临床免疫学：胶体金免疫层析试验
胶体金免疫层析法生产
胶体金免疫层析法生产
胶体金免疫层析法的生产过程如下：
1.将蛋白质置入透析袋中，然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水
中（0.005mol/l NaCl，pH7.0）进行透析。
2.去除蛋白质中的沉淀。
长期低温保存的蛋白质或4℃较长时间保
存的抗体，特别是在浓度高于2mg/ml的情况下，很容易形成聚合物。
这些聚合物对标记过程及免疫金探针的稳定性有一定影响，因此，在标记之前需要离心以除去这些聚合物。
3.确定最佳pH值。
一般认为，当pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电
点时（pH=PI+0.5pH），蛋白质呈电中性，此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小，但蛋白质分子的表面张力却最大，处于一种微弱的水化状态，较易吸附于金颗粒的表面。
由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，而使胶体金处于稳定状态。
如果低于蛋白质的等电点时，蛋白质带正电荷，胶体金带负电荷，二者极易静电结合形成大的聚合物。
以上是胶体金免疫层析法的生产步骤，建议咨询专业人士获取更多信息。
胶体金法和胶体金免疫层析法的区别
胶体金法和胶体金免疫层析法的区别摘要：一、胶体金法和胶体金免疫层析法的概念与原理二、胶体金法和胶体金免疫层析法的应用领域三、胶体金法和胶体金免疫层析法的优缺点四、总结：胶体金法和胶体金免疫层析法的区别与选择正文：胶体金法和胶体金免疫层析法都是常见的免疫分析技术，广泛应用于医学、生物学等领域。
然而，这两种方法在原理、应用、优缺点等方面存在一定的差异，下面我们将逐一进行分析。
一、胶体金法和胶体金免疫层析法的概念与原理胶体金法：胶体金法是一种免疫标记技术，利用胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体检测。
它通过胶体金颗粒与抗原或抗体的特异性结合，实现对目标物质的检测。
胶体金法具有较高的灵敏度和特异性，且检测结果直观可见。
胶体金免疫层析法：胶体金免疫层析法是一种免疫分析方式，利用特异性抗原抗体免疫结合反应的原理，加上试纸条层析技术进行检测。
它将胶体金作为标记物，通过层析技术将结合后的抗原抗体分离，从而实现对目标物质的快速诊断。
二、胶体金法和胶体金免疫层析法的应用领域胶体金法：胶体金法广泛应用于免疫学、病理学、组织学等领域。
例如，在医学检测中，胶体金法可以用于病原体检测、抗体检测、肿瘤标志物检测等。
胶体金免疫层析法：胶体金免疫层析法主要用于快速诊断技术，如传染病、肿瘤、生育健康等领域。
它具有快速、灵敏、特异性的特点，适用于临床、Point-of-Care 和家庭检测。
三、胶体金法和胶体金免疫层析法的优缺点胶体金法：优点：1.灵敏度高，特异性强；2.检测结果直观，易于判读；3.应用领域广泛，适应性强；缺点：1.胶体金颗粒尺寸较大，可能导致分辨率降低；2.实验条件较严格，操作复杂；胶体金免疫层析法：优点：1.快速检测，结果准确；2.操作简便，适用于基层医疗和家庭检测；3.成本较低，普及度高；缺点：1.相对于胶体金法，灵敏度和特异性略低；2.设备和技术要求较高；四、总结：胶体金法和胶体金免疫层析法的区别与选择胶体金法和胶体金免疫层析法在原理和应用上具有一定的区别。
第5章 常见免疫学检测技术-胶体金免疫层析
夹心法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©②间接法检测抗体
间接法反应演示
阳性
阴性
（三）胶体金免疫测定技术
§ （2）胶体金免疫层析
©③间接竞争法
竞争抑制法反应演示
阴性
弱阳性
阳性
检测线颜色强度与样品浓度负相关
竞争法结果判断
（三）胶体金免疫测定技术
ª 2.胶体金免疫层析试纸条制作 § （1）试剂、耗材准备 § （2）金标抗体的制备 § （3）试纸条的组装 § （4）试纸条的优化 § （5）样品检测及分析
ª 2.胶体金（免三疫）层胶析体试金纸免条疫制作测定技术
§ （1）试剂、耗材准备
• 硝酸纤维素膜的参数：孔径、对称性、层析速度、表面 活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均 一性等
• um 指的是膜孔径，但膜在生产过程中，由于干燥成型 等过程的非绝对均一，膜的孔径也是非均一的，不同厂 家膜孔径标准无法统一衡量
（三）胶体金免疫测定技术
ª 1.主要形式（基本原理） § 斑点金免疫渗滤/dot immunogold filtration
assay, DIGFA § 胶体金免疫层析/immunochromatography assay,
ICA--试纸条
（三）胶体金免疫测定技术
§ （1）斑点金免疫渗滤
原 • 以硝酸纤维素膜作为固相载体、包被抗 理 原或抗体
（二）胶体金的制备
® 一般采用还原法，常用的还原剂有柠檬酸钠、鞣 酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等
ª 以柠檬酸三钠还原法为例 § 取0.01% HAuCl4 溶液100 mL 搅拌、加热、回
流，沸腾2 min, 迅速一次加入一定量的 1% 柠 檬酸三钠水溶液（现配），保持低沸，经由蓝、 灰、至呈现透明的橙红色停止加热。回流冷却至 室温（应为原体积，否则应用蒸馏水恢复体积） § 加入柠檬酸钠的量不同，胶体金颗粒大小不同
新冠胶体金免疫层析法原理
新冠胶体金免疫层析法原理新冠病毒（COVID-19）是一种由严重急性呼吸综合症冠状病毒2型（SARS-CoV-2）引起的传染病。
为了迅速检测和诊断感染新冠病毒的个体，科学家们开发了各种检测方法，其中包括胶体金免疫层析法。
胶体金免疫层析法（Colloidal Gold Immunoassay）是一种基于免疫学原理的快速诊断方法，它利用纳米金颗粒的性质来检测特定抗原或抗体。
在这种方法中，纳米金颗粒被包裹在特定抗体上，并形成一种可见的复合物。
这种方法的原理是通过特定抗体的配对反应来检测患者体内是否存在新冠病毒相关的抗体。
在检测过程中，首先将待测试血样加入试剂盒中。
这些试剂盒通常包含有两种类型的试剂，一种是带有新冠病毒抗原的纳米金颗粒，另一种是检测特定抗体的试剂。
当血样中存在新冠病毒相关的抗体时，它们与试剂中的新冠病毒抗原结合，形成一种反应复合物。
这种反应复合物随后与试剂盒中的带有特定抗体的纳米金颗粒结合。
这样，纳米金颗粒就会聚集在一起，形成一个可见的颜色变化，通常是红色线条或斑点。
如果血样中不存在新冠病毒相关的抗体，则不会发生聚集，试剂盒上不会出现颜色变化。
这意味着测试结果为阴性。
胶体金免疫层析法的优点是快速、简单、可视化和便携。
这种方法不需要特殊的设备或技术，并且可以在短时间内提供结果。
因此，它被广泛应用于临床和流行病学调查中，特别是在资源有限的地区和快速筛查人群时。
然而，需要指出的是，胶体金免疫层析法并不是一个确定性的检测方法。
尽管它可以快速筛查出可能感染新冠病毒的个体，但其结果需要进一步经过实验室验证，以确认感染或否定感染。
因此，在使用此方法时应谨慎，并且应与其他检测方法相结合，以确保准确性和可靠性。
临床免疫学：胶体金免疫分析
反应线 质控线
阳性
阴性 23
操作技术要点
A
B
DIGFA——双抗体夹心法测抗原 24
DIGFA——结果判断
InstantChek HIV 1+2的结果判断 (图 像)
阳性
阴性
测定无效
25
胶体金免疫层析试验
（ dot immunogold chromatographic assay, DICA)
G
T
C
26
夹心法 双抗原夹心法
双抗体夹心法
抑制法(竞争法） 间接法
27
胶 （体
金 免 疫 层 析 试 验
dot immunogold chromatographic
assay,DICA )
双抗体夹心法
阳性结果
标本
G区：金标特异性 抗体(兔型)
T区：特异 性抗体
吸水纸
C区：羊
抗兔Ig
28
29
ICA 结果观察 阳性 阴性 无效
体
-
+
金
-
+
白 质
-
+
15
免疫金的制备
制备要点 ➢ PH值的调整：原则上可选择待标记蛋白质等
电点，也可略为偏碱 ➢ 蛋白质最适标记量的确定 ➢ 标记过程 ➢ 离心纯化：超速离心法 ➢ 免疫金最终用稀释液配成工作浓度保存 ：稳
定剂-PEG，BSA
16
对
蛋白量逐渐减低
照
管
待标记蛋白作系列稀释+定量胶体金+Nacl 最适标记量：能保持红色不变而蛋白含量最
标本 Ab
Ab*
Ag
标记物 放射性核素
荧光素 酶
胶体金免疫层析试验.ppt
一、组成
组成
工作原理 结果判定 临床应用
检测区（T区） 质控区（C区）
样品垫 胶体金区 硝酸纤维膜
吸水垫
检测区（T区） 质控区（C区）
S
G
T
C
B
样品胶硝垫体酸金纤区维膜 吸水垫
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
胶体金免疫层析试验
胶体金免 疫标记
技术
硝酸纤维膜
蛋白质层 析技术
2 结果判定
HCG夹心法
阳性
阴性
C
C
T
T
Q1: 试纸条中红色线条表示什么含义？
质控线（C线）
检测线（T线）
Q2: MAX标志线
试纸条中为什么会出现红色线条？
四、临床应用
组成
工作原理 结果判定 临床应用
临床应用（以HCG为例）
急诊检测
家庭检测
现场检测
胶体金免疫层析实验
组成
样品垫 胶体 金垫
硝酸纤 维膜区 吸水垫
1 原理
免疫标 记技术
蛋白质层 析技术
《临床免疫学检验技术》 第十四章 胶体金免疫分析
胶体金免疫层析试验
早早孕诊断试纸条（HCG）检测
第步
打开包装取出试 纸条
第步
插入待检样本中
第步
观察结果
• 临床免疫学检验技术
胶体金免疫层析试验
(goldimmunochromatography assay, GICA)
目录
试纸条长什么样子？ 它是怎么工作的？ 它有哪些结果？
分离
二、工作原理
组成 工作原理 结果判定 临床应用
蛋白质层析方向
Ag
胶体金免疫层析竞争法
胶体金免疫层析竞争法1. 背景介绍胶体金免疫层析竞争法（Colloidal Gold Immunochromatographic Assay）是一种常见的免疫层析快速检测方法。
该方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒与样品中的目标分子相互作用，通过色素沉淀形成可见的测试结果。
这种检测方法具有检测快速、操作简单、结果直观等优点，在临床诊断、食品安全监测、环境污染监测等领域得到广泛应用。
2. 原理介绍2.1 免疫学原理免疫学原理是胶体金免疫层析竞争法的基础。
免疫层析法是一种通过抗原-抗体反应实现分离和检测的技术。
在该方法中，通过将抗原（目标分子）与抗体（特异性与抗原结合的蛋白质）结合，形成免疫复合物，从而实现目标分子的检测。
2.2 胶体金颗粒胶体金颗粒是胶体金免疫层析法的关键试剂。
胶体金颗粒具有良好的生物相容性、稳定性和可见性，广泛应用于免疫学和生物医学领域。
胶体金颗粒的颜色通常为红色或紫色，直径一般在10-100纳米之间。
在光学显微镜下观察，胶体金颗粒呈现明显的表面等离子共振吸收峰，即表现为红色。
2.3 竞争反应胶体金免疫层析竞争法通过竞争反应实现目标分子的检测。
竞争反应分为两个步骤：竞争体系构建和检测结果显示。
2.3.1 竞争体系构建竞争体系构建是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，将胶体金颗粒与目标分子结合。
首先，将目标分子与胶体金颗粒中的抗体结合，形成免疫复合物。
然后，将样品中的目标分子与胶体金颗粒中的抗体竞争结合。
当样品中的目标分子存在时，会与胶体金颗粒中的抗体竞争结合，导致免疫复合物的形成减少。
而当样品中的目标分子不存在时，胶体金颗粒中的抗体能与胶体金颗粒自身上的抗原结合，免疫复合物形成量较多。
2.3.2 检测结果显示检测结果显示是胶体金免疫层析竞争法的关键步骤。
在这一步骤中，利用胶体金颗粒的可见性进行结果显示。
当竞争体系构建完成后，将样品滴在测试纸上，胶体金颗粒会经由纸质的吸收作用，沿纸张上升。
实验六胶体金免疫层析技术PPT课件
胶体金的制备及性质
01
详细介绍了胶体金的制备方法和性质特点，包括其光学性质和
稳定性等。
胶体金在生物医学领域的应用
02
探讨了胶体金在免疫分析、生物传感器和药物载体等方面的应
用和研究进展。
胶体金标记技术
03
介绍了胶体金标记技术的原理、操作方法和注意事项，以及其
在免疫分析中的优势和局限性。
THANKS FOR WATCHING
的准确性和可靠性。
图像分析
通过观察不同时间点的试纸条照片， 分析颜色变化和显色情况，判断实 验结果的准确性。
统计学分析
运用统计学方法对实验数据进行处 理和分析，得出更具有科学性和客 观性的结论。
结果讨论与解释
结果解释
根据实验结果和数据分析，对实 验原理、操作步骤和误差来源进
行深入探讨和解释。
结果讨论
在临床诊断中，胶体金免疫层析技术常用于检测妊娠、糖尿病、肝炎等疾病的标志 物。
03
实验材料与方法
实验材料
01
02
03
抗原
用于制备胶体金的特异性 抗原，如病毒、细菌、毒 素等。
抗体
用于与抗原结合的特异性 抗体，通常为多克隆抗体 或单克隆抗体。
胶体金
制备胶体金所用的金盐， 如氯金酸。
实验材料
硝酸纤维素膜
行性和实用性。
与传统检测方法相比，胶体金免 疫层析技术具有更高的灵敏度和 特异性，且操作简便，适用于现场快速Leabharlann 测和临床应用。技术优缺点分析
快速
检测时间短，可在几分钟内得到结果 。
简便
操作简单，不需要复杂的仪器和设备 。
技术优缺点分析
灵敏度高
能够检测低浓度的目标物质。
2024临床免疫学检验名词解释(第二部分)
2024临床免疫学检验名词解释（第二部分）49、荧光：荧光物质在吸收激发光的能量后，使原来处于基态的电子跃迁到激发态，当其回复至基态时，激发态的电子以发射光的形式释放出能量，这种发射光称为荧光。
so、荧光免疫试验：是以荧光物质标记抗体或抗原，通过与相应抗原或抗体发生特异也绪合反应，以此对待测物进行定位、定性和定量分析的检测技术，具有高度特异性、敏感性和直观性。
51、时间分辨荧光免疫试验：以系元素标记杭原或抗体，并与时间分辨测定技术相结合而建立起来的一种新型非放射性微量分析技术。
52、Stokes位移：选择荧光物质作为标记物时，必须考虑激发光谱和发射光谱的波长差，即Stokes位移。
53、荧光偏振免疫试验：是利用抗原抗体竞争反应原理，根据荧光素标记抗原与荧光素抗原－抗体复合物之间荧光偏振程度的差异测定体液中小分子抗原物质的含量。
54、荧光效率：荧光物质分子将吸收的光能转变成荧光的百分率称为荧光效率。
55、荧光滓灭：荧光物质在某些理化因素（如紫外线照射、高温、苯胺、硝基苯、酚、I－等）作用下，发射荧光减弱甚至消退的现象称为荧光滓灭。
56、酶免疫试验：是继荧光免疫试验和放射免疫试验之后的三大经典免疫标记技术之一，它以酶标记抗体（抗原）作为主要试剂，将酶高效催化反应的专一性和抗原－抗体反应的特异性相结合的免疫检测技术。
57、包被：将抗原或抗体结合在固相载体上的过程称为包被。
58、封闭：由千包被液蛋臼浓度很低，造成包被后固相载体表面会剩余少量未结合位寺，可非特异性吸附标本中的蛋白质和酶结合物，形成非特异性结合导致本底增高。
为消除干扰，包被后的微孔板或膜等还需用1%~5％牛血清白蛋白(BSA),5% ~ 20％小牛血清或2％脱脂乳等再包被一次，此过程称为封闭。
59、均相酶免疫试验：是利用酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变的原理，可以在不将结合酶标记物和游离酶标记物分离的清况下，通过测定标记酶活性的改变（酶活性增强或减弱），从而确定待测物的含量。
胶体金免疫层析间接法测抗体
胶体金免疫层析间接法测抗体概述在免疫学研究中，测定抗体的含量和活性是非常重要的。
胶体金免疫层析间接法是一种常用且高效的方法，用于测定抗体的存在和浓度。
本文将详细介绍胶体金免疫层析间接法的原理、步骤和应用。
胶体金免疫层析间接法原理胶体金免疫层析间接法是一种基于免疫层析的定性和定量分析方法。
其原理基于抗原-抗体反应和胶体金颗粒的特性。
胶体金颗粒具有良好的稳定性和生物相容性，在免疫层析中具有较强的敏感性和特异性。
胶体金免疫层析间接法步骤1.样品处理–收集样品并加工处理，确保样品的纯度和完整性。
–根据需求，可以对样品进行预处理，如稀释、去除干扰物等。
2.抗原固定–在固相载体（如纸张、膜等）上固定抗原。
–抗原可以直接固定在固相载体上，也可以通过其他方法间接固定，如沉淀、共价结合等。
3.样品添加–将处理好的样品加到固相载体上，与固定的抗原发生反应。
–反应时间和温度根据具体实验需求进行调整。
4.胶体金标记抗体–将特异性抗体与胶体金颗粒结合。
–通常通过物理吸附或共价结合方法将抗体与胶体金颗粒结合。
5.胶体金标记抗体添加–将胶体金标记的抗体加到固相载体上，与样品中的抗原结合形成免疫复合物。
–免疫复合物的形成会导致固相载体上的颜色变化，形成可见的测试线。
6.结果分析–根据形成的可见测试线的数量和强度，可以定性和定量地分析抗体的存在和浓度。
–通过对照样品和标准曲线，可以计算出样品中的抗体浓度。
胶体金免疫层析间接法应用胶体金免疫层析间接法在临床诊断、药物开发和基础研究等领域具有广泛的应用前景。
临床诊断胶体金免疫层析间接法可以用于诊断某些疾病和感染，如艾滋病、流感等。
通过检测人体产生的特定抗体，可以判断是否存在疾病或感染。
药物开发胶体金免疫层析间接法可以用于药物的筛选和评估。
通过检测药物对特定抗体的影响，可以评估药物的活性、特异性和毒副作用。
基础研究胶体金免疫层析间接法在免疫学和生物学研究中也有广泛的应用。
可以用于分析细胞表面标记物的表达和变化，研究免疫反应的机制和调控因子。
简述胶体金免疫层析试验的原理
简述胶体金免疫层析试验的原理
胶体金免疫层析试验是一种广泛应用于临床诊断的免疫学方法，其原理基于抗原与抗体的特异性反应和胶体金颗粒的性质。
首先，抗原与抗体具有高度的特异性反应。
抗原是一种可以诱导免疫系统产生抗体的物质，而抗体则是由免疫系统识别并与抗原结合的蛋白质。
在胶体金免疫层析试验中，目标抗原与特异性抗体预先反应形成抗原-抗体复合物。
其次，胶体金颗粒具有特殊的性质。
胶体金颗粒是直径约为
20-200纳米的纳米金粒子，具有强烈的表面等离子共振吸收
特性，使其呈现出红色或紫红色。
胶体金颗粒还具有良好的稳定性和容易修饰的特点。
在试验过程中，将已经与抗原形成复合物的胶体金颗粒滴加到试纸上，然后样品溶液滴加到试纸样品孔上。
如果样品中存在目标抗原，它们会与复合物竞争结合到特异性抗体上。
当目标抗原与抗体结合后，胶体金颗粒会被阻滞在试纸样品孔上，形成红色或紫红色的线条。
如果样品中不存在目标抗原，则胶体金颗粒会沿着试纸上升，不会形成线条。
通过观察样品孔上的线条的形成情况，可以判断样品中是否存在目标抗原。
线条的出现通常表示阳性结果，即样品中存在目标抗原；线条未出现则表示阴性结果，即样品中不存在目标抗原。
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法是一种常用于生物分析和临床诊断的技术。
它基于抗原-抗体反应原理，利用胶体金粒子和抗体之间的相互作用来实现分离和检测目标分子。
胶体金是一种纳米级粒子，其表面具有特定的化学官能团，可以与抗体分子发生化学结合。
在胶体金免疫层析法中，首先将目标分子与抗体反应，形成抗原-抗体复合物。
然后将这个复合物与含有胶体金粒子的试剂混合，使胶体金粒子与抗原-抗体复合物结合。
混合物经过一段时间后，被加入到一根特定宽度和长度的试纸条上，试纸条上通常具有特定的孔洞或线条，用于控制混合物的流动。
胶体金粒子在试纸条上移动的速度受到复合物的大小和电荷的影响。
当复合物较大且带有负电荷时，胶体金粒子与复合物结合，导致复合物无法通过试纸孔洞或线条，停留在原位置。
这样，通过观察试纸条上形成的颜色条带的位置，可以确定是否存在目标分子。
通常，出现颜色条带表示目标分子的存在，而无颜色条带表示目标分子的缺失。
胶体金免疫层析法具有快速、便携和易于操作的特点，可以在不需要复杂设备和实验室条件的情况下进行分析。
因此，它广泛应用于临床诊断、食品安全检测、环境监测等领域。
免疫层析胶体金法
免疫层析胶体金法免疫层析胶体金法是一种常用的生物分析技术，主要用于检测生物样本中的抗原或抗体。
该方法结合了免疫学原理和胶体金纳米颗粒的特性，具有高灵敏度、高特异性和简单快速等优点。
免疫层析胶体金法的原理是基于抗原与抗体之间的特异性反应。
首先，在胶体金纳米颗粒表面修饰上适当的抗体或抗原，使其能够与待测的抗原或抗体发生特异性结合。
然后，将待测样品添加到一片特定的膜上，膜上固定有与胶体金固定结合的另一种抗体或抗原。
当样品中存在与胶体金修饰的抗原或抗体相结合的待测物时，会形成胶体金-待测物-固定抗体或抗原的复合物。
这些复合物会在免疫层析膜上移动并沉积在特定位置，形成可视的条纹或斑块。
免疫层析胶体金法具有许多优点。
首先，它具有快速的分析速度，通常花费不到半个小时就能得到结果。
其次，该方法不需要复杂的仪器设备，只需简单的样品处理和可见观察，因此可以广泛应用于基础研究和临床诊断等领域。
此外，免疫层析胶体金法具有较高的灵敏度和特异性，能够检测到低浓度的抗原或抗体。
同时，该方法还能同时检测多个待测物，提高了检测的效率。
免疫层析胶体金法在许多领域得到了广泛的应用。
在医学诊断方面，它可以用于检测多种疾病的标志物，如传染病、肿瘤、心脏病等。
在食品安全领域，免疫层析胶体金法可以用于快速检测食品中的残留农药、毒素以及转基因成分。
在环境监测方面，该方法可以用于检测水体、土壤和空气中的污染物，如重金属、农药等有害物质。
此外，免疫层析胶体金法还可应用于生物制药、疫苗研发等领域。
然而，免疫层析胶体金法也存在一些局限性和挑战。
首先，其灵敏度和特异性受抗体或抗原的质量影响较大，需要高质量的抗体或抗原来提高检测的准确性。
其次，该方法只能实现定性或半定量的分析，不能得到精确的定量结果。
此外，免疫层析胶体金法对待测样品的复杂性有一定的限制，如含有干扰物质或高浓度的待测物。
因此，在实际应用中需要综合考虑这些因素。
综上所述，免疫层析胶体金法是一种高灵敏度、高特异性和简单快速的生物分析技术。
胶体金和免疫层析法区别
胶体金和免疫层析法区别胶体金和免疫层析法是生物医学领域常用的两种技术手段，它们在生物分析、临床诊断、生命科学研究等方面都有着重要的应用价值。
这两种方法都是利用抗体与抗原的特异性相互作用来进行生物分析的技术手段，但在原理和应用方面有着一些显著的区别。
首先，我们先来介绍一下胶体金技术。
胶体金是一种在纳米尺度下的金颗粒悬浮液，其具有良好的生物相容性和生物相互作用性，在生物医学领域被广泛应用于生物探针和生物标记物的检测。
胶体金技术主要是利用了胶体金颗粒的表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）效应来进行分析，当在特定条件下，胶体金颗粒与抗体–抗原复合物结合后，会发生表面等离子共振现象，从而产生可见光的吸收峰值转移，通过测量吸光度的变化来进行生物分析。
相比之下，免疫层析法则是一种传统的生物分析方法，该方法主要原理是利用抗体与抗原的特异结合，通过与被测样品中的抗原相互作用，形成免疫复合物，然后通过免疫扩散或免疫沉淀的方式来进行分离和检测。
免疫层析法在临床诊断和生物医学研究中有着广泛的应用，尤其在血清标志物检测、肿瘤标志物检测、感染病原体检测等方面有着重要的价值。
在原理方面，胶体金技术主要通过测定胶体金颗粒的表面等离子共振效应来进行生物分析，所以其具有较高的灵敏度和特异性，能够检测到非常低浓度的抗原分子。
而免疫层析法则主要通过抗原-抗体的非共价结合来进行分析，所以其检测灵敏度相对较低，一般只能检测到中等浓度的抗原。
此外，胶体金技术还具有颜色可视化的优势，当胶体金与抗原结合后，会出现颜色变化，通过肉眼观察就可以判断结果，这在一些简单快速的生物分析中有着很大的应用潜力。
而免疫层析法通常需要通过测定免疫复合物的位置和密度来进行定量分析，相对来说操作要求比较严格。
在应用方面，由于胶体金技术具有灵敏度高、特异性好、操作简单、颜色可视化等优势，因此在临床诊断、环境监测、生命科学研究等领域都有着广泛的应用。
临床免疫学：胶体金免疫层析试验
胶体金-乙肝表面抗原 加样区
C：乙肝表面抗体
主要试剂
• 试剂条 • 采血针 • 缓冲液
操作方法与结果判定
• 将血清/血浆/全血标本直接加入加样区,
• 静置10分钟后判定结果，20分钟后判定结 果无效；
• 两条带有效，标本阳性；
• 仅质控区有带， 标本阴性;
<<临床免疫学检验>>操作考试
班级
姓名
学号
分数
题号 操作题 理论题
操作（50分）
实验报告：（30分，其中实验原理8分、试剂与器材 2分、操作步骤5分、注意事项5分、结果分析与 判断5分、临床意义5分）
理论题（20分）
操作考试时间：2017-12-12下午
分两批进行： 第一批：1、2班：14：00~15：30 第二批：3、4班：15：30~17：00
• 仅测试区有带， 无
• 无带；
效
注意事项
• 测试条从冰箱取出后应恢复至室温； • 加标本不可越过加样区。
方法学评价与临床应用
• 操作简单、方便，结果快速； • 符合床边检验POCT要求； • 不能准确定量。
作业：要求大家对前面7次实验报告按
照老师批改意见进行订正。下周操作考试 时学委收齐交到讲台上。
胶体金免疫层析试验
• 胶体金免疫技术
胶体金免疫测定技术
胶体金渗滤试验 胶体金层析试验
胶体金免疫层析试验原理
一种将胶体金免疫技术和蛋白质层析技术相 结合的快速固相膜免疫分析技术。所用试剂全部 为干试剂，测试时滴加在膜一端的待测标本溶液 受载体膜的毛细管作用向另一端移动，在移动过 程中待分析物与固定于载体膜上的抗原或抗体结 合而被固相化，最终通过胶体金的呈色条带来判 断试验结果。
[医学]胶体金免疫层析技术
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抗原抗体——钥匙和锁的 关系
抗体能够特异性的结合 抗原的活性位点。
基因工程指按人们意愿设计，通过改造基因 或基因组而改变生物的遗传特性，从而获 得新的品种货或产品。
意义：可以稳定的获得人类所要的蛋白。
◊ 20世纪90年代初，第一个免疫层析产品诞 生——用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测 定。
烘制成型从而制的一定孔径的硝酸纤维素 膜。
匀浆配方决定硝酸纤维素膜的性质。
烘制速度决定硝酸纤维素膜的孔径。
硝酸纤维素膜的性质：
◊ 微孔性：层析动力的来源 ◊ 多孔性：样本流动性
孔径（μM） 0.2 0.45 0.8
流速(S/4cm) 180 135 75
◊ 蛋白吸附能力： ◊ 样本过滤：
◊ 滤膜 ◊ 分子杂交 ◊ 核酸、蛋白转印 ◊ 免疫层析
◊ 在其后的20年中，免疫层析产品得到了快速 的发展：
项目 早孕检测 毒品检测 疾病检测
所占百分比 90%以上 80-90% 30-40%
◊ 快速，定性 10分 准确、灵敏 灵敏度可以达到10-9数量级
◊ 应用范围不断扩大
疾病诊断，食品安全，药物检测，DNA检测
粒径 2～5nm 10～20nm 30～80nm
颜色 橙色的 酒红色 紫红色
∆ 胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性
∆吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳 定迅速的吸附蛋白
+ 胶体金在电镜水平的应用 + 胶体金在光镜水平的应用 + 胶体金在流式细胞仪中的应用 + 免疫印迹技术
什么叫硝酸纤维素膜？ 以硝酸纤维素为基质，经过匀浆，滚筒铺膜，
◊ 特异性，灵敏度不断提高
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胶体金免疫测定技术
胶体金渗滤试验 胶体金层析试验
胶体金免疫层析试验原理
一种将胶体金免疫技术和蛋白质层析技术相 结合的快速固相膜免疫分析技术。所用试剂全部 为干试剂，测试时滴加在膜一端的待测标本溶液 受载体膜的毛细管作用向另一端移动，在移动过 程中待分析物与固定于载体膜上的抗原或抗体结 合而被固相化，最终通过胶体金的呈色条带来判 断试验结果。
双抗原夹心法测HBsAb
T：乙肝表面抗原
胶体金-乙肝表面抗原 加样区
C：乙肝表面抗体
主要试剂
• 试剂条 • 采血针 • 缓冲液
操作方法与结果判定
• 将血清/血浆/全血标本直接加入加样区,
• 静置10分钟后判定结果，20分钟后判定结 果无效；
• 两条带有效，标本阳性；
• 仅质控区有带， 标本阴性;
<<临床免疫学检验>>操作考试
班级
姓名
学号
分数
题号 操作题 理论题
操作（50分）
实验报告：（30分，其中实验原理8分、试剂与器材 2分、操作步骤5分、注意事项5分、结果分析与 判断5分、临床意义5分）
理论题（20分）
操作考试时间：2017-12-12下午
分两批进行： 第一批：1、2班：14：00~15：30 第二批：3、4班：15：30~17：00
• 仅测试区有带， 无
• 无带；
效
注意项
• 测试条从冰箱取出后应恢复至室温； • 加标本不可越过加样区。
方法学评价与临床应用
• 操作简单、方便，结果快速； • 符合床边检验POCT要求； • 不能准确定量。
作业：要求大家对前面7次实验报告按
照老师批改意见进行订正。下周操作考试 时学委收齐交到讲台上。