(完整word版)Waters Xevo TQS液相色谱质谱操作

Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪

(三重串连四级杆质谱)操作指南

1.适用范围：

本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。

2.仪器设备的主要技术指标：

1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）≤0.047min。

2) ESI正离子灵敏度和精密度：

测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl

指标要求：平均信噪比（S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min

测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：120000；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。

3) ESI负离子灵敏度和精密度：

测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl

指标要求：平均信噪比（S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min

测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。

4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）≤0.9%。

5) NanoFlow正离子灵敏度

指标要求：峰强（m/z =785.8）≥1×107，

测试样品：Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/μl

测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。

6) T RIZAIC正离子模式MS说明：

测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA

T10, PHO T88

指标要求：保留时间标准偏差：≤0.25%

测试结果：ADH T19：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)

7) 系统性能测试

一维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。一维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；

二维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。二维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；二维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；所有检测方式的回收率指标：≥90.0%

3. 仪器设备的使用环境要求：

1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。

2) 工作温度：19-22度，不要超过25℃，保持恒温。

3) 相对湿度：50%-70%

4. 操作程序：

4.1 开机

4.1.1 打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。

4.1.2 选择Instrument＞MS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuun＞

pump，打开真空泵，开始抽真空。机械泵和涡轮分子泵开始工作。

4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪烁，同时观察调谐界面Diagnostics→Turbo Speed 泵转速达到100%即可，达到实验状态大约要抽真空4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无需打开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。）

4.1.4 气源压力设置：氮气：90-100psi。氩气：0.05Mpa，不超过0.1Mpa（实验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。）

4.2 准备UPLC系统

4.2.1准备流动相：用0.22μm的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要可挥发的，而且浓度在2mM-5mM之间，不要超过10mM（注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸，浓度范围为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH≥2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）。有机相要使用原装进口的色谱纯。（2）SW+Purge（弱洗：10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗；Wash（强洗：90%ACN+10%纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22μm的膜过滤。

4.2.2初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统控制界面，点击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROL＞Prime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1min，如果更换了流动相则输入3min，按start。

4.2.3初始化UPLC自动进样器：UPLC控制台上选择Sample Manager，选择Control＞Prime syrings，灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes，Number of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样器准备好。

4.2.4灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。

4.3 建立一个Project

如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。