还原型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)

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碧云天谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒说明书

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站微信公众号谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)产品编号产品名称包装 S0056谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)100次产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(NADPH 法)(Cellular Glutathione Peroxidase Assay Kit with NADPH)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性的试剂盒。

绝大部分细胞内的谷胱甘肽过氧化物酶都是含硒的，且硒为该酶的活性中心组成部分。

细胞内也有很少量的不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶存在。

本试剂盒检测的是最常见的含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

本试剂盒的使用灵活方便，样品用量和检测时间的范围宽，样品用量可以根据样品中GPx 的活力在0.1-50微升之间调整，检测时间可以根据样品中GPx 的活力在5-30分钟内进行调整。

本试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒(S0058)配合使用，可以定量检测出样品中不含硒的谷胱甘肽过氧化物酶。

谷胱甘肽过氧化物酶可以清除活细胞内的过氧化物，在保护细胞免受自由基损伤过程中起着关键作用。

细胞内的脂类容易和自由基发生反应，产生脂类过氧化物。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)还原脂类过氧化物，从而消除自由基的毒害作用。

谷胱甘肽过氧化物酶几乎在所有组织中都有分布。

在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显上调或下调。

谷胱甘肽过氧化物酶可以利用还原型谷胱甘肽(GSH)催化过氧化氢以及许多有机过氧化物，产生水或有机醇。

但以过氧化氢为底物进行检测会受同样可以分解过氧化氢的过氧化氢酶(Catalase)的影响，因为过氧化氢酶的酶活性会干扰谷胱甘肽过氧化物酶的测定。

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB法)说明书

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)产品简介：谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法) (Glutathione Reductase Assay Kit with DTNB)是一种简单易行的通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase, GR)活性的试剂盒。

谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。

GSH 可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。

谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)，而GSH 可以和生色底物DTNB 反应产生黄色的TNB 和GSSG ，并可以通过测定A 412来检测TNB 的生成量。

适当设置应体系，前后两个反应合并起来后，GSSG/GSH 过量而GR 相对不足时，该反应体系中谷胱甘肽还原酶就成为整个反应体系的限速因素，此时黄色的TNB 生成量和谷胱甘肽还原酶的活性呈线性正相关。

从而通过测定A 412就可以计算出谷胱甘肽还原酶的活性水平。

本试剂盒的具体反应原理如下：两个反应相合并：本试剂盒检测肝脏样品的检测效果如图1所示。

图中可见，对于肝脏样品可以检测到比较强的谷胱甘肽还原酶的活性并且有很好的剂量效应。

图1. 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(DTNB 法)用于肝脏裂解样品的实测效果图。

本试剂盒可以检测组织匀浆液上清、细胞裂解液上清等生物样品中的谷胱甘肽还原酶的活性。

一个试剂盒共可以进行100次检测。

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谷胱甘肽含量测定

植物生理学模块实验指导玲主编科学还原型谷胱甘肽含量的测定方法（分光光度计法）【实验目的】了解植物组中中抗坏血酸-谷胱甘肽循环代过程，学习还原型谷胱甘肽含量的测定原理和方法。

【实验原理】谷胱甘肽是有谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为一黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。

因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

【器材与试剂】1.实验仪器与用具研钵、高速冷冻离心机、微量移液枪、离心管、试管、水浴锅、容量瓶（100ml、200ml、1000ml）、分光光度计2.实验试剂50g/L三氯乙酸（TCA）溶液（含5mmol/L Na2-EDTA）：称取5g三氯乙酸，用蒸馏水溶解稀释至100ml。

再称取186mg Na2-EDTA·2H2O，加入到100ml 50g/L三氯乙酸溶液中溶解。

0.1mol/L磷酸钠溶液缓冲液（pH7.7）：配制方法见附录。

0.1mol/L(pH6.8)磷酸钠缓冲液：配制方法见附录。

4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）溶液：称取15.8mg DTNB，用0.1mol/L、pH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，混匀，4℃保存。

现用现配。

100μmol/L还原型谷胱甘肽标准液：称取3.1mg 还原型谷胱甘肽，加入少量无水乙醇溶解，加蒸馏水定容至100ml。

3.实验材料同抗坏血酸。

【实验步骤】1.标准曲线制作取6支试管，编号，按照表1加入各种试剂，混匀，25℃保温反应10min。

dtnb检测gsh原理

dtnb检测gsh原理我们来了解一下GSH的基本知识。

GSH是一种三肽，由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成。

它在细胞中广泛存在，并且在许多生物学过程中起着重要的作用。

GSH是一种强还原剂，可以与氧化剂反应，从而保护细胞免受氧化损伤。

DTNB是一种化学指示剂，可以与GSH发生反应。

当GSH与DTNB反应时，它们之间会发生一系列的化学变化。

具体来说，DTNB的硫醇基团（－SH）会与GSH中的硫醇基团反应，形成一种新的化合物，即二硫巴比妥酸（TNB）。

在这个反应过程中，TNB的产生会伴随着颜色的变化。

原本无色的DTNB会转变为黄色的TNB。

这种颜色变化是可见的，可以用肉眼观察到。

这就是DTNB检测GSH的基本原理。

DTNB检测GSH的方法相对简单，可以在实验室中进行。

首先，需要提取样品中的GSH。

这个步骤通常需要使用一些特殊的试剂和技术。

然后，将提取的样品与DTNB混合，使它们发生反应。

反应完成后，观察溶液的颜色变化，并使用光谱仪等设备测量吸光度。

根据吸光度的变化，可以推断出样品中GSH的含量。

DTNB检测GSH的原理简单明了，而且具有一定的灵敏度和准确性。

因此，它被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中。

例如，科学家们可以利用DTNB检测GSH的含量来评估细胞的氧化应激水平。

在某些疾病的诊断中，GSH的含量也可以作为一个重要的指标。

需要注意的是，尽管DTNB检测GSH的方法简单易行，但它也存在一些局限性。

首先，DTNB只能检测还原型的GSH，而不能检测氧化型的GSH。

此外，DTNB的反应也可能受到其他物质的干扰，需要进行适当的控制和校正。

因此，在进行实际应用时，需要结合其他方法和技术，综合评估GSH的含量和活性。

以DTNB检测GSH原理为基础的方法是一种简单而有效的检测手段。

通过观察DTNB与GSH反应过程中的颜色变化，可以推断出样品中GSH的含量。

这种方法广泛应用于生物医学研究和临床诊断中，为我们更好地了解细胞氧化应激和疾病发生机制提供了重要的工具。

谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)试剂盒说明书

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义：GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。

测定原理：GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，而NADP+没有；通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保管。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。

试剂三：液体10μL×1支，20℃保管。

试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保管。

粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

GSHPx测定操作：1.酶标仪预热30min，调整波长到340nm。

2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。

抗坏血酸谷胱甘肽测定

还原型谷胱苷肽GSH2．试剂配制（1）1mM GSH标准液10mL（现用现配）：称3.0733mgGSH,加蒸馏水至10mL。

(不要)（2）5％磺基水杨酸500mL：25g溶于500mL水中。

（3）6mM DTNB：称取0.118905g DTNB溶于50mL PBS（0.1M，pH7.5）中。

（4）2mM NADPH：18.1mg NADPH溶于10mL PBS中。

（5）1mMGSSG标准液10mL：6.126mg GSSG加PBS至10mL。

(不要)实际配置0.1M PBS(pH 7.5): 3个处理*2个品种*3次重复*0.5ml*3次测定=27ml; （实际配置50 ml）6mM DTNB: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际配置50 ml，实际用量0.1189g）2mM NADPH: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml;（实际配置50 ml, 实际用量18.1mg）(1U)GRⅢ: 3个处理*2个品种*3次重复*0.1ml*3次测定=5.4ml; （实际配置50 ml, 实际用量10ml）5％磺基水杨酸：3个处理*2个品种*3次重复*0.01ml*3次测定=0.54ml;（实际配置10ml）(实际用量0.5g/10ml)0.5mM PBS: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置100 ml）乙醚（二乙醚）: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际配置1000 ml）PBS Buffer 0.5mM: 3个处理*2个品种*3次重复*1.5ml*3次测定=81ml; （实际配置150 ml）2-乙烯吡啶: 3个处理*2个品种*3次重复*0.2ml*3次测定=10.8ml; （实际用量20 ml）乙醚: 3个处理*2个品种*3次重复*10ml*3次测定=540ml; （实际用量1000 ml）1．标线制作：配制浓度为0，0.02mM,0.04mM,0.06mM,0.08mM,0.1mM,0.12mM的标准GSH溶液（吸取上述标准液各0.1mL）加入0.5mL 0.1M磷酸钠Buffer（pH7.5）(含5mM EDTA)，0.2mL 6mM DTNB,0.1mL 2mM NADPH,0.1mL(1U)GRⅢ（谷胱甘肽还原酶）(sigma),从0.1mL GSH启动反应，测定650s的A412（OD412），绘制标准曲线。

Elabscience

（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®还原型谷胱甘肽(GSH)比色法测试盒Reduced Glutathione (GSH) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K030-S产品规格：50 assays(48 samples)/100 assays(96 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计（420 nm）使用前请仔细阅读说明书。

如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。

请在保质期内使用试剂盒。

联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。

用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、动植物组织样本及培养细胞中GSH的含量。

检测原理还原型谷胱甘肽（GSH）可与二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）反应产生硫代硝基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（反应式见下图），硝基巯基苯甲酸是一种黄色化合物，在420 nm处，可进行比色定量测定还原型谷胱甘肽（GSH）的含量。

本试剂盒检测组织和细胞样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用考马斯亮蓝法（货号：E-BC-K168-S）提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。

对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。

所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计（420 nm）、涡旋混匀仪、磁力搅拌器、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、烧杯（250 mL）耗材：枪头（1000 μL，200 μL，10 μL ）、EP管（5 mL、2mL）、吸水纸、擦镜纸、磁力搅拌子试剂：双蒸水或去离子水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。

试剂准备①检测前，试剂盒中的试剂平衡至室温。

谷胱甘肽标准测定方法

谷胱甘肽标准测定方法
谷胱甘肽的测定方法主要有以下几种：
1. 埃尔曼（Ellman）法：这是最常用的谷胱甘肽测定方法，其原理是谷胱甘肽在DTNB（二硝基苯磺酸）的作用下，生成具有黄色的DTNB-SH，通过测定其吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

2. 弗斯特（Foster）法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2-硝基-5-苯甲酸的还原能力，通过测定其产物2-氨基-5-苯甲酸的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

3. 比色法：这种方法是通过测定谷胱甘肽在酸性环境下的还原能力，即测定其对2,4-二硝基苯酚的还原能力，通过测定其产物2,4-二氨基苯酚的吸光度来定量谷胱甘肽的含量。

4. 高效液相色谱法（HPLC）：这种方法是通过分离、定量样品中的谷胱甘肽，通过比较其峰面积与已知浓度的谷胱甘肽峰面积来定量谷胱甘肽的含量。

5. 荧光光谱法：这种方法是通过测量谷胱甘肽的荧光光谱，通过比较其荧光强度与已知浓度的谷胱甘肽荧光强度来定量谷胱甘肽的含量。

以上方法都有其优点和缺点，选择哪种方法主要取决
于实验的目的和条件。

还原型谷胱甘肽 (reduced glutathione,GSH)含量测定试剂盒使用说明

还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）含量测定试剂盒使用说明产品简介：GSH/GSSG是细胞内最重要的氧化还原对之一。

因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度变化与GSH含量成正比。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水产品内容：试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存试剂二×1支，充分溶解于50ml试剂一中，4℃保存试剂三×1支，充分溶解于10ml双蒸水中，4℃避光保存操作步骤：一、样品前处理：取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，8000rpm4℃离心10min，取上清。

（如上清不清澈，再离心3min）GSH测定操作：测定前将试剂一于25℃水浴20min按每100mg组织加入1000µL生理盐水的比例进行匀浆。

8000g4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

对于非哺乳动物组织：按每100mg组织加入1000µL提取液的比例进行匀浆。

8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。

（2）血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作表：测定管空白管样本0.1ml/试剂一0.7ml0.7ml蒸馏水/0.1ml试剂三0.2ml0.2ml 迅速混匀，于412nm测吸光值，并记录第60s的OD值GSH含量计算：GSH标准曲线公式：y=0.0015x+0.0818（x为GSH浓度，y为吸光值）液体中GSH（µmol/L）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数组织中GSH计算：①GSH（µmol/mg prot）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品蛋白浓度（Cpr）②GSH（µmol/g mass）=[（OD测定管-OD空白管）-0.0818]/0.0015×样品稀释倍数÷样品质量（g）注意事项：（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力测定时，除试剂一外，其它试剂均需放置在冰上；（2）样本测定前先取1-2个样做预实验，如吸光值太高（超过标准曲线范围，即y ＞0.2时），应先用试剂二稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法) 简介：谷胱甘肽(glutathione，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。

谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统的功能，保护组织细胞免受氧化损伤，并具有抗氧化作用和整合解毒作用，半胱氨酸上的巯基为其活性基团，故常简写为G-SH或GSH，易与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、碘乙酸、铅、汞、砷等)等结合，具有整合解毒作用。

谷胱甘肽具有广谱解毒作用，在延缓衰老、增强免疫力、抗肿瘤等功能性食品广泛应用。

谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。

还原型谷胱甘肽(GSH)是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，能可逆的转变为氧化型谷胱甘肽(GSSG)，其存在形式会随着细胞内代谢的情况而发生相互转变。

氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测试剂盒(DTNB速率比色法)(GSSG Assay Kit)是一种简单易行的氧化型谷胱甘肽(GSSG)检测的试剂盒，其检测原理是先检测还原型谷胱甘肽(GSH)含量，再检测总谷胱甘肽(T-GSH)含量T-GSH减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)：待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB反应，产生稳定黄色的TNB和GSSG；谷胱甘肽还原酶把氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原成还原型谷胱甘肽(GSH)，由GSSG还原成的GSH和样品本身含有的GSH都与发色底物DTNB反应，生成黄色的TNB和GSSG，前后两个反应合并起来，总谷胱甘肽(GSSG+GSH)就相当于一个呈色的限速反应，总谷胱甘肽(T-GSH)含量决定了黄色含量。

通过分光光度法(酶标仪)检测410nm处吸光度，与相应处理的GSH标准比较，分别获得还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)，用T-GSH 减去GSH即得氧化型谷胱甘肽(GSSG)。

该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量，亦可检测还原型谷胱甘肽(GSH)和总谷胱甘肽(T-GSH)含量。

总谷胱甘肽检测试剂盒

50 μl
50 μl
50 μl
b. 加入50微升0.16mg/ml NADPH溶液，混匀。
c. 立即用酶标仪测定A412，每5分钟测定一次或实时测定，共测定25分钟，测得5个数据。(说明：为了简化实验步骤，可以在加入NADPH溶液混匀后25分钟，仅测定一次A412)。如果仪器可以设置温度，把温度设置在25℃，否则就在室温
2. Xiao-Long W, Chuan-Ping Y, Kai X, Ou-Jv Q. Selenoprotein W depletion in vitro might indicate that its main function is not as an antioxidative enzyme. Biochemistry (Mosc). 2010;75(2):201-7.
NADPH。每检测一个样品需50微升0.16mg/ml NADPH。
2. 标准品的准备：
把10mM GSH储备液用蛋白去除试剂S溶液稀释成50μM GSH溶液。然后依次稀释成25、15、10、5、2μM GSH溶液。取
50、25、15、10、5、2μM GSH溶液六个点做标准曲线。注意：由于GSH在蛋白去除试剂S溶液中不太稳定，用蛋白去除
b. 细胞样品的准备。请尽量使用新鲜的细胞进行测定，而不要使用冻存的细胞进行测定。PBS洗涤细胞一次，离心收集
细胞，吸尽上清。加入细胞沉淀体积3倍量的蛋白去除试剂S溶液，即如果细胞沉淀为10微升，则加入30微升蛋白去除
试剂S溶液，充分Vortex。(细胞沉淀的体积可以根据细胞沉淀的重量进行估算。收集细胞前后分别对离心管进行称
等处理，而直接加入适量蛋白去除试剂S溶液进行匀浆)。4℃放置10分钟后，10,000g 4℃离心10分钟，取上清用于总

γ-谷氨酰基转移酶检测试剂盒(速率法)产品说明书

γ- 谷氨酰基转移酶检测试剂盒（速率法）说明书[产品名称] 通用名称：γ- 谷氨酰基转移酶检测试剂盒（速率法）英文名称：γ-Glutamyl Transpeptidase Assay Kit(γ-GGT)[包装规格]2×200Tests；2×400Tests；R1:4×60ml、R2:4×15ml；R1:4×80ml、R2:4×20ml；R1:4×120ml、R2:2×60ml；R1:8×40ml、R2:2×40ml；R1:4×50ml、R2:2×25ml；R1:2×40ml、R2:2×10ml；R1:4×50ml、R2:4×50ml。

[预期用途] 用于体外定量检测人血清中的γ- 谷氨酰基转移酶的活力。

[检验原理]γ-GGTγ-L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺+ 甘氨酰甘氨酸γ-L-谷氨酰甘氨酰甘氨酸+ 2-硝基-5-氨基苯甲酸[主要组成成份]由试剂R1和试剂R2组成。

试剂R1：三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液、甘氨酰甘氨酸；试剂R2：γ-L-谷氨酰-3羧基-4-硝基苯胺。

[储存条件及有效期] 试剂在2℃～8℃无腐蚀性气体中避光储存，若无污染，可稳定至失效期。

有效期12个月。

开瓶后2℃～8℃可稳定30天。

备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。

[适用仪器]日立7170、奥林巴斯AU640、贝克曼LX-20全自动生化分析仪。

[样本要求]使用新鲜的血清。

不可使用已被污染的样本。

[检验方法]（1）双试剂无需配制，直接使用。

（2）试验条件：样本（S）：10 µl试剂1(R1) ：160 µl 试剂2（R2）：40 µl温度：37 ℃测定类型：速率法主波长：405 nm 副波长：505 nm 反应方向：上升方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后1分钟至3分钟之△A/min 。

还原型谷胱甘肽（GlutathioneReduced,GSH）含量测定试剂盒使用说明

还原型谷胱甘肽（GlutathioneReduced,GSH）含量测定试剂盒使用说明还原型谷胱甘肽（Glutathione Reduced,GSH）含量测定试剂盒使用说明货号:BC1170常量法（50T/48S）一、试剂盒组成：试剂Ⅰ液体1瓶50ml（4℃保存）试剂Ⅱ液体1瓶50ml（4℃保存）试剂Ⅲ液体1瓶15ml（4℃避光保存）标准品粉末1支10mg（4℃避光保存）说明书一份二、实验原理谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）组成的天然三肽，是一种含巯基（—SH）的化合物，广泛存在于动物组织、植物组织、微生物和酵母中。

谷胱甘肽能和5,5’-二硫代-双-（2-硝基苯甲酸）（5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基苯甲酸和谷胱甘肽二硫化物（GSSG）。

2-硝基-5-巯基苯甲酸为黄色产物，在波长412nm处具有最大光吸收。

因此，利用分光光度计法可测定样品中谷胱甘肽的含量。

三、实验仪器分析天平、微量匀浆器（规格2ml）、低温离心机、水浴锅、移液器、可见分光光度计、1ml比色皿。

四、操作步骤1、样品的处理组织处理新鲜组织首先用PBS冲洗2次，然后称取动物组织或者植物组织0.1g。

加入用试剂Ⅰ润洗过的匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入1ml试剂Ⅰ（组织/试剂Ⅰ比例保持不变即可），迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000rpm4℃离心10min；取上清液放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。

血液处理血浆：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，吸取上层血浆到另一支试管中，加入等体积的试剂Ⅰ,4℃，8000g离心10分钟,将上清移入新的试管中放置于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。

血细胞：将收集的抗凝血于4℃，600g离心10分钟，弃去上层血浆用3倍体积的PBS 清洗3次（用PBS重悬血细胞，600g离心10分钟），加入等体积试剂Ⅰ，混匀后4℃放置10分钟，8000g离心10分钟，吸取上清放于4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存10天）。

谷胱甘肽还原酶检测试剂盒

GSSG。1 U=1000 mU。
c. 对于谷胱甘肽还原酶：1mU/ml＝1nmol NADPH/min/ml＝(A340/min)/0.00622 即相当于：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]=[A340/min(sapmle)－A340/min(blank)]/0.00622 注：[检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]的单位为mU/ml。
如果A340/min(sapmle)＝0.0255，A340/min(blank)＝0.0006，那么 [检测体系中谷胱甘肽还原酶活力]= (0.0255-0.0006)/0.00622=4.0mU/ml
[样品中谷胱甘肽还原酶活力]= 4.0mU/mlX10X20/(0.5mg/ml)=1.6U/mg(蛋白)
注意事项：
¾ 本试剂盒检测时牵涉到氧化还原反应，所有氧化剂或还原剂都会干扰本试剂盒的测定。另外，硫酸钠、硫酸铵和铁氰化物都会干扰本试剂盒的测定。请尽量避免。
¾ 样品可以立即测定，也可以-70℃冻存待以后测定。 ¾ 一定要严格控制反应时的温度，否则会引起较多误差。 ¾ NADPH不太稳定，要严格按照后续说明操作，谨防失活。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
产品编号 S0055
谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
产品名称谷胱甘肽还原酶检测试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 谷胱甘肽还原酶检测试剂盒(Glutathione Reductase Assay Kit)是一种简单易行的通过紫外比色来检测细胞、组织或其它样品中谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase)活性的试剂盒。谷胱甘肽还原酶可以还原氧化型谷胱甘肽(GSSG)生成还原型谷胱甘肽(GSH)。谷胱甘肽还原酶在许多组织中都有分布，可以维持细胞内充足的还原型谷胱甘肽(GSH)水平。GSH可以清除自由基和一些有机过氧化物，或作为谷胱甘肽氧化酶(Glutathione peroxidase)的底物来清除一些过氧化物。

谷胱甘肽还原酶测定试剂盒(谷胱甘肽底物法)产品技术要求jiuqiang

谷胱甘肽还原酶测定试剂盒（谷胱甘肽底物法）适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清谷胱甘肽还原酶的含量。

1.1 包装规格包装规格见表1。

表1 包装规格1.2 主要组成成分主要组成成分见表2。

表2 主要组成成分2.1 外观试剂1a为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂1b为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂2为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；质控品为无色或浅黄色粉末状物质，复溶后为无色或浅黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

试剂盒标签标识清晰，外包装完整无损。

2.2 净含量液体试剂的净含量应不少于标称量。

2.3 试剂空白吸光度2.3.1 试剂空白吸光度A340nm下测定空白吸光度应≤1.5000。

2.3.2 试剂空白吸光度变化率A340nm下测定试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤ 0.0100。

2.4 准确度与已上市产品进行比对试验：在[12，184] U/L区间内，相关系数r≥0.975，在[12，50] U/L区间内测定的绝对偏差应不超过±7.5 U/L，在(50，184]U/L区间内测定的相对偏差应不超过±15%。

2.5 分析灵敏度样本浓度为70U/L时，其吸光度变化率应不超过0.5000。

2.6 线性范围在[12，184] U/L区间内，线性相关系数r≥0.990，在[12，50]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±7.5U/L，在(50，184] U/L区间内线性相对偏差应不超过±15%。

2.7 测量精密度2.7.1 重复性使用高、低不同浓度的血清样本或质控品重复测定10次，其测定值的变异系数（CV％）应不大于10％。

2.7.2 批间差随机抽取三批试剂盒的批间相对极差（R）应不大于10%。

2.8 瓶间差试剂1b、试剂2、质控品的瓶间差应≤10%。

谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定试剂盒说明书

谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义：GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。

GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。

GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，另外GR还参加抗坏血酸—谷胱甘肽循环途径。

测定原理：GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，相反NADP+在该波长无汲取峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保管。

试剂二：粉剂×2支，20℃保管。

临用前加入1.2mL蒸馏水，混匀。

试剂三：粉剂×2支，20℃保管。

临用前加入0.6mL蒸馏水，混匀。

粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

操作步骤：1.分光光度计/酶标仪预热30min，调整波长到340nm，蒸馏水调零。

2.试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。

还原型谷胱甘肽检测试剂盒(DTNB速率比色法)

还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)简介：谷胱甘肽(glutathione ，GSH)存在于几乎身体的每一个细胞，参与细胞许多功能活动，是一种氧自由基消除剂。

谷胱甘肽是研究活性氧和自由基的重要指标，亦是机体氧化物牵累的重要指标。

还原型谷胱甘肽(GSH)检测试剂盒(DTNB 速率比色法)(Glutathione Assay Kit)是一种简单易行的检测还原型谷胱甘肽的试剂盒，其检测原理是待测样品中的还原型谷胱甘肽(GSH)与发色底物DTNB 反应，产生稳定黄色的TNB 和GSSG ，获得样品的GSH 含量。

该试剂盒可用于检测血浆、血清、组织、细胞等样品中还原型谷胱甘肽(GSH)含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：操作步骤(仅供参考)：1、配制GSH 标准储存液：取10mg 还原型谷胱甘肽(GSH)标准加入3.25ml ddH 2O ，溶解并混匀，即为还原型GSH 标准储存液(10mM)。

一部分立即使用，其余适当分装后-20℃保存。

2、配制GSH 检测工作液：按下表配制GSH 检测工作液。

1个样品 10个样品 50个样品 GSH assay buffer 1.6ml 16ml 80ml DTNB 储存液10μl100μl500μl3、配制标准品：注意：由于GSH 标准在蛋白沉淀工作液中不太稳定，用蛋白沉淀工作液配制的GSH 溶液必须新鲜配制后使用，不可冻存后再使用。

4、配制NADPH 工作液：在本试剂盒提供的10mg NADPH 中加入1ml ddH 2O ，溶解并编号名称TO1037 100T Storage试剂(A): 还原型谷胱甘肽(GSH)标准 10mg 4℃ 避光试剂(B): GSH assay buffer 250ml RT 试剂(E): NADPH 10mg -20℃ 避光试剂(F): DMSO 1.5ml RT 避光试剂(G): ddH 2O 50mlRT 避光使用说明书1份混匀，即为NADPH储存液(10mg/ml)。

GssgGsh测定

谷胱甘肽含量测定测定原理：还原型GSH：DTNB能被-SH基团还原，产生等克分子2-硝基-5-巯基苯甲酸。

硝基巯基苯甲酸阴离子呈黄色，在可见光412nm波长处有吸收峰，可用于测定巯基总谷胱甘肽：类上，只不过多了一个辅酶Ⅱ还原体系利用2GSH的氧化还原DTNB生成2TNB+2H+,氧化后的GSH（GSSG）又被NADPH还原；在反应中，NADPH量逐渐减少，TNB量逐渐增加，TNB在412nm光吸收增加速率（△A412/min）与总GSH量呈正比。

由于GSH和GSSG循环交替，周而复始，总量不变，故称循环法。

仪器：分光光度计试剂：1）5%磺基水杨酸2）磷酸盐缓冲液：0.1mol/l 磷酸钾缓冲液PH8.0 含1mmol/l EDTA（分子量372）3）1mmol/l DTNB（分子量396.35）用1%柠檬酸钠溶液配制：0.396354）1%柠檬酸钠溶液5）NADPH（分子量833.4）1mmol/l6) GR酶液（现配现用）：酶标品20ul (NH4)2SO4(3.6M)930ul7）1mmol/L的GSH（分子量307.33）注：分子量：EDTA(372),DTNB(396.35) KH2PO4(136.09) K2HPO43H2O(228.22)样品的处理：取样品，加入５％磺基水杨酸１ml,冰浴迅速研磨匀浆；6000rpm8分钟左右取上清标准曲线的绘制：（由于测GSH和总GSSG共用了同一个反应，可以绘制一条标准曲线）GSH(um) 0 20 40 60 80 1001.0mmol/L GSH(ml)0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25双蒸水0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.250.1mol/L PBS 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0DTNB试剂0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5混匀，5min内412nm比色，以双蒸水调零。

以标准GSH溶液为X轴，相应的吸光度为Y 轴，绘制标准曲线，并求得回归方程样品液GSH测定：试剂测定管空白管待测样品液0.1 0.10.1mol/L PBS 4.4 4.4DNTB 0.5 ------双蒸水——0.5混匀，5分钟内，412nm处读取光密度样品液总谷胱甘肽测定反应体系：0.1ml 样+0.1mlDTNB+0.1mlNADPH+0.05mlGR+0.65mlPBS测△A412=（A412）2—（A412）1对于谷胱甘肽还原酶的用量影响最终测定结果，故每批测定必须同时做标准曲线。