高效液相色谱分析技术的应用

试论高效液相色谱分析技术的应用

【摘要】hplc在我国食品分析领域的应用始于20世纪70年代末，90年代后期国家标准中开始将hplc法列为检测食品中的污染物、营养成分、添加剂、毒素和无机成分等的国标方法。

【关键词】hplc；高效液相色谱分析；食品检测

1.hplc在食品添加剂领域的应用

1.1食品甜味剂的检测

采用液相色谱—气相色谱联用技术， spherigelc18色谱柱，电喷雾负离子采集模式，甲醇-甲酸-三乙胺缓冲盐梯度洗脱，定量测定果冻等食品中安赛蜜、糖精钠和甜蜜素含量，结果加样回收率为93.19%～100.90%，相关标准偏差（rsd）为1.05%～2.04%。该方法选择性好，定性定量准确，分析时间短，同时也适用于饮料等其他食品的定性定量检测。

用高效液相色谱—荧光法（hplc-fld）测定食品中的糖精钠，最低检出限在0.005～0.200mg/ml，与高效液相色谱—紫外检测法（hplc-uv）相比较，hplc-fld法重现性好，准确度更高，由于fld 的选择性响应，降低了对色谱柱的性能要求，更适合复杂样品的快速分析，使其具有比uv法更高的可靠性，是一种较为理想的糖精钠检测方法。

1.2食品防腐剂的检测

利用hplc测定含乳饮料中苯甲酸的含量。用zn（ac）2和kfe （cn）3溶液作为沉淀剂进行样品的预处理，磷酸盐缓冲液和甲醇

混合溶液为流动相，c18色谱柱，于波长225nm处紫外检测，方法简单快速、灵敏度高，既适用于大部分含乳饮料，也适用于纯牛奶的测定。苏爱梅采用加沉淀剂沉淀法对火腿肠样品进行预处理，过滤后用rp-hplc法测定火腿肠中防腐剂苯甲酸和山梨酸的含量。色谱柱为symetry-c18，以0.02mol/l乙酸铵-甲醇（97∶3）为流动相，检测波长为230nm。苯甲酸和山梨酸浓度在0～0.05g/l范围内线性很好（r=0.9996）；山梨酸最低检出限为0.024g/l，平均回收率为100.4%，rsd为0.68%。

1.3食品色素的检测

采用hplc法测定保健食品黄金搭档包衣片中食用合成色素，样品前处理用粉碎提取法和漂洗法，聚酰胺吸附纯化lichrospherc18柱，甲醇-乙酸铵流动相梯度洗脱，单波长或多波长测定柠檬黄、靛蓝和诱惑红3种色素。其线性范围宽（0～100g/ml），回收率高（91.3%～103.1%），重现性好（rsd=2.11%～5.63%），最低检出限为2～11ng。其中，尤以粉碎提取法，梯度洗脱，多波长检测效果更佳。

1.4食品抗氧化剂的检测

采用rp-hplc法测定油炸薯条没食子酸内酯（pg）、叔丁基对苯二酚（tbhq）、羟基茴香醚（bha）、4-已基间苯二酚（4hr）、二丁基羟基甲苯和2246含量。其中，pg、tbhq用50%甲醇（rp-hplc体积分数1%的冰醋酸）作流动相，bha、4hr、bht和2246用80%甲醇作流动相，检测波长为280nm，相关系数在0.9983～0.9996，最低

检出限为1.0～2.0μg/g，平均回收率均在85%以上。

采用基质固相分散萃取植物油中抗氧化剂bha、bht、tbhq和pg，经hplc法进行分离。结果通过基质固相分散技术，可减少有机溶剂的用量，缩短分析时间，提高分析效率，回收率为85.8%～94.3%，最低检出限为2ng。

2.hplc在食品营养成分领域的应用

2.1碳水化合物的检测

对于碳水化合物的测定，hplc法操作简便，灵敏度高，可同时测定各种糖，国际上已将hplc法作为酒类糖分含量测定的仲裁法。

2.2氨基酸的检测

氨基酸是生物体中重要的生命物质，是组成酶和蛋白质的基本单元，准确灵敏地测定食物中氨基酸的含量具有十分重要的意义。目前，柱前衍生化高效液相色谱法以其灵活和易于推广的特点。

采用邻苯二甲醛（opa）-9-芴甲基氯甲酸酯（fmoc）进行氨基酸柱前衍生，rp-hplc法测定氨基酸含量。3个不同浓度梯度的氨基酸标准溶液线性关系良好，样品保留时间绝对误差小于0.1min，重现性rsd值低于4%，加标回收率均在90%～110%。

2.3脂肪酸的检测

脂肪酸是指一端含有一个羧基的长的脂肪族碳氢链，是有机物。饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸和三脂酰苷油磷脂卵磷脂等，对人体的健康起到了重要的作用。用hplc法与基质辅助激光解吸电离飞行时间技术联用，分析蛋黄中磷脂粗提物。将从蛋黄中提取的多种磷

脂通过hplc预先分离，收集各组分后分别进行maldi-tof-ms分析得到比较清晰的质谱图。选用rp-hplc与电容耦合非接触电导检测（c4d）结合的方法分离测定肉蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸与亚油酸5种未衍生化长链脂肪酸，采用hypersilodsc18色谱柱，以甲醇-1mmol/l醋酸钠（78∶22，v/v）为流动相，结果表明，硬脂酸在5～200μg/ml范围内与峰面积线性关系良好，其他4种酸线性范围为2～200μg/ml。将此种方法用于检测南瓜、大豆、米糠及棕榈油中脂肪酸，与标准气相色谱检测方法相比，简单、快速、灵敏度高。

3.hplc在食品污染物领域的应用

3.1食品农药、兽药残留的检测

农药残留是由于使用农药而导致的在食品、农产品或动物饲料中残留的一定物质，国家相关标准都有明确的药物最大残留量，超过其值有可能对人体造成危害。运用hplc柱后衍生荧光检测法，测定苹果、梨、桃、葡萄、香蕉和芒果等水果样品中涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、三羟基克百威、涕灭威、克百威和甲萘威7种氨基甲酸酯类农药的残留量，结果7种农药3种不同浓度平均添加回收率在72.5%～116.2%，最低检出限为0.0037～0.0074mg/kg。3.2食品中其他来源化学污染物的检测

环境污染物以及在工业生产中所产生的有毒有害化学物，如包装材料等均可通过植物或动物进入食物链，并引起人类的疾病或健康问题。

3.3食品中霉菌毒素的检测

食品中存在多种霉菌毒素，主要的霉菌毒素有黄曲霉毒素、镰刀菌毒素和玉米赤霉烯酮等。粮食及食品由于霉变不仅会造成经济损失，有些还会造成误食人畜急性或慢性中毒，甚至导致癌症。

4.小结

目前在食品安全检测高标准的情况下，hplc分析技术以其分辨率、灵敏度及定量精度高等特点，已被广泛应用于食品检测领域。现今科学技术日益更新，高效液相色谱仪器也在不断地更新发展，并且与各种检测技术的联用越来越普遍，包括液相色谱（lc）和质谱仪（ms）及核磁共振谱仪的集成（lc-ms-nmr）、气相色谱-液相色谱联用（gc-hplc）、固相微萃取-液相色谱联用（spme-hplc）、聚焦微波辅助萃取-液相色谱联用（fame-hplc），大大拓宽了hplc 的应用范围，提高了检测水平，在今后hplc也会有更广阔的发展空间。

【参考文献】

[1]贺家亮，李开雄，刘海燕.高效液相色谱法在食品分析中的应用[j].食品研究与开发，2008，29（11）：175-177.

[2]赵青山，冯志彪.高效液相色谱在食品分析领域的应用[j].生命科学仪器，2005，3（6）：21-24.

[3]黄国宏.高效液相色谱技术在食品分析中的应用[j].食品工程，2006（4）：47-50.