生物多肽工艺流程
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生物多肽工艺流程
一、固相肽合成
(1)投料:树脂加入固相合成仪,加入DCM溶胀,抽干后加入DMF洗涤, 洗涤结束抽干备用。
(2)缩合:将氨基酸用一定体积的DMF容解,加入缩合剂活化后投入固相 合成仪,补充DMF至反应浓度,搅拌反应。
(3)脱除保护基:以Kaiser试剂检测反应程度,反应结束后抽干溶剂,
(6)树脂干燥:树脂在真空干燥箱中室温干燥, 干燥完毕称重, 计算收率。
(7)有机废液回收,集中处理。
(8)清场:操作结束后操作人员及时清场。
二、树脂裂解
(1)配液:按照裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存。
(2)投料:肽树脂加入反应釜中,加入预冷的裂解液,搅拌反应。
(3)出料:裂解结束后放出反应液,抽滤除去树脂并以TFA洗涤。
(1)溶解:操作人员将粗肽溶解,调节PH至工艺规定范围。
(2)过滤:滤去粗肽溶液中不溶物,过滤ACN和纯化水。
(3)配制纯化液:根据工艺内容配制A相(乙腈)和B相(水)。
(4)纯化:在制备型液相上进行纯化,分别接收流份。
(5)检验及返工:对制备流份进行检查,合并合格流份,其他部分根据需 要再次纯化。
DMF洗涤,加入PIP/DMF溶液脱除保护基,以Kaise源自文库试剂检测反应程度,反 应完毕抽干溶剂,DMF洗涤,准备加入下一个氨基酸。
(4)缩合循环:按照树脂序列依次连接氨基酸,按照“脱保护——洗涤— —活化氨基酸——投料缩合——洗涤”步骤进行缩合循环操作,按照氨基酸 序列完成剩余n个氨基酸的缩合。
(5)出料:合成结束之后用IPA和DCM交叉洗涤树脂,完成树脂收缩收缩, 出料至不锈钢托盘。
(4)浓缩:裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积。
(5)析出:浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚)中,搅拌使
析出大量固体
(6)离心:浊液离心,并用预冷的醚洗涤。
(7)粗肽干燥:涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥。
(8)有机废液回收,集中处理。
(9)清场:操作结束后操作人员及时清场。
三、多肽HPLC屯化
(6)废弃流动相按有机废液回收,集中处理。
四、浓缩过滤冻干
(1)浓 缩 : 合 并 滤 液 旋 蒸 除 去 有 机 溶 剂 , 有 机 废 液 回 收 , 集中处理。
(2)过滤:浓缩后水相无菌过滤。
(3)冻干:滤液置冻干机中,设定升温程序冻干。
(4)出箱:出料、加内包。
五、质量检查、入库
工艺流程图如下所示
一、固相肽合成
(1)投料:树脂加入固相合成仪,加入DCM溶胀,抽干后加入DMF洗涤, 洗涤结束抽干备用。
(2)缩合:将氨基酸用一定体积的DMF容解,加入缩合剂活化后投入固相 合成仪,补充DMF至反应浓度,搅拌反应。
(3)脱除保护基:以Kaiser试剂检测反应程度,反应结束后抽干溶剂,
(6)树脂干燥:树脂在真空干燥箱中室温干燥, 干燥完毕称重, 计算收率。
(7)有机废液回收,集中处理。
(8)清场:操作结束后操作人员及时清场。
二、树脂裂解
(1)配液:按照裂解液成分比例配置裂解液,并提前置冰柜中冷藏保存。
(2)投料:肽树脂加入反应釜中,加入预冷的裂解液,搅拌反应。
(3)出料:裂解结束后放出反应液,抽滤除去树脂并以TFA洗涤。
(1)溶解:操作人员将粗肽溶解,调节PH至工艺规定范围。
(2)过滤:滤去粗肽溶液中不溶物,过滤ACN和纯化水。
(3)配制纯化液:根据工艺内容配制A相(乙腈)和B相(水)。
(4)纯化:在制备型液相上进行纯化,分别接收流份。
(5)检验及返工:对制备流份进行检查,合并合格流份,其他部分根据需 要再次纯化。
DMF洗涤,加入PIP/DMF溶液脱除保护基,以Kaise源自文库试剂检测反应程度,反 应完毕抽干溶剂,DMF洗涤,准备加入下一个氨基酸。
(4)缩合循环:按照树脂序列依次连接氨基酸,按照“脱保护——洗涤— —活化氨基酸——投料缩合——洗涤”步骤进行缩合循环操作,按照氨基酸 序列完成剩余n个氨基酸的缩合。
(5)出料:合成结束之后用IPA和DCM交叉洗涤树脂,完成树脂收缩收缩, 出料至不锈钢托盘。
(4)浓缩:裂解液转入旋转蒸发仪室温浓缩至小体积。
(5)析出:浓缩后的反应液倾入预冷的甲基叔丁基醚(简称醚)中,搅拌使
析出大量固体
(6)离心:浊液离心,并用预冷的醚洗涤。
(7)粗肽干燥:涤完成的粗肽转至真空干燥箱中室温干燥。
(8)有机废液回收,集中处理。
(9)清场:操作结束后操作人员及时清场。
三、多肽HPLC屯化
(6)废弃流动相按有机废液回收,集中处理。
四、浓缩过滤冻干
(1)浓 缩 : 合 并 滤 液 旋 蒸 除 去 有 机 溶 剂 , 有 机 废 液 回 收 , 集中处理。
(2)过滤:浓缩后水相无菌过滤。
(3)冻干:滤液置冻干机中,设定升温程序冻干。
(4)出箱:出料、加内包。
五、质量检查、入库
工艺流程图如下所示