动物肝脏DNA提取和鉴定
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实
验
五
动物肝脏中DNA的制备和鉴定
学时：6
一、实验目的：
1、掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 2、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3、学习核酸染色的方法。
二、实验原理:
（一）动物肝脏DNA制备原理
要获得纯的DNA样品，必须考虑以下几点：
如何选材，如何破碎组织细胞？
如何除去蛋白质？(在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋
收260nm的紫外线后将能量传递给EB，二是EB本身吸收
302nm和360nm的紫外线的能量。这两方面的能量最终 激发EB发射波长为590nm的可见光（红橙区）。
2、优点：
（1）染色比较简便、快捷，一般在10－15min就可反应。
（2）EB对核酸分子无破坏作用，这是其它染料所不能做 到的。 （3）EB灵敏度高，可检测出10ng或更少的DNA含量。
（二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。
琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半
乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖 和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电 泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗 作用降低，因而分离效果明显提高。
(三)除去RNA的方法
脱氧核糖核蛋白在浓NaCl（1-2mol／L）溶液中
溶解度很大，但在0.14mol／L NaCl溶液中溶解度很低，
而核糖核蛋白则溶于0.14mol／L NaCl溶液中，利用
这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白 分离开来。
(四)除去蛋白质的方法
用氯仿一异成醇混合液振荡核蛋白溶液，使蛋白质变性，然 后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿 相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积 95％乙醇溶液可 将DNA钠盐沉淀出来。
（3）插入梳子，梳齿下端离板底0.5－1mm。 （4）在胶床上滴加2－3滴 0.5μ g/mL的EB溶液。 （5）将60℃凝胶不间断倒入胶床，高3－4mm，避免气泡，摇 匀，室温下凝固。 （6）完全凝固后，撕掉胶带，置于电泳槽中，加入电泳缓冲 液，高于胶面1－2mm，从一头轻轻斜拉出梳子，除去产生 的气泡。
（7）电泳缓冲液：Tris-硼酸－EDTA（50×TBE）pH8.0。 （8）加样缓冲液：0.25%溴酚蓝（BPB）40%蔗糖。
（9）溴化乙啶（EB）溶液：10μg/ml。
（10）琼脂糖凝胶：浓度为0.7%。
(三)仪器
（1）稳压稳流电泳仪 （2）可调微量移液器
（3）水平电泳槽
（4）暗箱紫外透射仪等。
上清液 (沉淀用80％乙醇溶液离心洗涤)。
• 7．将沉淀置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然
干燥后，加入200ul 电极缓冲液，使DNA充分溶解，
待用。
• 8.凝胶板的制备：
（1）取琼脂糖0.7 g，加1×TBE缓冲溶液100ml，于沸水浴中 至熔化，制成0.7%的琼脂糖胶液。
（2）胶床两头贴上防水胶带，形成8mm高的挡墙，压紧胶带， 置水平台面上。
• 11. 观察
关闭电源，取出胶床，在紫外检测仪下观察凝胶中的 DNA（红橙色荧光）。
五、思考题：
1、用荧光染料EB染色的原理和优缺
点是什么？ 2、绘制DNA电泳图谱。
核酸提取过程中的注意事项：
（ 1 ） 避 免 过 酸 过 碱 或 高 温 环 境 ， 合 适 的 T：0－4℃， pH4-9； （2）防止机械力的切割作用，避免剧烈振荡； （3）防止核酸酶的降解作用，可加入抑制剂－EDTA，柠檬 酸钠；
DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场
中向正极移动（电荷效应） 。 DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关 外，还与DNA分子的大小和空间构象有关（琼脂糖凝胶 的分子筛效应）。
电泳时，用溴酚蓝做前沿指示剂，用溴化乙啶
（ethidium bromide，EB） 指示DNA样品在凝胶中的 确切位置。
荧光染料EB染色
后，在紫外灯 (λ305nm)下观察
到的电泳结果：
* 荧光染料EB染色的原理和优点是什么？
1、原理：
EB： 即 3 , 8 - 二氨 基 - 5 - 乙 基 - 6 - 苯基 菲锭 溴 盐
(Ethidium Bromide)。 EB是一种扁平分子，它可以嵌 入核酸的碱基之间，在紫外线激发下，发出红橙色荧 光。 激发的荧光的能量来源于两个方面：一是核酸吸
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚
至更少的DNA。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤
20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离
时行比较，便可测出未知片段的大小。
离心 10min。
• 2．在上述沉淀物中加入2mL
0.14mol／L NaCl
－0.15mol／L EDTA溶液，然后在60℃下，滴加 20％SDS溶液3－5滴，边加边摇动，再摇动 10min， 使核酸与蛋白质分离。
• 3.
ຫໍສະໝຸດ Baidu
加固体氯化钠0.2g混匀，使其最终浓度达到
l.4mol／L，水浴30min。
（2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链
环状DNA.
（3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳
分离。
琼脂糖浓度/% 线状DNA大小/kb 行电泳分离。
0.3 60-5 0.6 20-1 0.7 10-0.8 0.9 7-0.5 1.2 6-0.4 1.5 3-0.2 2.0 2-0.1
• 压榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升
的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。 温和的、彻底破碎细胞的方法，但仪器费用较高。
细胞破碎方法—机械物理法
• 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃， 然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成 冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 • 超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和 细胞器。使用时注意降温，防止过热。 • 冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰 浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以 被破碎。
• 9.加样：
将样品DNA溶液与加样缓冲液以5 ：1的体积比混合，用 微量移液器加样，每加完一个样品，冲洗三次。加样量15～ 20 l （加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝 胶底部）。
• 10.电泳：
为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不 应高于5V/cm（两电极间的距离）开始时用较高电压(80V)， 样品一进入胶内则将电压调至5V/cm 。当染料前沿移至底边 1-2mm时，电泳毕。
（4）既可用于DNA也可用于RNA的检测。
（5）EB可加到样品中，也可加到凝胶中，可随时用紫外 灯检测电泳的进程和效果。 （6）EB-DNA复合物中的EB发出的荧光比游离的EB强10倍， 因此不需洗净凝胶中游离的EB也可检测出DNA的条带。
3、缺点：
溴化乙啶是一种强的致突变剂，在操作和配制试剂 时应戴手套。含溴化乙啶的溶液不能直接倒入下水道， 应进行处理。 （1）每100ml溶液中加入100mg粉状活性炭； （2）室温下放置1小时，不时的摇动； （3）用新华一号滤纸过滤，弃滤液； （4）用塑料袋封装滤纸和活性炭，作为有害废物处理。
• 4．加等体积的氯仿一异
戊醇，混匀，摇动5min，以
4000r／min的转速离心
10min。离心管内的物质分
为三层，上层为含DNA的水
相层，下层为氯仿一异成醇 混合物，中间层为变性蛋白 凝胶。
• 5．吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预
冷），产生沉淀。
• 6. 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去
*溴化乙啶在260℃分解，在标准条件下进行焚化后不会有 危险性。
二、实验材料、试剂和仪器:
(一)材料：动物肝脏
(二)试剂：
（1）0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA-Na溶液： （2）20％SDS溶液： （3）氯仿一异戊醇(24:1)混合液： （4）95％乙醇溶液。 （5）80％乙醇溶液。 （6） pH8.0TE缓冲液：10 mmol／LTris－HCI，lmmol ／L EDTANa，其中含RNA酶20ug／mL。
用十二烷基硫酸钠（SDS）等去污剂使蛋白质变性，可以直
接从生物材料中提取DNA。
纯的DNA样品的获得
为了防止DNA酶的降解，提取时可加入适量
EDTA（乙二胺四乙酸）、柠檬酸，以降低
DNA酶的活性。
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低 温保存。
（4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸 变性、降解、机械切割的机会。
注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进
琼脂糖凝胶电泳具有以下优点：
（1）操作简单、制备容易快速、凝胶机械性能好、电泳速度 快、分离DNA片段范围广、样品不需事先处理就可以进行电泳。 （2）凝胶结构均匀，对样品吸附小，电泳图谱清晰，分辨率 高，重复性好。 （3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外 光检测及定量测定。 （4）电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制 成干膜可长期保存。 因此，琼脂糖凝胶电泳已成为分子生物学及基因工程研 究中常用实验方法之一， DNA样本的分离、纯化、鉴定以及 相对分子质量测定常用琼脂糖凝胶电泳。
移液器的使用
自动取液器的构造
自动取液器的使用
吸入液体
排出液体
使用注意事项：不超量程使用；不倒置；使用完毕调至最大刻度上。
三、实验步骤：
• 1．取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，加
入2ml 0.14mol／L NaCl－0.15mol／L
EDTA溶液，于研钵中研磨至匀浆，再加2ml
清洗转入离心管中，以4000r／min的转速
细胞破碎方法—化学方法
• 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯等脂溶性溶剂或 SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞， 可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与
研磨法联合使用。
• 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低
浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子
大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。
溴化乙啶是一种荧光染料，可插入DNA双螺旋结构的
两个碱基对之间，与DNA分子形成络合物，在紫外光的 激发下发出橙黄色的荧光。
荧光来自两方面，一是核酸吸收260nm的紫外光， 并将能量传给EB；二是EB本身吸收波长为302nm和 360nm的紫外光。这两方面的能量最终激发EB发出 波长为590nm的红橙色荧光。 溴化乙啶可加入凝胶中，也可以在电泳后，将凝胶 放在含EB的溶液中浸泡.
白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去
蛋白质。)
设法除去RNA的污染； 防止DNA酶的降解作用；
选 材
要提取动物组织DNA，一般选择细 胞膜较脆弱，容易破碎的动物脏器，如
胸腺、肝脏、脾脏、胰脏等。
细胞破碎方法—机械物理法：
• 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石 英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使 用。 • 组织捣碎器：较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升 温过高，通常是转10秒—20秒，停10秒—20秒，可反复多次。
验
五
动物肝脏中DNA的制备和鉴定
学时：6
一、实验目的：
1、掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。 2、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。
3、学习核酸染色的方法。
二、实验原理:
（一）动物肝脏DNA制备原理
要获得纯的DNA样品，必须考虑以下几点：
如何选材，如何破碎组织细胞？
如何除去蛋白质？(在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋
收260nm的紫外线后将能量传递给EB，二是EB本身吸收
302nm和360nm的紫外线的能量。这两方面的能量最终 激发EB发射波长为590nm的可见光（红橙区）。
2、优点：
（1）染色比较简便、快捷，一般在10－15min就可反应。
（2）EB对核酸分子无破坏作用，这是其它染料所不能做 到的。 （3）EB灵敏度高，可检测出10ng或更少的DNA含量。
（二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理：
琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖凝胶作为支持介质的一种电 泳分离方法，是一种简便、快速分离鉴定核酸的方法，已 成为分子生物学及基因工程研究中常用实验方法之一。
琼脂糖英文名agarose，是从琼脂中提取出来的，由半
乳糖和3.6-脱水-L- 半乳糖相互结合的链状多糖。琼脂糖 和琼脂都可在不同浓度的水溶液下可形成多孔的凝胶，电 泳中具有分子筛效应。但琼脂糖含硫酸根比琼脂少，电渗 作用降低，因而分离效果明显提高。
(三)除去RNA的方法
脱氧核糖核蛋白在浓NaCl（1-2mol／L）溶液中
溶解度很大，但在0.14mol／L NaCl溶液中溶解度很低，
而核糖核蛋白则溶于0.14mol／L NaCl溶液中，利用
这一性质可将脱氧核糖核蛋白与绝大部分核糖核蛋白 分离开来。
(四)除去蛋白质的方法
用氯仿一异成醇混合液振荡核蛋白溶液，使蛋白质变性，然 后离心除去变性蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿 相中间，而DNA溶于上层水相。用两倍体积 95％乙醇溶液可 将DNA钠盐沉淀出来。
（3）插入梳子，梳齿下端离板底0.5－1mm。 （4）在胶床上滴加2－3滴 0.5μ g/mL的EB溶液。 （5）将60℃凝胶不间断倒入胶床，高3－4mm，避免气泡，摇 匀，室温下凝固。 （6）完全凝固后，撕掉胶带，置于电泳槽中，加入电泳缓冲 液，高于胶面1－2mm，从一头轻轻斜拉出梳子，除去产生 的气泡。
（7）电泳缓冲液：Tris-硼酸－EDTA（50×TBE）pH8.0。 （8）加样缓冲液：0.25%溴酚蓝（BPB）40%蔗糖。
（9）溴化乙啶（EB）溶液：10μg/ml。
（10）琼脂糖凝胶：浓度为0.7%。
(三)仪器
（1）稳压稳流电泳仪 （2）可调微量移液器
（3）水平电泳槽
（4）暗箱紫外透射仪等。
上清液 (沉淀用80％乙醇溶液离心洗涤)。
• 7．将沉淀置于吸水纸上，除尽乙醇，室温自然
干燥后，加入200ul 电极缓冲液，使DNA充分溶解，
待用。
• 8.凝胶板的制备：
（1）取琼脂糖0.7 g，加1×TBE缓冲溶液100ml，于沸水浴中 至熔化，制成0.7%的琼脂糖胶液。
（2）胶床两头贴上防水胶带，形成8mm高的挡墙，压紧胶带， 置水平台面上。
• 11. 观察
关闭电源，取出胶床，在紫外检测仪下观察凝胶中的 DNA（红橙色荧光）。
五、思考题：
1、用荧光染料EB染色的原理和优缺
点是什么？ 2、绘制DNA电泳图谱。
核酸提取过程中的注意事项：
（ 1 ） 避 免 过 酸 过 碱 或 高 温 环 境 ， 合 适 的 T：0－4℃， pH4-9； （2）防止机械力的切割作用，避免剧烈振荡； （3）防止核酸酶的降解作用，可加入抑制剂－EDTA，柠檬 酸钠；
DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场
中向正极移动（电荷效应） 。 DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关 外，还与DNA分子的大小和空间构象有关（琼脂糖凝胶 的分子筛效应）。
电泳时，用溴酚蓝做前沿指示剂，用溴化乙啶
（ethidium bromide，EB） 指示DNA样品在凝胶中的 确切位置。
荧光染料EB染色
后，在紫外灯 (λ305nm)下观察
到的电泳结果：
* 荧光染料EB染色的原理和优点是什么？
1、原理：
EB： 即 3 , 8 - 二氨 基 - 5 - 乙 基 - 6 - 苯基 菲锭 溴 盐
(Ethidium Bromide)。 EB是一种扁平分子，它可以嵌 入核酸的碱基之间，在紫外线激发下，发出红橙色荧 光。 激发的荧光的能量来源于两个方面：一是核酸吸
溴化乙啶检测DNA的灵敏度很高，可检出10ng甚
至更少的DNA。
琼脂糖凝胶电泳分离核酸的影响因素
（1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
凝胶中，DNA片段迁移率与DNA分子大小(碱基对的对数)成反比(≤
20kb) ，因此通过已知大小的标准物移动的距离与未知片段的移动距离
时行比较，便可测出未知片段的大小。
离心 10min。
• 2．在上述沉淀物中加入2mL
0.14mol／L NaCl
－0.15mol／L EDTA溶液，然后在60℃下，滴加 20％SDS溶液3－5滴，边加边摇动，再摇动 10min， 使核酸与蛋白质分离。
• 3.
ຫໍສະໝຸດ Baidu
加固体氯化钠0.2g混匀，使其最终浓度达到
l.4mol／L，水浴30min。
（2）核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系
不同构型DNA的移动速度次序为：闭环DNA>直线DNA>开环的双链
环状DNA.
（3）不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳
分离。
琼脂糖浓度/% 线状DNA大小/kb 行电泳分离。
0.3 60-5 0.6 20-1 0.7 10-0.8 0.9 7-0.5 1.2 6-0.4 1.5 3-0.2 2.0 2-0.1
• 压榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升
的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。 温和的、彻底破碎细胞的方法，但仪器费用较高。
细胞破碎方法—机械物理法
• 反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃， 然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成 冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。 • 超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和 细胞器。使用时注意降温，防止过热。 • 冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰 浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以 被破碎。
• 9.加样：
将样品DNA溶液与加样缓冲液以5 ：1的体积比混合，用 微量移液器加样，每加完一个样品，冲洗三次。加样量15～ 20 l （加样时应防止碰坏样品孔周围的凝胶面以及穿透凝 胶底部）。
• 10.电泳：
为了获得电泳分离DNA片段的最大分辨率，电场强度不 应高于5V/cm（两电极间的距离）开始时用较高电压(80V)， 样品一进入胶内则将电压调至5V/cm 。当染料前沿移至底边 1-2mm时，电泳毕。
（4）既可用于DNA也可用于RNA的检测。
（5）EB可加到样品中，也可加到凝胶中，可随时用紫外 灯检测电泳的进程和效果。 （6）EB-DNA复合物中的EB发出的荧光比游离的EB强10倍， 因此不需洗净凝胶中游离的EB也可检测出DNA的条带。
3、缺点：
溴化乙啶是一种强的致突变剂，在操作和配制试剂 时应戴手套。含溴化乙啶的溶液不能直接倒入下水道， 应进行处理。 （1）每100ml溶液中加入100mg粉状活性炭； （2）室温下放置1小时，不时的摇动； （3）用新华一号滤纸过滤，弃滤液； （4）用塑料袋封装滤纸和活性炭，作为有害废物处理。
• 4．加等体积的氯仿一异
戊醇，混匀，摇动5min，以
4000r／min的转速离心
10min。离心管内的物质分
为三层，上层为含DNA的水
相层，下层为氯仿一异成醇 混合物，中间层为变性蛋白 凝胶。
• 5．吸出上清液，加入2倍体积95％乙醇溶液（预
冷），产生沉淀。
• 6. 再以4000r／min的转速离心溶液10min，弃去
*溴化乙啶在260℃分解，在标准条件下进行焚化后不会有 危险性。
二、实验材料、试剂和仪器:
(一)材料：动物肝脏
(二)试剂：
（1）0.14mol／LNaCl－0.15mol／L EDTA-Na溶液： （2）20％SDS溶液： （3）氯仿一异戊醇(24:1)混合液： （4）95％乙醇溶液。 （5）80％乙醇溶液。 （6） pH8.0TE缓冲液：10 mmol／LTris－HCI，lmmol ／L EDTANa，其中含RNA酶20ug／mL。
用十二烷基硫酸钠（SDS）等去污剂使蛋白质变性，可以直
接从生物材料中提取DNA。
纯的DNA样品的获得
为了防止DNA酶的降解，提取时可加入适量
EDTA（乙二胺四乙酸）、柠檬酸，以降低
DNA酶的活性。
加入RNA酶降解剩余的RNA，获得纯的DNA。
保存：将DNA于滤纸上干燥，溶于1mlTE中低 温保存。
（4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸 变性、降解、机械切割的机会。
注：DNA片段在5-500bp之间时，一般用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进
琼脂糖凝胶电泳具有以下优点：
（1）操作简单、制备容易快速、凝胶机械性能好、电泳速度 快、分离DNA片段范围广、样品不需事先处理就可以进行电泳。 （2）凝胶结构均匀，对样品吸附小，电泳图谱清晰，分辨率 高，重复性好。 （3）琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外 光检测及定量测定。 （4）电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制 成干膜可长期保存。 因此，琼脂糖凝胶电泳已成为分子生物学及基因工程研 究中常用实验方法之一， DNA样本的分离、纯化、鉴定以及 相对分子质量测定常用琼脂糖凝胶电泳。
移液器的使用
自动取液器的构造
自动取液器的使用
吸入液体
排出液体
使用注意事项：不超量程使用；不倒置；使用完毕调至最大刻度上。
三、实验步骤：
• 1．取新鲜动物肝，称取1g，切成小块，加
入2ml 0.14mol／L NaCl－0.15mol／L
EDTA溶液，于研钵中研磨至匀浆，再加2ml
清洗转入离心管中，以4000r／min的转速
细胞破碎方法—化学方法
• 有机溶剂处理法：利用氯仿、甲苯等脂溶性溶剂或 SDS（十二烷基硫酸钠）等表面活性剂处理细胞， 可将细胞膜溶解，从而使细胞破裂，此法也可以与
研磨法联合使用。
• 溶胀法：细胞膜为天然的半透膜，在低渗溶液和低
浓度的稀盐溶液中，由于存在渗透压差，溶剂分子
大量进入细胞，将细胞膜胀破释放出细胞内含物。
溴化乙啶是一种荧光染料，可插入DNA双螺旋结构的
两个碱基对之间，与DNA分子形成络合物，在紫外光的 激发下发出橙黄色的荧光。
荧光来自两方面，一是核酸吸收260nm的紫外光， 并将能量传给EB；二是EB本身吸收波长为302nm和 360nm的紫外光。这两方面的能量最终激发EB发出 波长为590nm的红橙色荧光。 溴化乙啶可加入凝胶中，也可以在电泳后，将凝胶 放在含EB的溶液中浸泡.
白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去
蛋白质。)
设法除去RNA的污染； 防止DNA酶的降解作用；
选 材
要提取动物组织DNA，一般选择细 胞膜较脆弱，容易破碎的动物脏器，如
胸腺、肝脏、脾脏、胰脏等。
细胞破碎方法—机械物理法：
• 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石 英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使 用。 • 组织捣碎器：较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升 温过高，通常是转10秒—20秒，停10秒—20秒，可反复多次。