叶绿体色素的提取

合集下载

绿叶中色素的提取和分离实验原理

绿叶中色素的提取和分离实验原理
绿叶中色素的提取和分离实验：
1、提取：绿叶中的色素——研磨法。

称取、剪碎5g叶片，放入研钵中。

加入少许二氧化硅、碳酸钙、5mL丙酮。

快速、充分研磨。

根据叶绿体中的色素在有机溶剂（乙醇、丙酮等）中溶解的特性，用丙酮可将色素从叶片中提取出来（若用95％的酒精作溶剂，则应向色素提取液中加入无水碳酸钠，除去色素提取液中的水分。

若用丙酮作溶剂，则用量不宜过多，以2～5mL为宜，过多会影响色素浓度，过少不易过滤），过滤后收集滤液，将滤液收集到小试管中，及时用棉塞将试管塞紧备用。

2、分离：制备滤纸条，将干燥过的定性滤纸剪成6cm×lcm的条，一端剪去两角，距该端lcm处用铅笔画一条极细的横线。

用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线均匀画一条细而直的滤液线，待干燥后再重复画2～3次（次数越多色素越多）。

实验原理：
1、色素提取原理：色素溶于有机溶剂而不溶于水，可用95%的乙醇、丙酮等有机溶剂来溶解色素，从而提取绿叶中的色素。

色素提取也可用水浴加热法，即把叶片剪碎后放在95%的乙醇中，进行隔水加热来提取。

一般地说，叶片加热到变成黄白色，叶片中的色素基本上被提取出来了。

2、色素分离原理：各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随层析液在滤纸上扩散速度比较快，反之则比较慢，从而使各种色素相互分离开来。

浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理

浅谈叶绿体色素的提取,分离实验的基本原理叶绿体色素是植物共同的分子，是植物叶片绿色色素的主要成分，在植物的基因组中占有非常重要的地位。

叶绿体色素的提取和分离实验是植物生理学研究中常见实验，它们的研究对于深入解析植物叶片绿色色素的组成、形成机制以及植物的适应和演化有重要的意义。

本文简要介绍叶绿体色素提取、分离实验的基本原理以及实验步骤。

一、叶绿体色素的提取1.提取用植物组织植物细胞是由多种组织结构的嵌套形式组成的，而叶绿体这种特殊的细胞构造，它们除了在细胞质和细胞核里贮存着叶绿素外，还处于细胞子室内、细胞膜之间，因此叶绿体色素的提取，必须从整个植物细胞体内提取。

2.提取步骤a)取植物组织消化，加入蛋白酶消化液，消化温度保持在37℃，消化完成后，用离心机将悬浮液离心分离；b)将悬浮液和脉粗滤；c)用离心机将滤液离心，并将残留物清除；d)用硫酸钠缓冲液将离心液中的叶绿体色素进行沉淀分离；e)最后，用离心机将沉淀液离心，取得叶绿体色素提取液。

二、叶绿体色素分离实验叶绿体色素分离实验是以“四维定律”为基础的，四维定律指的是溶解物的溶解度与温度、酸度、配体浓度等四个维度的变化而发生变化。

以下是叶绿体色素分离实验的实验步骤：1.温度调节将叶绿体色素提取液加入50mL的萃取液中，将温度调节到10°C，保持温度稳定后，用离心机将其离心十分钟；2.酸度调整将离心液加入室温的硫酸铵溶液中，搅拌均匀，然后再次利用离心机离心，将叶绿体色素沉淀出来；3.配体浓度调整将离心液和硫酸铵溶液加入50mL的氯化钠溶液中搅拌均匀，然后将其再次离心，至此叶绿体色素被沉淀出来，即可获得叶绿体色素的分离液；最后，用离心机离心冷却至温度达到最低，来增强叶绿体色素的沉淀，以达到纯度高的目的。

综上所述，叶绿体色素的提取、分离实验步骤比较复杂，从植物组织的提取、细胞色素的悬浮液提取、细胞色素的滤液提取、通过改变温度、酸度、配体浓度的方法对叶绿体色素的分离实验，至此，叶绿体色素的提取和分离实验基本原理就介绍完了。

叶绿体色素提取与分离实验

类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素叶绿素b
（黄绿色）含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素（黄色）胡萝卜素（橙黄色）
含量约占卜素主要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度最快的色素是（） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析，会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是（） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答：分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理二氧化硅（少量）碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml）蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液，进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]

叶绿体中色素的提取和分离

温故
生物体内的主要能源物质是: 糖类生物体内主要的储能物质是: 脂肪
生物体进行生命活动的直接能源物质: ATP 最终能量来源: 太阳的光能
能量之源——光与光合作用
太阳光中有能量，我们制造出太阳能电池板可以捕获其中的能量并转化为电能。绿色植物也能捕获并转化太阳光中的能量，那么，绿叶中通过什么物质或结构捕获并转化光能呢？
小鼠
存活。
结论：植物能够净化因燃烧或呼吸而变混浊的空气。
结论1：普利斯特利的实验只有在阳光照射下
才能成功
结论2：植物体只有绿叶才能更新空气。
结论：淀粉是光合作用的产物之一。
极细光束
黑暗中
光照下
结论：叶绿体是植物进行光合作用的场所光合作用需要在光下进行光合作用中释放氧气
O2
光合作用的过程
学习目标： 1．了解光合作用的探索历程 2. 掌握光合作用的过程
1
光合作用的概念:
光合作用是指绿色植物通过叶绿体,利用光能,把二氧化碳和水转化成储存能量的有机物,并且释放氧气的过程。 2 光合作用反应式: CO2 + H2
*O 光能叶绿体
有机物 + *O2
在光合作用的探索历程中，有几个比较重要的突破性实验？分别有什么发现？在探索过程中最杰出的科学家是谁？
光合作用的过程
阅读课本P:103—106,填写下表
项目
光反应
叶绿体的类囊体薄膜上光、色素、酶，水 H2O
酶
暗反应
叶绿体的基质上酶，水，ATP, [H]，C5
场所条件
物质变化
[H]+O2 ↑
酶
ADP+Pi+能量

叶绿体中色素的提取与分离

他们所得的实验结果依次是（ B ）
A. ①②③④ C. ④②③①
B. ②④①③ D. ③②①④
捕获光能
色素
色素的种类与颜色：
色素种类
含量
叶绿约占素 3/4
名称叶绿素a 叶绿素b
颜色
吸收光
蓝绿色主要吸收红黄绿色光和蓝紫光
类胡萝卜素
约占黄色
主要吸收蓝紫光
画滤液细线毛细吸管沿铅笔线画一条直的滤液细线 .
色素分离
干燥后，重复一两次将滤纸条轻轻插入层析液中
滤纸条上呈现四条颜色、宽度不同的色素带
用培养皿盖住烧杯
胡萝卜素：橙黄色叶黄素：黄色叶绿素a：蓝绿色叶绿素b：黄绿色
1.在提取绿叶中的色素时，研磨绿叶碎片需要
加入碳酸钙，目的是（ B ）
捕获光能
色素
色素的吸收光谱
延伸拓展
色素的分布：叶绿体的类囊体薄膜上
色素的作用：吸收、传递、转化光能
不同颜色的大棚对光和效率的影响： ① 无色透明大棚光和效率最高； ② 绿色塑料大棚光和效率最低。 ③ 在农业生产中，有些温室中悬挂红色或蓝色光的灯，可有效提高蔬菜产量。
甲＞乙＞丙＞丁
叶绿体中色素
实验目的：
提取和分离
1) 进行绿叶中色素的提取和分离； 2) 探究绿叶中含有几种色素。
材料用具：
新鲜的绿叶、干燥的定性滤纸、无水乙醇、层析液、二氧化硅、碳酸钙、毛细吸管、研钵、剪刀、量筒等。
一、提取绿叶中的色素
1.取材： 5g绿叶+剪碎+研钵 2.研磨：二氧化硅+碳酸钙+10ml无水乙醇 3.过滤：玻璃漏斗+单层尼龙布

提取叶绿体色素的方法

提取叶绿体色素的方法解析：提取叶绿体色素的方法一、准备工具大试管、台秤、研钵、剪刀、量筒、漏斗、分液漏斗、软术寒、烧杯、滤纸、小试管、分兆计、酒精灯、吸耳球、移液管、电吹风、毛细管95%乙醇、CaCO3、石英砂、汽油、苯、KOH、甲醇、乙酸铜、盐酸二、步骤1. 称取新鲜去大叶脉的菠菜叶片，或芹菜、油菜等其他植物的新鲜绿叶5 g，剪碎放人研钵中，加入乙醇5 ml、少许CaCO3，中和细胞中的酸防止Mg，从叶绿素中心释放，和石英砂,研磨成勻浆,再加入适量的乙醇20~25 ml，然后用漏斗过滤，即得叶绿体色素液。

2. 若用千拒肥排粉时，则称取1g 干粉放人小烧杯中，加95%乙醇20~30 ml 提取,并随时搅动。

待乙醇呈深绿英露色时,滤出浸提液备用。

取准备好的滤纸条(2cmX20cm)，将其一端剪去两侧，中间留一个长约1.5cm,宽约0.5cm的窄条。

3. 用毛细管吸取叶绿体色素提取液点于滤纸的下端窄条的上方中央，注意一次所点溶液不可过多，如色素过淡,用电吹风吹千后再重复1~2次。

4. 在大试管中加入汽油5~10ml，或其他层析液，如石油醚:丙酮苯体积比为20 :2 :1的混合溶液，然后将滤纸条上端固定在软术塞上，插人试管内，使窄条进入溶液中，色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁，盖紧软木塞,直立于阴暗处，或试管外套一黑纸套。

5. 经0.5~1h后，观察分离后色素带的分布。

最上端橙黄色的是胡萝卜素,其次为叶黄素，再下面蓝绿色为Chl a,最后的黄绿色为Chl b。

6. 取叶绿体色素提取液少许于1支试管中，用反射光和透射光观察提取液的颜色有何不同，反射光下观察到的提取液颜色即为叶绿素产生的荧光颜色。

取叶绿体色素提取液少许，分装于两支试管，光对叶绿素的破坏作用中，一支放在黑暗处(或用黑纸套包裹)，另一支放在强光下(阳光下)，经过2~3h后，观察两支试管中溶液的颜狠敏色有何不同。

叶绿体色素的提取与分离实验

2、叶绿体中色素旳提取和分离旳试验目旳是（） A、观察多种色素旳吸收光谱 B、验证叶绿体中色素旳种类和多种色素旳颜色。 C、提取高等植物叶绿体中旳色素 D、用纸层析法将色素进行分离
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一条色素带旳颜色是（） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素叶绿素b
（黄绿色）含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素（黄色）胡萝卜素（橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见旳太阳光
类胡萝卜素主要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度最快旳色素是（） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液：深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许）碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml）蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是黄绿色，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是他们旳颜色是橙黄色和黄色，主要吸收蓝紫
胡萝卜素和叶黄素，光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜

实验七：叶绿体色素的提取和纸层析

实验七：叶绿体色素的提取和纸层析于路遥 121140072一．实验目的：了解叶绿素的提取和纸层析的方法二．实验原理：【1】叶绿体色素的提取、分离实验原理：1.植物叶绿体色素是吸收太阳光能,进行光合作用的重要物质.它一般由叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素组成，它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体。

2.绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）这两类色素都很难溶于水，而易溶于有机溶剂,故可用乙醇,丙酮等有机溶剂提取。

【2】叶绿体色素的提取原理：1.由于光合色素位于叶绿体中的类囊体上，要把它提取出来必须破坏叶表皮、细胞壁和细胞膜、叶绿体的双层膜，所以要剪碎后加二氧化硅研磨，以便使色素充分被提取。

又因为叶绿体的色素不溶于水，但可溶于有机溶剂中，所以还要加入乙醇或其它有机溶剂使色素溶解，来提取各种色素。

2.另外还要加碳酸钙以保护叶绿体中的色素，原因是加碳酸钙以调节液体的pH，防止叶绿素被破坏。

叶绿体中的色素溶解于有机溶剂如乙醇或丙酮(相似相溶)，形成色素液。

三．实验材料：1.菠菜或青菜叶片.2.仪器设备：研钵，漏斗，冻存管，剪刀，滴管, 滤纸，脱脂棉（或尼龙布或纱布），毛细管，吸水纸。

3.药品试剂：①无水乙醇或丙酮;②石英砂;③碳酸钙粉;④层析液: 石油醚10ml+丙酮2ml+苯1ml四．方法与步骤：1.叶绿体色素的提取(1)取植物新鲜叶片2 g,洗净,擦干,去掉粗的叶脉，剪碎,放入研钵中；(2)研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉, 研磨至近乎糊状，加入10-15mL 无水乙醇,再研磨片刻，提取3-5 min，然后用漏斗（内放一层薄的脱脂棉）过滤,即得色素提取液。

2.叶绿体色素的分离(1)制备滤纸条：剪去一端两角，在距离剪角一端1～ 1.5 cm处用铅笔画线（或简单做个记号）。

(2) 画滤液细线：用毛细吸管吸收少量滤液，沿铅笔线（记号）处均匀地画一条直的滤液细线。

干燥后，连续重复3～5次，至滤液细线呈绿色。

叶绿体色素的提取和分离

⑵、分离色素制备滤纸条：剪去两角－使扩散均匀，防止边
缘毛细现象
画滤液细线：直、细、浓(风干后重复数次）
层析液不能没及滤液细线：防止色素溶于层析液层析分离加盖：防止挥发洗手：丙酮有毒
类胡萝卜素
叶绿素
叶绿素色素
叶绿素a
叶绿素b 叶黄素
（蓝绿色）
（黄绿色）
（黄色）
含量约占3/4 含量约占1/4
（3）细胞的代谢
——进行叶绿体色素的提取和分离
1、实验原理提取：色素能溶解在有机溶剂中，不溶于水如：丙酮溶液无水乙醇分离：色素在层析液中溶解度不同，使四种色素随层析液在滤纸上扩散的速度不同而分离
2、实验用：称取
5g左右的鲜叶，剪碎，放入研钵中。加少许的石英砂（充分研磨）和碳酸钙 (保护叶绿素)与丙酮溶液。在研钵中快速研磨。将研磨液进行过滤。
类胡萝卜素胡萝卜素（橙黄色）
吸收可见的太阳光叶绿素主要吸收红光和蓝紫光
类胡萝卜素主要吸收蓝紫光

实验八叶绿体中色素的提取和分离

实验八叶绿体中色素的提取和分离一．实验原理：色素提取原理：利用相似相溶原理，色素可以溶解于酒精、丙酮等有机溶剂中，形成色素液。

色素分离原理：由于四种色素在层析液的溶解度不同，因而四种色素在滤纸上的扩散速度也不同，从而将它们分离开来。

二．实验材料：新鲜的绿色叶片、干燥的定性滤纸、烧杯、研砵、玻璃漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培养皿盖、药勺、量筒、天平。

药品：丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙。

三．实验过程：（一）。

制备色素滤液：1．取叶：称取5克新鲜的绿色植物叶片，然后剪碎，放入研砵中；2。

研磨：A．研砵中分别加入以下物质：二氧化硅：为了使研磨充分；碳酸钙：保护色素免受破坏；丙酮：作为色素的溶剂。

思考题：（1）研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少层膜？提示：应该是3层，一层细胞膜，两层叶绿体膜。

（2）碳酸钙保护色素的原理是什么？因为叶绿素极易分解，在研磨过程中，细胞结构被破坏，细胞液中的有机酸释放出来，很容易破坏叶绿素分子，为了缓冲研磨液中的PH值一，可以加入碳酸钙，来中和释放出来的有机酸，从而避免了叶绿素被破坏。

B．充分迅速地研磨；充分是为了彻底破坏细胞结构，迅速是为了防止丙酮挥发；防止挥发采取的措施：在研砵上加一个中间有洞的纸，把玻璃棒插在中间研磨可以减少挥发。

3．取滤液：在一支试管上插入一个小漏斗，中间用脱脂棉或者尼龙布作为过滤用，迅速倒入研磨滤液，进行过滤，然后在试管口用棉花塞紧。

思考题：为什么要迅速倒入？为什么要用棉花塞紧试管管口？同样为了防止丙酮挥发；同时由于色素极容易被光和空气所破坏，所以要避光和隔绝空气保存。

（二）制备滤纸条：1。

干燥处理过的定性滤纸；为何干燥处理？有利于层析液在滤纸上的扩散；2．规格：6㎝×1㎝3．处理：在滤纸的一端，剪去两角，大约距1㎝处，角度约45°；剪角的目的是什么？因为在靠近两侧的层析液扩散的速度比较快，剪去两角后，扩大了两侧层析液扩散的距离，可以调整层析液扩散处于同一平面。

实验四：叶绿体色素的提取

实验四：叶绿体色素的提取、分离及叶绿素a、b含量的测定实验目的1、了解叶绿素分离与提取的原理和方法2、了解它们的光学特性和理化性质3、了解叶绿素a、b含量测定的方法。

实验原理1.脂溶性叶绿体色素提取：可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。

2.分离：（1）叶绿体色素的分离＜纸层析法＞因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过一定时间后，可将各种色素分开。

纸层析是以滤纸纤维为固定相，而以有机溶剂作为流动相。

由于样品中各物质有不同的分配系数，移动速度因此而不同，从而达到分离的目的。

（2）叶绿素与类胡萝卜素的分离<皂化反应>叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇与叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开。

3.叶绿素a、b含量的测定：根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其溶液浓度c和液层厚度L成正比，即：A=φCL(φ为吸光系数) 因此，根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，用公式即可计算出提取液中各色素含量。

测定663nm 和645nm两个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b在对应波长下的吸光系数即可求出叶绿素a、b含量。

其校正过的公式为：Ca＝12.7A663－2.69A645 Ca:叶绿素a浓度,mg/LCb＝22.9A645－4.68A663 Cb:叶绿素b浓度,mg/LCT＝Ca + Cb CT:叶绿素总浓度,mg/L实验器材：1、仪器：剪刀、漏斗、烧杯、分光光度计、分液漏斗、铁架台、移液管、吸耳球、试管、毛细管、平底大试管、天平、研钵、滤纸2、试剂：石英砂、碳酸钙、丙酮、乙醚、四氯化碳、无水硫酸钠、30%KOH-甲醇溶液3、材料：菠菜实验步骤：1、叶绿素的提取称取去中脉叶片2g左右，剪碎放入研钵中加丙酮5ml，少许碳酸钙和石英砂，研磨成浆，再加入丙酮10ml，用漏斗过滤即为色素提取液，暗处备用。

叶绿体色素的提取

叶绿体色素的提取、分离、定量及理化性质的鉴定【实验目的】1.掌握提取和分离叶绿体色素的方法；2.掌握测定叶绿体色素含量的方法；3.熟悉叶绿体色素的理化性质及吸光特性；4.了解植物叶绿体色素组成及其与生境的相关性。

【实验原理】1.叶绿体色素是植物进行光合作用的重要物质，叶绿体色素包含绿色素（包括叶绿素a 和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。

提取液可用色层分析的原理加以分离。

因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。

2.叶绿素是一种二羧酸——叶绿酸与甲醇和叶绿醇形成的复杂酯，故可与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开图一：叶绿素的结构3.叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，叶绿素吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态时可发射出红光量子，因而产生荧光。

图二：叶绿素对光能的吸收与能量转变示意图4.叶绿素中的镁可以被H+所取代而成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素。

铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标本。

5.叶绿体色素具有吸光特性，可利用分光光度计在某一特定波长下测定色素溶液光密度，即可用公式计算出其中各色素的含量。

各种色素含量计算如下：Chla（μg /ml）=12.7 OD663－2.69OD645Chlb（μg /ml）=22.9 OD645－4.68 OD663ChlT（μg /ml）=Chla + Chlb0.1ml提取液Chla含量（μg ）=Chla（μg /ml）*0.1ml*稀释倍数0.1ml提取液Chlb含量（μg）=Chlb（μg /ml）*0.1ml*稀释倍数0.1ml提取液ChlT含量（μg ）=ChlT（μg /ml）*0.1ml*稀释倍数（菠菜：稀释倍数=0.1ml/3ml=30，玉米：稀释倍数=0.3ml/3ml=10）每种叶绿素含量计算（以Chla为例）：FW总V）μg含量（Chla提取1ml）/gμg含量（Chla ⨯=液其中FW为样品总重（2.0g菠菜叶片，0.2g玉米叶片），V总=10ml6.叶绿体色素易受光氧化，提取色素应在弱光中进行，并避光保存色素。

高中生物实验叶绿体色素的提取和分离

实验叶绿体色素的提取和分离
1、原理：( 1 )叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇(或丙酮)中，所以用无水乙醇可提取叶绿体中的色素。

( 2 )不同的色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得慢，因而可用层析液将不同色素分离。

3、结果分析：①从色素带的宽度可知色素含量的多少依次为：叶绿素a >叶绿素b >叶黄素>胡萝卜素; ②从色素带的位置可知色素在层析夜中溶解度大小依次是：胡萝卜素>叶黄素>叶绿素 a >叶绿素 b ; ③在滤纸上距离最近的两条色素带是叶绿素a 与叶绿素
b ，距离最远的两条色素带是胡萝卜素与叶黄素。

4、注意事项：(1)裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。

(2)根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条长度高出烧杯1cm ，高出的部分做直角弯折。

(3)画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中。

(4)研磨要迅速、充分。

a.因为丙酮容易挥发; b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;
c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。

(5)制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。

5、实验创新：在本实验中在圆形滤纸中央点上叶绿体色素的提取液进行层析，会得到近似同心的四个色素环，由内到外依次是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。

叶绿体色素的提取和分离

叶绿体色素的提取和分离
叶绿体色素是位于植物叶绿体中的一类有机化合物，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。

提取和分离叶绿体色素的方法如下：
1. 手工研磨法：将植物叶片取出后，加入适量的减水醇（如乙醇或甲醇），用研钵或机械研磨器搅拌研磨，使细胞破碎释放叶绿体色素。

然后通过离心将悬液离心分离出叶绿体色素。

2. 酒精沉淀法：将植物叶片切碎后加入适量的酒精溶液，用撇去悬浮物，然后再用滤纸滤除酒精中的杂质。

过滤后的溶液可以进行酒精沉淀，即加入适量的酒精悬浮叶绿体色素，并通过离心分离出沉淀。

3. 层析法：将植物叶片经过研磨和过滤后得到的色素溶液，可以通过色谱柱层析进行分离。

常用的色谱柱包括硅胶柱、纸层析柱和高效液相色谱柱等。

通过向色谱柱中加入适当的溶剂系统，可以将叶绿体色素按照其亲水性和亲油性进行分离。

4. 液-液萃取法：将植物叶片研磨并与适量的有机溶剂（如二氯甲烷、苯或正己烷）混合，通过摇晃、振荡或搅拌等方法，使叶绿体色素在有机相和水相之间分配。

随后，分离有机相并蒸干，即可得到叶绿体色素。

这些方法可以根据实验需求和设备条件选择使用，提取和分离叶绿体色素可以用于进一步的分析和研究。

叶绿体色素的提取

叶绿体色素的提取叶绿体色素的提取是一项实验技术，涉及从植物叶片中提取叶绿体色素的过程。

下面是关于该实验的详细步骤和注意事项。

一、实验目的本实验旨在学习叶绿体色素的提取方法，了解叶绿体色素的种类和性质，掌握叶绿体色素的提取和纯化技术。

二、实验原理叶绿体色素是植物叶片中的一类重要色素，包括叶绿素、类胡萝卜素和黄酮类化合物等。

这些色素在光合作用中起着重要的作用，可以帮助植物吸收光能并转化为化学能。

叶绿体色素的提取通常使用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）作为提取剂，通过研磨、过滤和分离等步骤将色素从叶片中提取出来。

三、实验步骤1.准备实验材料：新鲜的植物叶片（如菠菜、甘蓝等）、称量纸、研钵、玻璃棒、漏斗、滤纸、丙酮、无水乙醇等。

2.称量植物叶片：选择新鲜的植物叶片，用称量纸称取5g左右，记录重量。

3.研磨：将称好的植物叶片放入研钵中，加入少量丙酮和无水乙醇混合液（比例为1:1），用玻璃棒充分研磨至匀浆状。

4.过滤：将研磨后的匀浆通过漏斗倒入滤纸中，用玻璃棒轻轻压榨，使滤纸上的液体完全流尽。

5.分离：将滤纸上的色素用玻璃棒刮下，用丙酮和无水乙醇混合液洗涤滤纸上的色素，洗液收集到棕色瓶中。

6.纯化：将收集到的洗液通过旋转蒸发仪进行浓缩，得到纯化的叶绿体色素。

7.分析：通过光谱分析、色谱分析等方法对提取到的叶绿体色素进行分析鉴定。

四、注意事项1.实验过程中要使用新鲜的植物叶片，以保证色素的含量和活性。

2.研磨时要充分破碎细胞，以便色素的提取。

3.过滤时要注意滤纸的选择和使用，避免滤纸上的杂质对色素纯度的影响。

4.分离时要小心操作，避免色素的损失。

5.纯化时要注意控制温度和时间，避免高温导致色素分解。

6.分析时要选择合适的分析方法，以便准确鉴定叶绿体色素的种类和性质。

7.注意安全操作，避免溶剂溅到皮肤或眼中。

8.实验结束后要及时清理实验现场，将废液和废弃物妥善处理。

9.本实验中使用的丙酮和无水乙醇等有机溶剂应妥善保管和使用，避免对环境和健康造成影响。

叶绿体中色素的提取用的物质

叶绿体中色素的提取用的物质
叶绿体中色素提取的物质有：
1. EDTA：乙二胺四乙酸，也叫芐酸，是一种维持叶绿体的必需条件，能够调节pH和离子平衡，起到配合体特殊性复制叶绿体的作用。

2. 普鲁兰液：由80％甘油、20％乙二醇组成，用于辅助新陈代谢，同时也能调节叶绿体膜结构，保持叶绿体的正常功能。

3. 尿囊素：它是一种非常重要的膜质脂质，可以稳定叶绿体的水溶性物质，同时还可以抑制高温环境下的膜脂质挥发，可以防止叶绿体的膜结构改变。

4. 果糖：提取叶绿体的过程中果糖可作为能量的供给，可以为叶绿体提供热能使其反应充分活跃，同时果糖可以避免某些离子参与抵抗膜上脂质分布，保证叶绿体膜结构的稳定。

5. 甲醇：用于溶解叶绿体，能够使其保持混合态，但不会影响构型，可以在中性或弱酸碱条件下保持叶绿体膜结构不变。

6. 矿物质：种类繁多，包括钠、钙、镁、铁、钾等元素。

它们可以调
节叶绿体的电解质平衡，维持其正常的结构及功能，为充分发挥叶绿体提供必要的条件。

提取叶绿体色素的方法

提取叶绿体色素的方法
叶绿体色素是一种非常重要的生物分子，可以在植物中找到。

它们起着重要的作用，可以参与光合作用，吸收太阳能以供有机物质的合成。

因此，叶绿体色素的提取显得尤为重要。

提取叶绿体色素的方法有几种，其中最常用的是离心法和沉淀法。

（1）离心法：首先，要将样品分离出叶绿体，可以用离心法。

在离心容器中加入植物细胞悬液，先用慢速离心运转1分钟，再用中速离心运转5分钟，最后再用高速离心运转5分钟，使叶绿体聚集在容器的离心池的底部，然后可以得到细胞浆液，再进行叶绿体的提取。

（2）沉淀法：检测混合物中的叶绿体，可以用沉淀法。

在混合
物中加入氯化钠或氯化钙溶液，使叶绿体发生沉淀，然后用离心法分离叶绿体，最后滤过，就可以得到叶绿体色素溶胶了。

提取叶绿体色素需要准备一些特定的试剂，比如：Tris-HCl缓
冲溶液、NaCl 、EDTA 、Triton X-100 、B-mercaptoethanol 、Glycerol 、蛋白酶K 、蛋白酶R 以及植物细胞悬液。

- 1 -。

叶绿体色素提取的方法

叶绿体色素提取的方法
叶绿体色素提取属于植物生理学研究课题中的重要内容，主要用于研
究植物光合作用机制和生理活动等。

叶绿体色素提取的方法有：
1. 普通法：普通法，也称为离心法，是从叶绿体提取色素的常的方法，主要包括叶绿体分离、碱提取和色素沉淀等步骤。

2. 高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱法能够高效提取出叶绿体
色素，且对不同类型的叶绿素色素都具有很好的效果。

3. 原子吸收法：此方法利用叶绿体色素在原子吸收分析中的特殊的亮
度特性，可以同时测量特定波长的吸收谱，从中可以提取出大量不同
类型的叶绿体色素。

4. 光子聚焦荧光技术：光子聚焦荧光技术的原理是采用具有抑制作用
的特定波长发射出自身特定荧光，从而进行叶绿体色素的提取。

5. 光波谱法：光波谱法是利用光信号的强度大小，通过特定波长的发
送和接收来测定叶绿体色素浓度大小及组成成分，从而获得精确的叶
绿体色素提取结果。

通过以上五种方法可以进行叶绿体色素的提取。

但是在实际的应用中，
根据检测工具的不同，也要注意一些特殊的技术要求，例如提取样品的选择、采集参数的调节等，以保证实验的准确性和可靠性。