液质联用分析重组人白细胞介素-11的肽图

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药学学报 9NVD +’D&FDNBRVGND .GJGND >##? ， <" （=） ： 6$? ; 6?#
液质联用分析重组人白细胞介素 !"" 的肽图
杨! 英，饶春明，王! 威，韩春梅，王军志 !
（ 中国药品生物制品检定所，北京 "###$# ） （ &’()%"" ） 的肽图。方法 ! 用胰蛋白酶酶解 &’()% 摘要：目的 ! 用液质联用技术分析鉴定重组人白细胞介素%"" "" ， 采用 *+), 测定肽图， 用电喷雾%四极杆%飞行时间质谱 （ -.(%/%012 3 4.） 技术分析肽段的精确相对分子质量， 通过 串联质谱 （ 4. 3 4.） 测定肽段的氨基酸序列。结果! 根据肽段的色谱保留时间、 相对分子质量及对其碰撞诱导解离 质谱的解析结果， 归属出肽图中各肽段所在的色谱峰， 已检出肽段的总覆盖率为 567 。结论 ! 液质联用研究肽图是 验证和分析蛋白质结构的高效准确的方法。 关键词：液相色谱%质谱联用；重组人白细胞介素%"" ；相对分子质量；肽图；氨基酸序列 中图分类号：85"6! ! ! 文献标识码：9! ! ! 文章编号： #$": ; <=6# （ >##? ） #= ; #6$? ; #$
［ :］ 结果 。此外， 近年来发展的串联质谱仪 （ 4. 3 4.） ，
使质谱用于生物分子结构分析的功能进一步增强， 它能快速灵敏地测定肽段的部分氨基酸序列， 使得 肽段的确认更加准确， 极大地提高了蛋白质鉴定的
［ <］ 。 准确性
万方数据
杨( 英等： 液质联用分析重组人白细胞介素!"" 的肽图
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重组人白细胞介素!"" （ #$%&!"" ） 为血小板生长 因子， 可刺激造血干细胞和巨核细胞母细胞的增殖， 并诱导巨核细胞的成熟， 从而增加血小板的生成。 本文在文献 ［"］ 的基础上， 用液质联用技术对重组 人白细胞介素!"" 经胰蛋白酶裂解后的肽图进行研 究， 可以更快速、 直接和准确地判断出每个洗脱峰的 肽段归属， 而不仅仅是对 ’ 端的判定， 为其质量分 析和控制提供了依据。
结果和讨论
!" 理论酶切结果分析 经 -./0 处理的胰蛋白酶专一性酶切位点在肽 链中赖氨酸 （ 0， &24 ） 和精氨酸 （ Z， >#8 ） 的羧基端。 #$%&!"" 理论氨基酸全序列见图 " ， 共有 ",, 个氨基 酸， 胰蛋白酶完全水解后理论上可以产生 )) 个肽段 或氨基酸。图 " 中 -" U -)) 为 )) 个肽段的编号及 所在位置， 标在每个肽段的羧基端。 #" $%&’()*+(,(-./ 0 1* 对肽段相对分子质量的 测定 胰蛋白酶酶切过的肽段， 经过 X.&/ 的分离后 依次进入质谱进行检测。每一个洗脱峰均可获得相 应组分的相对分子质量信息。例如色谱洗脱时间为 )CN <+ 956 的肽段在 W7%!H!-L= Y G7 中产生的特征
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收稿日期： >##$%">%#6@ 基 金 项 目：国 家 高 技 术 研 究 发 展 计 划 （ =?: 计 划） 资助项目 （ >##:99>A:<=# ） @ ! 通讯作者! 0BC： =? ; "# ; ?6#5$$=? ， 2DE： =? ; "# ; ?6#$"5"> ， -%FDGC：HIHGJKI66L HD’MM@ NMF@ NJ
[ 峰见图 ) 。图 )> 是单电荷峰 ［ G [ X］ ， 相邻两个
材料和方法
材料( #$%&!"" （ 供试品， 批号 )**+*,*" ） ， -./0 处理的胰蛋白酶 （ -./0!1#23456， 7589: -;<+) ） ， 甲酸 （ =>， =?@A: B+C"; ） ， 三氟乙酸 （ -=>， -DE5: -7+)BF ） ， 色谱纯乙腈 （ >/’， 7589: 公司） ， 实验用水为 G5??5!H 超纯水， 其他试剂均为分析纯。 仪器和设备( 美国 I:1D#4 >??5:6JD 高效液相系 统 )<BF 型 和 二 极 管 阵 列 检 测 器 )BB< 型， 英国 G5J#K9:44 公司的 H!-L= 95J#K 质谱仪， 美国 I:1D#4 G:44?26M +N * 液 质 联 用 分 析 软 件，美 国 I:1D#4 7299D1#2 C** /"; 色谱柱。 胰蛋白酶酶切条件 ( 参 照 文 献 ［"］ 报道的方 法， 取质量浓度为 C 98 ・ 9& O " 的 #$%&!"" 样品 +** 对 "P 碳酸氢铵溶液进行充分透析， 然后取透析 !&， O" 样品 )F* !&， 加入 " 98・9& -./0 处理的胰蛋白 酶 C !&， C, Q 水浴 )* $ 进行酶解。"** Q 煮沸 C 956 终止酶解反应， 离心收集上清液作为肽图测定 的样品溶液。 色谱条件 ( 采用 I:1D#4 7299D1#2 C** /"; （ "F* 99 R CN B 99 %S， F !9 ） 色谱柱， 流动相 > 液为含 *N "P 三氟乙酸的水溶液， T 液为含 *N "P 三氟乙酸 的乙腈溶液， 洗脱梯度
/34567 ! ( >956K :J5E 4D]@D6JD J$:56 K^ #$%&!"" :6E 3D315ED ^#:89D614 _2 1#23456 E58D415K6
万方数据
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