液相色谱串联质谱的小知识
液相色谱串联质谱
液相色谱串联质谱液相色谱串联质谱技术:一、什么是液相色谱串联质谱？液相色谱串联质谱（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC/MS）是一种由液相色谱和质谱相结合的分析检测技术，它的原理是将待测样品通过液相色谱分离，应用质谱法对分离出的测试物质进行结构分析，来实现对低级别有机物、中级别有机物、高分子量物质及混合物的快速分离和精确定性/定量，所以它具有分离效率高、多重检测能力强以及定量准确度高等优点。
二、液相色谱串联质谱的原理液相色谱串联质谱（LC/MS）原理是利用液相色谱实现分析样品的分离，然后利用质谱对其进行结构分析的技术，该技术将实验室中广泛使用的液相色谱（LC）与质谱（MS）有机地结合在一起，继而利用潜在的质谱的优势解决了液相色谱的空分析问题。
液相色谱串联质谱技术可以检测出有机物，无机物，高分子量物质及混合物，同时可以得到分子结构和定量分析，其具有高分离系数、多重检测能力、定量准确度和高灵敏度等特点，因此被广泛应用于环境、有机合成、制药等领域。
三、液相色谱串联质谱的优势（1）高分离系数。
液相色谱实现样品的分离，具有分离系数高、精细度高的优点，结合质谱的原理可以实现同类物质不同种类、结构不同的定性分析。
（2）多重检测能力。
利用液相色谱串联质谱（LC/MS），可以在同一分析样品中检测多种有机物种类，同时可以给出其结构，实现定性分析，而且可以安全、准确快速的实现检测。
（3）定量准确度高（比如灵敏度高）。
这也是使用液相色谱串联质谱的一大优势，它可以检测出极低浓度的物质，有助于完成定量分析，可以有效的探测样品中的低浓度物质，从而提高检出率，实现检出极低浓度的有机物。
四、液相色谱串联质谱的检测范围液相色谱串联质谱（LC/MS）被广泛应用于环境、有机合成分析、化学分析、制药及检测等多种领域，这两个技术的综合应用可以检测出中级元素、有机及无机化合物，特别是大分子量有机物和混合物，还可以实现定性和定量分析，对有机物实现精细分析、检测和结构鉴定等，有着广阔的应用前景。
液相色谱——串联质谱法
液相色谱——串联质谱法液相色谱——串联质谱法1. 概述液相色谱——串联质谱法（LC-MS）是一种用于快速鉴定和定量分析大量小分子物质和链状有机化合物的一种惰性重排技术。
这种技术通过将液相色谱和质谱两大仪器技术的优越性能有机结合，实现了液体中微量物质的快速鉴定、分离和测定。
这套技术比单独使用液相色谱成像分析，可以提高检测限下限，解决液相色谱分离后质谱加速定性分析的问题，因而更加实用。
2. 技术原理LC-MS系统由液相色谱分离柱，检测装置，与两个机构负责操纵液相色谱组分提取等主要部件组成。
样品分离和分析步骤就是将样品溶解在适当的溶剂中，经液相色谱－质谱就可以分析出单分子组分的物化性质和表观分子量，以及细微程度的组成差别。
检测装置实现了LC-MS连续启动程序，得到样品组分的全谱图谱，获取检测信息，实现LS-MS技术的数据处理，实现样品鉴别，定量计算，同时获取实时的检测数据，保证检测的准确性和准确度。
3. 优势（1）具备高敏感性和低检出限，可以检测非常稀少的物质，提高检测的灵敏度。
（2）可以实现快速和自动化操作，大大提高测定速度。
（3）LC-MS能实现样品分离前质谱加速定性分析、消除高纯度物质混杂分离困难、采样测定对比分析等特点，从而提高检索精确度和结果准确度。
（4）结合液相色谱分离和双离子检测质谱技术，可以自动化连续运行，来自动调整参数实现高灵敏度测定和高分辨率分离。
4. 应用领域LC-MS主要用于有机物、抗生素、毒素、毒物、化合物的研究以及在生物信息学和医学方面的研究等。
当前有机物、抗生素、毒素、毒物在药物研究、毒理、环境污染检测和药物开发等领域都有广泛的应用，以及药剂学、兽医学、分子毒理学和菌类学领域的研究。
5. 结论液相色谱——串联质谱法（LC-MS）是一种结合液相色谱和质谱技术，可以用于鉴定薄分子物质和链状有机化合物的惰性重排技术。
该技术可以飞快地连续运行，自动调整参数，从而实现了高灵敏度测定和高分辨率分离，同时也可以检测非常稀少的物质，具有广泛的应用领域。
液相色谱-质谱(LC-MS)联用的原理及应用课件
喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷 的离子,最后经计
+TOF MS: 1.84 min (57 scans) from go 10
1. 26e 1
Int act Ant ibody Spect r um
算机自动换算成单
5
质/荷比离子。
2500
3000
3500
4000
m/z, amu
BioSpec Reconstruct for +TOF MS: 1.84 min (57 scans) from go, smoothed
总离子流图:
• 在选定的质量范围内，所有离子强度的 总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC
图.
学习交流PPT
10
质量色谱图
• 指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所 作的图.
• 利用质量色谱图来确定特征离子，在复杂混合物 分析及痕量分析时是LC/MS测定中最有用的方式。 当样品浓度很低时LC/MS的TIC上往往看不到峰， 此时，根据得到的分子量信息，输入M+1或 M+23等数值，观察提取离子的质量色谱图，检 验直接进样得到的信息是否在LC/MS上都能反映 出来，确定LC条件是否合适，以后进行MRM等 其他扫描方式的测定时可作为参考。
学习交流PPT
3
Ionic
IonSpray
APCI
Analyte Polarity
GC/MS
Neutral
101
102
103
104
105
Molecular Weight
学习交流PPT
4
现代有机和生物质谱进展
• 在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。 在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以下 的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解吸 （FD）离子化技术，能够测定分子量高达 1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。20 世纪80年代初发明了快原子质谱法（FAB-MS）， 能够分析分子量达数千的多肽。
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机(Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS T une）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source T emp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
液相色谱-质谱联用(LC-MS)
液相色谱-质谱联用(LC-MS)LCMS分别的含义是：L液相C色谱M质谱S分离（友情赠送：G是气相^_^）LC-MS/MS就是液相色谱质谱/质谱联用MS/MS是质谱-质谱联用（通常我们称为串联质谱，二维质谱法，序贯质谱等）LC-MS/MS与LC-MS比较，M（质谱）分离的步骤是串联的，不是单一的。
色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
色谱法的最早应用是用于分离植物色素，其方法是这样的：在一玻璃管中放入碳酸钙，将含有植物色素（植物叶的提取液）的石油醚倒入管中。
此时，玻璃管的上端立即出现几种颜色的混合谱带。
然后用纯石油醚冲洗，随着石油醚的加入，谱带不断地向下移动，并逐渐分开成几个不同颜色的谱带，继续冲洗就可分别接得各种颜色的色素，并可分别进行鉴定。
色谱法也由此而得名。
现在的色谱法早已不局限于色素的分离，其方法也早已得到了极大的发展，但其分离的原理仍然是一样的。
我们仍然叫它色谱分析。
一、色谱分离基本原理：由以上方法可知，在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。
色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。
使用外力使含有样品的流动相（气体、液体）通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。
当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。
由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。
与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。
二、色谱分类方法：色谱分析法有很多种类，从不同的角度出发可以有不同的分类方法。
从两相的状态分类：相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。
液相色谱串联三重四级杆质谱基础知识
数据处理系统 液相色谱
质谱
一 液质联用
液质联用仪的组成
大气 真空系统
液相色 谱
样品入 口
离子化 （离子源 ）
质量分析 器
检测器
数据系 统
质谱部分
一 液质联用
离子源
最常用的离子源-电喷雾离子源（ESI)
干燥 气 四极预 杆
喷雾针装置
喷雾室
毛细 管
一 液质联用
质量分离器
兽药残留最常用的是三重串联四级杆（QqQ）
我们所做的已知化合物，并且有现成 的方法
整个质谱仪的模式图
电喷雾离子源 Q1 q2 Q1 检测器
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 0 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
选择离子流图（SIM)：选取其中几个 特征离子扫描，对保留时间作图，即 得到选择离子色谱图。
三 质谱基本概念
选择离子流图（SIM)：
SIM通过去除本底和其 他无关离子的干扰， 降低噪声，提高选择 性、分辨率和灵敏度， 可使复杂的TIC简化， 对特定化合物的分析 或化合物的分类十分 有用。
三 质谱基本概念
8
9
10 11 12 13 14 15 16
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 14 m/e
8
9
10 11 12 13 14 15 16
液相质谱串联质谱
液相质谱串联质谱
液相质谱串联质谱（LC-MS/MS）是一种高效、敏感、选择性强的分析方法，被广泛应用于生物分析、环境分析、食品安全等领域。
液相色谱（LC）将要分析的混合物分离成单一成分，质谱（MS）则对单一成分进行结构鉴定和定量分析，而串联质谱（MS/MS）则可以进行更加精细的结构鉴定和分析。
液相质谱串联质谱的优势在于其可以对复杂样品进行高效、高通量的分析，同时可以进行更加准确的定量和定性分析。
该技术的应用范围广泛，可以用于生物大分子的鉴定、药物代谢学研究、环境污染物的检测等领域。
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液相色谱串联质谱的小知识知识讲解
液相色谱串联质谱的小知识一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机 (Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
液相色谱-质谱联用法
液相色谱-质谱联用法液相色谱-质谱联用法是一种用于分离及分析化学分子中微量成分的有效方法。
它是通过在两个色谱电器仪器中，分别对原始样品进行分离和分离后的色谱物质进行定性和定量的分析，来检测微量的化学物质各自的活性分子结构的总体宏观成分。
这种方法不仅可以确定和测定样品中各自的化学成分，而且可以识别组分及其构成以及相对价值，从而得到样品中具体原子和分子的结构信息。
液相色谱-质谱联用法是将液相色谱仪和离子化质谱仪相结合，来分析及鉴定各类样品成分。
在液相色谱-质谱联用法中，液相色谱-质谱联用法是根据样品的分子量和分子结构，把它们进行加速和减速的离子化，由检测系统加以分析，从中获得原子结构的分析数据，也可以进行定量分析。
液相色谱-质谱联用法的优势在于，其能够检测分子中极为微量的成分，比传统的液相色谱能力更 is 。
它可以检测分子的总体特性、反应活性成分和相对价值。
此外，液相色谱-质谱联用法中，质谱仪可以实现样品的细微分离及进一步检测，从而可对样品中的活性分子结构和宏观成分进行定性和定量分析，从而较大限度地判断样品的复杂性、活性及特定分子键的分子结构。
液相色谱-质谱联用法在物质特性分析中的应用，可以更全面、准确的反映样品的总体特征，包括其成分的宏观构成和相对价值、以及分子结构的分布等因素。
另外，该技术也可以获得原子结构、反应活性成分及各类指标的定量数据，这在比较复杂的材料及生物样品中特别有用。
液相色谱-质谱联用法作为一种新兴的分析技术，已广泛应用于食品及制药行业的科学研究，以及汽车、矿山、石油等工业应用。
由于它可以更准确快速地反映样品的化学组成及分布，它也被广泛应用于药物开发、气体分析、生物分析、环境分析等多个领域中，帮助人们更好更准确地分析样品成分，由此发现新物质，为新药物开发和新产品开发提供理论依据。
液相色谱 - 质谱联用法既能够检测出样品中的微量成分，又能够检测出样品中构成其特性和反应活性成分的结构，使更复杂的物质特征分析变得更加可靠准确。
液相色谱串联质谱法
液相色谱串联质谱法
液相色谱串联质谱（Liquid chromatography tandem mass spectrometry，
LC-MS/MS）是一种分离检测技术，被广泛应用于药物化学及药物代谢，生物医药，农药分析等领域，作为一种灵敏的高通量的鉴定和定量分析的手段。
LC-MS/MS的操作困难度略高，但技术表现却非常出色。
它的原理是将待测样
品分解成各组分，然后在液相色谱的的发射机构中排列和分离，得到分离峰后，将每个峰送入质谱计仪器中进行分子结构鉴定。
液相色谱与质谱结合起来，使得被测物质的定量和定性分析变得更加精准，得到了更高的灵敏度与精确度。
LC-MS/MS给人们的生活也带来了不少便利。
它能更有效的检测潜藏在食品中
的有害物质，甚至可以嗅出空气中的重金属物质，以确保食品和空气的安全。
此外，在医学上，LC-MS/MS也可以鉴定出血液中的分子标志物，从而帮助医生诊断乳腺癌、肝癌等，为患者提供更有效的治疗措施。
LC-MS/MS是当今药物及生物医药学研究领域最火热的概念，结合先进的检测
技术，它也为特定领域的研究提供了更大的帮助，尤其是生物和分子诊断研究实验中。
其仅占用少量的样品的前提下，在短时间内，就能最大限度提高检测效率，具有准确率高、重复性好、价格低的明显优势，这也使得它深受生命科学的欢迎。
ms)的原理及应用
液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 的原理及应用1. 液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 的概述液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 是一种结合了液相色谱 (LC) 和质谱 (MS) 技术的分析方法。
液相色谱是一种用于分离和纯化复杂混合物的技术，而质谱则是一种通过分析分子的质量和结构来鉴定化合物的方法。
LC/MS 结合了这两种技术的优势，具有高灵敏度、高选择性和高分辨率的特点，因此在生物、化学、环境等领域得到了广泛的应用。
2. 液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 的原理液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 的原理如下：2.1 液相色谱 (LC) 部分液相色谱 (LC) 是一种基于样品在流动相和固定相之间的分配行为进行分离的技术。
在液相色谱部分，样品溶解在流动相中，并通过固定相柱或柱组进行分离。
不同组分会以不同的速率通过柱，从而实现分离。
2.2 质谱 (MS) 部分质谱 (MS) 是一种基于分子的质量和结构进行分析的技术。
在质谱部分，离子源将分离后的化合物转化为离子，并通过质谱仪器进行质量分析和鉴定。
常用的离子源包括电喷雾离子源 (ESI) 和化学电离源 (APCI)。
2.3 LC/MS 联用在液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 中，液相色谱和质谱紧密结合。
液相色谱部分负责分离复杂混合物，质谱部分负责分析和鉴定分离后的化合物。
分离后的化合物通过离子源被转化为离子，并在质谱仪器中进行质量分析。
3. 液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 的应用液相色谱-质谱联用 (LC/MS) 在许多领域中具有广泛的应用。
以下是一些常见的应用：3.1 生物医药领域•药物代谢研究：LC/MS 可以用于分析药物在体内的代谢过程，帮助研究人员了解药物在人体内的代谢途径和代谢产物。
•蛋白质分析：LC/MS 可以用于蛋白质的鉴定和定量分析，是生物医药领域中蛋白质组学研究的重要工具。
3.2 环境领域•污染物检测：LC/MS 可以用于分析水体、土壤、大气中的污染物，帮助监测环境中的污染程度和来源。
液相色谱-串联质谱法
液相色谱-串联质谱法
液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是一种新型的色谱
分析技术，它可以用于分析多种类型的样品中的有机物，包括药物、肽和其他生物分子。
LC-MS/MS的原理是，样品被首先通过液相色谱仪（LC）进行分离，然后采用串联质谱仪（MS）对分离出的组分进行鉴定。
液相色谱法（LC）是一种以溶剂为溶剂的色谱分析技术，它可以把混合物分别成不同的组分。
在LC-MS/MS中，溶剂
通常是一种有机溶剂，比如乙腈或甲醇，用来溶解样品中的有机物。
通过高压活性柱（HPLC），溶剂带动样品在柱中运动，不同的有机物会以不同的速度经过柱，这样就可以把样品中的有机物分离出来。
串联质谱仪（MS）则可以用来鉴定分离出来的组分，这
是因为不同的有机物会有不同的质量数或质量分数。
MS是通
过将样品中的原子或分子电离，然后再用电压梯度将离子排列出不同的质量，从而可以确定样品中的有机物种类和含量。
LC-MS/MS的优势在于分析灵敏度高，可以检测微量样品中的有机物，而且分析时间短，减少了分析时间。
此外，LC-MS/MS也可以用于复杂的样品，因为它可以把复杂的样品中
的有机物分开，这样就可以从复杂的样品中提取关键信息。
总之，LC-MS/MS是一种非常有用的分析技术，可以用来分析复杂的样品，并能快速准确地测定样品中有机物的种类和含量。
液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用技术
液相色谱-质谱联用技术（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，简称LC-MS）是一种将液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）和质谱（Mass Spectrometry，简称MS）结合起来的分析技术。
液相色谱是一种分离技术，可以将混合物中的不同成分分离开来。
而质谱则是一种检测技术，可以测量化合物的分子量和结构信息。
因此，将液相色谱和质谱联用，可以同时实现混合物的分离和检测，从而提高分析的准确性和灵敏度。
LC-MS 技术通常包括以下几个步骤：
1. 样品预处理：将待分析的样品进行预处理，如提取、净化、浓缩等，以便后续分析。
2. 液相色谱分离：将预处理后的样品注入液相色谱仪中，通过色谱柱将不同成分分离开来。
3. 质谱检测：将分离后的化合物逐个进入质谱仪中进行检测，得到化合物的分子量和结构信息。
4. 数据分析：将质谱检测得到的数据进行分析处理，得到化合物的结构、纯度、含量等信息。
LC-MS 技术具有高灵敏度、高分辨率、高准确性等优点，被广泛应
用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
高效液相色谱-串联质谱法
高效液相色谱-串联质谱法高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）是一种现代化分析技术。
它结合了高效液相色谱（HPLC）和串联质谱（MS/MS）两种分析方法，能够快速、准确、灵敏地分析复杂的混合样品中的多种化合物。
HPLC-MS/MS技术的基本原理是将样品通过高效液相色谱进行分离，然后以极高的分辨率将分离后的化合物导入串联质谱分析仪中进行质谱检测和分析。
HPLC部分能够通过改变流速、温度、化合物间隔、载气、反应物、固相分离等方法来分离样品中的成分。
MS/MS 部分则能够通过改变离子源、离子传输、离子选择和离子检测等方式检测化合物。
具体来说，HPLC-MS/MS技术的实现过程如下：需要准备一定量的样品。
样品通常是一种混合物，需要进行分离和净化。
这可以通过一系列的化学方法和生物技术实现。
将样品注入到高效液相色谱仪中进行分离。
高效液相色谱仪通过改变环境条件可以分离出复杂混合物中的单个分量，比如改变洗脱剂的浓度、PH值、离子强度来调整样品中化合物的排列顺序。
高效液相色谱仪具有高速分离和高效洗脱的特点，具有处理大量和复杂样品的能力。
接着，通过HPLC输出的流缓和制备离子源，离子源生成的离子对化合物分子进行离子化。
这个过程利用化合物分子上的R基或者H+来形成游离气态的化合物离子。
然后，将产生的离子通过串接质谱进行分析。
在离子进入串联质谱仪的离子源之前，需要将它们选择性的分离为固定质量和电荷比的离子，这可以通过一系列的电子和电场进行控制来实现。
所得到的离子被送至陷入式离子阱，通过对离子的激发和断裂等过程，形成包含多种离子片段的离子质谱图谱。
这些离子片段遵循一定的质量电荷比的规律，可以通过特征峰和离子质量比等独特的质谱性质来鉴别。
将这些片段的数据输入到质谱数据库中，与已知化合物的质谱数据进行比对。
这样，就能够得到混合物中的每个化合物的特定质谱图谱，从而通过质量分析进行结构确认和鉴定。
HPLC-MS/MS技术的优点是明显的，该技术具有高效和灵敏的特点，能够分析非常低的浓度样品成分。
液相色谱-质谱联用技术及使用注意事项
m/z 271
66.71
69.88 NL: 8.56E5 TNILC: 5F.:6+4Ec 6ESI Full pTrIC27F1: .+00c0ESI Full [p1r0208.070.000-10000.000] [M10S0.000-1000.000] 1M11S229GZY-LJJ3-4 111229GZY-LJJ3-4
– 四极杆分析器（Quadrupole）
灵敏度
– 离子阱分析器（Ion trap）
– 扇形磁分析器
在全扫描模式下仍然具有较高灵
– 飞行时间分析器（TOF)
敏度；可实现多级质谱(MSn)的
– 傅里叶离子回旋共振变换分析器
功能
单级质谱和串联质谱
第一章 LC-MS技术简 介
单级质谱：LC-MS, LC-TOF 串联质谱
检测器检测
色谱-质谱联用技术
第一章 LC-MS技术简 介
体现了色谱和质谱优势的互补，它将色谱对复杂样品的高分离 能力与质谱的高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构 信息的优点结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。
• 气相色谱-质谱联用技术(GC-MS) • 液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)
200
368.94 400
653.08
993.61
结构。
750.50
975.69
1179.86 1293.87 1499.66 1650.79 1840.49
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
2000
m /z
质谱扫描类型
第一章 LC-MS技术简 介
RT: 0.00 - 50.00 SM: 7B 100
超高液相色谱串联质谱法
超高液相色谱串联质谱法
超高液相色谱串联质谱法（UHPLC-MS/MS）是一种高效的分
析方法，它将超高液相色谱（UHPLC）和串联质谱（MS/MS）技术相结合，能够快速准确地检测和定量复杂的化合物混合物。
UHPLC-MS/MS的原理是，样品经过UHPLC分离后，进入质
谱仪进行分析。
质谱仪将样品中的化合物逐一离子化，并将其分离成不同的离子状态，然后对这些离子进行质谱检测和定量。
使用UHPLC-MS/MS可以同时检测许多化合物，并且具有高
分辨率和高灵敏度的优点。
UHPLC-MS/MS在生物医学、环境、农业、食品等领域得到广泛应用，可以用于药物代谢动力学研究、毒理学研究、环境污染物分析、农药残留检测、食品添加剂检测等。
串联质谱知识点总结
串联质谱知识点总结一、基本原理串联质谱（tandem mass spectrometry，简称MS/MS）是将两台质谱仪串联使用的一种质谱分析技朧。
它能够在脱去离子源产生的离子束后，利用探测器对该束进行进一步分析和加速。
在串联质谱中，两台质谱仪被设置为串行，第一台质谱仪（MS1）用于进行离子的选择、聚焦和加速，第二台质谱仪（MS2）则用于对第一台仪器所产生的离子进行进一步分析。
通过多级串联质谱技术的应用，不仅能够提高分析的灵敏度和准确性，同时也可以获得更加详尽的结果。
二、仪器构成串联质谱由离子源、质谱仪、质谱分析器和数据处理系统构成。
离子源主要用于产生样品分子的离子，质谱仪用于分离和加速这些离子，质谱分析器则用于对这些离子进行进一步的分析和检测，数据处理系统则用于对产生的离子进行数据分析和处理。
三、工作流程1. 样品预处理：样品预处理是串联质谱分析的第一步，它包括离子化、离子传输和质子化等过程。
在这一阶段，样品需要经过一系列的处理步骤，以便使之能够最终形成质质子。
通常情况下，常见的样品预处理方式包括电喷雾离子源、化学离子化和电子轰击离子化等。
2. 离子传输：样品在经过离子化后，会通过一个称为离子传输设备的设备，这个设备通常包括一个离子传输管和一个离子导引系统。
在传输过程中，样品的离子会被加速和分离，并最终被送入到质谱分析器中进行进一步的分析。
3. 质谱分析：在质谱分析阶段，样品的离子会被送入到负责进行质谱分析的质谱仪中，这台质谱仪通常包括一个离子阱和一个质谱分析器。
在这一阶段，样品的离子会被进一步分离并进行质谱分析，以获得更加准确和详尽的质谱数据。
4. 数据处理：在数据处理阶段，获得的质谱数据会被送到一个数据处理系统中进行处理和分析。
在这个系统中，获得的质谱数据会被处理并转化成可视化的结果，以便用户可以更加直观地理解和分析获得的数据。
四、数据分析数据分析是串联质谱分析的重要一环，它包括对获得的质谱数据进行处理、分析和解释等一系列步骤。
液相色谱串联质谱的小知识
一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1。
分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后,进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例)。
a。
打开脱气机（Degasser On）。
b。
湿灌注(Wet Prime)。
c。
Purge Injector。
d。
平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx 4。
0图标进入质谱软件.4。
检查机械泵的油的状态（每星期）,如果发现浑浊、缺油等状况,或者已经累积运行超过3000小时,请及时更换机械泵油.5.点击质谱调谐图标(MS Tune）进入质谱调谐窗口 .6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求,ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7。
点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求.8。
确认氮气气源输出已经打开,气体输出压力为90 psi。
9。
设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2。
点击Standby 让MS 进入待机状态时,这时状态灯会由绿变红,这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速,如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次.b）对于APCI源,每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent,这时质谱开始泄真空,ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
液相质谱联
液相质谱联
液相质谱联是一种分析技术，将液相色谱和质谱联合起来，可用于分离和鉴定样品中的化合物。
这种技术可以提高分析的灵敏度、选择性和分辨率，尤其适用于分析复杂的混合物。
液相色谱是一种分离技术，通过不同的物理化学性质将混合物中的化合物分离开来，而质谱则是一种检测技术，可以鉴定不同化合物的分子量和结构。
将这两种技术结合起来，可以在分离的基础上进行更加准确的鉴定。
液相质谱联的原理是在液相色谱的基础上加入质谱检测，即将从液相色谱柱中流出的化合物直接送入质谱中进行在线检测。
这种技术可以克服传统色谱分离后需进行进一步提取和处理的问题，提高分析效率和准确性。
液相质谱联可以应用于各种样品的分析，如食品、药物、环境污染物等。
这种技术在生物医药领域的应用也日益增多，可以用于药物代谢产物的分析和生物大分子的鉴定等。
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一、开机water 2695/micromass zq4000:开机步骤1. 分别打开质谱、液相色谱和计算机电源，此时质谱主机内置的CPU会通过网线与计算机主机建立通讯联系，这个时间大约需要1至2分钟。
2. 等液相色谱通过自检后，进入Idle状态，依照液相色谱操作程序，依次进行操作。
（具体根据液相色谱不同型号来执行，下面以2695为例）。
a.打开脱气机 (Degasser On)。
b.湿灌注(Wet Prime)。
c.Purge Injector。
d.平衡色谱柱。
3.双击桌面上的 MassLynx4.0图标进入质谱软件。
4.检查机械泵的油的状态（每星期），如果发现浑浊、缺油等状况，或者已经累积运行超过3000小时，请及时更换机械泵油。
5.点击质谱调谐图标（MS Tune）进入质谱调谐窗口。
6.选择菜单“Options –Pump”，这时机械泵将开始工作，同时分子涡轮泵会开始抽真空。
几分钟后，ZQ就会达到真空要求，ZQ前面板右上角的状态灯“Vacuum”将变绿。
7.点击真空状态图标，检查真空规的状态，以确认真空达到要求。
8. 确认氮气气源输出已经打开，气体输出压力为90 psi。
9.设置源温度（Source Temp）到目标温度。
关机1．点击质谱调谐图标进入调谐窗口。
2.点击Standby 让MS 进入待机状态时，这时状态灯会由绿变红，这一过程是关质谱高电压的过程。
3．停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4．等脱溶剂气温度（ESI）或APCI探头温度降到常温，点击气体图标关闭氮气。
5．逆时针方向拧开机械泵上的Gas Ballast 阀，运行20分钟后关闭（镇气）。
a) 对于ESI源，至少每星期做一次。
b) 对于APCI源，每天做一次。
6．再次确认机械泵的Ballast阀是否已经关闭。
7．选择Option / Vent，这时质谱开始泄真空，ZQ 前面板的状态灯“Vacuum”开始闪烁，几分钟后机械泵会停止运行，这时可以关闭质谱电源。
FINNIGEN DECA 开关机及校正流程——1开机前准备事项（1）确保质谱总电源开关（白色开关）及主板电源开关（黑色开关）处于关闭状态（O）；（2）检查真空泵油液面，确保泵内油页面处于标定的上下两线之间；（3）查看离子源洁净程度，ESI源查看喷口是否有固体析出，毛细管口是否完好；APCI喷口是否有积液；（4）气体压力，打开高纯氮气钢瓶总阀，调节出口压力调至0.65MPa，打开高纯氦气钢瓶总阀,调节出口压力调至0.25Mpa;（5）检查壳气及辅助气接口连接紧固，松开液相管路与离子源的接口；（6）开启动力电源，电压稳定，正常；（7）确保室内温度在18～25度。
二找方法a、其实做方法不是很难的，先找ＭＳ的条件，然后建立ＭＲＭ连上液相找液质方法就可以了，然后在优化离子源气体流量，以及温度就可以了。
b、首先，我们应该知道被测化合物的结构式，pKa，溶解度等理化性质。
1，根据化合物极性和分子量大小选择离子源，非极性强的化合物可用APCI源，非极性弱的用ESI，此外ESI可形成多电荷离子，适合检测多肽等分子量大的化合物（APCI则不行）。
2，根据化合物的酸碱性选择用正离子或负离子：一般碱性化合物用正离子，酸性或中性化合物选择负离子。
正离子条件下：流动相一般加0.01－0.1％的甲酸，负离子条件下：流动相一般加0.01－0.1％的甲酸铵。
3，离子源和正负条件确定好后即可优化化合物的质谱参数：建议先搞清楚各个参数是与流速相关还是与分子量相关，与TSQ Quantumn为例：与流速相关的参数有：Spray voltage，Sheath gas， Aux gas，Capillary temperature 等参数，如果流速在较低范围内变动，这些参数就不用优化，使用厂家的推荐值即可。
与分子量相关的参数有Tube lens offset等参数，这个一般也不建议优化。
使用校正表上的值即可。
所以这一步最关键的是找到母离子，如有加合离子建议加大Source CID试试，给一定能量，看看打碎的主要子离子。
注意：如让仪器自动找子离子也能找到，但其优化的碰撞能量一般偏高，一般需要在其基础上减去Source CID的值大小即可C、如果是简单的定性，对于锥孔电压没什么太苛刻的要求。
但是如果是要对样品进行定量，特别是低含量的，要讲究灵敏度，那就我对单个样品直接进样，分别优化毛细管电压和锥孔电压。
三质谱仪按质量分析器(或者磁场种类)可分为静态仪器和动态仪器，即稳定磁场（单聚焦及双聚焦质谱仪）和变化磁场（飞行时间和四极杆质谱仪）。
MS仪器一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。
1、真空系统质谱仪中所有部分均要处高度真空的条件下(10-4-10-6Torr或mmHg), 其作用是减少离子碰撞损失。
真空度过低，将会引起：a) 大量氧会烧坏离子源灯丝；b) 引起其它分子离子反应，使质谱图复杂化；c) 干扰离子源正常调节；d) 用作加速离子的几千伏高压会引起放电。
2、进样系统对进样系统的要求：重复性、不引起真空度降低。
进样方式：a) 间歇式进样：适于气体、沸点低且易挥发的液体、中等蒸汽压固体。
如图所示注入样品(10-100g)---贮样器(0.5L-3L)---抽真空(10-2 Torr)并加热---样品蒸分子(压力陡度)---漏隙---高真空离子源。
b) 直接探针进样：高沸点液体及固体探针杆通常是一根规格为25cm6mm i.d.,末端有一装样品的黄金杯(坩埚)，将探针杆通过真空闭锁系统引入样品，如图所示。
我们试验室用的是ABI 3000质谱仪，主要定量分析生物样品。
LC-MS/MS方法学开发的一般步骤是首先通过微量注射泵获得母离子和子离子以及DP CE这四个主要参数然后利用梯度程序考察流动相组成（包括有机相的比例，甲酸或缓冲盐的加入量）对质谱响应的影响。
流动相的组成确定后利用FIA优化确定其他参数，主要是气体参数和TEM IS。
一台LC/MS由以下几部分组成：HPLC、离子源接口、离子束聚焦、质量分析器、离子检测器、数据处理、化学工作站。
HPLC就不说了，先说离子源，目前比较好的离子源设计为Agilent的直角喷雾技术，好处：1。
去溶剂效果好,耐受液相高流速；2。
雾化针零电位,位置免调整,操作安全简便,重现性好;3。
离子截取面积大,灵敏度高;4。
反吹干燥氮气,有效阻挡中性分子,减少污染并保护真空;5。
大口径非加热石英毛细管,离子传输效率高,有利于高灵敏度检测；有效防止样品热降解；调谐稳定，碰撞诱导解离（CID）谱图重现性好；6。
铰链设计,不同离子源的切换,简单方便,易于操作。
下面说质量分析器：没有一种质量分析器可以适用于所有领域，目前的质量分析器有：单四极杆质谱、三级串联质谱、离子阱质谱、飞行时间质谱、四极-飞行时间质谱。
离子检测器：电子倍增管（EMT）：经质量分析器分离出来的离子首先撞击高能转换打拿极发射二次粒子，正、负离子转换的二次粒子最终均为电子；随后发射的电子进入电子倍增器的弯曲形内壁，撞击管壁涂层，产生更多的二次电子；最后以电信号输出。
电子倍增管的放大倍数约为107。
光电倍增管（PMT）：经质量分析器分离出来的离子首先撞击倍增管最前端的闪烁晶体发射光子，光子照射光阴极射线管而发射电子，随后发射的电子进入电子倍增管进行信号放大，最终同样以电信号输出。
微通道板（MCP）：由一组圆柱形微通道管组成，每个微通道管的作用与电子倍增管类似。
当离子进入微通道管时，产生二次电子，反射通过这些微通道管时，不断产生更多的电子。
MCP的最大优点在于具有超快的时间响应。
如果将几块微通道板用适当的方法叠在一起，放大倍数将达108。
ESI是气相离子化过程，主要包括三个步骤：1、在喷雾毛细管尖端产生带电液滴；2、通过溶剂蒸发和雾滴分裂使带电液滴变小，这个过程反复进行；3、由很小的带电雾滴产生气相离子。
一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。
但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。
四液质经验我认为要维护好仪器，首先流速不能过大，液质是不能承载过大流速的；其次电压不要加到极限，尤其是正负离子转换时要适当调整；最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。
做液质时跑一针的时间最好不要超过45分钟，否则仪器会很累。
另外我认为API4000定量很准，但是打多级碎片时最好用的是离子阱，因为它能够在一次进样后同时分析多个离子，很方便，而不像四级杆一次只能进行一种离子的多级研究。
1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。
2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。
3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。
4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<10mM。
5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生，表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。
比如分析的样品必须要干净，这样既可以保护色谱柱，也可以防止污染质谱；分析了大量的生物样品后，冲洗系统时，先用高比例的水相冲洗，把源也给洗一下，然后再换用高比例的有机相，这时要把柱后管路从源上拿下来，避免柱中的杂质给冲进质谱1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物，岛津的质谱好像做直接沉淀的源比较容易堵，Waters的好些。
2.2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2ug/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。
3.3.流动相:流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不要加表面活性剂之类的，容易离子抑制，如果遇到离子抑制，可以试试把你的样品峰往后推推或者改变提取方法，也可以试试用APCI源。
如果你的液相是低压混合的，尽量不要跑梯度，那样很费时间，如果没办法，一针又要走很长时间的话，可以考虑切换，只测样品出峰前后的那段时间，这样可以保护质谱。
但是如果你用粗柱子，较高流速的也可以考虑跑梯度，如API4000，但要尽量减小死体积。