DL-苹果酸检测方法介绍—科标检测
DL苹果酸检测方法介绍科标检测
DL －苹果酸检测方法介绍——科标检测OHOOH HO OC 4H 6O 5科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍：【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸及DL－苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
苹果酸、柠檬酸含量测定方法(HPLC)
苹果酸、柠檬酸含量的测定（HPLC法）1）原理苹果酸、柠檬酸在酸性缓冲液中，利用反相键合色谱法将其从样品基质中分离出来，根据该类物质在紫外波长下的吸收进行定性和定量分析。
2）试剂1）溶剂：水，过滤后的二次蒸馏水2）流动相：0.5%的H3PO4/KH2PO4缓冲液，PH=2.81, 含2.5%乙腈3）苹果酸、柠檬酸标准品；纯度99.2%和99.5%4）苹果酸、柠檬酸标准溶液分别准确称取苹果酸、柠檬酸标准品0.2g 和0.02g ，精确至0.0001g，用过滤后的二次蒸馏水将标准品溶解，转移、定容于50ml容量瓶中，混匀后贴标签备用。
5）苹果酸、柠檬酸标准工作溶液分别将上述标准品贮备液以5倍和10倍比例稀释，得到三个不同浓度的系列，在给定的色谱条件下，每一浓度样品进样三次，然后绘制出标准工作曲线。
标准溶液应避光，在0~4℃下贮存，标准液贮存期不超过二个月。
3）仪器所使用的玻璃仪器必须是洁净的。
3.1 液相色谱：单元泵，可变波长检测器，化学工作站。
3.2 色谱柱：ODS反相柱150mm * 4.6mm(ID).5um填充颗粒。
3.3 进样器：20ul微量进样针3.4 色谱条件：流动相：0.5%H3PO4/KH2PO4缓冲液（PH=2.81）；含0.025%乙腈。
流量：1.0ml/min柱温：40℃检测波长：206nm进样量：5ul保留时间：苹果酸2.5min；柠檬酸3.5min以上条件是典型条件，可根据情况对给定参数作适当调整，以确保方法的稳定性和耐用性。
4）测定步骤4.1样品溶液的制备称取浓缩果汁 4.0~5.0g 或清汁10ml，精确至0.01g，用二次蒸馏水将其溶于50ML 容量瓶中，定容至刻度，混匀后，用0.45um滤膜的过滤器将其过滤至样品瓶中，贴上标签备用。
4.2 测定：在以上色谱条件下，运行仪器和测试方法，待基线稳定后，按照标准溶液、样品的顺序进样。
4.3计算根据标准液绘制的标准曲线进行外标法定量，保留时间和响应因子均由标准液确定。
苹果酸检测方法
制Hale Waihona Puke 每 1ml 中约含富马酸 10µg，马来酸 4µg，DL－苹果酸 1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取 20µl，注入液相色谱仪，理论板数按 DL－苹果酸峰计算不低于 2000，富马酸和马来酸及 DL－苹果酸峰的 分离度均应符合规定。 测定法 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml 中约含 1mg 的溶液，作为供试品溶 液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每 1ml 中含富马酸 5µg，马来 酸 2µg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各 20µl 注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保 留时间的 4.5 倍。 供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰， 按外标法以峰面积 计算，其含量分别不得过 1.0％和 0.05％。其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的 0.5
DL－苹果酸检测方法介绍
——恒信检测
O HO O OH OH
C4H6O5 恒信检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪 器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以 下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典 2005 年版二部附录 VI C）为 128℃～132℃。
【鉴别】 （1） 取本品约 0.5g，加水 10ml 使溶解，用氨水调 pH 值至中性，加 1%对氨基苯磺酸溶液 1ml，在沸水浴中加热 5 分钟，加 20%亚硝酸钠溶液 5ml，置水浴中加热 3 分钟，加 4%氢氧化钠溶液 5ml， 溶液应立即呈红色。 （2） 本品的红外光吸收图谱应与 DL－苹果酸对照品的图谱一致 （中国药典 2005 年版二部附录Ⅳ C） 。 【检查】 比旋度 取本品， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 中含 0.2g 的溶液， 依法测定 （中国药典 2005 年版二部附录 VI E） ，比旋度为－0.10～＋0.10。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典 2005 年版二部附录 V D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂， 以 0.005mol/L 硫酸溶液为流动相； 检测波长为 210nm；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释
L-苹果酸gb13737-92
中华人民共和国国家标准GB 13737-92食品添加剂L-苹果酸Food additive L-Malic acid━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1 主题内容与适用范围本标准规定了食品添加剂L-苹果酸的技术要求、试验方法、检验规则和及标志、包装、运输和贮存等本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的L－苹果酸。
该产品主要用作食品的酸度调节剂。
化学名称L-羟基丁二酸分子式：C4H6O5结构式：HO—CH—COOH｜CH2—COOH相对分子质量：134.09(按1989年国际相对原子质量)2 引用标准GB 601 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备GB 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB 613 化学试剂比旋光度测定通用方法GB 6678 化工产品采样总则GB 6682 实验室用水规格GB 8450 食品添加剂中砷的测定方法GB 8451 食品添加剂中重金属限量试验法GB 9728 化学试剂硫酸盐测定通用方法GB 9729 化学试剂氯化物测定通用方法GB 9741 化学试剂灼烧残渣测定通用方法3 技术要求3.1 外观性状:白色结晶或结晶粉末,有特殊的酸味。
3.2 食品添加剂L-苹果酸钾应符合下表要求。
━━━━━━━━━━━━━━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━项目┃指标━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━含量(以C4H6O5计),％≥┃99.0━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━20 ┃比旋光度〔α〕, °┃－1.6～－2.6D ┃━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━硫酸盐(以SO4计),％≤┃0.03━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━氯化物(以Cl计),％≤┃ 0.005━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━砷(以As计),％≤┃ 0.000 2━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━重金属(以Pb计),％ ≤┃ 0.002━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━灼烧残渣,％ ≤┃0.10━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━易氧化物┃合格━━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━澄清度┃合格━━━━━━━━━━━━━━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━4 试验方法除特殊注明外,试验中所用的试剂为分析纯试剂;试验用水应符合GB 6682中三级水规格;试验所需分析用标准溶液、杂质测定用标准溶液以及所用试剂及制品分别按GB 601 GB 602、GB603规定配制。
DL-苹果酸
DL －苹果酸PingguosuanMalic AcidOHOOH HO OC 4H 6O 5 134.09[617-48-1]本品为(RS)-(±)-羟基丁二酸，按无水物计算，含C 4H 6O 5不得少于99.0％。
【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸及DL －苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
食品添加剂 L-苹果酸标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品添加剂L-苹果酸1 范围本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的食品添加剂L-苹果酸。
2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1 化学名称L-羟基丁二酸2.2 分子式C4H6O52.3 结构式2.4 相对分子质量134.09（按2007年国际相对原子质量）3 技术要求3.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求3.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标附录A检验方法A.1 警示试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。
操作者应采取适当的安全和健康措施。
A.2 一般规定本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。
试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3 鉴别试验A.3.1 试剂和材料A.3.1.1 氨水溶液：2+3。
A.3.1.2 对氨基苯磺酸溶液：10 g/L。
A.3.1.3 亚硝酸钠溶液：200 g/L。
A.3.1.4 氢氧化钠溶液：40 g/L。
A.3.2 鉴别方法A.3.2.1 苹果酸氨盐呈色试验称取0.5 g试样，精确至0.01 g，置于50 mL试管中，加入10 mL水溶解。
用氨水溶液中和至中性，加入1 mL对氨基苯磺酸溶液，在沸水浴中加热5 min。
加入5 mL亚硝酸钠溶液，再置于水浴加热3 min 后，加入5 mL氢氧化钠溶液，试验溶液应立即呈红色。
A.3.2.2 旋光特性试验试验方法同A.5，试样水溶液应呈左旋特性。
A.4 L-苹果酸(C4H6O5)含量的测定A.4.1 方法提要以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定试样水溶液，根据氢氧化钠标准滴定溶液的用量，计算以C4H6O5计的总酸含量为L-苹果酸含量。
A.4.2 试剂和材料A.4.2.1 无二氧化碳的水。
苹果酸和柠檬酸的测定报告 (1)
生物仪器分析课程实验报告姓名：开课时间：2016－2017学年第 2学期授课教师：一、实验目的1、了解液相色谱仪的基本原理、结构及使用注意事项。
2、掌握液相色谱的操作方法。
二、实验原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography,简称HPLC）又叫做高压或高速液相色谱，是色谱法的一个重要分支。
它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
果汁中含有多种有机酸，苹果酸和柠檬酸是果汁中重要的有机酸。
样品经离心及过滤后，直接注入反相液相色谱体系，以磷酸二氢铵为流动相，经分离后采用紫外检测器在210nm处外标法定量分析。
三、实验简要步骤（最好以流程图形式表达）1、标准溶液的配制：分别准确称取100mg苹果酸及柠檬酸标准标准品并用超纯水定容至100mL，配制成1000mg/L的贮备液。
然后分别吸取上述溶液2mL、4mL、8mL、10mL定容到10mL（相当于浓度200mg/L、400mg/L、800mg/L、1000mg/L），配制标准品混合溶液；2、样品的处理：将样品经0.45μm水相微孔滤膜过滤后备用；3、流动相的配制及过膜：0.05mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节至pH=2.5）配制，并过膜，脱气；4、高相液相色谱仪操作流程：1）开机顺序：点击电脑图标，听到哔哔两声则说明仪器和LCsolution工作站已连接上。
（关机顺序完全相反）2）柱平衡排气（Purge）：使用前按A泵、B泵和进样器的Purge键进行自动排气排杂。
3）流动相选择事先处理好的无机相0.05mol/L磷酸二氢铵在A泵输送。
4）工作站LCsolution中的系统设置及开启①在LCsolution中，点击“Normal”，对时间程序和结束时间（通过单标保留时间定性，第一次设置时间可设置久一点）、泵（Pump）、柱温（Oven）、总流速（Total Flow）、B泵浓度（Pump B Conc）进行设置；②点击高级设置“Advanced”，选择泵“Pump”，选择二元梯度洗脱模式、对A泵B泵流速进行详细设置；③选择“PDA”，打开所需要的检测灯（Lamp）、检查波长（要包括所检验的波长，紫外区范围190~1100nm）；④设置好之后，保存检测方法（Save Method File As..），再下载（点击“DownLord”）,然后开始运行。
l-苹果酸质量标准
l-苹果酸质量标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：l-苹果酸，英文名为l-Malic acid，是一种广泛存在于自然界中的有机酸，常见于水果和植物中。
l-苹果酸是苹果和其他水果中的主要成分之一，具有许多重要的生物学功能和应用价值。
在食品工业中，l-苹果酸被广泛用于调味剂、酸味剂、抗氧化剂和蓄电剂等方面。
为了确保l-苹果酸的质量和安全性，各国纷纷制定了相应的质量标准，以规范l-苹果酸的生产和使用。
一、l-苹果酸的生产l-苹果酸可以通过化学合成和生物发酵两种方式生产。
化学合成主要采用马来酸和乳酸为原料，经过一系列的反应制得l-苹果酸。
而生物发酵则是通过细菌或真菌发酵产生l-苹果酸，这种方法更环保和可持续，受到越来越多生产商的青睐。
1.外观：l-苹果酸应为无色晶体或结晶性粉末，无明显杂质。
2.纯度：l-苹果酸的纯度应在99.0%以上，水分含量应在2.0%以下。
3.重金属：l-苹果酸中不得检出铅、镉、汞等重金属及其化合物。
4.微生物指标：l-苹果酸中不得含有大肠杆菌、霉菌和酵母菌等微生物。
5.残留溶剂：l-苹果酸不得使用禁用的有机溶剂进行生产，且不得检出有机溶剂残留。
6.其他有害物质：l-苹果酸中不得含有对人体有害的物质，如重金属离子、农药残留、放射性物质等。
1.食品工业：l-苹果酸是一种天然有机酸，被广泛用于食品工业中作为酸味剂、酸度调节剂和防腐剂等，能够改善食品的口感和保质期。
2.医药工业：l-苹果酸具有抗氧化、抗菌和抗病毒等生物活性，被用于医药工业中制备药品或保健品。
3.化妆品工业：l-苹果酸被广泛添加在化妆品中，具有保湿、抗氧化和美白等功效，能够改善肌肤质地。
l-苹果酸虽然被认为是一种相对安全的食品添加剂，但过量摄入也会对健康造成影响。
长期大量食用l-苹果酸可能会引发食道炎、肠胃炎等消化系统疾病，应注意适量食用。
第二篇示例：l-苹果酸是一种常见的有机酸，具有多种生物活性和医疗应用价值，广泛应用于食品添加剂、医学和农业领域。
苹果酸的检验
定量检验1.酸碱滴定法取约2g苹果酸，精密称定。
在一只三角瓶中溶于40ml新沸过的冷水中，加入酚酞指示剂，用1mol/1NaOH滴定至开始出现粉红色（持续时间不低于30s）。
1ml1mol/1NaOH溶液相当于67.04mg C4H6O5。
美国药典采用此法。
2.紫外分光光度法试剂：（1）硫酸96%，分析纯，不含硝酸盐。
（2）2，7-萘二酚溶液：1g2，7-萘二酚溶于100ml96%硫酸中。
操作：取1ml样品溶液（苹果酸浓度控制在0.05～0.8mg/1）加入6ml试剂（1）中，加入0.1ml试剂（2），在100℃下水浴加热15～20min，冷至接近室温后，在385nm紫外光下比色测定。
同时以空白水样同法处理，作仪器调零之用。
用纸层定性后的样品，将显色斑点剪下，用1ml水洗脱，也可采用此法测定。
根据上述在385nm下测得的吸光度值，可以从标准曲线上查得苹果酸含量。
3.荧光分光光度法试剂：（1）80%硫酸（2）地衣酚溶液：称取0.250g地衣酚，加少许95%硫酸溶解后，转到50ml 溶量瓶中，并用硫酸定容至刻度。
（3）苹果酸标准溶液：称取苹果酸标准样0.1028g，用去离子水溶解后转入100ml容量瓶中，并用水定容至刻度。
操作：在25ml干燥的带塞比色管中，加入1ml试剂（2），并加入待试溶液10μL(浓度不超过3g/1)。
同时用水和20μL试剂30min显色。
取出放冷，再用冰浴冷却后，用80%硫酸稀释至刻度，摇匀。
在最大激活光波长（369nm）和吸收光波长（445nm）下测定荧光强度。
测定时以水样调零，以标准试剂调在45±0.5荧光强度。
根据荧光强度，可以标准曲线上查得苹果酸含量。
富马酸和马来酸含量测定美国药典规定，苹果酸除了用滴定法测定酸含量以外，还需测定富马酸和马来酸含量，因为化学合成法或发酵法生产的苹果酸中，都可能有这两种酸存在。
测定采用极普法，方法如下。
1.试剂（1）电解质溶液：74.5gKCl溶于1000ml容量瓶的500ml水中，加100ml盐酸，再加水至刻度，摇匀。
【精品文档类】知名企业苹果酸的技术要求完整版
L－苹果酸GB 13737-9Food additive L-Malic acid1、主题内容与适用范围本标准规定了食品添加剂L-苹果酸的技术要求、试验方法、检验规则和及标志、包装、运输和贮存等本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的L－苹果酸。
该产品主要用作食品的酸度调节剂。
化学名称 L-羟基丁二酸分子式：C4H6O5结构式：HO-CH-COOH ｜ CH2-COOH相对分子质量：134.09 (按1989年国际相对原子质量) 2、引用标准GB 601 化学试剂滴定分析(容量分析)用标准溶液的制备GB 602 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备GB 603 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB 613 化学试剂比旋光度测定通用方法GB 6678 化工产品采样总则GB 6682 实验室用水规格GB 8450 食品添加剂中砷的测定方法GB 8451 食品添加剂中重金属限量试验法GB 9728 化学试剂硫酸盐测定通用方法GB 9729 化学试剂氯化物测定通用方法GB 9741 化学试剂灼烧残渣测定通用方法3、技术要求3.1 外观性状：白色结晶或结晶粉末，有特殊的酸味。
3.2 食品添加剂L-苹果酸钾应符合下表要求。
4、试验方法除特殊注明外，试验中所用的试剂为分析纯试剂；试验用水应符合GB 6682中三级水规格；试验所需分析用标准溶液、杂质测定用标准溶液以及所用试剂及制品分别按GB 601 GB 602、GB603规定配制。
4.1 鉴别试验4.1.1 苹果酸氨盐呈色试验4.1.1.1 试剂和溶液 a.氨水溶液：2→5；b.对氨基苯磺酸溶液：10g/L；c.氢氧化钠溶液：40g/L；d. 亚硝酸钠溶液：200g/L。
4.1.1.2 分析步骤称取试样0.5g，精确至0.01g。
置于50mL试管中，加水10mL溶解。
用氨水溶液中和至中性，加入对氨基苯磺酸溶液1mL，在沸水浴中加热5min。
加入亚硝酸钠溶液5mL，再置于水浴加热3min后，加入氢氧化钠溶液5mL，试液应立即呈红色。
蔬菜水果果酸的测定原理
蔬菜水果果酸的测定原理蔬菜水果中的果酸测定原理主要有两种方法，一种是直接测定果酸含量的方法，另一种是间接测定果酸含量的方法。
直接测定果酸含量的方法常用的有高效液相色谱法（HPLC）和滴定法。
高效液相色谱法（HPLC）是一种基于化学物质在流动相中的溶解度和吸收特性来分离和检测的方法。
它通过将样品与流动相一起注入到色谱柱中，然后使用高压将样品从色谱柱中排出，通过检测器检测出样品中果酸的峰值，并根据标准曲线来计算果酸的含量。
滴定法是一种常用的量化分析方法，它通过向含果酸的样品中滴加知量碱溶液，当果酸完全中和后，溶液中的酸性物质就会转变为中性物质，此时使用酸碱指示剂可以显示出溶液的中和点。
通过反应所需的滴定液的体积与标准溶液所需的滴定液的体积之差，可以计算出果酸的含量。
间接测定果酸含量的方法常用的有蓝色高锰酸钾法和PH差法。
蓝色高锰酸钾法是一种常用的氧化还原反应方法，它通过将样品和蓝色高锰酸钾溶液混合，在酸性条件下，果酸会被氧化为二氧化碳和水，同时高锰酸钾也会被还原为锰离子，当果酸完全被氧化后，溶液的颜色由深紫变为浅紫或无色。
然后使用标准高锰酸钾溶液进行反应，根据标准曲线来计算果酸的含量。
PH差法是一种测定酸性物质含量的方法，它通过测定样品在不同pH值下的酸性物质含量的变化来计算果酸的含量。
首先将样品分别加入不同pH值的缓冲溶液中，然后测定样品溶液的酸度差异，根据酸度差异和标准曲线来计算果酸的含量。
总的来说，蔬菜水果果酸的测定原理主要通过直接测定和间接测定两种方法来获取。
直接测定方法包括HPLC和滴定法，通过检测样品中果酸的含量来计算。
间接测定方法包括蓝色高锰酸钾法和PH差法，通过氧化还原反应和酸度变化来计算果酸的含量。
这些方法可以为蔬菜水果的品质评价和加工过程中提供重要的参考。
DL-苹果酸内控质量标准
目的
制订DL-苹果酸内控质量标准，为其质量评价提供依据。
适用范围
适用于研发品种在药品注册批件获得前使用。
职责
质量管理部、研究与开发部对本技术标准制订、审核、批准及执行负责。
规程目录
1内控质量标准制订依据
2经批准的供应商
3 规格和用途
4取样及检验方法
5定性和定量限度要求
6贮存条件和注意事项
7有效期
正文
1内控质量标准制订依据
依据《中国药典》2015年版第四部P5519~520。
2经批准的供应商
经批准的供应商详见本公司“已批准物料采购供应商目录”现行文件。
采购人员不得向其它未经质量审计及批准的供应厂家进行采购。
3规格和用途
3.1规格：药用辅料。
3.2用途：用于口服液的生产。
4取样及检验方法
4.1取样
4.1.1取样步骤：详见“＊物料取样程序”。
4.1.2取样数量：从总件数中抽取约50g作为理化检验样品、约15g作为微生物限度检查用样品，约40g作为该批物料的留样。
4.2检验方法：详见“＊L-苹果酸检验操作规程”。
5定性和定量限度要求
6贮存条件和注意事项
遮光，密封，在阴凉处保存。
7有效期
24个月。
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苹果酸含量的测定苹果酸含量
学生姓名：学号：专业：应用化学年级班级：12级C班课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日0.02mo l/L KH2PO4溶液的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。
计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g苹果酸样品的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。
纯甲醇CH3OH(M=34)2实验所得高效液相谱图：高效液相图特殊实验条件泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图山西谱图山东谱图甘肃谱图浓度泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图特殊实验条件标准图谱山西谱图山东图谱甘肃图谱3苹果酸含量计算实验1：实验2：苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml苹果产地：山西样品称取量：1.0903g容量瓶体积：25ml实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，模式为二元高压梯度。
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力17.0MPa最小压力0.0MPa。
怎样做葡萄酒苹果酸测定
怎样做葡萄酒苹果酸测定一，原理：龟兔赛跑的故事大家都听说过，纸层析苹果酸测定就是葡萄酒中酸的“龟兔赛跑”。
想把一大群龟兔分开，最好的办法就是举行赛跑比赛。
枪响！大群兔子跑开了，龟都落在了起点附近。
假如加入一群犬，犬比兔子还快，会跑得更远。
层析中，葡萄酒中的酒石酸就是龟，苹果酸就是兔子，乳酸琥珀酸就是犬。
犬比兔子跑得快，但也快不多，要想分的开一点，就要延长比赛时间和距离。
层析也一样，纸长一点（30厘米左右），展开时间也长一点（4-6小时），酸才能分得开。
层析过程好似赛跑过程。
比喻是为了理解，并不一定精准。
二，材料准备；1，高30公分的层析缸；（见图）如果没有现成的，自制可用5毫米厚的玻璃，裁成31厘米长、13厘米宽的4块做成方形筒体，14厘米*14厘米大的一块做底板。
用玻璃胶粘结。
再在口部粘两块可以挂层析纸的凹槽板就可以了。
（见下图）2，展开剂；买正丁醇一瓶（500毫升，参考价15元），冰乙酸一瓶（500毫升，参考价18元），溴酚蓝一瓶（25克参考价29元）和苹果酸一瓶（100克参考价15元）。
按溴酚蓝0.1克、正丁醇100毫升、乙酸50毫升配好溶液备用。
3，苹果酸标准液按蒸馏水100毫升，苹果酸0.5克配方备用。
4，滤纸：买60厘米*60厘米的普通滤纸（参考价1-2元一张），裁成30厘米长，宽度按瓶的口径或实际需要剪裁。
这种未经酸化的普通滤纸斑点拖尾会比较长，会影响图的质量。
见下图：未经酸化的滤纸苹果酸斑点长达10厘米经过酸化后，斑点缩减至4厘米滤纸买来后，可以先用苹果酸试一下展开，如果展开剂里展开5.5小时，其斑点长度在6厘米左右，则不必进行酸化处理，因为酸化比较麻烦，特别是丙酮受控制不太好买。
有时碰巧买到质量比较好的滤纸就可以省却酸化这一步。
上图可以看出，2010年购入的滤纸质量较好，虽然其苹果酸斑点较长，但也可以使用。
正丁醇和冰乙酸一般化工商店有售，容易买到。
滤纸、溴酚蓝淘宝网上有售，键入“600*600滤纸”“DL苹果酸”和“溴酚蓝”就找到了。
dl苹果酸的标准
DL苹果酸的标准
DL苹果酸是一种食品添加剂，其化学名称为3,4-二羟基戊酸，常用作酸味剂和调味剂。
目前，国际上对于DL苹果酸的标准主要包括以下几个方面：
1. 化学成分标准：DL苹果酸的化学成分应符合相应的规定，其纯度应不低于98.5%。
2. 感官品质标准：DL苹果酸的感官品质应符合相应的规定，其酸度、口感、香气等方面应符合要求。
3. 安全性标准：DL苹果酸的安全性应符合相应的规定，其含量应符合相应的食品安全标准，不得对人体造成危害。
4. 包装标准：DL苹果酸的包装应符合相应的规定，其标签、标识等应符合相应的标准。
需要注意的是，不同国家或地区对于DL苹果酸的标准可能存在一定的差异，具体标准以当地法规为准。
化妆品中果酸成分鉴别及含量测定方法doc
化粧品中果酸成分鑑別及含量測定方法Identification and Assay forα-Hydroxy Acids in Cosmetics1.適用範圍：本方法適用於化粧品中含乙醇酸(glycolic acid)、蘋果酸(dl-malic acid)、乳酸(lactic acid)、檸檬酸(citric acid)等果酸之鑑別及含量測定。
2.檢驗方法：高效液相層析法(high performance liquid chromatography,HPLC)2.1. 裝置：高效液相層析儀2.1.1. 檢出器：光二極體列陣檢出器(photodiode array detector)。
2.1.2. 層析管：Capcell PAK C18 UG120 S-5μm，內徑4.6 mm ×250mm或同級品。
2.2. 試藥：甲醇採HPLC級，磷酸及氨水採用試藥特級，乙醇酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸對照用標準品。
2.3. 器具及材料：2.3.1. 容量瓶：20 mL、100 mL、1000 m L，Pyrex材質。
2.3.2. 濾膜：孔徑0.45 μm，Nylon材質。
2.4. 移動相溶液之配製：取磷酸20 mL，加水至1000 mL，並以氨水調整pH值至2.0，以濾膜過濾，取濾液，供作移動相溶液。
2.5. 標準溶液之配製：分別取適量乙醇酸、蘋果酸、乳酸、檸檬酸對照用標準品，精確稱定，以去離子水溶解並定容，供作標準原液。
使用時再以去離子水稀釋至25~500 μg/mL。
2.6. 檢液之調製：取檢體約1 g，精確稱定，以去離子水溶解並定容至20 mL，於超音波振盪30分鐘，置室溫冷卻，以濾膜過濾，濾液供作檢液。
2.7. 鑑別試驗及含量測定：取檢液及標準溶液各20 L，分別注入高效液相層析儀，參照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之。
並依下列計算式，求出檢體中各果酸成分之含量(mg/g)：C⨯V檢體中各果酸成分之含量(mg/g) =M⨯103C：由標準曲線求得檢液中各果酸成分之濃度(μg/mL)M：取樣分析檢體之重量(g)V：檢體定容之體積(mL)高效液相層析測定條件：光二極體列陣檢出器：波長210 nm。
苹果酸的检验
定量检验1.酸碱滴定法取约2g苹果酸，精密称定。
在一只三角瓶中溶于40ml新沸过的冷水中，加入酚酞指示剂，用1mol/1NaOH滴定至开始出现粉红色（持续时间不低于30s）。
1ml1mol/1NaOH溶液相当于67.04mg C4H6O5。
美国药典采用此法。
2.紫外分光光度法试剂：（1）硫酸96%，分析纯，不含硝酸盐。
（2）2，7-萘二酚溶液：1g2，7-萘二酚溶于100ml96%硫酸中。
操作：取1ml样品溶液（苹果酸浓度控制在0.05～0.8mg/1）加入6ml试剂（1）中，加入0.1ml试剂（2），在100℃下水浴加热15～20min，冷至接近室温后，在385nm紫外光下比色测定。
同时以空白水样同法处理，作仪器调零之用。
用纸层定性后的样品，将显色斑点剪下，用1ml水洗脱，也可采用此法测定。
根据上述在385nm下测得的吸光度值，可以从标准曲线上查得苹果酸含量。
3.荧光分光光度法试剂：（1）80%硫酸（2）地衣酚溶液：称取0.250g地衣酚，加少许95%硫酸溶解后，转到50ml 溶量瓶中，并用硫酸定容至刻度。
（3）苹果酸标准溶液：称取苹果酸标准样0.1028g，用去离子水溶解后转入100ml容量瓶中，并用水定容至刻度。
操作：在25ml干燥的带塞比色管中，加入1ml试剂（2），并加入待试溶液10μL(浓度不超过3g/1)。
同时用水和20μL试剂30min显色。
取出放冷，再用冰浴冷却后，用80%硫酸稀释至刻度，摇匀。
在最大激活光波长（369nm）和吸收光波长（445nm）下测定荧光强度。
测定时以水样调零，以标准试剂调在45±0.5荧光强度。
根据荧光强度，可以标准曲线上查得苹果酸含量。
富马酸和马来酸含量测定美国药典规定，苹果酸除了用滴定法测定酸含量以外，还需测定富马酸和马来酸含量，因为化学合成法或发酵法生产的苹果酸中，都可能有这两种酸存在。
测定采用极普法，方法如下。
1.试剂（1）电解质溶液：74.5gKCl溶于1000ml容量瓶的500ml水中，加100ml盐酸，再加水至刻度，摇匀。
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DL －苹果酸检测方法介绍
——科标检测
OH
O
OH HO O
C 4H 6O 5
科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍：
【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。
本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。
熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。
【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。
（2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。
【检查】
比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10︒～＋0.10︒。
有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10µg，马来酸4µg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20µl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸
及DL－苹果酸峰的分离度均应符合规定。
测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中含富马酸5µg，马来酸2µg的溶液，作为对照品溶液。
精密量取上述两种溶液各20µl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的4.5倍。
供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量分别不得过1.0％和0.05％。
其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的0.5倍（0.1%）；其它杂质总量不得过对照品溶液中马来酸峰面积的2.5倍（0.5%）。
溶液的澄清度与颜色取本品5.0g，加水25ml，充分振摇使溶解，溶液应澄清无色（中国药典2005年版二部附录IX A B）。
水分取本品，照水分测定法（中国药典2005年版二部附录Ⅷ M）测定，含水分不得过2.0%。
水中不溶物取本品25.0g，加水100ml使溶解，用经100℃恒重的4号垂融坩埚滤过，反复用热水冲洗滤器后，在100℃干燥至恒重，遗留残渣不得过0.1％。
易氧化物取本品0.10g，置100ml蒸发皿中，加水25ml及硫酸溶液（1→20）25ml使溶解并摇匀，置20±1℃水浴中冷却，加入0.02mol/L高锰酸钾滴定液5ml,溶液的颜色应在3分钟内不消失。
氯化物取本品1.0g,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ A），与标准氯化钠溶液5.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.005％）。
硫酸盐取本品1.0g,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ B），与标准硫酸钾溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.03％）。
砷盐取本品1.0 g,加盐酸5ml与水23ml,依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ J第一法），应符合规定（0.0002％）。
炽灼残渣不得过0.1％（中国药典2005年版二部附录Ⅷ N）。
重金属取本品1.0g，加氢氧化钠试液5ml与水20ml使溶解，依法检查（中国药典2005年版二部附录Ⅷ H第三法），含重金属不得过百万分之二十。
【含量测定】取本品约1.0g,精密称定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取25ml，置锥形瓶中，加酚酞指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定至显微红色并保持30秒内不褪色。
每1ml氢氧化钠滴
定液（0.1mol/L）相当于6.704mg的C
4H
6
O
5。