医用化学实验

红色石蕊试纸放置管口，观察变化
待管内物质凝固后冷却试管，加水2ml
玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中
再加入10%NaOH 、1%CuSO4各1滴，观察变化
注意事项
1、注意区分以下试剂： 液体苯酚——5%苯酚溶液 5%Br2的CCl4溶液——溴水 2 、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热 3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒 轻轻搅动 4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位
实验原理
1、同离子效应
例：
HAc H+ + Ac-
NaAc
Na+ + Ac-
同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高
• 酸碱指示剂：
红 橙 黄 4.4 淡红 红
甲基橙
3.1
酚酞
无色
8
溴麝香草酚蓝 黄 绿
10
蓝
6
7.6
2、缓冲溶液
韩-哈方程式
pH = pKa + lg
[盐] [酸]
2、鉴定原理
基碱（B）
嘌呤（A G） 嘧啶
核苷→ 核糖（C U） 核酸→核苷酸→ （B-R） 戊糖（R） 磷酸（P） 核酸的基本组成单位
脱氧核糖（C T）
• a:磷酸+钼酸铵 • b:嘌呤+AgNO3 • c:核糖
H+
磷钼酸 絮状嘌呤银
3，5-二羟基甲苯
氨基萘酚磺酸
钼蓝
糠醛
H+
绿色化合物
• d: 脱氧核糖
二、蛋白质的沉淀反应
• 实验原理：
• 1、盐析：破坏水化膜，中和电荷 • 常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl
2、重金属盐类沉淀： 条件：PH > PI，蛋白质带 负电荷 重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+
3、生物碱试剂沉淀： 条件： PH < PI，蛋白质带 正电荷 生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸
• 磷酸的鉴定
管号 测定管 对照管 水解液 10d — 5%H2SO4 — 10d 钼酸铵 试剂 5d 5d 氨基萘酚磺 酸 20d 20d
放置3min，沸水浴3~5min，观察颜色差异
• 核糖的鉴定
管号 水解液 5%H2SO4 3，5-二 羟基甲 苯 6d 6d
测定管 对照管
4d —
— 4d
沸水浴5~10min，观察颜色差异
一、蛋白质的呈色反应
• 实验原理： • 双缩脲反应：含有—CO—NH— 、 —CS—NH— 、—CH2—NH—等基团的化合物在浓碱液中与硫酸铜 生成紫红色复合物。 • 茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热， 生成紫色化合物。 • Folin法： 酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝
操作步骤 （ 1）
0.1mol/L KH2PO4 0.1mol/L Na2HPO4
精密pH试纸检测 pH计检测
韩-哈方程式计算
测完pH值 后2管保留
（2） 另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验
2号缓冲液
2 ml
1 ml
蒸馏水
0 ml
1 ml
溴麝香草酚 蓝各1滴
（3）另取3支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验
O O || || CH3-C-CH2-C-O-C2H5 室温时 酮型（93%） OH O | || CH3-C = CH-C-O-C2H5 烯醇型（7%）
凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以
动态平衡存在的现象——互变异构现象
5、尿素的化学性质
O O O CuSO4 碱性 紫红色 H2N - C - NH2 + H2N - C - NH2 O H2N - C - NH - C - NH2
5
CH 2OH 2,5成环
CH 2OH 2,6成环
4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象
O O || || CH3-C-CH2- C-O-C2H5 • 与苯肼反应生成苯腙，颜色？ • 使红棕色溴的四氯化碳溶液褪色——具有双键结构 • 使三氯化铁溶液呈紫红色反应——具有烯醇式结构
说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的 混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。
6 * 5 * 4 * 3
CH2OH 2 OH H -C OH C
3
CHO
H
OH
C CH2OH OH C- C H
OH HO -C H C-C H- H HO - C - H O HO -HO 4 C-C OH- O H - CH --C OH- OH H - H
H - CH -C - OH H - C - OH H-C 6 CH2 CH2OH
2、酚性羟基的反应 （ 1）
+ 液体苯酚2滴 水5滴，摇匀
+ 10%NaOH 2 滴 摇匀，观察
（ 2）
+ 0.5%苯酚溶液10滴
+ 0.5%水杨酸溶液10滴
各加入1%FeCl3 1滴，观察结果
+ 苯甲醇10滴
3、醛基反应（大试管6支）
试剂（滴） 40%乙醛液 10%NaOH 丙酮液 1 5 5 — 2 — — 4 3 — — — 4 — — — 5 — — — 6 — — —
实验一

医化实验基本操作
玻璃仪器的洗涤 吸量管的使用
注意：右手食指按住吸量管口

溶液的混匀
指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混 合器混匀等
实验二 电离平衡与缓冲溶液
实验目的
1、掌握同离子效应的原理 2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液 3、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响 4、学习吸量管及pH计的使用
操作见讲义
三
蛋白质等电点的测定
• 在某一PH下，蛋白质带正电荷和负电荷数相等， 容易彼此结合形成沉淀，此PH值称为等电点。 • 操作见讲义
注意事项
• 1、酪氨酸和酪蛋白，酚溶液和酚试剂勿 混淆 • 2、等电点测定时用大试管 • 3、先做第二个盐析实验
二苯铵
ω-羟基-γ-酮基戊醛
•
蓝色化合物
操作步骤
• 1、提取步骤 • 制备肝组织匀浆： 脱臼处死或断头处死 剖腹取全部肝组织 生理盐水冲洗血污，吸干净 三氯醋酸2ml 分散匀浆机匀浆
• 分离提取
于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀 静置3min， 3000rpm 3min, 弃上清 沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌 取出冷却，3000rpm 3min 取上清，逐滴95%酒精2管，混匀 静置5min，3000rpm 5min 弃上清，得白色核酸钠
• 核酸的水解：
• • •
短试管内加入5%H2SO4 3.5ml 玻棒搅匀 沸水浴中10min
• 成分的鉴定
嘌呤的鉴定
管号 测定管 对照管 水解液 20d — 5%H2SO4 — 20d 浓氨水 2~3d 2~3d 5%AgNO3 10d 10d
沸水浴3~5min，观察结果，静置15min,观察结果
2号缓冲液
2 ml
2 ml
2 ml
溴麝香草酚蓝 各2滴，混匀
NaOH 3滴， 摇匀，观察结果 继续滴加，记录变色时 所加NaOH滴数
HCl 3滴， 摇匀，观察结果 继续滴加，记录变色时所 加HCl滴数
注意事项：
2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去 吸量管的使用 pH计的使用
吸量管的使用
1、看清刻度，选择适当容量的吸量管 2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，稳住液面 3、拿吸量管的时候，刻度面向自己 4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以 下凹面为准 5、吸取另外一种试剂时，要润洗
• 脱氧核糖的鉴定
管号 测定管 对照管 水解液 20d — 5%H2SO4 — 20d 二苯胺 试剂 30d 30d
沸水浴5~10min，观察颜色差异
注意事项
• 1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标 • 号朝试管上方 • 2、玻璃棒搅拌要轻柔 • 3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染
移液枪的使用
+ 1：10鸡蛋白2滴 1%CuSO4 1滴
+ 10%NaOH 5 滴
混匀，观察颜色
（ 2）
+ 1：10鸡蛋白4滴 + 蒸馏水10滴
+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色
+ 1：10鸡蛋白2滴
+ 0.25%白明胶
0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸
蒸馏水6滴+ 10%NaOH3 滴， 酚试剂1滴，混匀，观察颜色
实验三
实验目的
功能基反应
1、掌握几功能基的主要化学性质
2、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象
实验原理
1、双键与卤素的加成反应
C=C
+
Br2
-CH-CHBr Br
红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中
是否存在不饱和键
2、酚性羟基的反应
（1）苯酚的弱酸性
OH + 混浊 NaOH 澄清 ONa
实验操作
1、同离子效应
（ 1） 各1支 + NH3 . H2O 2ml+ 1滴酚酞
1ml=15滴 1滴NH4Cl
摇匀
1滴H2O
观察结果
（ 2）
各1支 + 醋酸 2ml+ 1滴甲基橙
1滴NaAc 1滴H2O
摇匀
观察结果
2、缓冲溶液
（ 1）
大试管3支
用吸量 管进行 操作
8 ml 2 ml 5 ml 5 ml 2 ml 8 ml
1%葡萄糖
1%果糖 1%蔗糖
—
— —
—
— —
4
— —
—
4 —
—
— 4
—
— 4
2mol/L盐酸
班氏试剂
—
10
—
10
—
10
—
10
—
10
10
—
1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸 水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴 混匀，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果
医用化学 实验
生物化学教研室 张丽娜
实验课注意事项：
不迟到，不早退，做好课前预习工作 穿好白大褂 使用煤气时注意安全 试剂用后及时归位 保持严肃认真的实验态度 及时记录实验结果，按时完成实验报告
实验报告格式：
1、实验目的 2、实验原理 3、实验操作 4、实验结果（真实、客观） 5、讨论（实验报告的核心） 6、意见与建议（可选择）
150 ~ 160
O
C
O
O
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H2N - C - NH - C - NH2 + NH3 缩二脲 （缩二脲反应）
缩二脲反应：
缩二脲 + CuSO4（少量）
OH-
紫红色物质
实验操作
1、烯基的反应
+ 硬脂酸10滴
+ 油酸10滴
不是溴水
逐滴加入5%Br2的CCl4溶 液，不断振荡试管，记录 结果
+ 植物油10滴
（2）酚性羟基与FeCl3的显色反应
苯酚 FeCl3 紫色络合物
可用于鉴别酚和醇
3、醛基的反应
O || R-C-H O || R-C-OH
+ 2Cu（OH）2
+ Cu2O ↓ + 2H2O
（班氏试剂）
砖红色沉淀
酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮
环 式
CH2OH
2 1
1
C = O HO - C - H H - C - OH H - C - OH CH2OH
n盐/V溶液 n酸/V溶液
也可表示为：
pH = pKa + lg
n盐 （盐的摩尔数） n酸 （酸的摩尔数）
当酸与盐混合前的浓度相等时：
pH = pKa + lg
V盐 V酸
缓冲溶液加水稀释时，盐浓度与酸浓度作相同 比例稀释，因此，缓冲溶液的pH几乎不因稀释 而改变。
缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度 缓冲溶液的pH也会发生较大改变
4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象
（ 1）
+ 10%乙酰乙酸 乙酯2滴
+ 2，4-二硝基苯肼10 滴，振荡，观察结 果，写出反应式
（ 2）
+ 10%乙酰乙酸 乙酯10滴
+ 1%FeCl31滴，观察结果
再加溴水1滴，观察变化， 并加以解释
5、尿素的化学性质
+ 尿素1匙
小火加热，待尿素熔化
继续加热
实验三 动物组织中核酸的提取与 鉴定
• • • • 实验目的： 1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定 2、掌握离心机的使用 3、熟悉加样器的使用
• 实验原理 • 1、提取原理：
• a: DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。 • b: 核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。 • c: 10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸 • 的钠盐 • d: 乙醇把核酸钠沉淀下来
1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪 （最大刻度和读数的关系） 2、先调好刻度 3、打至第一档吸入试剂 4、打出试剂时要按至第二档 5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出 现
• 离心机的使用
台秤平衡 对称插入 定时定速
实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应及等 电点的测定
• 实验目的： • 1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检 查蛋白质的方法 • 2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性 环境的影响 • 3、了解蛋白质等电点测定