链球菌和葡萄球菌分离鉴定

青岛农业大学

兽医微生物学课程论文

题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定

姓名：

学院：动物科技学院

班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新

二0一四年四月十二日

链球菌和葡萄球菌分离鉴定

班 2012

指导教师温建新

摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。

关键词：葡萄球菌；链球菌

引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇.

链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1待鉴定菌A.B各一，健康兔。

1.1.2 试剂及其配制1:5兔血浆，革兰氏染色液，百分之三的过氧化氢溶液

1.1.3 器材：普通营养琼脂平板，血琼脂平板，甘露醇微量发酵管。无菌注射器，碘酒棉，酒精棉，无菌离心管，无菌平皿，离心机，接种环，小试管，载玻片。

1.2方法

1.2.1 划线分离，由接种环以无菌操作分别沾取少许待分离的材料A，B.。在无菌平板表面进行平行划线、，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来。如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。分别取待测A，B菌于普通培养基划线培养和血琼脂培养基。置于37摄氏度培养18至24小时。

1.2.2 血平板制作取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用

1.2.3兔心脏取血法和大、小鼠心脏取血法类似，且比较容易掌握。将兔固定在手术台上，用碘酒酒精消毒皮肤，选择心搏最明显处穿刺，针头刺入心脏后即有血液涌入注射器。取得所需血量后，迅速将针头拔出，这样心肌上的穿孔易于闭合。经6～7天后，可以重复进行心脏采血。

1.2.4 生化鉴定：分别取待测菌A，B。取2毫升百分之三的过氧化氢溶液，加入干净的小试管中，用细玻璃棒蘸取试验菌，插入过氧化氢液面下，发现B有气泡产生，为葡萄球菌，A为链球菌。

1.2.5形态鉴定：进行革兰氏染色。

1.2.6凝固酶试验：挑取细菌菌苔，混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆，同时用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小时，观察结果，凝固者B为阳性。1.2.7甘露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中，置37摄氏度培养24小时，观察情况。

2 结果与分析

2.1普通琼脂是直径1到2毫米的白色或米色略微凸起的光滑球面，菌落呈圆形，湿润，不透明，边缘齐整。血液琼脂平板：多数病菌株形成明显的溶血。但链球菌比葡萄球菌的效果明显。

2.2过氧化氢酶试验若有气泡产生，B则为葡萄球菌，A否则为链球菌。

2.3凝固酶试验：挑取细菌菌苔，混悬于1:4稀释的0.5毫升兔血浆，同时用已知阳性菌株作对照，置37摄氏度培养2至4小时，观察结果，凝固者为阳性。

2.4甘露醇发酵实验：将各种葡萄球菌分别接种于甘露醇发酵管中，置37摄氏度培养24小时，观察情况。

3.1 结果讨论

经试验结果鉴定A为链球菌，B为金黄色葡萄球菌。

3.2操作的过程中可能出现的问题：触媒实验①

3％H2O2溶液要新鲜配制。

②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。

③取对数生长期的细菌。

4 结论：A为链球菌，B为金黄色葡萄球菌。

参考文献：

【1】李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。

【2】陆承平，兽医微生物学第四版。

【3】兽医微生物学(原书第2版）