题目：乳酸中嗜热链球菌的分离及鉴定

分类号：

2011届本科生毕业论文

题目：乳酸中嗜热链球菌的分离及鉴定

Title：Lactic acid streptococcus thermophilus cultured in the separation and identification

系别：化学与生命科学学院

专业：07级生物技术

学生姓名：邵志国

学号：2007090223

指导老师：郭志华

职称：讲师

2011年4月17号

摘要

[目的]从乳酸中将嗜热链球菌分离出并进行鉴定。[方法] 利用MRS培养基将乳酸中的菌种培养，经过革兰氏染色、镜检分离出嗜热链球菌，最后选出7株，对它进行菌落形态的观察。最后对其进行各种理化鉴定。[结果]镜检结果该菌为革兰氏阳性，经过生化鉴定该菌为嗜热链球菌。

关键词：乳酸；嗜热链球菌；分离；鉴定。

ABSTRACT

[objective] the streptococcus thermophilus cultured from lactic acid will isolate and evaluations. [method] Use the media will lactic acid bacteria MRS cultivation, and after gram's staining, isolated anti-bma streptococcus thermophilus cultured, finally chosen for it, seven strains colony morphology observation. Finally the various physical and chemical identification. [result] microscopy results this for gram-positive bacteria, after biochemical identified the bacteria for streptococcus thermophilus cultured.

Keywords: lactic acid; Streptococcus thermophilus cultured; Depart; appraisal

目录

绪论 (5)

1 试验材料与方法 (6)

1.1试验材料 (6)

1.2 实验试剂 (6)

1.3实验方法 (6)

1.3.1乳酸菌的筛选 (6)

1.3.2 乳酸菌的分离纯化 (6)

1.4 理化性质的测定 (7)

2 结果与讨论 (8)

2.1菌落形态和细胞形态 (8)

2.2生化试验结果 (11)

3 小结 (12)

参考文献 (13)

致谢 (14)

绪论

乳酸菌是一类能利用可发酵的糖产生大量乳酸的细菌通称。这类细菌广泛分布在土壤、植物根茎、湖泊及动物的体内。酸菌从形态上可以分为球菌和杆菌，并且均为革兰氏染色阳性、在缺少氧气的环境中生长良好的兼性厌氧性或厌氧性细菌。

目前，对乳酸菌的应用研究，着重于发酵乳制品、发酵食品和医药工业等人类生活密切相关的领域。乳酸是以新鲜牛乳经有效杀菌，用不同乳酸菌发酵剂制成的乳制品。由于该产品营养价值较高，并能改善肠道正常微生物区系的稳定，因此它已成为深受消费者青睐的营养保健食品。

在我国市场上，生产销售的各种乳酸制品中，作为发酵剂使用的乳酸菌，通常为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。乳酸的生产是利用原始菌种进行逐级扩大培养方式进行，即活化复壮———再进行扩大培养至乳酸菌的活力都达到可用程度后，投入生产进行发酵。在发酵剂的活化过程中，工序多，技术要求严格，稍有不甚就会污染杂菌，通过对乳酸发酵剂嗜热链球菌的分离和鉴定能及时掌握研究进程和生产控制。

1 实验材料和方法

1.1 材料和仪器

乳酸：采购于超市伊利；化学试剂：均为国产分析纯。超净工作台、酒精灯、接种环、灭菌锅等。

1.2 实验试剂

MRS固体培养基：蛋白胨10 g，肉膏10 g，酵母提取物5 g，柠檬酸二铵2 g，乙酸钠5 g，KHPO4 2 g，MnSO4.4H2O 0.25 g，MgSO4.7H2O 0.58g，葡萄糖20g，吐温80 1ml，琼脂25g，水1000ml。调PH6..2~6.4，121℃灭菌15min。

PY基础培养基：蛋白胨0.5 g，酵母提取物1.0 g，盐溶液4.0 g，蒸馏水100ml。调PH值6.0左右，113℃灭菌20min。

蛋白胨水培养基：蛋白胨5g，Nacl2.5 g，蒸馏水500ml。调ph值7.0左右，121℃灭菌20min。

葡萄糖蛋白胨水培养基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，KHPO4 2g，蒸馏水1000ml，调PH值7.0~7.2，过滤，121℃灭菌30min。

明胶基础培养基：蛋白胨1.0 g，酵母提取物1.0 g，葡萄糖0.1g，明胶12.0g，盐溶液4.0ml，蒸馏水100ml，ph值7.0,113℃~115℃灭菌15~20min。

可溶性淀粉培养基：向PY培养基中加入0.5%可溶性淀粉。

1.3实验方法

1.3.1 乳酸菌的筛选

将乳酸均匀涂布于MRS培养基平板上，37℃静置培养48h。

1.3.2 乳酸菌的分离纯化

挑取培养基上的菌落，划线分离纯化2~3次，最后选择单菌落，经过镜检确

认为纯种，得到7株菌株，4℃斜面保存。将菌落平板和细胞形态在显微镜下用照相机照出。

1.4 理化性质的测定

1.4.1 KOH试验

用灭菌的接种环加1~2环5%的KOH溶液于干净的载玻片上，调菌于溶液中，用环将其混合搅匀，短时间内KOH试剂阳性菌会越搅越稠，抬起接种环会产生拉丝现象，而KOH阴性菌则无拉丝现象。

1.4.2 过氧化氢酶测定

用灭菌的接种环加1~2环10%过氧化氢溶液于干净的载玻片上，挑菌于溶液中，搅拌均匀。观察产气泡情况，有气泡产生，则判断为过氧化氢酶阳性反应。

1.4.3 需氧试验

将分离纯化后的各菌株分别接种于高层MRS液体培养基中，37℃静置培养

2d后，观察生长情况。

1.4.4 淀粉水解试验

将各菌株分别接种到可溶性淀粉培养基中，37℃培养1~2天。然后向培养液中加入3~4滴卢戈氏碘液，如不显色表示淀粉水解阳性反应，显蓝黑色或蓝紫色时，表示淀粉水解或水解不完全，为阴性反应。

1.4.5 明胶液化

试验菌株接种后适温培养，观察结果时需经低温处理。如对照管（未接种）凝固而接种管液化则为阳性反应，同时凝固或者液化为阴性反应。

1.4.6 吲哚试验

向培养2d后的含菌蛋白胨水培养基内加3~4滴乙醚，摇动数次，静置