鸡胚尿囊腔接种(单孔接种)SOP
鸡胚1、尿囊腔接种2、绒毛尿囊膜接种 3、卵黄囊等接种方式资料
室端 3）用钢锥在气室中央锥 一 小孔
4） 用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小
孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。
5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，
每天翻卵1-2次，24h内死亡者废弃。
方法二：
1）2）同一 3）将卵横放在卵座上， 胚胎位置向下。在卵长 径的1/2处用碘酊和酒 精消毒。 4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm， 注入病毒液0.1-0.5ml 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵
十二、收毒
收毒前将鸡胚直立放置于4℃冰箱半小时以上， 冻死胚胎，防止出血。 根据接种途径的不同，收获相应的材料
1、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜
2、尿囊腔接种 收获尿囊液（5-8ml）
3、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体
4、羊膜腔接种 收获羊水（0.5-1ml）
4、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入
0.1-0.2ml接种物
5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻
卵并检卵一次，24h内死亡者废弃。
十一、NDV接种鸡胚后对鸡胚的影响
NDV以尿囊腔接种于9-10日龄鸡胚，强毒株 在30-60h死亡，弱毒株3-6d死亡。死亡的鸡胚 以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、 足趾、翅膀出血尤为明显。
卵黄 在胚胎发育早期供给鸡胚营养。
卵白 在胚胎发育晚期供给鸡胚营养。
材料
1、鸡胚 10日龄
2、病毒 鸡新城疫病毒（NDV） 3、照蛋灯 4、打孔器 5、石蜡 6、注射器 7、蛋座 8、酒精棉球、碘酊棉球
鸡胚的选择
最好是来自SPF鸡群，以降低母源抗体的影响 受精卵的壳最好是白色的
受精卵必须新鲜，保存在5-20℃不要超过10天，
标准操作规程(SOP)——流感病毒的鸡胚分离方法
一、目的流感病毒的鸡胚分离方法是流感病毒分离方法之一，常用于流感病毒的分离、培养。
本SOP 是为确保鸡胚分离流感病毒的操作准确、规范和可靠而制定。
二、范围适用于中国国家流感中心的所有技术人员进行流感病毒的鸡胚分离。
三、程序（一）生物安全要求H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的鸡胚分离实验室生物安全级别：BSL-3。
实验操作人员需进行BSL-3防护，具体详见“生物安全个人防护SOP ”。
H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒的鸡胚接种和病毒培养液的收获操作必须在BSL-3级实验室的生物安全柜中进行。
其余流感病毒的鸡胚分离实验室生物安全级别：BSL-2。
实验操作人员需进行BSL-2防护，具体详见“生物安全个人防护SOP ”。
其余流感病毒的鸡胚接种和病毒培养液的收获操作必须在BSL-2级实验室的生物安全柜中进行。
（二）材料1．9～11日龄SPF 鸡胚2．照卵灯3．70%～75％酒精4．一次性注射器5．鸡蛋开孔器6．蜡或医用胶布7．液体石蜡8．15mL 无菌离心管、试管架标准操作规程（SOP ）——分离方法9．10mL无菌移液管10．无菌镊子。
（三）实验步骤1．验卵（1）用照卵灯检测鸡胚，标记出鸡胚的气室与尿囊的界限、胚胎的位置。
（2）如果鸡胚是死胚、没有受精、有裂痕、发育不全或表面有好多渗水孔，应弃掉。
（3）如何判断鸡胚状态1）血管：活胚血管清晰，死胚模糊，成淤血带或淤血块2）胎动：活胚有明显的自然运动，死胚无胎动。
3）绒毛尿囊膜发育界限：密布血管的绒毛尿囊膜与鸡胚胎的另一面形成明显的界限。
2．鸡胚接种（1）将鸡胚的气室朝上放置在蛋盘上，标记每个鸡胚，通常每个样本接种3个鸡胚。
（2）用70%～75％酒精消毒鸡胚，在气室端钻孔，开10×6mm裂口。
（3）用注射器吸200µL处理过的临床标本，装上16号针头。
（4）从裂口中滴入无菌的液体石蜡，然后轻轻晃动鸡胚，让液体石蜡在鸡胚壳膜内层（脏层）铺开，此时在照卵灯下即可清楚的看到鸡胚胎的位置。
病毒的鸡胚接种技术
病毒的鸡胚接种技术目的要求掌握鸡胚培养病毒的接毒和收毒方法，明确鸡胚培养病毒的应用。
仪器及材料受精卵、恒温箱、照蛋器、接种箱、蛋架、一次性注射器（1～5ml）、中号镊子、眼科剪和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、锉、煮沸消毒器、消毒剂（5%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸或3%来苏儿）、新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗。
方法与步骤（尿囊接种为例）1．选择9～12日龄的健康鸡胚，最好是SPF鸡胚。
为便于照蛋观察，以来航鸡蛋或其他白壳蛋为好。
选好后用孵化箱孵化，要注意温度、湿度和翻蛋。
孵化最低温度为36℃，一般为37.5℃，相对湿度为60%。
每日最少翻蛋3次。
健康鸡胚：照蛋时可见清晰的气室、血管及鸡胚的活动。
2．病毒材料的处理怀疑污染细菌的液体材料：加抗生素（青霉素1000IU和链霉素1000μg/ml）置室温1h或4℃冰箱12～24h→高速离心，取上清液→细菌滤器滤过除菌若用新城疫Ⅰ系或Ⅳ系疫苗，则无菌操作用生理盐水将其稀释100倍。
3．照蛋以铅笔划出气室、胚胎位置及接种的位置，标明胚龄及日期气室朝上立于蛋架上。
4．消毒先碘酊后酒精，由内向外呈同心圆状消毒5．打孔用灭菌小锥子在在气室中心或远离胚胎侧气室边缘，避开大血管进行打孔，孔径以1ml注射器针头容量刺入为宜。
6．注入病毒材料用一次性1ml注射器吸取新城疫病毒液垂直或稍斜插入气室，刺入尿囊，向尿囊腔内注入0.1～0.3ml。
7．封孔并继续孵化注射后，用熔化的石蜡封孔，置温箱中直立孵化3～7d。
孵化期间，每6h照蛋一次，观察胚胎存活情况。
弃去接种后24h内死亡的鸡胚，24h以后死亡的鸡胚应置0～4℃冰箱中冷藏4h或过夜（气室朝上直立），一定时间内不能致死的鸡胚也放冰箱冻死。
8．收毒收毒原则：（1）先冷藏再收毒。
（2）接种什么部位，收集什么部位。
（3）固液分开收集。
（4）无菌收集。
（5）冷冻保存。
收毒方法：无菌操作轻轻敲打并揭去气室顶部蛋壳及壳膜，用灭菌镊子夹起并撕开或剪开气室中央的绒毛尿囊膜，然后用灭菌吸管从破口处吸取尿囊液，注入灭菌青霉素瓶或试管内。
鸡胚接种实验报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚接种病毒的方法和步骤。
2. 了解病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
3. 学习病毒分离和培养的基本原理。
二、实验原理鸡胚接种是一种常用的病毒分离和培养方法。
病毒接种于鸡胚后，能够在鸡胚中繁殖，从而便于观察和分析病毒的生物学特性。
本实验主要采用尿囊腔接种法，将病毒接种于鸡胚尿囊腔内，观察病毒在鸡胚中的生长和繁殖情况。
三、实验材料1. 实验动物：9-11日龄的鸡胚。
2. 实验试剂：新城疫病毒悬液、生理盐水、碘酒、酒精、消毒棉球等。
3. 实验仪器：照蛋器、无菌手术刀、镊子、注射器、剪刀、平皿等。
四、实验方法1. 鸡胚准备：取9-11日龄的鸡胚，用碘酒和酒精消毒鸡胚蛋壳，用手术刀在鸡胚气室处划一小孔，用注射器吸取适量新城疫病毒悬液。
2. 尿囊腔接种：将鸡胚置于卵盘上，气室端向上，用注射器将病毒悬液注入鸡胚尿囊腔内，注入量约为0.1-0.2ml。
3. 孵育：将接种后的鸡胚放入37℃孵卵箱中孵育48-72小时。
4. 观察：定期观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、畸形等现象。
5. 病毒分离：取出死亡鸡胚，无菌操作下取出尿囊液，进行病毒分离和培养。
五、实验结果1. 接种后，部分鸡胚出现死亡现象，死亡时间集中在接种后24-48小时。
2. 死亡鸡胚的尿囊液中检测到新城疫病毒。
3. 成活鸡胚生长发育正常，未出现明显异常。
六、实验讨论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法，适用于多种病毒的研究。
2. 尿囊腔接种法是一种常用的鸡胚接种方法，适用于新城疫病毒、流感病毒等多种病毒。
3. 本实验结果表明，新城疫病毒能够在鸡胚中繁殖，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
七、实验结论1. 鸡胚接种是一种简单、有效的病毒分离和培养方法。
2. 尿囊腔接种法适用于新城疫病毒等多种病毒的分离和培养。
3. 本实验成功分离和培养了新城疫病毒，为新城疫病毒的研究提供了有力支持。
八、实验心得1. 实验过程中，无菌操作至关重要，需严格按照无菌操作规程进行。
流感病毒分离标准操作规程
流感病毒分离标准操作规程(SOP)病毒分离分离病毒是诊断病毒性疾病最常用,并且高度敏感的方法之一。
分离出的病毒须经免疫学、基因分析或电子显微镜等进一步鉴定确诊。
病毒可长期保存,亦可用来作抗原性、基因特性或药物敏感性等分析。
病毒分离亦受一定限制。
目前用于分离病毒的组织细胞种类有限,每种细胞只能用来分离培养一或数种病毒。
MDCK(狗肾细胞)是目前用于分离培养流感病毒最常用的细胞系。
分离流感病毒最常用的活体是鸡胚,目前有些实验室用MDCK细胞代替鸡胚分离培养流感病毒。
由于MDCK细胞属肿瘤细胞系,故用该细胞分离的病毒不能用于疫苗生产。
各实验室应同时采用鸡胚和MDCK两种方法分离病毒,不应放弃用鸡胚分离病毒的方法。
流感病毒细胞分离标准操作规程材料:1、细胞瓶或细胞管培养成片的MDCK细胞2、TPCK处理胰酶(牛胰腺来源XIII型)Sigma Cat. # T-86423、HEPES 缓冲液, 1 M 母液GIBCO BRL Cat. # 15630-0234、D-MEM培养基,GIBCO BRL Cat. # 11965-0925、青、链霉素母液(10,000 U/ml 青霉素G; 10,000 μg/ml 硫酸链霉素) ,GIBCO BRL Cat. # 15140-0236、牛血清白蛋白组分V, 7.5%溶液,GIBCO BRL Cat. # 15260-0117、放置于2ml wheaton 小瓶中的临床样品8、T-25培养瓶用于病毒培养,(组织培养管也可被应用,若样本量大的话应选用培养瓶,细胞数量按规定调整。
)9、1ml 滴管10、10ml 滴管培养基和试剂的准备:(建议:要求经常检查试剂使用的有效期)500 ml D-MEM液中加入:青、链霉素母液5 ml (终浓度达: 100 U/ml 青霉素and 100 μg/ml 链霉素) 牛血清白蛋白12.5 ml (终浓度: 0.2 %)HEPES缓冲液12.5 ml (终浓度: 25 mM)病毒生长液:每500毫升不含血清的D-MEM液之中加0.5 ml of TPCK-胰酶(母液浓度为2mg/ml )使TPCK-胰酶的浓度为2 μg/ml。
实验一 鸡新城疫疫苗(一)
尿囊膜贴在卵壳内壁上，用镊子夹住将其撕脱下来即
可。
胚胎：消毒、打开气室卵壳后，用镊子撕破卵壳膜和
绒毛尿囊膜，夹起胚胎，用剪刀剪断卵黄带，将胎儿
放灭菌容器内即可。
8.鸡胚接种注意事项
（1）接种材料一般都应按每毫升1000ＩＵ或μg加入 青、链霉素。
（2）接种位点应避开鸡胚、血管和胚头，以免针头 刺伤鸡胚而造成接种后的损伤性死亡。
实验一 鸡新城疫油乳剂灭活苗的制备技术（一）
新城疫病毒可以在鸡胚中大量增殖，收获的鸡胚
尿囊液中即含有新城疫活病毒，将收获的尿囊液经过
灭活，并加入佐剂，便制成了新城疫灭活疫苗。
目的和要求：
1.掌握鸡胚的孵化过程和鸡胚的接种途径、接 种方法； 2.掌握新城疫病毒在鸡胚尿囊腔的增殖过程， 掌握接毒和收毒的方法。
头约1cm左右。
4.病料接种：
若用鸡胚分离、培养病毒，则应选9～12日龄之
间的发育鸡胚。许多病毒，特别是大多数禽病毒都能
在鸡胚或鸭胚中生长繁殖。接种时应先在照蛋器下检 查鸡胚是否健康、活泼，并划出气室和接种部位。然 后严格消毒接种部位和气室（先用碘酊消毒，再用 70%酒精消毒），用打孔器打孔后，每胚接种处理好
水瓶中，使两种抗生素在生理盐水中的含量均
达到1000-2000 IU(μg)/ml。将注射用生理盐
水3-4ml注入一瓶新城疫Ⅳ系弱毒疫苗中，稀释。
3.照蛋定位 ： 接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚 和弱胚。对所有健康胚应先用红铅笔画出气室 位臵，再于胚胎侧画出接种位点（进针点）， 接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚
此法适用于马立克氏病毒、披膜病毒、衣
原体及立克次氏体的分离、培养。接种方法：
气室端蛋壳消毒后，在气室中央打一小孔，用
鸡胚的接种技术 - 养鸡技术
鸡胚的接种技术-养鸡技术张师杨（哈尔滨市阿城区畜牧兽医局150000）鸡胚接种技术用途广泛，除了可以分离培养病毒、支原体及衣原体等病原以确诊传染病外，还可用于病毒的鉴定，效价测定，致病力测定及制造疫苗、抗原等。
因此掌握鸡胚接种技术对进行传染病的研究和防制工作非常重要。
1选胚根据需要选用合适日龄的鸡胚，大多数病毒适于9～12日龄的鸡胚。
鸡胚应以白色蛋壳者为好，便于照蛋观察。
鸡胚应发育正常，健康活泼，不要过大、过小或畸形蛋孵化的胚。
鸡胚应来自健康无病的鸡群，而且不能含有可抑制所接种病毒的母源抗体，最好选用SPF鸡胚或非免疫鸡胚。
2. 照蛋定位接种前应在照蛋器下检查鸡胚，挑出死胚和弱胚。
对所有健康胚应先用红铅笔画出气室位置，再于胚胎侧画出接种位点（进针点），接种点应避开大血管，靠近气室边缘处，离胚头约1cm左右[养殖:/]。
3 接种照蛋定位完毕后，即可开始接种。
先用碘酊将接种位点和气室消毒，再用70%酒精脱碘，然后根据需要用三棱针或20号针头在蛋壳上打孔。
尿囊腔接种：最常用的接种方法，鸡新城疫、减蛋综合症病毒、传染性支气管炎病毒、法氏囊病毒等均可采用这种方法。
蛋壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎一侧近气室处所画位点打一小孔，用带5～7号针头的注射器插入孔内约1. 5cm，接种接种材料0. 1～0.2mL。
进针时针头与蛋壳应保持30℃角，不应垂直进针，注射完毕，立即用溶化的热石蜡将注射口和气室上小孔密封，然后放回37℃孵化箱孵化72～120h。
绒毛尿囊膜接种：主要用于痘病毒、喉气管炎病毒和马立克氏病毒等的分离培养。
将卵壳消毒后，先在气室上打一小孔，再于胚胎侧靠近气室处避开大血管用电烙铁或钢锯条将蛋壳打开1个4mm见方的小口，用刀尖小心撬开蛋壳，不能损伤卵壳膜，形成卵窗。
用针尖轻轻挑破卵窗中心的卵壳膜，但不能损伤卵壳膜下的绒毛尿囊膜。
在针尖挑破处滴1滴灭菌生理盐水或甘油，然后用吸头在气室小孔上吸气，使胚内造成负压，这时卵窗处绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见生理盐水或甘油迅速渗入。
病毒接种、收获尿囊液操作步骤
病毒接种1.选胚：首先，在照蛋间挑选出血管模糊，没有生命迹象的鸡胚。
2.标记注射点：接着用记号笔在气室上方约1mm处画线，在线的下方挑选注射点，在挑选注射点时应注意避开主血管，避开鸡头。
3.打孔：打孔前先用碘酊在气室部位消毒，用打孔器在气室线上方打孔。
注意：孔不宜过大，否则会导致封蜡不完全，甚至将蜡油流进鸡胚内部。
4.注射病毒：用注射枪向每个鸡蛋孔内注射0.2ml病毒稀释液，注射时针头朝向注射点方向，每次注射停留4~6s。
5.封蜡：注射完毕，用镊子夹取酒精棉沾上蜡油，进行鸡胚封蜡。
6.培养：将封蜡完成的鸡胚放入孵化箱中培养。
孵化箱温度设置33~35℃，湿度50%~70%，甲型流感病毒培养48~52小时，乙型流感病毒培养66~72小时。
需准备的仪器试剂：手电筒，记号笔，碘酊，棉签，量筒（稀释），酒精灯，废液瓶，打孔器，三脚架，蜡块，连续注射器，一次性注射器，移液枪，移液枪枪头，镊子，纱布，打火机，蓝盖瓶。
注意事项：（1）、前一天将病毒原液拿至4℃冷库；（2）、前一天准备好需要灭菌消毒的物品，高温高压灭菌，烘干；确定好参加实验人数，准备好无菌服；（3）、接种当天早上将接种所需生物安全柜开紫外杀菌；收获尿囊液1.鸡胚消毒:将培养好的鸡胚放入4℃冷库进行冷胚6h以上；首先，用0.1%的新洁而灭溶液将鸡胚进行消毒，每次消毒1~2分钟。
接着，在鸡胚的气室用碘酊消毒。
2.烙蛋：将经过消毒处理的鸡胚在烙蛋器上进行烙蛋。
3.收获：先用小镊子将壳膜撕破扒出气室，再用大镊子压住鸡头，同时用5ml移液枪吸取尿囊液。
收获的尿囊液应是澄清、微黄状。
4.保存：将收获的尿囊液放至6℃冷库保存。
需准备的仪器试剂：新洁而灭溶液，碘酊，棉签，烙蛋器，废液瓶，镊子，5ml移液枪，5ml移液枪枪头，蓝盖瓶（数量由病毒原液体积决定）。
注意事项：（1）、前一天准备好需要灭菌消毒的物品，高温高压灭菌，烘干；确定好参加实验人数，准备好无菌服；（2）、收获当天早上将收获所需生物安全柜开紫外杀菌；血凝滴度试验1.稀释病毒液：取一块洁净的“96”孔血凝板，横向摆放。
鸡胚尿囊腔接种实训报告
一、实验目的1. 掌握鸡胚尿囊腔接种的基本操作技术。
2. 熟悉鸡胚尿囊腔接种在病毒分离与培养中的应用。
3. 了解鸡胚尿囊腔接种对病毒分离与培养的重要性。
二、实验原理鸡胚尿囊腔接种是一种常用的病毒分离与培养方法。
该法利用鸡胚尿囊腔作为病毒培养的场所，使病毒在尿囊腔内繁殖，从而获得病毒培养物。
鸡胚尿囊腔接种适用于多种病毒，如新城疫病毒、流感病毒等。
三、实验材料1. 9-11日龄健康鸡胚。
2. 病毒悬液（如新城疫病毒、流感病毒等）。
3. 无菌操作工具：无菌镊子、无菌剪刀、无菌注射器、无菌吸管、无菌培养皿、无菌滤纸等。
4. 无菌消毒剂：碘酊、酒精棉球等。
5. 温箱、孵化箱等。
四、实验步骤1. 鸡胚准备- 将鸡胚置于温箱中孵化，保持温度37.5-38.0℃，湿度60-70%。
- 在孵化过程中，每日翻动鸡胚2-3次，以防止粘连。
- 在孵化第5-6天，用照蛋器检查鸡胚发育情况，挑选发育良好的鸡胚。
2. 病毒悬液准备- 将病毒悬液置于无菌操作台中，用无菌吸管吸取适量病毒悬液。
3. 鸡胚尿囊腔接种- 将鸡胚取出，用无菌滤纸吸去表面水分。
- 在鸡胚气室部位，用碘酊和酒精棉球进行消毒。
- 用无菌剪刀在鸡胚气室部位剪一小孔，露出尿囊。
- 用无菌注射器吸取病毒悬液，注入尿囊腔内。
- 用无菌滤纸吸去多余病毒悬液。
4. 鸡胚孵育- 将接种后的鸡胚放回孵化箱中，继续孵化。
- 每日观察鸡胚的生长发育情况，记录死亡、病变等。
5. 收获病毒- 在接种后48-72小时，取出死亡鸡胚。
- 用无菌剪刀剪开鸡胚气室部位，撕去卵壳膜。
- 用无菌吸管吸取尿囊液，进行病毒分离与培养。
五、实验结果与分析1. 鸡胚尿囊腔接种成功后，大部分鸡胚在接种后48-72小时内死亡。
2. 死亡鸡胚尿囊腔内可见病毒繁殖的典型病变，如尿囊液增多、尿囊膜增厚等。
3. 收获的尿囊液经病毒分离与培养，可得到纯化的病毒。
六、实验总结1. 鸡胚尿囊腔接种是一种简单、实用的病毒分离与培养方法，适用于多种病毒。
模块三、鸡胚蛋孵化、清洗消毒鸡胚、鸡胚接种病毒的操作
鸡胚蛋孵化、清洗消毒鸡胚、鸡胚接种病毒的操作(已读)任务1、SPF蛋的收集、清洗消毒、孵化学习目标了解SPF (Specific Pathogen Free,无特定病原) 蛋的收集、清洗消毒、孵化。
任务提出：病毒除了利用原代鸡胚细胞培养外，也可利用鸡胚直接培养，要利用鸡胚直接培养病毒，需采用SPF种蛋，就要进行SPF蛋的收集、清洗消毒、孵化。
按生产指令单向仓库领取相关材料并核对，填写收料记录，并按相关的SOP进行操作。
任务分析：要进行SPF蛋的收集、清洗消毒、孵化，首先要得到生产指令单，根据接种所需，向仓库领取所需要的各种材料，再按照SOP的要求，进行SPF蛋的收集、清洗消毒、孵化。
任务实施：一、准备工作领取各种材料，填写领料单。
二、材料和仪器SPF蛋、孵化器、蛋架、铅笔、照蛋器、甲醛三、操作方法1．SPF 蛋的收集、灭菌、保存每天用蛋盒从隔离器中收集蛋(1 次/ d) 后,用细砂纸和刀片清理干净蛋表面的脏物,在蛋的大头表面上用铅笔写隔离器号和收蛋日期。
随后,按隔离器号依次装在塑料蛋盘中,放进熏蒸柜里,用多聚甲醛硅油法进行灭菌,灭菌后的SPF 蛋按家系集中在一起放进12～15 ℃的贮藏柜里保存。
上述的工作过程中,严防用赤手直接触摸SPF蛋,一定要带一次性无菌手套进行操作,以防SPF 蛋的污染。
在贮藏柜中的保存时间不要过长,一般不要超过7 d ,以免降低SPF 蛋的利用率。
2．SPF 鸡胚的孵化2. 1 孵化前准备工作(1) 孵化前应彻底清理干净孵化室和出雏室及其内的孵化器等设备,放进孵化时所用的工具和记录用品。
(2) 用多聚甲醛硅油法熏蒸孵化室和出雏室,待检查灭菌结果合格时进入使用,如不合格重新熏蒸,达到合格为止。
(3) 在孵化室的缓冲间里放进孵化时工作人员所要用的灭菌的工作服,鞋帽、口罩和一次性手套,打开紫外线灯(24 hPd) 。
(4) 调试孵化器的温度和湿度, 温度设定在3718 ℃左右。
鸡胚尿囊腔接种法 实验反思
鸡胚尿囊腔接种法实验反思嘿，同学们！今天咱们来聊聊鸡胚尿囊腔接种法这个实验。
哎呀，这实验做完，我可得好好反思反思。
你们说，这鸡胚尿囊腔接种法，听起来是不是有点复杂？其实啊，做起来也没那么简单。
我一开始觉得，不就是给小鸡胚胎弄个接种嘛，能有多难？结果真正上手，才发现自己太天真啦！我觉得吧，这个实验最关键的就是要小心小心再小心。
就像走在钢丝上，稍微一不注意，可能就前功尽弃。
我刚开始操作的时候，手都有点抖，心里一直嘀咕：“这要是弄错了可咋办？” 也许是我太紧张了，第一次接种居然失败了！那时候，我那个沮丧啊，感觉天都要塌了。
你们能想象吗？我瞪大眼睛，小心翼翼地拿着工具，就像拿着宝贝似的，可还是出了岔子。
我就想啊，是不是我动作太慢了？还是说我没找准位置？这鸡胚小小的，里面的结构又那么精细，稍微偏差一点，可能就全完了。
后来我又试了几次，慢慢地找到了点感觉。
我发现啊，做这个实验不能着急，得慢慢来，就像绣花一样，一针一线都得仔细。
这时候我又在想，要是能有个魔法棒，一挥就能搞定多好，哈哈！不过呢，这中间也有搞笑的时候。
有一次，我太专注了，结果不小心把旁边的东西碰倒了，那声音“哗啦”一下，把我自己都吓了一跳。
我就问自己：“你这是在做实验还是在拆家呢？” 现在想想，还觉得有点不好意思。
经过这一番折腾，我觉得自己可能还是不够熟练。
也许得多练习几次，才能真正掌握这个鸡胚尿囊腔接种法。
但是，我又在想，就算熟练了，每次做的时候也不能掉以轻心，不然还是容易出错。
你们说，这实验是不是就像一场战斗？我在和那些小小的鸡胚斗智斗勇。
有时候我觉得自己能赢，有时候又觉得自己要败下阵来。
这心情啊，就像坐过山车一样，忽上忽下的。
总之，这次鸡胚尿囊腔接种法的实验，让我学到了好多。
我知道了做事情要细心，要有耐心，还不能怕失败。
虽然过程有点曲折，但是我相信，下次再做这个实验，我肯定能做得更好！你们觉得呢？。
鸡胚尿囊腔接种（单孔接种）SOP
鸡胚尿囊腔接种（单孔接种）SOP鸡胚尿囊腔接种（单孔接种）操作规程一、目的：使鸡胚尿囊腔接种规范化。
二、使用范围：适用于鸡胚尿囊腔接种工序。
三、责任者：鸡胚尿囊腔接种操作员。
四、内容：1 准备工作1.1 人员着装：操作人员按要求穿工作服、戴帽子、戴口罩、戴手套。
1.2 确认物品：签字笔、记录表、10日龄鸡胚、医用胶带、封孔胶、75%酒精棉、无菌棉花、4%碘酒、毛笔、打孔器、直镊、1mL一次性无菌注射器（带针）、接种液、含冰容器、打火机、酒精灯、止血钳、危废缸、垃圾桶。
1.3 确认胚蛋全部照检画好气室标记线，气室朝上摆放，检查胚蛋外观完整无破损。
1.4 消毒：用75%酒精棉擦拭操作台面、手部，注意更换酒精棉，用过的酒精棉扔危废缸。
2 鸡胚消毒2.1 碘酒消毒：用毛笔蘸取4%碘酒并沥干，对胚蛋气室标记处上0.2-0.3cm接种部位逐一消毒，消毒面积为大拇指盖大小，消毒顺序从左到右、从上到下。
2.2 脱碘：用止血钳夹取75%酒精棉脱碘，脱碘顺序从左到右、从上到下；每15枚蛋胚更换一个酒精棉，用过的酒精棉扔危废缸。
3 打孔：从不锈钢灭菌盒中取出打孔器，去掉锡箔纸，在蛋胚气室消毒处轻轻打一小孔，注意打孔力度，防止打破，打孔顺序从左到右、从上到下。
4 接种4.1 操作前摇匀种毒液，将种毒液放入含冰容器中；4.2 用75%酒精棉消毒种毒瓶塞，用过的酒精棉扔危废缸；4.3 取1mL一次性注射器，确认外包装完好后，取出注射器，注意拧紧针头与针筒连接处，将注射器针帽取下，将接种液瓶倾斜60°，将针头插入接种液瓶塞中央部位，确保接种瓶内液体完全没过针头，抽取病毒液1.2mL，注意缓慢抽取以减少气泡产生；将注射器针头朝上直立，用手指轻弹气泡部位，待气泡上移到注射器顶端时，用75%酒精棉包住针头慢慢排尽气泡，确保病毒液保持在刻度线上，注意不要将种毒液溅到桌面或蛋胚上，用过的酒精棉扔危废缸。
4.4 沿打孔处垂直进针，注入种毒液，每胚0.1mL接种量，接种顺序从左到右、从上到下，注意注毒时应缓慢推进，避免种毒接后溢出。
鸡胚接种技术
绒毛尿囊膜接种法
解剖与收获
用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下， 用剪刀沿人工气室边缘将膜剪下，放入 加有灭菌生理盐水的培养皿内，观察病 加有灭菌生理盐水的培养皿内， 灶形状或用于传代，或用50 甘油保存。 50％ 灶形状或用于传代，或用50％甘油保存。 同时作无菌培养。 同时作无菌培养。
（三）尿囊腔接种
接种步骤与方法
将孵育l0~13日龄的鸡胚标记气室、胎位，于与胚胎略近气室端卵壳 将孵育l0~13日龄的鸡胚标记气室、胎位，于与胚胎略近气室端卵壳 上划一等边三角形。 消毒气室顶端及记号处，用开孔器在记号处的卵壳上开一三角形裂 痕，不可弄破下面的壳膜，同时在气室顶端钻一小孔。 轻轻揭去卵壳，露出壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖循卵 壳膜纤维方向划破一隙，勿伤及紧贴的绒毛尿囊膜。 用针尖刺破气室小孔处的壳膜，再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸 气，此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上，从而使绒毛尿囊 膜下陷而形成人工气室。 在卵壳的窗口滴0.05~0.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将旋转鸡胚 在卵壳的窗口滴0.05~0.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将旋转鸡胚 使接种物扩散到整个绒毛膜尿囊膜上。 在卵壳的窗口周围涂石蜡，用消毒胶布封口。将鸡胚保持人工气室 在上的位置，33~35℃继续培养48～72h。 在上的位置，33~35℃继续培养48～72h。
三、注意事项
防止污染：鸡胚为一活的有机体，因此 防止污染： 要严格无菌操作。 动作要仔细，以免造成物理死亡。接种 后24小时内死亡应不计结果。 24小时内死亡应不计结果。 适宜的培养温度：
第四节
无菌试验
病毒的检测
— 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 目的:证实收集的鸡胚是否受到细菌的污染。 — 方法: 方法:
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鸡胚尿囊腔接种（单孔接种）操作规程
一、目的：使鸡胚尿囊腔接种规范化。
二、使用范围：适用于鸡胚尿囊腔接种工序。
三、责任者：鸡胚尿囊腔接种操作员。
四、内容：
1 准备工作
1.1 人员着装：操作人员按要求穿工作服、戴帽子、戴口罩、戴手套。
1.2 确认物品：签字笔、记录表、10日龄鸡胚、医用胶带、封孔胶、75%酒精棉、无菌棉
花、4%碘酒、毛笔、打孔器、直镊、1mL一次性无菌注射器（带针）、接种液、含冰容器、打火机、酒精灯、止血钳、危废缸、垃圾桶。
1.3 确认胚蛋全部照检画好气室标记线，气室朝上摆放，检查胚蛋外观完整无破损。
1.4 消毒：用75%酒精棉擦拭操作台面、手部，注意更换酒精棉，用过的酒精棉扔危废缸。
2 鸡胚消毒
2.1 碘酒消毒：用毛笔蘸取4%碘酒并沥干，对胚蛋气室标记处上0.2-0.3cm接种部位逐一
消毒，消毒面积为大拇指盖大小，消毒顺序从左到右、从上到下。
2.2 脱碘：用止血钳夹取75%酒精棉脱碘，脱碘顺序从左到右、从上到下；每15枚蛋胚更
换一个酒精棉，用过的酒精棉扔危废缸。
3 打孔：从不锈钢灭菌盒中取出打孔器，去掉锡箔纸，在蛋胚气室消毒处轻轻打一小孔，
注意打孔力度，防止打破，打孔顺序从左到右、从上到下。
4 接种
4.1 操作前摇匀种毒液，将种毒液放入含冰容器中；
4.2 用75%酒精棉消毒种毒瓶塞，用过的酒精棉扔危废缸；
4.3 取1mL一次性注射器，确认外包装完好后，取出注射器，注意拧紧针头与针筒连接处，
将注射器针帽取下，将接种液瓶倾斜60°，将针头插入接种液瓶塞中央部位，确保接种瓶内液体完全没过针头，抽取病毒液1.2mL，注意缓慢抽取以减少气泡产生；将注射器针头朝上直立，用手指轻弹气泡部位，待气泡上移到注射器顶端时，用75%酒精棉包住针头慢慢排尽气泡，确保病毒液保持在刻度线上，注意不要将种毒液溅到桌面或蛋胚上，用过的酒精棉扔危废缸。
4.4 沿打孔处垂直进针，注入种毒液，每胚0.1mL接种量，接种顺序从左到右、从上到下，
注意注毒时应缓慢推进，避免种毒接后溢出。
（此操作否定项：每溢出一枚扣5分，超过3枚则此项操作为零分）
5 封孔：按从下到上、从右到左的顺序将封孔胶滴到打孔处。
如发现产生气泡应重新封孔。
6 标记：在已标记接毒名称、批号的标签上填写接种日期、接种数量、接种人，贴在蛋盘明显处。
7 记录：按操作顺序填写记录。
8 清场：将含毒用具放入不锈钢托盘中，清洁、消毒台面，将危废缸内的垃圾放入危废垃圾桶。