动物遗传试验果蝇诱变实验报告

综合实验：果蝇的诱变

目的意义：

1.采用物理法、化学法等多种实验手段，使果蝇发生诱发突变，通过其遗传现象找出突变的规律和特点。

2.学会自主设计实验，培养独立思考和团队合作精神,培养严谨的科学态度

实验材料（主要）：

果蝇物理诱变剂（紫外线灯）化学诱变剂（方便面防腐剂）

实验原理：

1.实验证明，紫外线的生物学效应主要是通过直接或间接作用引起DNA 变化而造成的. DNA 结构形式的变化很多，如DNA 链的断裂、DNA 分子内和分子间的交联、DNA 与蛋白质的交联、胞嘧啶的水合以及嘧啶二聚体的形成等，都是引起突变的原因，而主要原因是胸腺嘧啶二聚体的形成。DNA双链之间胸腺嘧啶二聚体的形成会阻碍双链的分开和下一步复制，而同一链上相邻胸腺嘧啶间二聚体的形成则会阻碍碱基的正常配对，破坏腺嘌呤的正常掺入作用，因此复制将在这一点上停止或错误地进行，使新形成的链上有1个改变的碱基顺序，在随后的复制过程中便产生1个在两条链上碱基顺序都改变了的分子，于是引起了突变。

2.在制作培养基时各培养基添加不同剂量的防腐剂，可以观察不同剂量防腐剂对果蝇生活状况的影响甚至会观察到果蝇的变异。

实验操作：

（一）果蝇的饲养【3月26日】

Ⅰ.制作培养基

果蝇以酵母菌为食常采用发酵的培养基繁殖酵母菌饲养果蝇

1.培养基配方：

水100ml 琼脂1.2g 葡萄糖10g 玉米粉12g 酵母膏1.4g

2.培养瓶的灭菌：

将饲养瓶放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。（当高压锅达到100℃时进行第一次放气；温度达到121℃时，保持15min，拔掉电源，自然冷却后取出饲养瓶）

3.配制培养基：

量取75ml水倒入大烧杯中进行加热，另取25ml水倒入下烧杯中，加入玉米粉12g，拌匀。将琼脂倒入大烧杯中，充分煮溶后，加入葡萄糖10g和搅拌均匀的玉米粉煮沸。稍冷后加入酵母膏，再滴加2滴丙酸。

4.培养基的分装：

充分调匀后将其分入到两个已经灭菌的饲养瓶中，勿使饲料粘附瓶壁。待冷却后，用酒精棉球将瓶壁上的水汽擦净，赛上棉塞。

Ⅱ.原种的培养

将野生型果蝇与**果蝇分别接种到两个培养基上，各品种分别培育。将轻度麻醉的果蝇用毛笔刷刷如倾斜的培养瓶瓶壁上，待其苏醒后再将瓶立起，以免国蝇粘附培养基上不能动弹而死亡。置于恒温培养箱中培养。

（二）紫外线诱变【4月9号】

Ⅰ.紫外线操作原理:

1.通过查阅资料，紫外线有效波长诱变果蝇半致死时间约为15min。于是我们设置诱变的梯度分别为5min，10min，15min，20min,25min。

2.诱变所用的雌果蝇必须为处女蝇。诱变的前几天放出亲本瓶中的所有果蝇，每隔10-12小时收集一次羽化的成蝇，并将雌雄蝇分开培养

Ⅱ.诱变操作【4月9号】

1.处理前需将紫外线灯稳定三十分钟。

2.准备6个培养瓶分别编号1、2、3、4、5、6备用

3.各取雌雄果蝇10只分别置于两空瓶中，置于紫外灯下，距灯管28.5cm处照射5min，然后从各瓶中挑选各5只，接种到2号瓶中；分别取果蝇以相同的处理方法处理10、15、20、25min 以同样的方法接种到3、4、5、6,号瓶中。1号瓶接种未作任何处理雌雄果蝇各5只作对照组。（各组雌果蝇必须为处女蝇）

4.确定每组均完全存活后将以上各瓶置于恒温培养箱中培养。

5.培养10天后观察果蝇并记录每瓶果蝇中果蝇数目及是否有变异个体，做好记录；然后将成虫全部倒掉继续培养2天后在观察果蝇数目和诱变个体，记录。以相同的方式每隔两天

观察记录一次连续观察四次。

Ⅲ.根据第一次观察结果缩小梯度重复实验。【4月20号】我们的结果是15、25min照射各有一只残翅突变个体，根据结果我们确定重复试验的梯度为15、17、19、21、23、25min，其他操作同Ⅱ.诱变操作

（三）化学诱变（防腐剂）【4月9号】

Ⅰ.诱变原理：

在制作培养基时各培养基添加不同剂量的防腐剂，观察不同剂量防腐剂对果蝇的生长状况的影响及有可能会引起性状变异。

Ⅱ.操作步骤：

1.随机买方便面一包，放入常温水中浸泡10分钟，去上层浊液（主要成分为防腐剂）备用

2.取空培养瓶6个编号1-6，其中1号作为空白对照

3.配制培养基（……）在溶解混合各营养物质时在2-6号培养基中依次加入该浊液10滴，20滴，30滴，40滴，50滴。其他操作不变

4.从培养箱中取出野生型果蝇培养瓶（雌蝇为处女蝇），取空瓶一个，同时打开盖子，迅速接口，将果蝇赶到空瓶中，盖上培养瓶，滴4滴乙醚到棉塞上，塞在空瓶上，一手拿底部，一手拿瓶口，上下轻轻摇晃，直到所有果蝇躺在瓶底，无活动迹象

5.随机选出5组果蝇，每组雌雄各5只接种到1-6号培养基中

6.确定每组均完全存活后放入培养箱中培养，观察后代变异情况并记录【具体操作见（二）诱变操作4】

注意事项

1.制备培养基，待冷却后，用酒精棉球将瓶壁上的水汽擦净，赛上棉塞。

2.麻醉过硬的时候使用的麻醉剂要适量，并且处死麻醉多余的果蝇防止影响果蝇纯度。

3.将轻度麻醉的果蝇用毛笔刷刷如倾斜的培养瓶瓶壁上，待其苏醒后再将瓶立起，以免国蝇粘附培养基上不能动弹而死亡。

4.诱变所用的雌果蝇必须为处女蝇。从接种到观察后放生时间要充足，否则会导致子代数量过少，影响实验结果甚至导致实验失败。

5.紫外线照射时注意自身安全，防止照伤眼睛。同时在每次处理实验组时，照射方式及距离应保持一致，尽量控制单一变量。

实验结果

Ⅰ.紫外线诱变

1.对不同照射时间的果蝇培养瓶进行培养、观察统计，结果见表

照射时间成虫数观察时间

变异个体数及

其性状表现4月20日4月22日4月24日4月26日

0min 51 37 41 30 0

5min 0 0 0 0 0

10min 45 31 28 32 0

15min 37 34 28 31 1,小翅不明显20min 35 29 34 32 0

25min 29 34 29 36 1，小翅明显2.根据结果一进行了第二次试验，缩小了梯度，结果如下

照射时间成虫数

观察时间变异个体数及

其性状表现5月1日5月3日5月5日

15min 46 24 26 0

17min 35 35 28 0

19min 41 29 24 0

21min 34 22 24 1小翅

23min 30 21 25 0

25min 42 25 23 1，残翅

3.诱变结论：

经紫外线照射的成蝇，当代表现为行动不稳、动作的准确性明显降低、明显失去方向