凯基7-AAD染色试剂盒说明书
七项呼吸道病毒检测试剂盒(鉴定)使用说明书
七项呼吸道病毒检测试剂盒（鉴定）使用说明书【产品名称】通用名称：七项呼吸道病毒检测试剂盒英文名称：D3 Ultra DFA Respiratory Virus Screen & ID Kit【包装规格】鉴定试剂：80人份/盒【预期用途】用于临床定性检测7种呼吸道病毒：甲型（A型）流感病毒，乙型（B型）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病毒，副流感病毒1、2和3型。
【检验原理】荧光素（FITC）标记的单克隆抗体与病毒抗原结合，形成稳定的抗原-抗体复合物，在荧光显微镜下观察，呈现特异性绿色荧光。
【主要组成成份】组份名称规格主要成分1 DFA染色试剂鉴定试剂流感A试剂：2 mL每试剂瓶为一项与病毒抗原相对应的荧光单克隆抗体流感B试剂：2 mL腺病毒试剂：2 mL呼吸道合胞病毒试剂：2 mL副流感1试剂：2 mL副流感2试剂：2 mL副流感3试剂：2 mL2 40X浓缩洗液25 mL PBS3 固定液15 mL 甘油4 阳性质控板5块包被病毒抗原【储存条件及有效期】2ºC-8ºC避光保存18个月。
【适用仪器】荧光显微镜，激发波长490 nm，发射波长520 nm。
【样本要求】鼻咽部取样后保存于生理盐水中，应在24小时内送检。
【检验方法】1、取样：用鼻咽拭子从病人的鼻咽部取样或者使用鼻腔灌洗液，将鼻咽拭子放入储存管中（含有生理盐水）。
2、样本准备步骤：①将样本充分震荡混匀约10-15秒。
②在400-600xg转速下离心5-10分钟。
③弃上清。
④在沉淀中加2-3 mL PBS缓冲液（不能使用试剂盒中的浓缩洗液），充分震荡混匀约10-15秒。
⑤在400-600xg转速下离心5-10分钟。
⑥吸走上清和黏液层，小心不要吸到沉淀。
⑦重复步骤4到6，直至黏液层被完全去除。
⑧在沉淀中加0.5-1 mL的PBS缓冲液。
⑨用移液器反复吹吸来重悬细胞沉淀，形成一个略混浊的悬液。
3、直接样本测试步骤：①在8孔板上的孔内滴加25 µL的细胞悬浊液，每样本需滴加七孔。
BCA蛋白质定量试剂盒说明书
M 100mM
1M 100mM 100mM 100mM 20mM 200mM
4M 50mM
10mM
干扰物质 去垢剂 NP 40 TRITON X-100 SDS TWEEN20 混合物&极性化合物 PMSF Acetone Ethanol Glycerol Urea DMSO Sucrose
1 小时内即可完成蛋白质定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白（BSA） 溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为 20～2000 ug/ml。
操作步骤：
1. 标准品的稀释：用与样品相同缓冲体系的稀释剂按下表对 BSA 标准品进
行稀释：
BSA 标准浓度配制表
管号 稀释剂体积 BSA 体积（来源） BSA 终浓度（ug/ml）
4. 微管测定方法： 1） 分别取 25ul 表格中新鲜配制的 BSA 标准液和待测样品，加入到 96 孔板中。 2） 每孔中加入 200ul BCA 工作液，并充分混匀。 3） 加盖，37℃孵育 30min 后冷却至室温或室温放置 2h。 4） 用紫外分光光度计于 562nm 处检测其吸光度。 5） 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
*PA115-01 试剂盒所携带的试剂可满足 50 次微管检测和 500 次微板检测。 **PA115-02 试剂盒所携带的试剂可满足 250 次微管检测和 2500 次微板检测。
储存条件：
BCA 试剂 A 和 BCA 试剂 B 室温储存。 BSA 标准品-20℃保存。
本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。
3. 标准比色杯测定方法： 1） 吸取 0.1ml 的每种标准品和待测样品置于合适的管中。 2） 加入 2.0ml 的 BCA 工作液, 彻底混匀。 3） 加盖，37℃孵育 30min 后冷却至室温或室温放置 2h。 4） 用紫外分光光度计于 562nm 处检测其吸光度。 5） 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
人类KRAS7种突变检测试剂盒(荧光PCR法)说明书-P4.2-12T-2015.10.09
人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法）说明书【产品名称】通用名称：人类KRAS基因7种突变检测试剂盒（荧光PCR法）英文名称：Human KRAS Gene 7 Mutations Fluorescence Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit【包装规格】12测试/盒【预期用途】KRAS基因是人体肿瘤中常见的致癌基因。
该基因的突变常见于多种恶性肿瘤，在肺癌患者中的突变率为15～30%，在结直肠癌患者中的突变率为20～50%。
导致KRAS处于激活状态的突变主要位于第12和13密码子上。
KRAS 基因突变一般会使肺癌患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂产生耐药，使结直肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。
但是，2010年10月的最新研究发现第13密码子上的Gly13Asp（G13D）突变亦对抗EGFR抗体类药物有治疗反应性（参见：De Roock. W. JAMA. 2010;304(16):1812-1820）。
因此，KRAS基因突变检测能提高肿瘤临床治疗的针对性，降低治疗费用，节省宝贵的治疗时间。
大部分肿瘤的突变都是体细胞突变，突变细胞往往与野生型细胞混杂在一起，因此所提取的DNA常带有大量野生型DNA，所以对体细胞突变检测需要较高的特异性，而目前广泛使用的直接测序法检测能力有限，不能完全满足临床需要。
本试剂盒用于检测人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变（见表1），试剂盒以DNA为检测样本，提供突变状态的定性评估。
辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者。
该产品用于组织中提取DNA的KRAS基因7种突变的检测，为临床医生对大肠癌或肺癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
表1 人类KRAS基因的12和13密码子上7种热点体细胞突变突变名称氨基酸变化碱基变化Cosmic ID 公司命名Gly12Asp 甘氨酸到天门冬氨酸GGT>GAT 521 12-2-A Gly12Ala 甘氨酸到丙氨酸GGT>GCT 522 12-2-C Gly12Val 甘氨酸到缬氨酸GGT>GTT 520 12-2-T Gly12Ser 甘氨酸到丝氨酸GGT>AGT 517 12-1-A Gly12Arg 甘氨酸到精氨酸GGT>CGT 518 12-1-C Gly12Cys 甘氨酸到胱氨酸GGT>TGT 516 12-1-T Gly13Asp 甘氨酸到天门冬氨酸GGC>GAC 532 13-2-A 【检测原理】本试剂盒基于实时PCR平台结合了特异引物和双环探针两种技术，检测DNA样品中含有的突变基因。
试剂盒使用说明书
大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的：本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原，加入大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品或样品，游离大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）含量成反比，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量（E.coli DH-5α）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×,6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
凯氏定氮仪应如何制备试剂 凯氏定氮仪操作规程
凯氏定氮仪应如何制备试剂凯氏定氮仪操作规程凯氏定氮仪是检测蛋白质含量的仪器，在检测过程中，标准溶液以及汲取液、指示剂等试剂的配置是特别紧要的。
下面简单介绍一下凯氏定氮仪分析所用试剂的配置方法。
（1）标准溶液（任选一）1.硫酸标准滴定溶液[c（1/2H2SO4）=0.1mol/L]，移取3mL浓硫酸（密度为 1.8419g/mL），蒸馏水稀释并定容至1000mL容量瓶，摇匀，用无水碳酸钠标定。
2.盐酸标准溶液[c（HCl）=0.1mol/L]，移取9mL浓盐酸（盐酸浓度36%～38%）用蒸馏水稀释并定容至1000mL容量瓶，摇匀，用无水碳酸钠进行标定。
（2） 40%（400g/L）氢氧化钠溶液：称取400g氢氧化钠溶解于1000mL无氨蒸馏水中。
（3） 2%（20g/L）硼酸溶液（汲取液）：称取40g硼酸溶于2000mL无氨蒸馏水中。
（4）甲基红、溴甲酚绿混合指示剂：称取0.1g甲基红，用无水乙醇溶解并定容至100mL，称取0.1g溴甲酚绿，用无水乙醇溶解并定容至100mL。
（5）硼酸—指示剂混合溶液：取将甲基红、溴甲酚绿乙醇溶液依照1:5的比例混合，再取20mL混合指示剂加入到（3）的2000mL 硼酸溶液中，现用现配。
（6）硫酸铵干燥：取适量硫酸铵于105℃干燥箱中，干燥至少4h，恒重，取出放入干燥器中冷却至室温，称量0.1g至消化管中备用。
（7）蒸馏水10L以上。
全自动凯氏定氮仪的应用如何？全自动凯氏定氮仪仪器完全由微处理器掌控，用凯氏方法检测谷物、食品、饲料、水、土壤、淤泥、沉淀物和化学品中的氨、蛋白质氮含量。
故障与维护全自动凯氏定氮仪在平常使用中常见故障及维护问题如下：（1）滴定时无法滴加酸碱液可能由于酸碱液太少，进液管离开液面，需适时补液。
（2）酸碱桶无压力可能由于酸碱管路或者气泵漏气、损坏，需适时更换管路或者气泵。
（3）酸碱桶有压力，却无法加液可能由于电磁阀电源未接通或者电磁阀内部结晶堵塞管路，需适时断电检查电磁阀接线或者拆洗电磁阀。
植物蛋白提取试剂盒
凯基植物蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明本试剂盒用于从培养植物中提取蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer裂解细菌，作用温和，提取过程简便高效。
获得的蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究。
二、 试剂盒组份组份 KGP750 （50 tests）KGP7100（100 tests）储存温度Lysis Buffer 50 mL 100 mL 40C蛋白酶抑制剂 50 μL 100 μL -200CDTT(1M) 0.5 mL 1.0 mL -200CPMSF（100mM） 0.5 mL 1.0 mL -200C三、操作步骤Lysis Buffer工作液配制：每 mL冷 Lysis Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂、10μL DTT（1M）和10μL PMSF（100mM），混匀。
冰上保存待用。
步骤1． 取100－200mg的植物放入液氮中过夜，在液氮的环境中研磨样本至粉碎2． 加入1.0ml Lysis Buffer工作液， 4℃孵育30min，期间涡旋混匀3次；5． 4 ℃， 14 000 rpm离心10 min，收集上清为蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；6． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
四、 注意事项1． 所有接触样品的用具及试剂均需预冷。
2． 提取蛋白后，如有必要，可透析除去表面活性剂。
五、 凯基相关产品（详见凯基网站）1、蛋白提取核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒全蛋白提取试剂盒膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒磷酸化蛋白提取试剂盒（简易型）活性蛋白提取试剂盒红细胞裂解液细菌蛋白提取试剂盒酵母蛋白提取试剂盒植物蛋白提取试剂盒蛋白裂解液系列2、蛋白定量BCA法蛋白定量检测试剂盒Bradford法蛋白定量检测试剂盒Lowry法蛋白定量检测试剂盒3、蛋白染色蛋白质银染检测试剂盒蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒考马斯亮蓝蛋白快速染液4、蛋白分子量Marker蛋白分子量Marker（14KD-116KD）蛋白分子量Marker（10KD-200KD）预染蛋白分子量Marker（20KD-118KD）预染彩色蛋白分子量Marker（11KD-250KD）5、Western bloting组装试剂盒凯基蛋白提取和SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒凯基Western bloting检测试剂盒6、Western bloting化学发光试剂盒ECL检测试剂盒加强型ECL检测试剂盒。
说明书修订日期20150713CatnumberKGA223
凯基苏木素说明书
KeyGEN Haematorylin Assay Reagent Kit
说明书修订日期：2015.07.13 Cat number：KGA223
Store at RT for for one year
For Research Use Only（科研专用）
一、原理
苏木素是一种天然染料，是组胚，病理，泌尿，妇产科及各实验室中最常用的染色剂，主要用于细胞核染色。
带正电荷的碱性染料苏木素与细胞核中带负电荷的酸性物质结合使细胞核染成蓝色。
二、试剂盒组份
组份100ml储存温度
苏木素染液1瓶RT
三、储存条件及有效期
本试剂盒应置室温密封保存，有效期一年。
四、操作步骤
1.将样本涂于清洁的玻片上，制成薄涂片
2.将涂片放于95%乙醇固定5-6分钟，然后置空气中晾干。
3.滴加苏木素染液6-8滴盖满样本，染色5-8分钟，流水洗去多余染液。
即可镜下观察。
此片一般可保
存半年以上。
若想多年长期保存可进行4和5步操作。
4.依次置入两个无水乙醇缸中脱水，每缸1分钟。
5.再移入二甲苯缸中，透明1分钟，中性树脂封片，镜检。
五、染色结果
镜检结果：胞核呈蓝紫色。
六、注意事项
染色太浅可重复步骤3，复染。
染色太深可用0.1%盐酸-酒精脱色。
染色试剂盒及使用方法[发明专利]
![染色试剂盒及使用方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/7c40ce5aa55177232f60ddccda38376baf1fe0ce.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910804447.7(22)申请日 2019.08.28(71)申请人 迈克生物股份有限公司地址 611731 四川省成都市高新区百川路16号(72)发明人 李立科 蒋小龙 (74)专利代理机构 北京派特恩知识产权代理有限公司 11270代理人 王子晔 张颖玲(51)Int.Cl.G01N 1/30(2006.01)(54)发明名称染色试剂盒及使用方法(57)摘要本发明涉及染色试剂盒，包括含表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物以及DAB色原的第一试剂，能够提高DAB染色工作液的稳定性。
本发明还涉及试剂盒的使用方法。
权利要求书1页 说明书8页CN 110567785 A 2019.12.13C N 110567785A1.一种试剂盒，包括：第一试剂，含有表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物，以及DAB色原。
2.权利要求1所述的试剂盒，其中，所述表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物的浓度为25μM至10mM，例如50μM至5mM；优选为0.25mM至10mM，例如0.5mM至5mM。
3.权利要求1或2所述的试剂盒，进一步包括含DAB底物的第二试剂以及含DAB缓冲液的第三试剂。
4.权利要求1或2所述的试剂盒，进一步包括含DAB底物和DAB缓冲液的第二试剂。
5.权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述试剂盒是免疫组织化学试剂盒。
6.一种提高DAB染色工作液稳定性的方法，包括将所述DAB色原与表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物接触。
7.权利要求6所述的方法，其中，在所述DAB染色工作液中，所述表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物的浓度为1μM至400μM，例如2μM至200μM；优选为10μM至400μM，例如20μM至200μM。
8.一种染色方法，包括：将含有表没食子儿茶酚没食子酸酯或其衍生物以及DAB色原的第一试剂与DAB底物和DAB缓冲液配制成工作液；将所述工作液加入至待染色样本并孵育；以及终止显色。
凯基生物bca说明书
凯基BCA蛋白含量检测试剂盒一、试剂盒说明BCA蛋白浓度测定试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用蛋白浓度检测方法之一BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。
检测浓度下限达到25微克/毫升，最小检测蛋白量达到0.5微克，待测样品体积为1～20微升。
三、操作步骤2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3. 各孔加入200μL BCA工作液；4. 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（20μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
B．分光光度计测定2.根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀；3.各管加入1000μL BCA工作液；4.各管充分混匀，37℃放置30分钟，然后在562nm下比色测定。
以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线；5.稀释待测样品至合适浓度，样品稀释液总体积为100μL，加入BCA工作液1000μL，充分混匀，37℃放置30分钟后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值；6.根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白含量（μg），除以样品稀释液总体积（100μL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度（单位：μg/μL）。
、注意事项1.配制好的混合BCA工作液室温24小时内稳定。
7-AAD (7-氨基放线菌素D) 用户手册说明书
7-AAD (7-氨基放线菌素D)产品编号 产品名称包装 ST515-1mg7-AAD (7-氨基放线菌素D)1mg产品简介：7-AAD ，英文全称为7-aminoactinomycin D ，中文名称为7-氨基放线菌素D ，是一种能够染色核酸的远红外荧光探针。
7-AAD 与DNA 形成的复合物在546nm 激发光下能够产生647nm 远红外区的最大发射光。
7-AAD 的远红外区发射光这一特性，使其常用于多重荧光染色实验中。
7-AAD 和碘化丙啶(PI)类似，是一种非细胞膜通透性的荧光染料，不能通透具有生物活性的细胞膜，只能染色丧失细胞膜完整性的坏死细胞或被固定和通透处理后的细胞，常被用于荧光染色区分坏死细胞或者固定通透处理后的广谱性染色。
与碘化丙啶(PI)不同的是，7-AAD 被546nm 的氩离子激光激发后，其发射光谱较PI 窄，且发射波长更长并在远红外区，对其它检测通道的干扰更小，在多重荧光染色时是PI 的理想替代品，可与多种488nm 激发光激发的荧光染料联合使用，如FITC (异硫氰酸荧光素)、PE (藻红蛋白)、APC (别藻蓝蛋白)等，在600nm 波长左右有较弱的荧光，可用普通的荧光显微镜检测红色荧光，而在远红外区650nm 波长左右有较强的荧光，可用流式细胞仪FL3通道或配备650nm 长通滤光片的荧光显微镜检测远红外荧光。
7-AAD 的分子式为C 62H 87N 13O 16，分子质量为1270.45，CAS number 为7240-37-1。
染色DNA 后的最大激发光波长为546nm ，最大发射光波长为647nm 。
7-AAD 的化学结构式以及染色DNA 后的激发光与发射光光谱参考图1。
图1. 7-AAD 的化学结构式(图A)以及与DNA 形成的复合物的激发光谱与发射光谱(图B)。
本产品提供1mg 包装，推荐使用DMSO 配制成10mM 的贮存液。
7-AAD 的使用浓度一般为1-10μM ，孵育时间一般为15~60分钟。
Annexin V-APC和7-AAD双染色检测细胞凋亡
细胞功能实验—Annexin V-APC/7-AAD双染色检测细胞凋亡
1. 材料
1.1. 实验材料
所用基础培养基请根据所培养细胞需求确定。
1.2. 试剂配制
1.2.1 培养基配制
于基础培养基中，加入10%FBS，1%双抗，以及其他营养成分（个别细胞需要额外的营养因子，请参考细胞需求），轻轻混匀，4℃冰箱储存（以下简称培养基）。
1.2.2 75%乙醇配制
取75ml无水乙醇，加入25ml超纯水，混匀。
1.2.3 PI染液配制（根据试剂盒说明书配制）
1.3. 主要仪器
1
2. 实验步骤（根据试剂盒说明书操作）
1.用不含EDTA 的胰酶消化细胞，终止消化后，1500rpm，3min离心，吸去上清，用PBS
洗1遍，离心后用PBS重悬细胞，进行细胞计数。
2.取1E+5 个细胞量的悬液，离心弃上清，加入500 μl Binding buffer 重悬细胞。
3.加入5 μL Annexin V-APC，混匀后，再加入5 μL 7-AAD染液，混匀，室温，避光，反应
5-15 min后置于冰上。
4.1小时内进行流式细胞仪机检测。
5.GFP的绿色荧光：FITC通道筛选GFP阳性细胞进行Annexin V-APC／7-AAD荧光检测。
6.Annexin V-APC的红色荧光：激发波长633nm，最大发射波长660 nm。
7.7-AAD红色荧光：激发波长Ex=546 nm；发射波长Em=647 nm。
2。
KGA101 N凯基Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒说明书
凯基Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit）Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。
因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。
因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。
二、 试剂盒组份组份Cat: KGA10110 assays Cat: KGA10220 assaysCat: KGA10350 assaysCat: KGA104100 assays储存条件AnnexinV-EGFP 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Propidium Iodide 50μL 100μL 250μL 500μL 4℃避光Binding Buffer 5 mL 10.0 mL 25 mL 50 mL 4℃三、 试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器1.5m L Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA的胰酶消化液四、 使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
凯基7-AAD染色试剂盒说明书
7-AAD染色试剂盒凯基7-AAD染色试剂盒(Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit)Cat number：KGA For Research Use OnlyStore at4℃for one yearExpire date：A．试剂盒说明7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。
7-AAD同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。
本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。
二、储存条件组分KGA219（100 assays）7-AAD染液0.5 mL 4℃,避光10×Assays Buffer 5 mL4℃1×10倍。
三、试剂盒以外自备仪器和试剂流式细胞仪、激光共聚焦或荧光显微镜：激发波长546nm，发射波长647 nm微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片四、使用注意事项1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
五、操作方法1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
Annexin V-APC 7-AAD 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒说明书
Annexin V-APC /7-AAD 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒货号： P-CA-208规格: 20Assays / 50Assays / 100Assays / 200Assays产品编号成分20Assays50Assays 200AssaysStorageP-CA-107Annexin V-APC 染色液100μL 250μL 500μL 1mL 2~8℃，避光P-CA-151Annexin V Binding Buffer(10×) 1.4mL×2 5.5mL 11mL 11mL×22~8°C P-CA-1627-AAD 染色液(100μg/mL)100μL250μL500μL 1mL-5~-20℃,避光说明书一份保存条件7-AAD 染色液适当分装后-5~-20℃可保存1年，其他试剂2~8℃可保存1年。
Annexin V-APC 禁止冷冻保存。
实验原理Annexin V-APC /7-AAD 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。
Annexin V 是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸(PS)有高度亲和力。
当细胞发生凋亡时，膜内侧的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻到膜表面，而被荧光染料APC 标记的Annexin V 结合，可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性，而7-氨基放线菌素D （7-Amino Actinomycin D,7-AAD ）可与双链DNA 特异性结合并产生强烈的荧光，与Annexin V 搭配使用，可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示：Jurkat 细胞用5μM 喜树碱（Camptothecin ）(左)或未加药(右)处理4h ，本试剂盒染色后流式检测。
Annexin V-APC 单阳细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-APC 和7-AAD 双阳细胞为坏死或晚期凋亡细胞，7-AAD 单阳细胞为裸核细胞。
AnnexinV-APC和7-AAD双染色检测细胞凋亡
AnnexinV-APC和7-AAD双染色检测细胞凋亡
细胞功能实验—Annexin V-APC/7-AAD双染色检测细胞凋亡
1. 材料
1.1. 实验材料
所用基础培养基请根据所培养细胞需求确定。
1.2. 试剂配制
1.2.1 培养基配制
于基础培养基中，加入10%FBS，1%双抗，以及其他营养成分（个别细胞需要额外的营养因子，请参考细胞需求），轻轻混匀，4℃冰箱储存（以下简称培养基）。
1.2.2 75%乙醇配制
取75ml无水乙醇，加入25ml超纯水，混匀。
1.2.3 PI染液配制（根据试剂盒说明书配制）
1.3. 主要仪器
1
2. 实验步骤（根据试剂盒说明书操作）
1.用不含EDTA 的胰酶消化细胞，终止消化后，1500rpm，3min 离心，吸去上清，用PBS
洗1遍，离心后用PBS重悬细胞，进行细胞计数。
2.取1E+5 个细胞量的悬液，离心弃上清，加入500 μl Binding buffer 重悬细胞。
3.加入5 μL Annexin V-APC，混匀后，再加入5 μL 7-AAD染液，混匀，室温，避光，反应
5-15 min后置于冰上。
4.1小时内进行流式细胞仪机检测。
5.GFP的绿色荧光：FITC通道筛选GFP阳性细胞进行Annexin V-APC／7-AAD荧光检测。
6.Annexin V-APC的红色荧光：激发波长633nm，最大发射波长660 nm。
7.7-AAD红色荧光：激发波长Ex=546 nm；发射波长Em=647 nm。
2。
凯基质粒大提试剂盒说明书
凯基质粒大提试剂盒说明书修改日期：20200706Cat Number：KGA1710Store at RT/-20℃ for 12 monthsFor Research Use Only一、产品简介凯基质粒大提试剂盒是将硅胶薄膜的优点与经典的强碱-SDS裂解细菌法结合，可在1h 获取高质量的质粒DNA。
本试剂盒利用特制的纯化柱简化了结合、洗涤和洗脱步骤，可同时处理多种样品。
获得的纯化质粒为高纯度级别，适用于酶切、PCR、测序及转化等要求。
二、产品组分三、操作步骤使用前请先在Washing buffer加入90 mL无水乙醇（10 assays），其余规格加入无水乙醇的体积请参照瓶身标签。
Solution I在使用前请将提供的全部RNase A加入，混匀，置于4℃保存。
如非特别指明，所有离心步骤均在室温下操作。
1. 接种新鲜的单个菌落到LB培养基（含适量抗生素），37℃震荡培养14-16小时。
收集菌液，10000 rpm离心3min，尽量吸除上清。
注意：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。
2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入10 mL Solution I (确保已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，会影响菌体裂解，导致质粒提取量和纯度偏低。
3. 向离心管中加入10 mL Solution II，温和地上下翻转5-10次室温放置2-4min。
注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。
4.向离心管中加入14 mL Solution III，温和地上下翻转5-10次，室温放置3-5min，此时会出现白色絮状沉淀。
5.12000 rpm离心15 min，用移液器小心地将上清转移到干净离心管中，尽量不要吸出沉淀（若上清中还有白色沉淀，可再次离心后取上清）。
凯基 Mitochondria Isolation Kit 线粒体提取试剂盒 说明书
线粒体提取试剂盒Mitochondria Isolation Kit一、试剂盒说明凯基线粒体提取试剂盒用于动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。
适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。
其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。
本试剂盒线粒体的分离原理基本上采用：第一，通过机械方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体。
二、试剂盒组份组份KGA82750 tests保存温度50mLLysis Buffer20mL Medium Buffer20mL Suspension buffer5mL Store Buffer2-8℃说明书修订日期：2021.06.25Cat number：KGA827Store at 2-8℃for 12 monthsFor Research Use Only（科研专用）三、使用注意事项1.为保证获得完整的线粒体:第一是全程低温操作，将样品管放在冰水浴而不是碎冰块中。
第二是快速:微量制备比大规模制备操作更方便和快速，因而更容易获得完整的线粒体。
第三，在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。
与组织块相比，培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
在相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右即可。
过度研磨将破坏线粒体，研磨不足将降低得率。
2.以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3.进行Western Blot和2D-胶电泳，可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。
4.Medium Buffer、Suspension Buffer、Store Buffer短期内（1-2周）可存放4℃，若长期不使用需-20℃冻存。
试剂盒说明书
第一章基因组DNA的提取DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物学技术中最重要、最基本的操作之一。
然而通过传统的提取技术不仅花费时间长而且提取效率低，但是通过使用Karroten试剂盒可以快速提取目的基因，从而大大提高工作效率。
一：基因组DNA提取的原理：DNA与组蛋白构成核小体，核小体缠绕成中空的螺旋管状结构，即染色质丝，染色质丝再与许多非组蛋白形成染色体。
染色体存在于细胞核中，外有核膜及胞膜。
从组织中提取DNA必须先将组织分散成单个细胞，然后破碎包膜及核膜，使染色体释放出来，同时去除与DNA结合的组蛋白与非蛋白。
二：基因组DNA提取的方法：a : 样品预处理从各种不同来源样品(如细菌、酵母、血液、动物组织、植物组织和培养细胞)，或同一来源的不同形式（如新鲜冷冻血液、血凝块和干血迹等）中提取高纯度的基因组DNA，因细胞结构及所含成分不同，样品预处理的方式也各有差异。
例如：b : 细胞裂解c : DNA分离纯化纯化要求：①核酸样品中不应存在对酶（如内切酶、DNA聚合酶）有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子②其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度③排除其他核酸分子的污染，如提取DNA分子时应除去RNA，相反亦是纯化方法：细胞破碎后，经常使用吸附材料结合方法去除杂质和纯化DNA，主要有硅基质吸附材料、阴离子交换树脂和磁珠等。
因硅基质吸附材料可可特异吸附核酸DNA，使用方便、快捷，不需用有毒溶剂如苯酚、氯仿等，使得提取基因组DNA像过滤一样简单，因此硅基质材料成为大规模分离纯化DNA，去除蛋白、多糖、盐类和有机溶剂等杂质的通用方法。
硅基质吸附原理：主要利用DNA与硅基质材料在高盐中结合，低盐条件下脱离的特征，其机理为高浓度盐离子破坏硅基质水分子结构，形成阳离子桥，当盐被清除后，再水化的硅石破坏了基质和DNA之间的吸引力，因此DNA从硅基质上洗脱下来。
ThermoScientificRevertAidFirstStrandcDNASynthesisKitK说明书第一链cDNA合成试剂盒
RevertAid第一链cDNA Synthesis试剂盒#K1621, #K1622分析证明书质量控制#K1621Lot采用100 fg对照GAPDH RNA和对照引物进行RT-PCR反应，通过在1%琼脂糖上进行凝胶电泳和溴化乙锭染色显示得到足够量的496 bp的产物质量认证人：Jurgita Zilinskiene目录页码试剂盒组成 (2)存储条件 (2)产品说明 (2)注意事项 (3)操作步骤 (6)RT-PCR (6)合成cDNA用于克隆………..………………………………………7 实验对照……………………………………………………………….8 问题分析与解决 (10)** 一个单位的RiboLockRNase酶抑制剂抑制5ng RNA酶A 50%的活性。
存储条件试剂盒中所有组分应存储在-20°C。
对照用RNA可存储于-70°C以便长期使用。
产品说明RevertAid第一链cDNA合成试剂盒以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。
本试剂盒使用RevertAid M-MuLV反转录酶，它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。
该反转录酶可耐受42-50°C温度，合成的cDNA片段长度达13kb。
试剂盒中含有RiboLock 重组RNA酶抑制剂，防止RNA降解，可耐受55°C高温。
试剂盒同时含有oligo(dT)18和随机六聚体引物。
随机六聚体引物与模板非特异性地结合，以总RNA中任何RNA为模板合成cDNA。
oligo(dT)18选择性和RNA 3’po ly(A)配对结合，只以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA。
使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。
合成的第一链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板，第二链cDNA的合成或线性RNA扩增，也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验，比如将标记好的第一链cDNA 作为杂交实验中的探针或者用于微阵列分析。
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7-AAD染色试剂盒
凯基7-AAD染色试剂盒
(Cell Apoptosis 7-AAD Detection Kit)
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at4℃for one year
Expire date：
A．试剂盒说明
7-AAD （7-amino-actinomycin D）是一种核酸染料，它不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性逐渐增加，结合细胞凋亡中DNA的有控降解，在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光，通过7-AAD标记DNA的强弱，将细胞分为三群：7-AAD强为死亡细胞，7-AAD弱是凋亡细胞，7-AAD-为正常活力细胞。
7-AAD同PI 有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI 的最佳替代品，可与Annexin V-EGFP/FITC/PE联合使用。
本试剂盒适用于培养的细胞染色，可应用于荧光显微镜、激光共聚焦计或流式细胞仪检测。
二、
储存条件
组分KGA219
（100 assays）
7-AAD染液0.5 mL 4℃,避光
10×Assays Buffer 5 mL4℃
1×10倍。
三、试剂盒以外自备仪器和试剂
流式细胞仪、激光共聚焦或荧光显微镜：激发波长546nm，发射波长647 nm
微量移液器、1.5m L Microtube、载玻片
四、使用注意事项
1．微量试剂取用前请离心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4．本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
五、操作方法
1．悬浮细胞离心（2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用胰酶消化收集用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混匀；室温、避光、反应5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer悬浮细胞；
4．请在1 hour内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。
A．荧光显微镜观察
1．滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；
2．对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；
（1）将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；
（2）用PBS洗涤细胞两次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混匀；
（4）将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖；
（5）避光、室温反应5 min。
3．将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下观察激发波长546nm，发射波长647nm，7-AAD 荧光信号呈红色。
B．流式细胞仪分析
用流式细胞仪检测，激发波长Ex=546 nm; 发射波长Em=647 nm。
7-AAD红色荧光建议使用FL3通道检测。