DNA 片段较长，含有许多目的基因以外的DNA 片段时，在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行，将目的基因所对应的一小段DNA 找出来，这个过程叫“亚克隆”。
填空题问题：基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning），gene cloning 的基本要点有（），（）和（）。
参考答案：克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择填空题问题：（）是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）参考答案：基因；连续；DNA；存在于染色体之外（如质粒，噬菌体等）填空题问题：基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
参考答案：表达；调控；检测；改造填空题问题：启动子（Promotor）是指（）。
通常一个Gene 是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程中，Promoter还是（）的结合位点。
参考答案：基因转录过程中控制起始的部位；转录起始；RNA 聚合酶填空题问题：原核生物的RNA polymerase 主要由两部分组成：（）和（），其中σ-因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。
基因工程简答题
基因工程1、转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。
质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。
请回答：（1）构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶，对进行切割。
（2）培养基中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有，作为标记基因。
（3）香蕉组织细胞具有，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。
图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的2、科学家将大麦细胞中的LTP1基因利用基因工程手段导入啤酒酵母菌中，使其产生LTP1蛋白，使酿出的啤酒泡沫更加丰富。
具体的操作过程如图所示,请据图回答问题。
(1)图中所示的基因工程操作步骤的A和C分别是______、________。
(2)由图中可以看出，所用的载体甲是______，载体甲的化学本质是_______。
(3)简要说明获得乙的方法步骤：。
(4)已知甲中含有抗青霉素基因(非LTPl基因的插入位点)，而啤酒酵母菌没有青霉素抗性，试说明如何检测和筛选出含有目的基因的啤酒酵母菌?。
(5)转基因啤酒酵母菌合成LTPl蛋白的场所是_____ ，原料是____。
LTPl基因在转基因啤酒酵母菌中的遗传信息传递过程是_________ 。
3、继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。
最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。
请回答：（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是。
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入中，原因是。
（3）通常采用技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的细胞中特异表达。
（5）为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的转入细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。
该技术称为。
基因工程题库及答案汇编
基因工程题库及答案汇编一、填空题1．基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。
基因工程技术的诞生，使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向的时代。
2．随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过、和等三种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。
3．Cohen等在年构建了第一个有功能的重组DNA分子。
4．基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。
5．基因克隆中三个基本要点是：；和。
6．年，美国斯坦福大学等在上发表了题为：“将新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法：含有λ噬菌体基因和E．coli半乳糖操纵子的环状SV40DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。
这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有。
7．克隆基因的主要目的有四：(1)；(2)；(3)；(4)。
填空题答案1．70；按人们的需要而定向地改造和创造具有新的遗传性品种。
2．细菌发酵；真核细胞培养；乳腺生物反应器。
3．19734．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。
5．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择6．1972；P．Berg；Proc．Natl．Acad．Sci．USA；证明体外重组的DNA分子具有生物学功能7．(1)扩增DNA；(2)获得基因产物；(3)研究基因表达调控；(4)改良生物的遗传性二、选择题(单选或多选)1．因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()(a)A．Komberg(b)W．Gilbert(c)P．Berg(d)B．McClintock2．第一个作为重组DNA载体的质粒是()(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是()(a)EcoRI(b)EcoB(c)EcoC(d)EcoRⅡ4．P Berg构建SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中()的作用是制造隐蔽的5’端。
基因工程试题
基因工程一、判断题(1)迄今发现的质粒DNA都是环状的。
(╳)(2)用同一种酶切割载体和外源DNA得到粘性末端后，为防止它自身环化，要用CIP将它脱磷酸。
(╳)(3)完整的总RNA样品电泳应呈现三条带-28S、18S和5S。
(√)(4)由同尾酶产生的粘性末端序列很容易重新连接，但是两种同尾酶消化产生的粘性末端重新连接形成的新片段将不能被该两种酶的任何一种所识别。
(√)(5)Mg2+浓度对PCR扩增效率影响极大，浓度过高可能降低PCR扩增的特异性；浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败。
(√)(6)DNA连接子是一段人工合成的只有平头末端的长度一般为8bp~12bp双链核苷酸片段，其主要作用是在DNA末端添加一个限制性核酸内切酶识别位点，产生粘性末端便于连接。
(√)(7)在外源DNA导入细菌的方法中，CaCl2转化法的转化率比电转化转化率高。
(╳)(8)基因文库构建的材料来源可以是染色体DNA也可以是mRNA。
(√)(9)T-DNA区左右边界各为25bp的重复序列，是完全保守的，左边界缺失突变仍能致癌；但右边界缺失则不能致癌。
(√)(10)T4DNA连接酶和E.coil连接酶作用时都需要ATP和NAD-作为辅助因子。
(╳)东隅已逝 1 桑榆非晚！二、选择题1．在切口位移标记DNA探针时只能使用(B)A.Klenow酶B.DNA聚合酶C.DNA聚合酶ⅡD.DNA聚合酶Ⅲ2．在利用lcaZ失活的显色反应筛选法中，X-gal的作用是(Ｄ)A.作为酶的作用底物B.诱导宿主的ω肽的合成C.诱导宿主α肽的合成D.作为显色反应的指示剂3.现在关于多克隆位点(ＭＣＳ)的描述，不正确的一句是(Ａ)A.仅位于质粒载体中B.具有多种酶的识别序列C.不同酶的识别序列可以有重叠D.一般是人工合成后添加到载体中4.下列那种克隆载体对外源ＤＮＡ的容灾量最大(Ｃ)A.质粒B.黏粒C.酵母人工染色体D.λ噬菌体5.同一种质粒ＤＮＡ，以三种不同形式存在，电流时它们的迁移率是(Ｂ)A.OC DNA>SC DNA>L DNAB.SC DNA>L DNA>OC DNAC.L DNA>OC DNA>SC DNAD.SC DNA>OC DNA>L DNA6.下列关于cＤＮＡ文库的特点说法不正确的是(Ｃ)A.不含内含子序列B.可以在细菌中直接表达C.包含了所有基因D.比ＤＮＡ文库小的多，容易构建7.噬菌体的核酸主要存在形式(Ａ)A.双链线型ＤＮＡB.双链环型ＤＮＡC.单链环型ＤＮＡ东隅已逝 2 桑榆非晚！D.单链线型ＤＮＡ8.下列载体和外源ＤＮＡ插入片段的连接结果导入受体细胞后，哪种早受体细胞中不能存活(Ｂ)A.载体之间相互连接B.插入片段互相连接C.一个载体与几个插入片段重组D.几个载体与一个插入片段重组Ｅ.载体自身环化连接9.在ＰＣＲ引物设计时，下列说法错误的是(Ｄ)A.一般在引物的５’端可加入限制酶位点序列，以便进行克隆B.防止引物自身形成二级结构C.若３’端最末的碱基不肯定，可以次黄嘌呤核苷取代的引物D.５’端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格配对三.填空题1.只要知道基因组中某一特定核苷酸组成，用（PCR）技术可以将这段DNA 进行百倍的扩增。
基因工程复习提纲
1. 基因工程概念：基因工程是一门以分子遗传学为理论基础、以分子生物学和微生物学的现代技术方法为手段的新兴交叉学科，它诞生于1973年，其发展十分迅速，新知识、新概念、新技术不断涌现，并广泛渗透到生命科学的各个领域，带动了整个生命科学的发展，是现代生物技术中的核心技术。
它为人类创造新生物开辟了新天地。
2. 基因工程的定义：基因工程是将不同来源的基因（DNA分子），按照工程学的方法进行设计，在体外构建成杂种DNA分子，然后导入受体细胞，并在受体细胞内复制、转录、表达的操作。
基因工程又称DNA重组技术。
3. 基因工程的特点及实施条件：基因工程的最大特点是分子水平上的操作，细胞水平上的表达。
其实施包括四个必要条件：工具酶、基因、载体和受体细胞。
4. 基因工程的基本步骤：（1）分离制取带有目的基因的DNA片段；（2）DNA片段和载体DNA 在体外连接；（3）将重组DNA分子导入合适的受体细胞，并扩增繁殖；（4）从大量的细胞繁殖群体中，筛选出获得了重组DNA分子的重组体克隆；（5）外源基因的表达和产物的分离纯化。
5. DNA复制的特点：（1）DNA的复制是从特定的复制起始点开始并按5’-3’的方向进行；（2）DNA 分子的半保留复制；（3）DNA分子的半不连续复制；（4）DNA分子复制是通过DNA聚合酶及各种相关酶蛋白、蛋白因子的协同有序的工作完成的；（5）DNA分子复制具有高度的精确性和准确性。
6. DNA的变性、复性与杂交：在高温、强碱及某些试剂存在的条件下，双链DNA分子氢键断裂，两条链完全分离，形成单链DNA分子，这种情况称为DNA变性。
DNA的复性是指变性DNA在适当的条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的逆转过程。
热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“退火”。
杂交的基本原理是应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA（或RNA）片段按碱基互补关系形成杂交双链分子。
高三生物基因工程总知识点
高三生物基因工程总知识点基因工程是指利用现代生物技术手段对生物体的遗传物质进行人为干预和改造的科学技术。
随着生物科技的不断发展，基因工程在农业、医学、环境保护等领域的应用越来越广泛。
在高三生物学中，基因工程是必修课程的重要部分。
下面将综述高三生物基因工程的总知识点。
1. DNA重组技术DNA重组技术是基因工程的核心技术之一。
该技术可以将不同物种的DNA片段进行切割、连接和复制，使其在目标生物体中表达出特定的基因。
常用的DNA重组技术有限制酶切、凝胶电泳、DNA连接和PCR扩增等。
这些技术的应用使得科学家能够在实验室中精确地操作和调控基因。
2. 转基因技术转基因技术是基因工程的一项重要应用。
通过转基因技术，科学家可以向目标生物体中导入其他物种的基因，使其具有特定的性状或功能。
许多转基因植物品种已经广泛应用于农业生产，例如抗虫、抗病植物品种的培育。
此外，转基因技术还可以应用于动物和微生物领域。
3. 基因治疗基因治疗作为基因工程的一个重要领域，被广泛应用于人类疾病的治疗。
基因治疗通过向患者体内导入正常的基因，修复机体的异常基因，从而治疗疾病。
在高三生物学中，我们需要了解基因治疗的原理和应用，如克隆基因、启动子的选择、基因导入方式等。
4. 基因测序技术基因测序技术是基因工程领域的重要研究手段之一。
它可以用来确定一个生物体的全部或部分基因组的序列，从而揭示生物体基因特性和遗传信息。
在高三生物学中，我们需要对常用的基因测序技术有一定的了解，如Sanger测序、新一代测序技术等。
5. 基因编辑技术基因编辑技术是一种针对特定基因的精确修改技术，近年来得到了快速发展。
CRISPR-Cas9技术是目前常用的基因编辑技术之一，能够精确删除、插入或修改基因序列。
这项技术在生物科学研究、基因治疗和农业改良中有着广泛的应用前景。
6. 无性生殖与胚胎工程无性生殖与胚胎工程是基因工程领域的重要应用之一。
通过细胞分裂、离体培养等技术，可以实现细胞和组织的无性繁殖，并利用胚胎工程技术进行胚胎分裂和植物再生。
基因工程(第二章答案)
第二章基因工程工具酶一、解释下列名词1.Restriction and modification（限制与修饰）宿主特异性地降解外源遗传物质（DNA）的现象称为限制。
外源遗传物质通过甲基化等作用避免宿主的限制作用称为修饰。
2. Matched ends(or cohesive end)（匹配末端或粘性末端）识别位点为回文对称结构的序列，经限制酶切割后，产生的相同的，互补的末端称为匹配粘端，亦即粘性末端3. Blunt ends平末端。
在回文对称轴上同时切割DNA 的两条链，产生的没有碱基突出的末端称为平末端。
4. Star activity星星活性。
在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性。
5. Klenow fragment Klenow 片段。
Klenow DNA 聚合酶是E.coli DNA polymerase 经蛋白酶（枯草杆菌蛋白酶）裂解而从全酶中除去5'--3' 外切活性的多肽大片段，而聚合活性和3'--5' 外切活性不受影响。
6.Reverse transcriptase反转录酶。
即依赖于RNA 的DNA 聚合酶，它有5'--3' 合成DNA活性，但是无3'--5' 外切活性。
7.Terminal transferase（末端转移酶）8.Ligase连接酶。
催化DNA 5' 磷酸基与3' 羟基之间形成磷酸二酯键，将两段核酸连接起来的酶。
9.T4 polynucleotide kinase（T4多聚核苷酸激酶）催化ATP 的γ-磷酸基转移至DNA 或RNA 的5' 末端。
10.Alkaline phosphatase（碱性磷酸酶）催化除去DNA 或RNA 5' 磷酸11.S1 nuclease Sl 核酸酶。
可降解单链DNA 或RNA ，产生带5' 磷酸的单核苷酸或寡核苷酸双链；对dsDNA ，dsRNA ，DNA:RNA 杂交体不敏感。
基因工程知识点 超全精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版基因工程一、基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在二、基因工程的基本工具1、限制性核酸内切酶-----“分子手术刀”2、DNA连接酶-----“分子缝合针”3、基因进入受体细胞的载体-----“分子运输车”1．“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）存在：主要存在于原核生物中。
（2）特性：特异性，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。
（3）切割部位：磷酸二酯键（4）作用：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
（5）识别序列的特点：（6）切割后末端的种类：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。
当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端，而当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的则是平末端。
2．“分子缝合针”——DNA 连接酶（1）作用：将限制酶切割下来的DNA 片段拼接成DNA 分子。
（2）类型相同点：都连接磷酸二酯键3．“分子运输车”——载体(1)载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一个至多个限制酶切点，供外源DNA 片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。
(2)最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌拟核之外，并具有自我复制种类 E ·coli DNA 连接酶 T 4DNA 连接酶 来源 大肠杆菌 T 4噬菌体 功能特性只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来 缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低能力的双链环状DNA分子。
(3)其他载体：λ噬菌体的衍生物、动植物病毒。
《基因工程》考试重点总结.doc
第一章基因工程概述第一节基因操作与基因工程基因操作（ gene manipulation）：指对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。
基因工程（ gene engineering）：通过工具酶，在体外将目的基因、基因片段或其它DNA 元件进行切割，与适当的载体进行连接和重组，导入相应受体细胞，并使外源基因进行复制和表达，定向改造受体生物性状或获得表达产物。
基因操作与基因工程的关系：基因操作的核心是基因重组（gene recombination）技术，基因工程是基因操作、基因重组的核心内容和主要目的。
基因工程的遗传学效果：受体生物发生遗传信息或遗传性状的变化并能稳定遗传给下一代。
第二节基因工程是生物科学发展的必然产物一、基因是基因重组的物质基础遗传因子、基因：是遗传信息的基本单位。
从物质结构上看，基因是染色体组核酸分子。
基因（gene）是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段并具有遗传学功能，可以是连续的，也可以是不连续的，可以是 DNA 也可以是RNA ，可以存在于染色体上，也可存在于染色体之外（如质粒、噬菌体等）。
基因工程的理论基础：⑴ . 明确了遗传信息的携带者—基因的载体是DNA ，明确了遗传的物质基础。
⑵. DNA 分子的双螺旋结构和半保留复制模型得以阐明，解决了基因的自我复制和传递问题。
⑶ . 中心法则、操纵子学说的提出以及遗传密码子的破译，解决了遗传信息的流向和表达问题。
(4). 遗传物质基础和中心法则的通用性决定了基因工程原理和技术在生物界普遍适用，尤其是可以实现跨越任何物种界限的遗传成分转移。
自此，从理论上讲，基因工程已有可能成为现实基因工程的技术基础：DNA 重组⑴ . DNA 体外切割和连接技术（限制性内切核酸酶和DNA 连接酶的发现与应用，标志着时代的开始）。
⑵ . 克隆载体的发展与应用。
⑶ . 大肠杆菌转化体系的建立。
⑷ . 琼脂糖电泳技术的应用。
⑸ . DNA 测序技术的应用。
基因工程知识总结
生物选修三 知识点--------基因工程一、 基因工程1、（a ）基因工程的诞生（一）基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外DNA 重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程是在DNA 分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA 重组技术。
2、（a ）基因工程的原理及技术 原理：基因重组技术：（一）基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA 片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。
2.“分子缝合针”——DNA 连接酶(1)两种DNA 连接酶（E ·coliDNA 连接酶和T4DNA 连接酶）的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键。
②区别：E ·coliDNA 连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA 片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA 连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。
(2)与DNA 聚合酶作用的异同:DNA 聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。
DNA 连接酶是连接两个DNA 片段的末端，形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA 片段插入。
③具有标记基因，供重组DNA 的鉴定和选择。
简答题基因工程 部分
1、构建质粒载体答、1、分子量尽量小。
＞15kb•时转化效率低。
小质粒优点:①容易提取；②较为抵抗机械(超声波)切割；③多拷贝，给克隆基因提供了剂量效应；④对内切酶提供多切点的机会大为减少。
2、了解载体上基因位置/限制酶作用位点。
3、包含可供选择的标记性状(基因)4、最大限度地具有MCS的单切点5、改造或增加表达基因的调控序列6、安全性能改造2、电泳的原理与区别a琼脂糖凝胶电泳的原理琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。
其结构单元是D-半乳糖和3，6-脱水-L-半乳糖。
许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶，即而形成琼脂糖凝胶。
琼脂糖凝胶电泳具有电荷效应和分子筛功能,使得大小和构象不同的带电粒子的迁移率出现较大差异,从而达到分离的目的。
b聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）丙烯酰胺（acr）和交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺（bis）在催化剂N,N, N’, N’-四甲基乙二胺（TEMED）和引发剂过硫酸铵（AP）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶作为支持介质的电泳称为PAGE。
PAGE具有电泳和分子筛的双重作用。
C、脉冲场凝胶电泳（PFGE）实际上是一种交替变化电场方向的电泳，以一定的角度并以一定的时间变化电场方向，使DNA分子在微观上按“z”字形向前泳动，从而达到分离大相对分子质量的DNA片段（如50kb、100kb以上）的目的。
3、核酸分子杂交原理：DNA的分子杂交是dsDNA的变性和带有互补序列的同源单链之间的配对过程，因此，分子杂交实质上是以DNA变性和复性为理论基础的4、引起变性的因素：热、酸、碱、化学试剂（如：尿素、甲酰胺、甲醛等）。
加热变性是最常用的方法，一般加热80-100℃数分钟即可使核酸分子氢键断裂，双链分开。
5、杂交分类杂交可分成：DNA与DNA、RNA与RNA、DNA与RNA之间的杂交。
6、核酸探针的类型：寡核苷酸探针、基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针、单链DNA 探针7、探针所携带的标记物应具备的条件（1）标记后的探针的分子结构要尽可能与原来的分子结构相同，绝不影响其碱基配对特异性，不影响探针分子的主要理化特性，尤其是杂交特性。
整理基因工程
精品文档一、名词解释1、感受态细胞：就是处于能吸收外源DNA分子的生理状态的细胞2、转化：是指以质粒为载体，将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种过程3、回文序列：从5,一3,端两条链中的核甘酸碱基排列顺序完全相同的序列4、粘性末端：是指DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补减记的单链延伸形成的末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新连接起来5、平齐末端：限制性核酸内切酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段末端为平末端6、Ti质粒：是根癌农杆菌中发现的可引发植物产生冠瘿瘤的质粒；7、质粒：是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。
8、cos位点：入DNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的双链区域称为cos位点。
9、lacZ'基因：大肠杆菌lacZ的a -肽链序列，是LacZ的氨基端片断。
10、克隆载体：以繁殖外源DNA片段为目的载体通称为克隆载体11、clone：含有目的DNA片段的重组DNA分子或含有该重组分子的无性繁殖12、同尾酶：它们的来源不同，识别的靶序列也不同，但切割后能产生相同的粘性末端的一类限制性核酸内切酶13、同切点酶：又称同裂酶，是一类来源不同而能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶14、星号活性：当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性的现象15、转导：由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移的过程16、转染：以噬菌体为载体，不经过蛋白包装成病毒颗粒，用DNA连接酶使噬菌体DNA环化，在通过质粒转化方式导入受体菌的过程17、感染：以入噬菌体DNA为载体的DNA重组分子包装成病毒颗粒，使其感染受体菌的过程18、基因枪法：又称微弹轰击法、粒子轰击法，是一种借助高速金属微粒将DNA分子引入活细胞的转化技术19、转化率：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数，是衡量转化效率的重要指标20、限制性内切核酸酶简称限制酶，是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核甘酸序列(4-8bp),并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
基因工程小综述之DNA测序
• 斯坦福大学的科学家最近利用 Heliscope单分子测序仪,用了48 000美 元的试剂和4个星期的时间,对一名白人 男子的基因组进行了测序。测序的覆 盖度达28 倍,覆盖了90%的人类参考基 因组。序列读长24 - 70 bp,平均读长为 32 bp,并鉴定出280万个SNP位点和752 个拷贝数变异 。
碱基特异性化学切割反应： • 硫酸二甲酯（DMS ）：使DNA分子中鸟 嘌呤（G）上的N7原子甲基化。 • 肼：使DNA分子中胸腺嘧啶（T）和胞嘧 啶（C）的嘧啶环断裂；但高盐条件下， 只C断裂，而不与T反应。 • 哌啶：从修饰甲基处断裂核苷酸链。 在不同的酸、碱、高盐和低盐条件下， 三种化学试剂按不同组合可以特异地切 割核苷酸序列中特定的碱基。
• 随着新的测序技术的出现,大规模测序的成本 迅速下降,花费1 000美元测一个人的基因组的 目标相信很快就可以实现。届时,对于遗传病 的诊治将变得简单、快速,并能从基因组水平 上指导个人的医疗和保健,从而进入个人化医 疗的时代。同时,生物学研究的进展将会更多 地依赖于测序技术的进步,不同领域的科学家 花很少的钱就可以对自己熟悉的物种基因组进 行测序,从而更好地指导试验设计,取得更多新 发现。
70年代末waltergilbert发明化学法fredericksanger发明双脱氧终止法手动测序同位素标记80年代中期出现自动测序仪应用双脱氧终止法原理荧光代替同位素计算机图象识别90年代中期测序仪重大改进集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳2001年完成人类基因组框架图dnadan人类基因组计划humangenomeprojecthgp是由美国科学家于1985年率先提出于1990年正式启动的
DNA测序发展的历程
• 70年代末，WalterGilbert发明化学法、 FrederickSanger发明双脱氧终止法手动测序， 同位素标记 • 80年代中期，出现自动测序仪（应用 双脱氧终止法原理）、荧光代替同位素， 计算机图象识别 • 90年代中期，测序仪重大改进、集束 化的毛细管电泳代替凝胶电泳 • 2001年完成人类基因组框架图
基因工程简答题总结
基因工程简答题总结第一篇：基因工程简答题总结基因工程原理复习题思考题5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
）6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
（传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。
这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA聚合酶 2）Klenow fragment 3）T7 DNA聚合酶 4）T4 DNA 聚合酶5）修饰过的T7 DNA聚合酶 6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。
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基因工程简答题综述基因工程原理回顾，思考问题5，简要描述同型尾酶和同型裂解酶的区别。
同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆DNA序列检测方法-5，简述同尾之间的区别同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆的DNA序列的检测:λ噬菌体、YAC、BAC、粘粒等。
基因文库构建的一般步骤如下:(1)染色体DNA 大片段的制备(1)酶切法(2)物理切割法(2)载体与基因组DNA大片段的连接(1)粘性末端的直接连接(2)人工连接法(3)受体的转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和接头的合成；基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE-(1)染色体DNA大片段的制备①酶促裂解②物理裂解②载体与基因组DNA大片段之间的连接①内聚端直接连接②人工连接③受体转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和连接的合成基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE:腺病毒，SV40，腺相关病毒，逆转录病毒，人类痘苗病毒，疱疹病毒等。
逆转录病毒(单链核糖核酸病毒)的优势:a、宿主范围广(几乎所有类型的哺乳动物细胞)b、效率高，能感染大量细胞，通常一次能感染106 ~ 107个细胞c，外源DNA在整合过程中不重排，单位点少，拷贝整合率低(一般不超过5个)的缺点:A.只有分裂细胞B被感染，携带外源基因的长度是有限的(8kb)，载体病毒基因具有潜在的致病性。
例如，在载体和人内源性逆转录病毒(HERV)序列之间存在潜在的D和重组危险，以产生具有传染性的人逆转录病毒词范例。