【药学】第09章 维生素类药物分析
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第九篇维生素类药物分析 ppt课件
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掌握重点
►1、维生素A的三氯化锑鉴别反应 ►2、维生素A三点矫正法测定含量的原理、方
法与计算 ►3、维生素E的鉴别试验和游离生育酚的检查 ►4、维生素B1的鉴别试验与含量测定方法 ►5、维生素C的结构与性质，鉴别试验和含量
测定方法
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45
PPT课件
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含量测定
► 采用正相HPLC法 ► 根据样品纯度，ChP采用三种方法 ► 第一法（适用于无VitA醇及其它杂质干扰）
对照品（ D2 、D3 ）+异辛烷→超声助溶，充氮，避 光0℃保存 内标液：邻苯二甲酸甲酯-正己烷溶液 色谱柱：硅胶柱 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm
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鉴别
►与硝酸反应——维生素E与硝酸共热，显橙红 色（生育红）
►水解后氧化反应——维生素E在碱性条件下水 解，与联吡啶和三氯化铁作用，显血红色。 在该反应中，维生素E水解游离出生育酚，还 原Fe2+→Fe3+ ，后者与联吡啶生成血红色配 位离子
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杂质检查
►合成型——检查有关物质（GC） ►天然型——检查生育酚 ►生育酚——采用硫酸铈滴定法
►性质：有强紫外吸收，易被氧化，脂溶性
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
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8
结构特点：
►环己烯+共轭多烯侧链 ►天然VA侧链为全反式 ►天然来源主要是鱼肝油，人工合成醋酸酯，
棕榈酸酯
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鉴别试验
► 三氯化锑反应：维生素A+三氯化锑→显蓝色→ 渐变成紫红色
► 紫外吸收光谱：维生素A的无水乙醇-盐酸溶液 在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热 后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖 锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热， 发生脱水反应所致
维生素类药物分析(SYSH)
返 回9
第一节 维生素A
维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去 氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（ 维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，
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一、结构和性质
R:
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-H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
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（2）波长的选择： ① 1
VitA的max（328nm） ② 2 3
分别在1的两侧各选一点
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第一法 等波长差法
32 8 31 6 34 0 328
A 3校 2 8 3 . 5 正 2 A 2 3 2 A 3 8 1 A 3 6 4
测定对象 VitA醋酸酯
结构分析
CH3
CH3
CH3 CH3
环己烯
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共轭多 烯侧链
CH3 CH2OR
多异构体 UV 易被氧化
12
1、为一个具有共轭多烯侧链的环己烯 ❖ （1）具有UV吸收
❖ （2）存在多种立体异构化合物 ❖ （3）易发生脱氢、脱水、聚合反应
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2、不稳定性
VitA紫 外 线 、 O2 、 氧 化 剂 环氧化物 [ O]VViittAA酸 醛
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中国药典收载方法
第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸
收度，计算吸收度比值（A/A328 ）
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33
数据处理
如果λmax在326-329nm之间，且A/A328比值未 超过规定值的±0.02，可直接按下式计算含 量：
9第九章 维生素类药物的分析new(药物分析)
淡黄色棱形结晶 57℃~58℃ (棕榈酸酯) 无定型或结晶 28℃～29℃
天然维生素A主要是全反式维生素A
尚有多种其它(多烯顺反)异构体
名 称 维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 新维生素Ac 异维生素Aa 异维生素Ab 形 式 醇 醋酸酯 醇 醋酸酯 醇 醋酸酯 醇 醋酸酯 醇 醋酸酯 醇 醋酸酯 λmax（nm） 325 325.5 328 328 319 320.5 311 310.5 323 323 324 324
CH3
CH3
CH3
CH3
9
8
7
5
6 4
3
CH2OR
1
CH3
2
对酸不稳定，遇Lewis或无水氯化氢乙醇液，可发生脱水反应，生成 脱水维生素A：
酯较稳定。 密封在凉暗处保存外，还需充氮气或加入合适的抗氧剂。
紫外吸收特性 共轭多烯醇的侧链结构，λmax(nm): 325nm～328nm， 可鉴别和含量测定。 与三氯化锑呈色 在无水无醇氯仿中与三氯化锑试剂作用， 生成不稳定的碳正离子，显蓝色，渐变成紫红色。 鉴别、比色法含量测定。
Thiamine Hydrochloride 盐酸硫胺
氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-(2-羟基乙基)噻唑鎓盐酸盐
硫色素反应 噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的氨 基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素，后 者溶于正丁醇中呈蓝色荧光。
CH3 N N NH2 CH2 N ClS CH2CH2OH HCl CH3
Vit A及异构体：
E
1% 1cm
紫外吸收（乙醇）
相对生物 效价 （%）
100 75 24 15 21 24
九章节维生素类药物分析-PPT精选
（二）鉴别试验
VitC[ O]去 氢 抗 坏 血 酸
C H 2O H
H C OH O O
HO
OH
C H 2O H
[O]
H C OH O
O
O
O
1、与AgNO3反应 (ChP2000)
AgN OV it CAg黑 （银镜）
2、与2，6 - 二氯靛酚反应 (ChP2000)
活性最强
*4
1O
32
HO
OH
5、具糖的性质 结构与糖类相似 糖类的显色反应
△H 脱 水 糠糠 醛醛 衍 酚 生 类 显 物
Vi tH C 脱 水 糠 吡 醛 咯 蓝
50℃
6、UV特征
H max nm OHmax nm
VitM
VitPP
三、分析方法
本类药物的分析方法很多，有生 物法、微生物法、化学法和物理化学 法，多依据其生物特性及理化性质进 行，但目前常用的分析方法是化学法 或物理化学法。
第一节 维生素A（Vitamin A）
维生素A包括有维生素A1（视黄醇）、去 氢维生素A（维生素A2 ）和去水维生素A（ 维生素A3）等，其中维生素A1活性最高，维 生素A2的生物活性是维生素A1的30-40%， 维生素A3的生物活性是维生素A1的0.4%，故 通常所说的维生素A系指维生素A1。
2、与三氯化锑反应 取本品适量(约1000单位)，加 1，2-二氯乙烷1m1溶解，加三氯化锑试液4ml，溶液即显 橙红色，逐渐变为粉红色。
3、其它显色反应 维生素D与三氯化铁反应呈橙黄色， 与二氯丙醇和乙酰氯试剂反应显绿色，均可用于鉴别，但 专属性不强。
2， 6二 氯 V 靛 i tC 无 酚色
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
《药物分析》维生素类药物的分析 ppt课件
R=
C
C15H31
2-Cis Neovitamin Aa 2,6-dicis Isovitamin Ab 4-Cis Neovitamin Ab H2 Vit A1 Vit A2 2,4-dicis Neovitamin Ac 去H2O Vit A1 Vit A3 6-Cis Isovitamin Aa 2 ppt课件
精密称取Vit A滴剂0.06126g(标示量50000 I.U./g)，置于25ml量瓶中，加环已烷至刻 度，精密吸取2ml置于另一25ml量瓶中，加 环已烷至刻度，并混匀，置石英比色皿中， 以环已烷为空白，分别于以下波长处测得 吸收度值，试求此滴剂中Vit A为标示量的 百分含量：
λ(nm) 300 316
按WHO规定 VA acetate 效价(I.U./g) 2.907×106 VA alcohol 3.33×106
1g pure VA acetate ≈ 2.907×106I.U.
ppt课件 4
1% 1% E E1 (328 nm) 1530 1cm (325 nm) 1820 cm (环已烷) (异丙醇)
若 A328计算含量
A328 (校正) - A328 100% 在±3%范围，则仍以 A328 A328 (校正) - A328 100% 在-15%～-3%范围， A328 A328 (校正) - A328 100% ＞3%，或＜-15%， A328
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若 则以A325(校正)计算含量 若 则采用第二法
Vit A含量表示 I.U.(international Unit) 国际单位 效价(I.U./g)
按WHO规定 效价(I.U./g) VA acetate 2.907×106 VA alcohol 3.33×106
药物分析：维生素类药物的分析
CH 3
维生素A
（维生素A1、视黄醇）
CH 3 CH 3 CH 3
CH 3 CH 2 OR
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯
维生素A棕榈酸酯
结构分析
CH3 CH3 CH3
共轭多 烯侧链
CH3
CH3 CH2OR
环己烯
UV 多异构体 易被氧化
max
维生素A 325.5
第一法 等波长差法
测定对象: VitA醋酸酯 λ1 = 328nm λ2 = 316nm λ3 = 340nm
等波长差法 校正公式
328 316 340 328
A328校正 3.522 A328 A316 A340
测定波长 300、316、328、340、360
A 328
第二法 3%
－15%
－3%
0
维生素E
CH3 R2 HO R1 O
生育酚
*
*
*
乙酰化（生育酚醋酸酯）
生物效价
右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10 （天然品） （合成品）
R1、R2均为CH3 R1、R2为H和CH3 R1、R2均为H
结构：dl－α－生育酚醋酸酯
CH 3 H3C H 3 C CO O CH 3 O CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
测定原理
☆ 1、杂质的吸收在310～340nm范围内呈一条直线 随波长的增大而吸收度变小
☆ 2、物质对光的吸收具有加和性
即样品各波长的吸收度是维生素A与杂质 吸收度的代数和 选择在三个波长处测定吸光度， 结合校正公式计算A校正，再计算含量
波长（三点）选择 （1） 1 VitA的max（328nm） （2 ） 2 3 分别在1的两侧各选一点 第一法 第二法
药物分析湖南大学第09章维生素类药物的分析
吸光度校正小结
1. 校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的 三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长 范围内杂质的额吸收再一条直线上。
2. 校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。
3. 使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素 A酯或维生素A醇。
1. 测定方法 第一法：直接测定法
① 方法：
如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂 （ 环 己 烷 ） 溶 解 供 试 品 ， 制 成 每 1ml 含 9 ～ 15IU的溶液后直接测定。
在300、316、328、340、360nm处的吸光 度，确定最大吸收波长（328nm）。
适合于纯度高的维生素A醋酸酯。
② 计算：
a. 求E1cm1%
E1% 1cm(样)
注意事项： 反应需在无水、无醇的条件下进行。 • 水可使三氯化锑水解成氯化氧锑 （SbOCl）。 • 乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。
2. 紫外分光光度法
维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶 液在326nm处有最大吸收。
在盐酸催化下加热，发生脱水生成去水维生素A （多一个双键），最大吸收红移，出现3个吸收峰。
CL 标示量 10％ 0
标识 % ） 量 W A 1 （ D 0 1 L 0 9 标 0 W 0识 10 量 0%
A：实测吸光度A238或校正吸光度A238(校正) D：供试品的稀释倍数 L：比色池厚度 W：供试品取用量 W：胶丸的平均内容物重量
1900：维生素A醋酸酯在环己烷溶液中的换算因子
Aλ1(校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：
A1(校)正 A1X1
∴
A 1 ( 校 ) A 正 1 K 1 K K 2 ( 1 ( 3 2 2 ) 1 ) A K 2 K 1 K 1 K 2 ( 2 ( 3 3 2 ) 1 ) K A 2 3 ( K 1 1 K 2 ( 3 ) 1 2 )
1. 校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的 三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长 范围内杂质的额吸收再一条直线上。
2. 校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。
3. 使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素 A酯或维生素A醇。
1. 测定方法 第一法：直接测定法
① 方法：
如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂 （ 环 己 烷 ） 溶 解 供 试 品 ， 制 成 每 1ml 含 9 ～ 15IU的溶液后直接测定。
在300、316、328、340、360nm处的吸光 度，确定最大吸收波长（328nm）。
适合于纯度高的维生素A醋酸酯。
② 计算：
a. 求E1cm1%
E1% 1cm(样)
注意事项： 反应需在无水、无醇的条件下进行。 • 水可使三氯化锑水解成氯化氧锑 （SbOCl）。 • 乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。
2. 紫外分光光度法
维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶 液在326nm处有最大吸收。
在盐酸催化下加热，发生脱水生成去水维生素A （多一个双键），最大吸收红移，出现3个吸收峰。
CL 标示量 10％ 0
标识 % ） 量 W A 1 （ D 0 1 L 0 9 标 0 W 0识 10 量 0%
A：实测吸光度A238或校正吸光度A238(校正) D：供试品的稀释倍数 L：比色池厚度 W：供试品取用量 W：胶丸的平均内容物重量
1900：维生素A醋酸酯在环己烷溶液中的换算因子
Aλ1(校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：
A1(校)正 A1X1
∴
A 1 ( 校 ) A 正 1 K 1 K K 2 ( 1 ( 3 2 2 ) 1 ) A K 2 K 1 K 1 K 2 ( 2 ( 3 3 2 ) 1 ) K A 2 3 ( K 1 1 K 2 ( 3 ) 1 2 )
维生素类药物的分析-药物分析课件
❖ 具有UV吸收
❖ 存在多种立体异构化合物
维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 异维生素Aa
异维生素Ab
m ax
325.5 328 320.5 323
324
相对生物效价
100% 75% 24% 21%
24%
VitA2 VitA3
鲸醇
二、 性质 （一） 共轭多烯侧链 易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂
BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法
立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）
三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波 长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
必需的 一种活性物质。 人体不能合成维生素。
脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM
VitPP
一、
维生素A 结构
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
（一） 为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯
f A325(校正) A325 100% A325
A3 2 5校 正
A325
－3%
0
A3 2 5校 正
3%
第一法与第二法的区别
第一法
第二法
测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇
方法 直接取样，测定 皂化提取，测定
溶剂 环己烷
❖ 存在多种立体异构化合物
维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 异维生素Aa
异维生素Ab
m ax
325.5 328 320.5 323
324
相对生物效价
100% 75% 24% 21%
24%
VitA2 VitA3
鲸醇
二、 性质 （一） 共轭多烯侧链 易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂
BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法
立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）
三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波 长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。
必需的 一种活性物质。 人体不能合成维生素。
脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM
VitPP
一、
维生素A 结构
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
（一） 为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯
f A325(校正) A325 100% A325
A3 2 5校 正
A325
－3%
0
A3 2 5校 正
3%
第一法与第二法的区别
第一法
第二法
测定对象 维生素A醋酸酯 维生素A醇
方法 直接取样，测定 皂化提取，测定
溶剂 环己烷
《药物分析》第九章维生素类药物的分析 ppt课件
维生 A S素 b3 C 三 l 氯 甲 兰 烷
在max（620nm）处，测 定吸光度，标准曲线法定量
（三）高效液相色谱法 RP—HPLC法同时测定人血清
中维生素A和维生素E的含量。
例1. 维生素A含量用生物效价表示， 其效价单位是
A. IU B. g C. ml D. IU/g E. IU/ml
A328
否 A328
皂化
-15%
-3% 0
3%
（2）第二法 等吸光度法 皂化法，适用于维生素A醇。 溶剂：异丙醇
乙醇、KOH
乙醚
S 皂化
300nm
异丙醇
310nm 325nm 334nm 测定吸光度，
Sol
（9~15单位）
并确定最大吸收波长
• 判断max是否在323～327nm之间
是
否
• 计算 A300 A325
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
分类：
脂溶性 VitA、D、 E、K 等
水溶性 VitC、VitB族（B1、
B2、B6）、烟酰胺、泛酸钙、 叶酸、烟酸等
第一节 维生素A的分析
一、结构与性质
（一）结构
1. 维生素A的结构为具有共轭多烯
醇侧链的环己烯
CH3
CH3
CH3 CH3
CH3 CH2OR值在±3％，则仍不用校正公式计
算吸光度，而直接用A328代入公式中
求出 E11c%m
A32（8校正 ） A32810% 0
若
A328
所得的
数值在-15％～-3％之间，则需用校正
公式计算吸收度，即用A328（校正）代入 公式中求出 E11c%m
A32（8校正 ） A32810% 0
在max（620nm）处，测 定吸光度，标准曲线法定量
（三）高效液相色谱法 RP—HPLC法同时测定人血清
中维生素A和维生素E的含量。
例1. 维生素A含量用生物效价表示， 其效价单位是
A. IU B. g C. ml D. IU/g E. IU/ml
A328
否 A328
皂化
-15%
-3% 0
3%
（2）第二法 等吸光度法 皂化法，适用于维生素A醇。 溶剂：异丙醇
乙醇、KOH
乙醚
S 皂化
300nm
异丙醇
310nm 325nm 334nm 测定吸光度，
Sol
（9~15单位）
并确定最大吸收波长
• 判断max是否在323～327nm之间
是
否
• 计算 A300 A325
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
分类：
脂溶性 VitA、D、 E、K 等
水溶性 VitC、VitB族（B1、
B2、B6）、烟酰胺、泛酸钙、 叶酸、烟酸等
第一节 维生素A的分析
一、结构与性质
（一）结构
1. 维生素A的结构为具有共轭多烯
醇侧链的环己烯
CH3
CH3
CH3 CH3
CH3 CH2OR值在±3％，则仍不用校正公式计
算吸光度，而直接用A328代入公式中
求出 E11c%m
A32（8校正 ） A32810% 0
若
A328
所得的
数值在-15％～-3％之间，则需用校正
公式计算吸收度，即用A328（校正）代入 公式中求出 E11c%m
A32（8校正 ） A32810% 0
药物分析维生素类药物的分析
9.1 维生素A的分析
1g维生素Ａ醇相当于：
国际单位IU=0.344微克维生素Ａ醋酸酯； IU＝0.300微克维生素Ａ醇 换算：1g维生素Ａ醋酸酯相当于：
VA1: VA2:(去氢VA) VA3:(去水VA)
注意:在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行!
2、紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。
含量测定
测定波长
吸光度
吸光度比值
吸光度比值差
计算值
规定值
300
0.555
316
0.907
(326)
328
1.000
(329)
340
0.811
360
0.299
紫外UV（中国药典） VB1片：方法与片剂含量测定相同(246nm)
01
VB1注射液：与液剂相同。（246nm)
02
9.3 维生素C的分析 化学结构
D(-)-异抗坏血酸 L(+)-异抗坏血酸 L(+)-抗坏血酸 D(-)-抗坏血酸 具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是 L（+）-抗坏血酸
四、含量测定
1、铈量法（中国药典）
原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄→灰紫 ，需作空白试验。
3、高效液相色谱法
日本药局方（JP13）
气相色谱法：Chp2005
Hale Waihona Puke 测定数据如下表，求：维生素A的标示百分含量。
由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。
添加标题
01
02
03
04
1g维生素Ａ醇相当于：
国际单位IU=0.344微克维生素Ａ醋酸酯； IU＝0.300微克维生素Ａ醇 换算：1g维生素Ａ醋酸酯相当于：
VA1: VA2:(去氢VA) VA3:(去水VA)
注意:在水中三氯化锑水解,必须在绝对无水中进行!
2、紫外吸收光谱 VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。
含量测定
测定波长
吸光度
吸光度比值
吸光度比值差
计算值
规定值
300
0.555
316
0.907
(326)
328
1.000
(329)
340
0.811
360
0.299
紫外UV（中国药典） VB1片：方法与片剂含量测定相同(246nm)
01
VB1注射液：与液剂相同。（246nm)
02
9.3 维生素C的分析 化学结构
D(-)-异抗坏血酸 L(+)-异抗坏血酸 L(+)-抗坏血酸 D(-)-抗坏血酸 具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是 L（+）-抗坏血酸
四、含量测定
1、铈量法（中国药典）
原理：VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄→灰紫 ，需作空白试验。
3、高效液相色谱法
日本药局方（JP13）
气相色谱法：Chp2005
Hale Waihona Puke 测定数据如下表，求：维生素A的标示百分含量。
由此可知，应该用测得的328nm处的吸收度计算。
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药物分析09第九章维生素类药物的分析
换算因数
效价(I .U./g)
E1% 1cm m ax
I.U./g(VA 酯) (E11c%m )测 1900
I. U. /g(VA 醇)
(
E1% 1cm
)测
1830
紫外分光度法（三点校正法）
在三个波长处分别测定吸收度，根据校正公 式计算吸收度A校正值后，再计算含量。
测定原理
白
NH3H2O
HNO 3
MHnO2 Cl2 KI淀粉试纸蓝
生成沉淀反应
分子结构中含有杂环，易与生物碱沉淀剂 (碘化铋钾、碘化汞钾、苦酮酸等)，硅钨酸等
作用形成组成恒定的沉淀 维生素B1在碱性加热条件下反应放出H2S,与
Pb(Ac)2试液形成黑色PbS↓
CH3
CH3
CH3
CH3 C O
O
R1
维生素E
乙酰化
酚羟基
CH3
R2
O CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
OH R1
生育酚
强还原性
R2
CH3
* O CH3
CH3
*
CH3 C O
O
R1
CH3
CH3
*
* CH3
手性C
生物效价
天然品 右旋体
右旋体:消旋体 = 1.4 : 10 合成品 消旋体
CH3
R2
O
CH3 C O
VitA SbCl3 蓝色→ 紫红色 CHCl3
含量测定
Vit A含量表示
I.U.(international Unit) 国际单位 效价(I.U./g) 按WHO规定 VA acetate VA alcohol 效价(I.U./g) 2.907×106 3.33×106 1g pure VA acetate≈ 2.907×106 I.U.
药物分析第09章维生素类药物的分析
医学ppt
65
四、含量测定
（一）GC法 1、GC特点
选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好
挥发性低、不
稳定、极性强
→衍生化易受
样品蒸气压限
制
医学ppt
66
2、 VitE测定的色谱条件
载气→N2 固定液→硅酮（OV-17） 担体→硅藻土或高分子多孔小球 柱温→265℃ 检测器→氢火焰离子化检测器(FID) 内标→正三十二烷
51
二、 鉴别
（一）硝酸反应
VitEH 7 5℃N 1O53′生育酚 生育红 [ O]
橙红色
医学ppt
52
强氧化剂
H3C
CH3 O
O O
H3C HO
HNO3
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
生育酚
CH3 C16H33
生育红（橙红色）
医学ppt
53
取本品约30mg，加无水 乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml， 摇匀，在75℃加热15分钟，溶 液应显橙红色。
医学ppt
26
第三步 求效价
效 价 IU （ /g） (样 )E% 1c m (样 )换 算 因
换算因数由纯品计算而得：
换算因数 效＝ 价I（ U/g） E% 1cm(纯)
医学ppt
27
1IU 0.34g4维 生 A醋 素酸 酯
效价（IU / g） 1106g 2907000 0.344g
换 算 因效 数 E% 1价 c＝ m I(纯 U （ /)g）219503700 0 0
VitM
医学ppt
VitPP
3
第二节 维生素A
R : -H
维生素A醇
-COCH3
第九章 维生素类药物的分析.ppt
VitA VitA
醛 酸
△或有金属离子存在时更易氧化
2019-8-11
感谢你的欣赏
8
3、与三氯化锑发生呈色反应
VitA SbCl 3蓝色 紫红
CHCl3
4、溶解性
不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等
2019-8-11
感谢你的欣赏
9
二、鉴别试验
1、三氯化锑反应
维生素A在饱和无水三氯化锑的无 醇氯仿溶液中呈现不稳定的蓝色，再变 为紫红色。
31
(一）结构与性质 1、溶解性 ① 易溶于水 ② 水溶液呈酸性
2019-8-11
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32
2、酸性 一元酸
C3－OH的 pKa = 4.17
C2－OH的 pKa = 11.57
C6H2OH
H C OH 5 O
4
1O
32
HO
OH
2019-8-11
感谢你的欣赏
33
3、强还原性 二烯醇结构
CC OH OH
二烯醇结构
2019-8-11
O
CC
OO
二酮基结构
感谢你的欣赏
34
4、光学活性 手性C（C4、C5）
C6H2OH
H C OH
L(+)－抗坏血酸
*5 O
活性最强
*4
1O
2019-8-11
3
HO
感谢你的欣赏
2
OH
35
5、具糖的性质 结构与糖类相似
糖类的显色反应
பைடு நூலகம்
△H
脱水
糠
糠醛 醛衍生
2019-8-11
VitM
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VitPP
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100%
第二法
A328校正
A 328
第二法
－15%
－3%
0
3%
VitAD胶丸中VitA的含量测定
精密称取本品(规格10000VitAIU/丸) 装量差异项下（平均装量0.08262g/丸） 的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环 己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml， 置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻 度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大 吸收波长为328nm，并在下列波长处测 得吸收度为
效价（ IU / g） 2907000 换算因数＝ % 1530 E1cm(纯)
6
1900
1IU 0.300g维生素 A醇
1 10 g 效价（ IU / g） 3330000 0.300g
效价（ IU / g） 3330000 换算因数＝ % 1820 E1cm(纯)
1830
6
第四步：求标示量％
IU / 丸 标示量％＝ 100 ％ 标示量
IU / g 平 均 丸 重 ＝ 100 ％ 标示量
A 换算因数 平均丸重 C 100 ％ 标示量
（2） 第一法 • 方法：
维生素A醋酸酯
S 9～15IU / ml 溶液 分别于300、 316、 328、 340、 360 nm处测Ai
A300 A316 A328 A340 A360
：0.354 ：0.561 ：0.628 ：0.523 ：0.216
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
：0.555 ：0.907 ：1.000 ：0.811 ：0.299
求本品中维生素A的含量？
蓝色
+Biblioteka CH 2SbCl 5 RCOO
-
紫红
（二） UV法 （BP（1998））
VitA 去水VitA
△ 无水乙醇 HCl
λmax为326nm 一个吸收峰
λmax为350～390nm 三个吸收峰
↓
VitA
CH 2
去水VitA（VitA3）
（三） TLC法 BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑
维生素A醋酸酯
-COC15H31
维生素A棕榈酸酯
一、 结构与性质 （一）为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯
具有UV吸收
存在多种立体异构化合物
max
维生素A 新维生素Aa 新维生素Ab 325.5 328 320.5
相对生物效价 100% 75% 24%
新维生素Ac
异维生素Aa 异维生素Ab
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值
三、 含量测定
（一） UV法 立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）
三点校正法 1. 条件：
（1）杂质的吸收在310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波 长的增大吸收度减小；
（2）物质对光的吸收具有加和性。
第九章
维生素类药物的 分析
第一节 维生素：
概述
是维持人体正常代谢机能所 必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。
脂溶性
VitA、D2、D3、 E、K1 等
水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM
VitPP
第二节
维生素A
R:
-H
-COCH3
维生素A醇
环己烷
• 判断 max是否在326～329nm之间
max在326～329nm之间
是 否
• 求算 Ai / A 328 并与规定值比较
改用第二法
Ai / A 328
A 300 A 316 A 328 A 340 A 360 A 328 A 328 A 328 A 328 A 328
规定值
0.555 0.907
2. 波长的选择：
（ 1） 1
VitA的max（328nm） （ 2） 2 3
分别在1的两侧各选一点
第一法
等波长差法
328 316 340 328
A328校正 3.522 A328 A316 A340
测定对象
VitA醋酸酯
第二法
等吸收度法(皂化法)
310.5
323 324
15%
21% 24%
易发生脱氢、脱水、聚合反应
VitA2
VitA3
鲸醇
（二） 共轭多烯侧链 易被氧化
VitA VitA醛 环 氧 化 物 VitA酸
[O ] 紫外线、 O 2、 氧 化 剂
△或有金属离子存在时氧化↑
差值
1.000 0 0.811 0.299
• 判断差值是否超过规定值的 0.02
有一个以上 超过 0.02
无超过 0.02
• 计算 A328（校正）
• 用A328计算
A328校正 3.522 A328 A316 A340
f
A 328(校 正) A 328 A 328
注意：
% % 1cm ( 样 ) 1cm ( 纯 )
C 为混合样品的浓度
第三步
求效价
% 效价（ IU / g） (样) E1cm(样) 换算因数
换算因数由纯品计算而得：
效价（ IU / g） 换算因数＝ % E1cm(纯)
1IU 0.344g维生素 A醋酸酯
1 10 g 效价（ IU / g） 2907000 0.344g
6 A1 A2 A3 7
A325校正 6.815 A325 2.555 A310 4.260 A334
测定对象
VitA醇
3. 测定法
（1）基本步骤:
第一步 A选择 选择依据：
所选A值中杂质的干扰已基本消除
第二步
% 求 1cm ( 样 )
A % 1cm(样) C(%) l
环氧化物
VitA醛
VitA酸
（三） 与三氯化锑发生呈色反应
VitA 蓝色 紫红
CHCl3
SbCl3
（四） 溶解性
不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等
二、 鉴别 （一） 三氯化锑反应
VitA 蓝色 紫红
CHCl3
SbCl3
条件
无水无醇
+
CH 2
-
SbCl 5 RCOO