链球菌和葡萄球菌分离鉴定

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临床细菌培养鉴定流程及报告.介绍

3．分离培养 ⑴一般培养: 用定量接种环或无菌微量加样器取尿液0.001ml或0.01ml(已使用抗生素患者),接种于血平板和麦康凯/中国兰平板,不能定量时需用倾碟法记数， 35～37℃培养18～24小时。 (2)特殊培养: 对临床要求真菌、淋病奈瑟菌及结核菌等培养者，根据细菌所需条件接种相应特殊培养基，放臵相应条件下进行培养。
(三 ) 尿尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖而引起的尿路炎症。从肾脏排泌出来的尿液正常情况下是无菌的，如果在尿液中分离出细菌（排除污染因素）即为菌尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。根据感染部位可分为上尿路感染（肾盂肾炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性还可出现前列腺炎。
1.尿中常见分离菌
⑵采血时间及采血量采血培养应该尽量在使
用抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血
培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视
为单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液，或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～1：
(2)标本采集 a.清洁中段尿最好是晨尿，是临床上最常留取尿标本的方法 b.耻骨上膀胱穿刺法是评估膀胱内细菌感染的“金标准” c.直接导尿法 d.小儿收集包 e.留臵导尿
(3)标本运送标本采集后应及时送检， 2小时内进行接种，否则应臵4～8℃冰箱保存，冷藏保存标本时间不得超过8小时。
(2)报告方式初步报告：在分离出细菌后，进行革兰氏染色，作出初步报告。最终报告：有意义的阳性结果报告，应报告菌落计数、细菌种名及药敏结果。无意义的阳性结果报告，报告菌落数、革兰氏染色形态特征，并注明是纯培养或是混合菌生长。阴性结果报告:应报告无菌生长和菌落计数＜1000cfu/ml或＜100cfu/ml尿。

球菌的培养与鉴定(实验)

金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性。
链球菌属
（一）菌落特征（血琼脂平板） • 肺炎链球菌
– 灰色，较小， α溶血，“脐窝”状凹陷，有荚膜菌株可成粘液样
• 化脓性链球菌（A群）
– 灰白色，较小，半透明，无/有光泽，周围有较大的β 溶血环
• 无乳链球菌（B群）
– 灰白色，较A群大，平坦，有光泽，不透明，周围有狭窄的β溶血环
蕈糖乳糖麦芽糖蔗糖甘露糖
四、操作步骤
（2）肺炎链球菌
Optochin敏感试验胆汁溶菌试验（有对照）
（3）化脓性链球菌与无乳链球菌
杆菌肽敏感试验 CAMP试验
四、操作步骤
（4）粪肠球菌
触酶试验 65g/LNaCl 胆汁-七叶苷试验精氨酸双水解酶试验（有对照管）甘露醇山梨醇阿拉伯糖棉子糖
球菌的培养与鉴定
苏州大学附属第二医院刘婷婷
1
实验目的
2
实验内容
3
实验材料
4
操作步骤
5
实验结果
一、实验目的
• 掌握葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属的菌落特点、染色形态及鉴别实验；
• 了解其它球菌的菌落特点、染色形态及鉴别。
二、实验内容
葡萄球菌属
金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌
链球菌属
肺炎链球菌化脓性链球菌无乳链球菌
3 结果
在两种细菌划线交界处出现箭头状透明溶血环区为阳性，否则为阴性。
CAMP试验
链球菌属
2、肺炎链球菌
Optochin敏感试验：＋胆汁溶菌试验：＋荚膜肿胀试验：＋分解菊糖
Optochin敏感试验
1 原理
Optochin能干扰肺炎链球菌叶酸合成，抑制细菌生长，故肺炎链球菌对其敏感。

病原性球菌的检验

病原性球菌的检验一、葡萄球菌属Staphylococcus⏹广泛存在于自然界，多数是不致病的腐物寄生菌。

⏹致病性葡萄球菌可引起化脓性炎症、败血症、食物中毒等。

分类与分型1）金黄色葡萄球菌(S. aureus)：多数致病。

（2）表皮葡萄球菌(S. epidermidis)：偶可致病。

（3）腐生葡萄球菌(S. saprophyticus)：不致病。

（4）致病性菌株能产生黄色或柠檬色素。

（5）多数金黄色葡萄球菌可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌不敏感。

金黄色葡萄球菌的致病性⏹用噬菌体可将金葡萄菌分为4群23个型。

⏹肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金葡萄菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。

⏹造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。

⏹引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。

金黄色葡萄球菌的流行病学⏹作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。

因而，食品受其污染的机会很多。

金黄色葡萄球菌及其检验⏹革兰氏阳性球状，排列呈葡萄串状。

无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，个别形成荚膜。

致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）菌体较小、约0.5~1um., 普通0.4~1.2um。

培养及生化特性1.在普通培养基上生长良好（需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、pH7.4 ，对营养要求不高，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。

），在麦康凯琼脂平板不生长。

2. 血平板上生长更佳，致病菌株β溶血3. 产生金黄色色素4. 高度耐盐: 可在7.5~15%NaCl肉汤中生长。

5. 分解葡、乳、麦、蔗糖，产酸不产气，触酶阳性，致病菌株能分解甘露醇。

6. 金黄色葡萄球菌能产生的毒素和酶（致病因素P149）1）溶血毒素2）杀白细胞素3）血浆凝固酶：区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。

4）脱氧核糖核酸酶：5）肠毒素6）溶纤维蛋白酶7）透明质酸酶抗原性1. 多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁，借此可分群。

微生物实验设计-病原性球菌的鉴定

医学微生物学实验设计姓名：***学号：**********班级：10级临床十一班病原性球菌的鉴定姚淑宝（石河子大学医学院石河子832000）摘要：球菌是细菌中的一大类，其中对人类有致病性的球菌包括分属葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属和奈瑟菌属的一些细菌。

本次实验设计以掌握病原性球菌的形态和培养特性，熟悉病原性球菌的分离和鉴定程序为目的。

对脓汁中的葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌进行鉴别。

一、鉴定思想本次鉴定试验，先将脓汁标本直接镜检，再分离培养，观察镜下菌体的形态特征以及形成菌落的形态特征确定待测菌的菌属。

然后，对可疑菌落纯培养，通过不同生化反应对同一菌属中的不同细菌进行区别。

（具体见图1-1）分离纯化葡萄球菌属奈瑟菌属血浆凝固酶试验胆汁溶菌试验麦芽糖发酵试验二、鉴定方法（一）直接镜检将脓汁标本涂片进行革兰染色，然后在显微镜下观察细菌菌体的形态、排列、染色性并作出初步诊断。

葡萄球菌属：革兰染色阳性，球形，无芽胞、无鞭毛，呈葡萄串状排列。

链球菌属：革兰染色阳性，球形或椭圆形，无芽胞、无鞭毛，呈链状或成双排列。

肺炎链球菌具有荚膜双球的典型形态。

奈瑟菌属：革兰染色阴性，无芽胞、无鞭毛，常成双排列。

脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌大多于中性粒细胞内外分布。

通过直接镜检可以确定脓汁标本中细菌的菌属。

在确定菌属的基础下再对脓汁标本中的细菌分离纯化，然后挑取可以菌落通过再次涂片染色镜检、致病物质检查、生化反应、血清学鉴定等方法进行菌属内的区别。

（二）分离纯化用分区划线法将脓汁中的细菌接种在血琼脂平板培养基或巧克力色培养基上并在5%二氧化碳、37℃的条件下培养18~48小时。

观察菌落的形态。

葡萄球菌属：在血平板上形成圆形凸起、表面光滑、润湿、边缘整齐、不透明的菌落。

形成金黄色、白色和柠檬色脂溶性色素，多数金黄色葡萄球菌菌落周围有β溶血现象。

链球菌属：在血平板上形成灰白色、圆形凸起、半透明或不半透明的细小菌落。

肉鸡葡萄球菌、链球菌混合感染的鉴定及其诊治

摘要：从辽南肉鸡场的病死鸡体内分离到５不同菌株的病原菌。通过培养特性、菌落形态、染色特性、生种
化试验等一系列鉴定，确定这５种菌株中有１为兽疫链球菌、２株为禽链球菌、３株为金黄色葡萄球菌。致病株性实验表明２株链球菌呈Ｂ血，１呈ｎ血，呈ｎ溶株溶、ｐ溶血的菌株对小白鼠的致病性为１０。将５菌株单０种独进行药敏试验时抗生素对这些菌有较好的效果，并且选择药物范围较广。而用混合菌进行药敏试验时药物敏感效果均不显著。临床肉鸡两种菌混合感染时病程轻，则能治愈，重症鸡极少有治愈，需要淘汰，对肉鸡的养殖业造成很大的经济损失。
关键词：肉鸡；链球菌；葡萄球菌；诊治
中图分类号：Ｓ８１３
文献标识码：Ａ
文章编号：１７－０１２０）０－００－０６１５７（０６３０１３发病后期爪僵直消瘦，别鸡只有鳞片发黑现象。个
近年来，养鸡业呈集约化、规模的发展，规大且模化养肉鸡场的疾病情况，日趋复杂型，往是两种往或两种以上的疾病同时感染，继发感染也很常见。肉鸡葡萄球菌、链球菌感染疾病的分布范围极广，世界各地均有发生，危害严重，是多年来一直困扰养鸡业的主要疾病之一。但肉鸡混合感染以上两种菌，在国内报道甚少。近年来，辽南地区养肉

病原性球菌及检验

病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。

G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。

G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。

对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。

常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。

一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。

为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。

(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。

1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。

2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。

(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。

1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。

存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。

2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。

有型特异性，分A、B、C三型。

(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。

2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。

3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。

(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。

在20%CO2环境中，有利于毒力产生。

最适温度37℃，最适PH7.4。

DNA中G+C含量：30-39%。

1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。

葡萄球菌的鉴定

血浆凝固酶试验和甘露醇发酵试验可区分致病性和非致病性葡萄球菌
血浆凝固酶
甘露醇发酵
金葡
表葡
腐生
（4）新生霉素敏感试验
血平板菌悬液涂布 5ug/L新生霉素纸片 35℃孵育16~18h S:抑菌圈直径>16mm，R:≤16mm
结果 ATCC25923 表葡 S R
腐生
阳性结果（S）
实验七葡萄球菌鉴定
检验系微生物教研室
（一）葡萄球菌检验程序
脓液、咽拭子、穿刺液尿液、痰液脑脊液血液粪便、呕吐物
直接涂片染色
初报
分离培养（血平板）
分离培养
增菌培养（高盐甘露醇平板）
涂片染色触媒血浆凝固酶甘露醇发酵耐热核酸酶其他鉴定试验
取可疑菌落
鉴定试验
药敏试验
报告
（二）目的要求
培养基：血琼脂平板，MH琼脂，甘露醇发酵管试剂：生理盐水，3%H2O2,EDTA抗凝兔血浆，革兰染液，
新生霉素纸片、头孢西丁、红霉素、克林霉素纸片其他：酒精灯，接种环，接种针，玻片，显微镜，孵箱等
（四）步骤方法
1.细菌菌落特征观察：
大小形态光泽表面边缘透明度颜色溶血金葡表葡腐生
玻片法
【操作】取兔血浆和生理盐水各1滴分别滴于载玻片上，用接种环挑取细菌，混合后观察。
【操作】
试管法
（3）甘露醇发酵试验：
【原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶类，能发酵甘露醇产酸，培养基由紫色变为黄色。
【操作】细菌分别接种甘露醇单糖发酵管，经35℃ 孵育18-24h观察结果。
【结果】金葡为阳性，表皮、腐生为阴性
H2O2
H2O + O2

链球菌和葡萄球菌分离鉴定

青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定姓名：学院：动物科技学院班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新二0一四年四月十二日链球菌和葡萄球菌分离鉴定班 2012指导教师温建新摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。

关键词：葡萄球菌；链球菌引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。

多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。

代表种有金黄色葡萄球菌。

白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。

典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。

葡萄球菌无鞭毛，不能运动。

无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。

易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。

营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。

致病性菌株能分解甘露醇.链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。

这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。

因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。

链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。

幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。

无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。

能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。

营养要求较高。

【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。

兽医微生物学-革兰氏阳性球菌(葡萄球菌+链球菌)

第二部分细菌学各论
了解各种细菌的形态、培养特性、致病因子及微生物学诊断。
细菌学各论
第七章革兰氏阳性球菌
第七章革兰氏阳性球菌
球菌（Coccus）是一大类球状细菌的总称。
根据革兰氏染色可分为:
G+球菌
葡萄球菌双球菌链球菌四联球菌
➢其中葡萄球菌和链球菌是具有代表性的G+球菌 ➢在兽医中具有重要意义
2、根据抗原结构进行分类（主要是 Lancefield分类法）
• 链球菌的抗原构造比较复杂，包括
• 1、属特异抗原，核蛋白抗原，又称P抗原，各种链球菌均相同，并与葡萄球菌属有交叉。
• 2、群特异性抗原，又称C抗原，是链球菌细胞壁中的多糖成分，兰氏(Lancefield)分类即以此为基础。
兰氏（Lancefield）分群法
4、抗原构造
➢葡萄球菌细胞壁上的抗原构造比较复杂，含有多糖及蛋白质两类抗原
①多糖抗原 • 具有型特异性
– 金黄色葡萄球菌的荚膜多糖抗原分为11型，临床分离株多为5型或8型，荚膜的重要成分为N乙酰氨基糖醛酸及N乙酰岩藻糖胺。
– 荚膜产生基因由单个染色体操纵子调控。
Fab段
②蛋白抗原
存在于细菌细胞壁的一种表面蛋白 SPA Fc段 • 人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A(SPA)，动物
金黄色葡萄球菌的平板菌落照片
有氧环境中产生色素无氧环境中不形成色素
➢②血液琼脂平板形成的菌落较大，产溶血素的菌株多为病原菌，在菌落周围呈现明显的β溶血。
溶血现象 α-溶血——草绿色溶血 β-溶血——菌落周围形成明显的全透明溶血环 γ-溶血——不溶血
培养特性
➢③普通肉汤生长迅速，初浑浊，管底有少量沉淀，轻轻振荡，沉淀物上升，旋即消散。培养 2～3d后可形成很薄的菌环，在管底则形成多量黏稠沉淀。

微生物实验报告

Xxx农业大学兽医微生物学实验报告葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名＿＿＿＿＿＿＿＿＿学号＿＿＿＿＿＿＿＿＿专业班级＿＿＿＿＿＿＿＿＿指导教师＿＿＿＿＿＿＿＿＿葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对A.B两种菌种进行分离鉴定主要方法：通过分离培养形态观察生化试验进行鉴定关键词葡萄球菌链球菌分离鉴定引言葡萄球菌，属微球菌科葡萄球菌属，革兰氏阳性菌。

对生长环境要求不高在普通培养基上生长良好，需氧或碱性厌氧，最适培养温度为37摄氏度。

最适PH7.4.在普通培养基上形成湿润光滑隆起边缘整齐的圆形菌落。

多数菌株能分解葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖，产酸不产气;致病菌株可以分解甘露糖，还可以产生血浆凝固酶。

有致病性的葡萄球菌主要是金黄色葡萄球菌，致病性葡萄球菌的鉴定可通过色素颜色，溶血性，过氧化氢酶实验（触酶试验），凝固酶实验，甘露糖发酵试验等鉴定链球菌，革兰氏阳性菌，老龄菌或被吞噬的的细菌或呈现阴性。

呈圆形或卵圆形，直径为0.5～1.0微米，常呈链状或成双排列。

一般致病性链球菌的链比非致病性的链长。

个别菌株有鞭毛，有的菌株有菌毛，幼龄培养物可形成荚膜。

大多数为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。

致病菌对营养要求比较高，普通培养基中生长不良。

在加入血液血清葡萄糖等的培养基中生长良好。

在血琼脂平板上可长成直径约0.1～1.0mm,灰白色表面光滑,边缘整齐的小菌落.多数致病菌落可形成溶血现象.强致病菌可形成β溶血.产生α溶血环的链球菌致病性不强,为条件致病菌.γ型溶血菌落周围无溶血现象,一般不治病.1.材料与方法1.1 材料1.1.1 两种未知的实验菌种 A菌 B菌1.1.2 培养基的制作材料（1）药品牛肉膏蛋白胨 NacI 琼脂 0.1mol/L 和1mol/L NaoH溶液,0.1mol/L和1mol/L HCI溶液。

（2）仪器天平或台秤，高压蒸汽灭菌器。

（3）玻璃器材移液管试管烧杯量筒锥形瓶培养皿玻璃漏斗。

（4）其他物品钥匙称量纸 ph试纸记号笔脱脂棉线绳纱布试管塞牛皮纸注射器等。

鉴别葡萄球菌属和化脓性链球菌属的鉴别流程

鉴别葡萄球菌属和化脓性链球菌属的鉴别流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定

不同基因型变异链球菌临床分离株的分离和鉴定[摘要] 目的分离鉴定变异链球菌临床分离株。

方法收集高龋患者和无龋健康人口腔中牙菌斑标本进行厌氧培养，通过细菌形态学观察、生物化学鉴定、自动微生物分析系统分析、聚合酶链反应（pcr）扩增变异链球菌基因的特异性片段表面蛋白抗原ⅰ/ⅱ（spap）、葡糖基转移酶b（gtfb）和葡聚糖酶（dexa）以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定。

结果从32例临床受试者口腔中分离获得46株变异链球菌临床分离株，经生物化学，自动微生物分析系统，变异链球菌的特异性基因spap、gtfb 和dexa的pcr扩增均鉴定为变异链球菌，基因分型发现其中5株临床分离株的基因型与其他菌株相同。

结论获得41株不同基因型变异链球菌临床分离株。

[关键词] 变异链球菌；基因型；分离；鉴定[中图分类号] r 780.2 [文献标志码] a [doi]10.7518/hxkq.2013.01.020 变异链球菌（streptococcus mutans）是人类口腔中最主要的致龋菌[1]。

变异链球菌群中各菌种的分离与鉴定是进行龋病研究的基础。

细菌菌种的鉴定方式经历了由传统的表型、血清型方法到以分子生物学为基础的基因型方法的转变。

本文采用形态学、生物化学、自动微生物分析系统、扩增变异链球菌基因的特异性片段区域以及基因分型等方法对获得的变异链球菌临床分离株进行鉴定，为龋病临床和基础研究提供材料。

1 材料和方法1.1 实验菌株变异链球菌国际参考株ingbritt（首都医科大学附属北京口腔医院口腔医学研究所提供），金黄色葡萄球菌临床分离株188号（军事医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学研究室提供）。

1.2 病例选择纳入标准：高龋患者，龋失补牙（decayed-mis-sing-filled-tooth，dmft）指数≥6；无龋健康人，dmft指数=0。

排除标准：饮食结构异常，有嗜甜食（饮）及睡前进餐等不良饮食习惯者；接受放疗和化疗的患者；舍格伦综合征患者；严重全身系统性疾病者；近3个月内服用抗生素者；接受正畸治疗者；口腔卫生状况不良者；牙齿结构异常者；涉及取样的牙体有牙髓病变、根面暴露或根面龋、未控制的牙周病变、冠或固定桥等修复体者。

血液标本中常见化脓性球菌的分离培养与鉴定一

会引起感染，如心内膜炎和血流感染等。
03
分离培养与鉴定
表皮葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面干燥、凸起、灰白色至棕色的
菌落。通过染色镜检和生化试验可对表皮葡萄球菌进行鉴定。
溶血葡萄球菌
生物学特性
溶血葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，直径约1μm，常呈双排列。在固体培养基上生长的菌落直径约1mm，圆形、不透明，边缘整齐，表面光滑、湿润、凸起、无色。
致病性
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。
分离培养与鉴定
金黄色葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面光滑、湿润、凸起、不透明的菌落，菌落周围可形成完全透明的溶血环。通过染色镜检和生化试验可对金黄色葡萄球菌进行鉴定。
接种工具
使用无菌接种环或针头将血液标本接种到培养基上。
接种方法
将血液标本均匀涂布在培养基表面，或用划线法接种，以促进菌落的生长。
防止交叉污染
在接种过程中，要严格遵守无菌操作规程，避免交叉污染。
培养条件
温度
化脓性球菌的生长需要适宜的温度，一般为35-37℃。
湿度
保持培养箱内的湿度，以防止培养基干燥。
致病性
溶血葡萄球菌可引起人类和动物感染，如尿道炎、前列腺炎、伤口感染和心内膜炎等。其致病力可能与产生毒素和其他毒力因子有关。
分离培养与鉴定
溶血葡萄球菌在血平板上形成圆形、表面光滑、湿润、凸起、无色的菌落，菌落周围可形成完全透明的溶血环。通过染色镜检和生化试验可对溶血葡萄球菌进行鉴定。
06
血液标本中化脓性球菌的感染与防治
血液标本中化脓性球菌的分离培养与鉴定是临床微生物学实验室的重要工作之一，对于及时诊断、治疗和预防疾病具有重要意义。

葡萄球菌,链球菌,李斯特菌的检验流程的

肠球菌普遍存在于自然界，一般栖居在各种温血和冷血动物的腔肠，甚至昆虫体内，也是健康人体的上呼吸道，口腔或肠道的常居菌。

本菌可以引起心内膜炎，胆囊炎，脑膜炎，尿路感染及伤口感染等多种疾病。

在人类粪便中的数量仅次于大肠菌群，每克成人的粪便中约含２×108个。

由于此污染指示菌比较大肠杆菌对外界环境温度适应性强、抵抗力强及耐受性强，甚至可以与多种抗生素相抵抗和生长营养要求不高，因此在自然界分布广，存活力持久。

在无粪便污染的环境中较大肠菌更易发现，所以，即使检出肠球菌也没有粪便污染的指示作用。

此外，即使在冷冻，干燥性和经中等强度加热处理的食品中检出肠球菌也不能提示肠道致病菌的存在，因为肠球菌比沙门氏菌，致病性大肠杆菌抵抗性及存活率均高。

食品微生物检验主要针对在１０℃和４５℃下可生长发育的粪肠球菌与屎肠球菌，二者在生化特性、ＤＮＡ杂交结果有明显不同。

在４５℃条件下，用含叠氮钠成分的培养基检测此类指示菌是其主要特征。

目前该菌多作为生活饮用水，管道水和一些水质的指示菌。

卫生学家认为，肠球菌类似于大肠菌群的生态活动，但其对恶劣的外环境和冷冻条件具有较强的抵抗力，作为监测水质卫生，环境卫生质量的污染指标更具有卫生学意义。

另据有关报道，大量的（１０9以上）肠球菌可以引起食物中毒，作为一个有卫生学意义的细菌（该菌的污染在某些食品中也常被发现），有些国家已经制定了针对肠球菌污染限量标准，大多制定在０／克～１０5／克范围内。

从预防食物中毒方面，保障人民身体健康考虑，借鉴国外标准，制定适宜的污染限量指标，应尽快摆到议事日程上来。

二、生物学性状１、形态与染色肠球菌属的细菌为革兰氏阳性球菌，多数菌种成双或呈短链状排列；一般无芽胞，无荚膜，少数菌种有鞭毛，陈旧培养物或在厌氧状态下有时呈革兰氏阴性。

２、培养特性在普通琼脂及麦康凯琼脂上形成小菌落，在血琼脂上形成较链球菌稍大的菌落，光滑、较湿润、易乳化，依据种的不同，α、β或γ溶血均可出现。

球菌鉴定思路

常见革兰阳性球菌鉴别
葡萄球菌属
鉴定及鉴别要点
1、葡萄球菌属与微球菌属的鉴别：
葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小；而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，并且菌体较大。

2、葡萄球菌属与链球菌属的鉴别：葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，触酶试验阳性；链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

表葡萄球菌属与微球菌科其他菌属的鉴别
注：各表中的d 为反应不定。

表常见葡萄球菌的鉴别
链球菌属
触酶试验阴性，分解葡萄糖产酸不产气，除肺炎链球菌外，链球菌不分解菊糖。

鉴定
杆菌肽敏感试验：95%以上的化脓性链球菌对杆菌肽（每纸片含0.04单位）敏感，抑菌环≥10毫米为敏感。

CAMP试验：无乳链球菌CAMP试验为阳性，其它链球菌为阴性。

Optochin敏感试验：几乎所有的肺炎链球菌都对Optochin敏感。

抑菌环≥18毫米为敏感。

β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
表β-溶血性链球菌的主要生物学特性
注：PYR：L-吡咯烷酮-萘酰胺水解。

d：为反应不定。

非β-溶血性链球菌的主要生物学特性见表
肠球菌属：肠球菌属细菌γ或α溶血，触酶试验一般为阴性，有些菌株可产生假阳性。

本属细菌的主要生化特征及鉴别见表表肠球菌属常见菌种的生化特征。