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基因工程简答题综述

基因工程原理回顾，思考问题5，简要描述同型尾酶和同型裂解酶的区别。

同尾酶:

不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。分解酶:

识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。部分异构酶和不完全异构酶(PS:

完全均裂酶:

识别位置和切点完全相同。不完全异构酶:

识别位置是相同的，但切割点不同。)

6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:

脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；

同样的一点:

脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。

差异:

DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。

核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。

7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。

(在线答案图例)

1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。

2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。

这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。

3.足够的向量和插入是最重要的。

4.平端的连接对离子浓度非常敏感。

5.尽可能减少连接反应的体积

6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。效率高于14度。

8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统

1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；

！有适当的筛选标志；

！具有较高的外源DNA负载量；

！具有多个克隆位点；

！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。

3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。

这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。

4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:

正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。

电穿孔转化原理:

将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。

影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；

超螺旋构象的转化率最高。

2)插入尺寸:

插入片段越大，转化效率越低。

3)受体细胞的类型和预处理；

4)转换方法:

电击法高于化学法。

5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。

一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:

(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载

体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。(2)基于克隆DNA序列检测方法-5，简述同尾之间的区别

同尾酶:

不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。分解酶:

识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。部分异构酶和不完全异构酶(PS:

完全均裂酶:

识别位置和切点完全相同。不完全异构酶:

识别位置是相同的，但切割点不同。)

6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:

脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；

同样的一点:

脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。

差异:

DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。

核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。

7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。

(在线答案图例)

1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。

2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。

这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。

3.足够的向量和插入是最重要的。

4.平端的连接对离子浓度非常敏感。

5.尽可能减少连接反应的体积

6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。效率高于14度。

8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统

1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；

！有适当的筛选标志；

！具有较高的外源DNA负载量；

！具有多个克隆位点；

！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。

3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。

这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。

4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:

正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。

电穿孔转化原理:

将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。

影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；

超螺旋构象的转化率最高。

2)插入尺寸:

插入片段越大，转化效率越低。

3)受体细胞的类型和预处理；

4)转换方法:

电击法高于化学法。

5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。

一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:

(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载