分析灵敏度(检测限)-冯仁丰

分析灵敏度（检测限）
但是较均值小的那些单次响应量， 若和检测低限（空白响应量上限） 交叉，说明检测方法还不能单凭一 次检测区分出这是空白还是有分析 物。
分析灵敏度（检测限）
只有样品检测响应量的95%或 99.7%单次检测量最低值也较 检测低限(LLD)大，这样就可 保证样品在任何情况下，单次 检测响应量一定不是空白的 响应量；样品的分析物浓度 可以定量地报告出来。
分析灵敏度（检测限）
统计说明，如果服从正态分布规律： 各个单次检测的空白响应量有 95% 的 可能性为： X 空白 －2S空白≤X空白≤ X 空白 +2S空白 即： ︱X空白－ X 空白 |≤2S空白
分析灵敏度（检测限）
检测响应量较空白响应量均值 大 2S空白 ，仍然认为是空白响应 量的可能性只有 5% ；有 95% 的可 能性属于样品内有分析物形成的 检测响应量，它较空白均值差 2S空白以上。
分析灵敏度（检测限）
在多个近于检测限的样品中，符合 这样条件的最低分析物浓度（或其 他量值）就是检测系统方法的生物 检测低限。
分析灵敏度（检测限）
生物检测低限定义为：以检测低 限加2或3倍检测限样品标准差的响 应量所对应的分析物量，为检测系 统或方法可定量报告分析物的最低 浓度或其他量值的限值。
分析灵敏度（检测限）
生物检测低限（BLD）的具体 度量方式为： 95%的可能性： BLD = LLD +2S检测限样品 99.7%的可能性： BLD = LLD +3S检测限样品
分析灵敏度（检测限）
本词语较完善地表示实际样品的 定量检测限度。在证实厂商的 BLD 说明时，应使检测限样品的浓度 和厂商的说明相同。
分析灵敏度（检测限）
0.25μg/L不是本法的生物检测限。 0 . 5 μg/L 的 9 9 . 7 % 的 最 低 吸 光 度 为 0.0251A（已减去空白），也在空白涉 及的范围内。1.0μg/L的99.7%的最低 吸光度为0.0518A（已减去空白），在 0.0411A 之外，说明 1.0 μg/L的样品 的吸光度有99.7%的可能性，一定大于 空白。 1.0 ，空白响应量也有波动 . 若 重复多次作空白检测 , ，以空白 （响应量）均值和标准差表示这 些空白响应量的平均水平和所有 空白响应量对于空白均值的离散 程度指标。
分析灵敏度（检测限）
在确定方法性能或绘制标准曲 线时，常常以空白均值表示空白 响应量。实际工作时，每次只做 一个空白，各有50%的可能性，这 个空白响应量大于或小于空白均 值。
分析灵敏度（检测限）
1. 空白液：一份空白液用作空 白检测，其他用于制备检测限样品。 理想的空白液应具有和检验的病人 样品相同的基体。
分析灵敏度（检测限）
理想的空白液应具有和检验的病 人样品相同的基体。常使用检测 系统的系列校准品中的“零标准” 作为空白。对某些项目，可使用 术后已无某疾病的病人样品（如： 前列腺瘤术后病人的 PSA 血清） 为空白样品。
分析灵敏度（检测限）
3.实验需要的时间：如果主要从 空白液的重复性了解检测低限， 常常就做批内或短期实验。如果 主要从“检测限”样品的重复性 了解定量的检测限，推荐作较长 时间的实验，代表天间测定性能。 实际就做10次检测（10天）。
分析灵敏度（检测限）
计算示例 : 某酶标法的甲状腺球 蛋白试剂盒的实验结果如下：
0.0304 17.2
0.0279 10.7 0.0315 8.2
分析灵敏度（检测限）
1.检测低限 空白“0”组的均值为 0.098，标准差为0.0137。这里采用 99.7%的可能性来计算检测低限。LLD = A0 + 3S0， 现 A0 = 0.098，S0 = 0.0137， ∴ LLD = A0 + 3S0 = 0.098 + 3 × 0.0137 = 0.139
分析灵敏度（检测限）
上海市临床检验中心 冯仁丰
分析灵敏度（检测限） 1. 可检测的最低分析物浓 度为检测系统的分析灵敏度 或称检测限。
分析灵敏度（检测限） 毒品检验;肿瘤标志物; 特定蛋白;核酸;激素;某些常 用项目等。需要有可检出的 最低浓度或某个量.
分析灵敏度（检测限）
2．检测限术语混乱。厂商使用各种词语， 如： 灵敏度 (Sensitivity)， 分析灵敏度(Analytical sensitivity)， 最小检测限(Minimum detection limit)， 功能灵敏度(Functional sensitivity)， 检测限度(Limit of detection)， 定量限度(Limit of quantitation)等。
分析灵敏度（检测限）
2.检测限样品：在证实某方法的 灵敏度性能时，对空白液加入分 析物配制成检测样品。加入的分 析物量应是厂商说明的检测浓度。 在建立检测限度时，应制备几份 检测限样品，浓度在预期检测限 度的高低一些的范围内。
分析灵敏度（检测限）
重复检测数：没有具体规定，但 常推荐做 20 次。这对检测限度实验 也是合理的。 厂商常推荐 10 次，是减少开支。 实验室常采纳作10次。
分析灵敏度实验数据(1)
甲球 (g/L) 0 0.25 0.5 吸光度 (A) 0.087 0.128 0.145 0.223 0.165 0.239
A
0.098 0.174 0.198
A A0
0 0.076 0.100
SA
0.0137
CV(%)
0.0253 33.2 0.0250 25.0
甲球生物检测限计算示意图
B
(0.098) 0 0.0004
+3SB
0.0411 0.076
A0.25
0.100
+3S0.25
0.152
-3S0.25
0.025
+3S0.5
0.175
-3S0.5
0.052
A0.5
0.123 0.194
无分析物
99.7%
有分析物
分析灵敏度（检测限）
所以若检测样品的反应响应量 较空白均值大，但相差2或 3S 空白以下的，只能说这些 响应量是空白样品单次检测的 响应量，样品内没有分析物， 或者表示：分析物量为零。
分析灵敏度（检测限）
检测低限定义为样品单次检 测可以达到超过2或 3S 空白 的检测响应量对应的分析物 量。检测系统或方法对小于 或等于检测低限的分析物量 只能报告“无分析物检出”。
分析灵敏度（检测限）
通常估计95%或99.7%的两种可能性： 95%可能性： LLD= X空白+2S空白 99.7%可能性： LLD= X空白+3S空白
分析灵敏度（检测限）
注意 : 直接读出浓度单位的检 测系统对低于零的检测将报告 零，其分布不是正态的，因此 计算的均值和标准差不能如实 表达检测低限的真实情况。
分析灵敏度（检测限）
以下介绍的分析灵敏度分为 具定性含义的检测低限； 具定量含义的生物检测限； 及功能灵敏度。
L
分析灵敏度（检测限）
二．检测低限 (LLD,Lower Limit of Detection) 每次检测，总是做一个空白样 品。检测方法常以空白响应量校 准至零点，再检测各个检测样品 的反应响应量。
分析灵敏度（检测限）
1.使用甲状腺切除后恢复健康的 病人血清为无甲状腺球蛋白的空 白血清。将纯化的甲状腺球蛋白 加入该血清，并用空白血清作系 列稀释，组成0、0.25、0.50、 1.0、2.0、4.0、8.0 μg/L的甲 状腺球蛋白样品。
分析灵敏度（检测限）
2.对空白血清作12次批内重复测 定；对其它系列样品天间重复测 定，做了12天。 记录所有结果，列表如下：
分析灵敏度（检测限）
四．实验须考虑的因素 一般制备两种不同类型的样品。 一个是“空白”样品，即不含有分 析物，分析物浓度为零。 第二个是”检测限”样品，即含有 低浓度的分析物。
分析灵敏度（检测限）
在有些场合下，需要备几份”检 测限”样品。空白和检测限样品 由检验方法作重复检测，计算各 自的均值和标准差。不同的检测 限由空白和检测限样品数据计算 出来。
分析灵敏度（检测限）
响应量较空白均值相差 3S 空白 以上的，还认为是空白响应 量的可能性仅0.3 %；而有 99.7%的可能性是样品内有 分析物形成的响应量。
X B - 2s B
XB
X B 2sB
95%
有分析物
样品检测响应信号
无分析物
X B 3sB
XB
X B 3sB
检测 低限
样品检测响应信号
分析灵敏度（检测限）
三 . 功 能 灵 敏 度 （ Functional Sensitivity,FS） 功 能 灵 敏 度 定 义为：以天间重复 CV 为 20% 时对应 检测限样品具有的平均浓度，确 定检测系统或方法可定量报告分 析物的最低浓度或其他量值的限 值。
分析灵敏度（检测限）
为了估计FS，须用多个检测限浓度 来确定在低浓度处的精密度表现， 从中选择具有或近似20% CV的某检 测限浓度，确定为方法的功能灵敏 度。在证实厂商的 FS的说明时， 使用的检测限样品浓度应和厂商的 说明相同。
分析灵敏度（检测限）
检测响应须以初始值表示，如： 吸光度、荧光、等，此时 S 空白 是 有效的。 由初始值计算均值和标准差，然 后再转换成浓度单位。
分析灵敏度（检测限）
三 ． 检 测 生 物 限 （ BLD,Biologic Limit of Detection,） 大于检测低限的响应信号，方法还 不能正确报告定量结果。因为在这 样低的浓度或其他量值的范围内， 单次检测样品的反应响应量重复性 较差。那么在多少检测响应量时才 能较好地报告定量结果呢？
分析灵敏度实验数据(2)
甲球 (g/L) 1.0 吸光度 (A) 0.189 0.259 0.249 0.320 0.321 0.423 0.432 0.504