高温α淀粉酶的实际应用

高温α淀粉酶的实际应用
高温α淀粉酶的实际应用

高温α淀粉酶

◇产品概述:

淀粉,一种碳水化合物的高度聚合体,是由两个多聚糖,直链淀粉和支链淀粉组成。淀粉的底物(像玉米淀粉)需要稳定的耐高温淀粉酶进行作用才能产生较短链的糊精。而葡萄淀粉酶则主要用于葡萄糖浆、高果糖浆和用于酒精生产业的淀粉的水解。该产品是一种耐高温稳定的细菌淀粉酶,由地衣芽孢杆菌发酵而成。本品具有良好的耐高温特性,广泛应用于淀粉糖(葡萄糖、饴糖、糊精、低聚糖)、酒精、啤酒、酿造、纺织、印染、造纸等工业。

◇工作机理:

能在较高的温度下迅速水解淀粉分子中α -1,4D-葡萄糖苷键,任意切割凝胶淀粉成长短不一的短链糊精和少量的低聚糖、葡萄糖和麦芽糖,从而使淀粉糊的粘度迅速下降。

◇产品优点:

本品具耐高温的特性,在高温下液化迅速彻底,液化液蛋白质絮凝好,分层明显,过滤速度快,且用量少,使用方便,对简化工艺,提高质量,提高收率,降低成本,节约能源,提高设备利用率等均具有明显的优点。

◇产品特性:

钙离子对酶活稳定性的影响:

较低浓度的钙离子存在,本产品即有很好的稳定性,对用于淀粉的水解,推荐加入50—70mg/L钙离子。

PH的影响:

最适PH范围:PH6.0—6.2;有效PH范围:5.0—8.0

温度影响:

最适温度范围:95℃—97℃;有效温度范围:90℃—100℃

在喷射液化工艺中瞬间温度可达105℃—110℃,本品的热稳定性相当好。

◇产品规格:

液体酶活力为20,000 U/mL)

固体酶活力为20,000 U/g)

注:其他酶活的高温淀粉酶可根据客户要求提供。

酶活力单位定义:在温度70℃、pH6.0 条件下,1 分钟内液化 1mg 可溶性淀粉所需要的酶量,即为 1 个酶活力单位。

◇使用说明:

本产品用于酿酒酵母的淀粉糖的生产,淀粉浆浓度为16-17°Bé(波美度),pH为6.0-6.5,酶的添加量为6U/ml(产品活性为20,000U/mL)左右。可一次加入。混合物搅拌后温度升高至95-97℃并保持30min左右。

在啤酒酿造过程中,本产品添加量为6U/ml(产品活性为20,000U/mL)左右。混合物的温度升高至95-97℃并保持30min左右。

在酒精生产中,本产品添加量为6U/ml(产品活性为20,000U/mL)左右, pH 6.5左右。温度升高至100 ± 5℃并保持100 分钟,冷却糖化。

在味精,饴糖和葡萄糖等工业应用时,首先按工艺要求将原料与水混合,制成淀粉乳,调整PH6.2左右,搅拌均匀,添加本品。添加量为10U/ml。如采用间歇液化,在液化罐中迅速升温到95—97℃,在95—97℃保温30分钟,如果用喷射液化,喷射出口温度可在105℃左右,并在95℃以上保温60分钟左右,直到达到液化完全.

(注:可根据试验确定最适添加量)

◇产品包装:

液体本产品包装规格为25kg/塑料桶。

固体本产品为盒装或塑料封口袋包装。

根据需求量的大小可提供可更换的包装。

◇储存条件:

本品属于生物活性物质 ,应置于低温,干燥处,避免阳光直射。常温下(25℃)储存三个月酶活不低于标示酶活力。如遇少量沉淀现象,可以摇匀后使用,其效果不变。

◇注意事项:

本产品是一种无毒的生物降解物质,但是,要避免不必要的产品接触。长期暴露在一些产品(如本产品)的蛋白质中会使有的人对该产品敏感。每次接触产品后要用温水、香皂洗手,将产品放在儿童不能触及的地方。

◇技术服务:

潍坊宇瑞贸易有限公司将协助我们的用户正确地使用此产品。

(整理)α-淀粉酶综述

α-淀粉酶综述 佚名2013-10-06 摘要:α-淀粉酶分布十分广泛,遍及微生物至高等植物。α-淀粉酶是一种十分重要的酶制剂,大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业等,是应用最为广泛的酶制剂之一。本文概述了α-淀粉酶的发现和应用发展史、分离纯化及结构的研究史、催化机制及其研究史、工业化生产和应用现状与发展趋势等。 关键词:α-淀粉酶发现应用分离纯化结构催化机制研究史发展趋势 α- 淀粉酶( α- 1,4- D- 葡萄糖- 葡萄糖苷水解酶) 普遍分布在动物、植物和微生物中, 是一种重要的淀粉水解酶。其作用于淀粉时从淀粉分子的内部随机切开α-1,4糖苷键,生成糊精和还原糖。由于产物的末端残基碳原子构型为α构型,故称α-淀粉酶。现在α-淀粉酶泛指能够从淀粉分子内部随机切开α-1,4糖苷键,起液化作用的一类酶。 1 α-淀粉酶的发现和应用史 1.1 α-淀粉酶的发现 啤酒是最古老的酒精饮料,发酵是其关键步骤,其中所包含的糖化过程就是把淀粉转化为糖。这个转化过程的机理一直都没有被弄清楚,直到淀粉的发现。 在19世纪早期,许多科学家都在研究谷物提取物中淀粉的消化机理。Nasse(1811年)发现,从生物体中提取的淀粉能过被转化为糖,而从被沸水杀死的植物细胞中提取的淀粉不能被转化为糖。Kirchhoff(1815年)做了一个巧妙的实验。他将4份的冷水加入到2份的淀粉中,并边加边搅拌。之后加入20份的沸水使其形成一层厚厚的淀粉糊。在淀粉糊还是余温的时候,加入被粉碎的麸质(或麦芽),然后在40-60°列式温度下水浴。1-2小时后发现,淀粉糊开始缓慢液化。8-10小时后,淀粉糊被转化为一种甜的溶液。之后,他将其通过过滤和蒸发浓缩得到了糖浆,品尝后发现,其和发酵液一样甜。在操作的过程中,他注明了实验过程中仅添加了非常少的麸质,并且得到的糖浆与淀粉的量成正比。此外,如果在加入麸质前加入几滴高浓度的硫磺酸,最终就没有糖生成。从这个实验中他得到结论1)麸质是一种能够使温水中的淀粉粉末转化为糖的物质。2)作为种子发芽的结果,相比种子内的物质而言,麸质能过将更多的淀粉转化为糖。至此,Kirchhoff奠定了发现谷物中一种能够将淀粉转化为糖的蛋白质的基础。

《探究温度对酶活性影响实验》教学设计

《探究温度对酶活性影响实验》教学设计 一.设计思路: 1、指导思想 高中生物新课程标准提出以提高学生的生物科学素养为主要目的,教师在教学中要组织好各种探究性学习,使学生领悟科学研究的方法并学会相关的操作技能。 2、理论依据 绝大多数酶是蛋白质,凡是能破坏蛋白质结构的因素都能影响酶的活性。如温度、PH等。 3、教学特色 (1)本节课立足于引导学生尝试设计探究性的实验,通过生活中的小常识引入课题,引发学生的思考,让探究的问题贴近学生的生活,激发学生思考、探究问题的兴趣。 (2)采用学生先尝试再补充的实验的设计与操作的教学法,帮助学生主动参与探究式的实验教学,构建以体验科学探究过程,领悟科学探究方法,体现团队合作精神和因材施教的教学原则。这样的教学对培养学生的发散思维及应变能力很有意义。最后通过拓展加深学生对生物科学技术知识的理解,使学生领悟科学技术与社会应用的相互关系。 二.实验教学分析: (1)内容分析:酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物,其中大多酶是蛋白质,凡是能破坏蛋白质结构的因素都能影响酶的活性。如温度、PH等。 (2)学情分析:学生已经学习了酶在细胞代谢中的作用,酶的化学本质及酶的高效性和专一性,对酶有一定的感性认识。但学生自主探究能力还较低,教师需进行有效的指导和帮助。 (3)教学条件分析: 相应的实验器材等学校基本都有。 三.教学重点及解决的具体策略: 教学重点:尝试探究温度对酶活性的影响。 具体策略:我将这一探究性的试验改为限定因素的定量试验,给定探

究的因素(温度)。因为探究性实验学生自己决定和判断的因素很多,我将引导学生重点尝试探究温度对酶活性的影响。 四、教学难点及突破的具体办法: 教学难点:如何进行探究温度影响酶活性的实验设计与分析。突破的具体办法:(1)设计实验是本教学的难点,但对如何进行材料选择,如何设计实验方案,并简要写出基本的实验步骤。这都需要老师的引导和帮助。 (2)通过设置一系列的疑问,并一一加以引导,通过在回答问题的过程中,学生经过反复思考,心中就会对实验设计有了大致的框架。这样就使教学难点实验设计得到突破。利于调动学生的学习积极性和特长的发挥,又在教师可控制范围之内,使探究活动按照教师的预设顺利进行。 五.实验目标: (1)知识与技能: 1、尝试设计温度对酶活性的影响的实验。 2、学会设置对照组和实验组并会控制单一变量,并能用准确的语言阐明实验探究的结果。 (2) 过程与方法: 1.培养学生观察、分析问题,解决问题的能力; 2.培养学生实验操作能力; (3)情感态度价值观目标: 1.培养学生实事求是和严谨的科学态度; 2.激发学生对生物科学的兴趣和热爱,培养学生理论联系实际。六.实验准备: 指导学生预习教材,根据学生探究能力的高低,将学生分成能力比较均衡的小组,每组选出一名动手能力较强的学生担任组长。 实验材料用具:试管、3%的淀粉溶液、温度计、碘液、烧杯、量筒、滴管、试管夹、石棉网、酒精灯、三脚架、冰块、教学课件、小组探究性实验设计方案报告单等。 七.教学流程图:

实验三、淀粉酶活性的测定实验报告

实验四、淀粉酶活性的测定 一、实验目的: 1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义; 2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。 二、实验原理: 淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热,70℃ 15min 则被钝化。测定时,使其中一种酶失活,即可测出另一种酶的活性。 淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖,利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸,测定其吸光度,从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。 三、实验用具: 1、实验设备 研钵,具塞刻度试管,离心管,分光光度计,酸度计,电热恒温水浴锅,离心机,电磁炉。 2、实验材料与试剂 (1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g,定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g,定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。 (2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液; (3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g,定容至100ml水中,紧盖瓶塞,勿使CO2进入; (4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中; (5)pH 6.8的磷酸缓冲液:取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8,加水稀释至1000ml即得。 (6)0.4mol/L的NaOH溶液; (7)1%NaCl溶液。 (8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm) 四、操作步骤 1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料,去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液,磨碎后以2000r/min 离心10min,转出上清液备用。取上清液1.0ml,用pH 为6.8的缓冲溶液稀释5倍,所得酶液。 2、a- 淀粉酶活力测定 (1) 取试管4支,标明2支为对照管,2支为测定管。 (2) 于每管中各加酶液lml ,在 70℃士0.5℃恒温水浴中准确加热15min ,取出后迅速用流水冷却。 (3) 在对照管中加入4m1 0.4mol/L氢氧化钠。 (4) 在4支试管中各加入1ml pH5.6的柠檬酸缓冲液。 (5) 将4支试管置另一个40℃士 0.5℃恒温水浴中保温15min ,再向各管分别加入40℃下预热的1%淀粉溶液2m1,摇匀,立即放入40℃恒温水浴准确计时保温5min。取出后向测定管迅速加入4ml 0.4mol/L氢氧化钠,终止酶

淀粉酶及其应用

淀粉酶及其应用 0 引言 淀粉酶分布非常广泛,是人们经常研究的一种酶。从纺织工业到废水处理,这些酶都有不同规模的应用。 淀粉酶是淀粉降解酶。它们广泛存在于微生物、植物和动物体中。它们将淀粉及相关的聚合物分解为带有具体淀粉分解酶特征的产品。最初,淀粉酶一词用来指可以水解直链淀粉、支链淀粉、肝糖及其降解产品中α-1,4-糖苷键的酶(本菲尔德(Bernfeld),1955年;费希尔(Fisher)和斯坦(Stein),1960年;迈拜克(Myrback)和纽慕勒(Neumuller),1950年)。它们水解相邻葡萄糖单体之间的键,产生带有具体用酶特征的产品。 近年来,人们发现了很多与淀粉及相关多糖结构降解有关的新型酶,并对其进行了研究(鲍伊(Boyer)和英格尔(Ingle),1972年;博诺考尔(Buonocore)等人,1976年;格里芬(Griffin)和福格蒂(Fogarty),1973年;福格蒂(Fogarty)和格里芬(Griffin),1975年)。 (1)有一些微生物源可以劈开这些结构中的α-1,4或α-1,4和/或α-1,6键,人们将现在已经或将来可能对这些微生物源工业化生产有重大影响的酶分为六种(福格蒂(Fogarty)和凯利(Kelly),1979年)。 (2)水解α-1,4键和绕过α-1,6键的酶,比如α-淀粉酶(内作用淀粉酶)。 (3)水解α-1,4键,但不能绕过α-1,6键的酶,比如β-淀粉酶(把麦芽糖当作一个重要的终端产品来生产的外作用淀粉酶)。 (4)水解α-1,4和α-1,6键的酶,比如淀粉葡糖苷酶(葡萄糖淀粉酶)和外作用淀粉酶。 (5)仅水解α-1,6键的酶,比如支链淀粉酶和其它一些脱支酶。 (6)优先水解其它酶对直链淀粉和支链淀粉所起的作用产生的短链低聚糖中α-1,4键的酶,比如α-葡萄糖苷酶。 (7)将淀粉水解为一连串非还原环状口葡糖基聚合物,称为环糊精或塞查丁格(Sachardinger)糊精的酶,比如浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)淀粉酶(环糊精生成酶)。 1 淀粉 在描述淀粉分解酶的作用方式和性质前,有必要来讨论一下这种天然基一一淀粉的特性。淀粉是所有高等植物中主要储备碳水化合物的。在有些植物中,淀粉占整个未干植物的70%。淀粉是不溶于水的细小颗粒。这些颗粒的大小和形状常常由植物母体决定,具有植物品种的特征。当把淀粉颗粒置于水中加热时,颗粒中的连接氢键变弱,颗粒开始膨胀、凝胶化。最终,它们根据多糖的浓度或形成糊状物或形成弥散现象。淀粉来自于植物,比如玉米、小麦、高梁、稻米的种子,或木薯、马铃薯、竹芋的茎根,或来自于西谷椰子的木髓。玉 米是淀粉的主要商业原料,通过湿磨生产工艺便可获得商品淀粉(博考特(Berkhout),1976年)。直链淀粉和支链淀粉的特性见表1。 表1直链淀粉和支链淀粉的比较 性质 直链淀粉 支链淀粉 基本结构 基本直线 分岔 在水溶液中稳定性 回生 稳定 聚合度 C.103 C.104~105 平均链长 C.103 C.20~25 β淀粉酶水解 87% 54%

脂肪酶、淀粉酶测定方法

脂肪酶测定——采用p-NPP法 取0.5g样品,加去离子水10mL,40℃水浴浸泡2h,过滤。取滤液1mL于试管中,加入pH8.0缓冲液3mL和1mmol/L p-NPP溶液0.1mL 于40℃下精确反应3min,迅速置于冰上终止反应。在波长405nm处测定吸光度值。对照管酶液用等体积去离子水代替,其余试剂相同。Npp标准曲线Y=0.287x+0.0861 (y:吸光度x:NPP浓度(umol/L)) 试剂配制: 1mmol/L p-NPP溶液:称取0.0378g pNPP,加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇,用Tris-HCL(pH8.0)定容至100mL。 pH8.0 Tris-HCl:50mL 0.1M tris碱溶液与29.2mL 0.1M HCl溶液混合,加蒸馏水定容至100mL。 淀粉酶测定 称取六神曲0.5g,研细,用20mL去离子水40℃浸泡1h,过滤。取2只250mL的碘瓶,各加入5%的淀粉液25mL,10mL醋酸钠缓冲液(pH4.5),10mL蒸馏水,摇匀,40℃水浴预热5min。A管中加入滤液5mL,准确反应1h,立即加2mol/L HCl 1mL终止反应,B管中先加入HCl,再加滤液5mL。2只碘瓶分别加入0.05mol/L碘液10mL,0.1mol/L氢氧化钠45mL,边滴边振摇,暗处放置20min,加入1mol/L 硫酸2mL,用0.1mol/L硫代硫酸钠滴定至无色。每份样品测定3次。记录消耗硫代硫酸钠的体积,计算得淀粉酶活力。

淀粉酶活力是指1g六神曲粉末在一定条件下(T=40℃,pH=5.0),1h 内催化可溶性淀粉水解生成葡萄糖的毫克数。计算公式: 淀粉酶活力=[c×(vB-vA)·M·N]/2×m·t 式中:c为硫代硫酸钠的浓度(mol/L),M为葡萄糖的摩尔质量(g/mol),N为酶液稀释倍数,V A为样品滴定值(mL),VB为空白滴定液(mL),m为六神曲的取样量(g),t为反应时间(h),淀粉酶活力单位为mg/(g·h) 。 试剂配制 pH4.5醋酸钠缓冲液:18g醋酸钠加9.8mL冰醋酸,定容至1000mL。1mol/L硫酸溶液:量取6mL浓硫酸,倒入适量水中,用水稀释至100mL。 0.1mol/L碘液:取碘13.0g,加碘化钾36g与水50ml溶解后,加盐酸3滴与水适量使成1000ml,摇匀,用垂熔玻璃滤器滤过。 蛋白酶活力测定 称取六神曲1g,研细,加蒸馏水20ml,于40℃水浴放置1h,间断搅拌,过滤,滤液以磷酸钠缓冲液稀释1倍。取1mL稀释液置离心管中,于40℃水浴预热5min,加入预热的酪蛋白1mL,保温10min,立即加入0.4 mol / L 三氯醋酸2 ml,终止反应,继续置水浴中保温20 min,使残余蛋白质沉淀后离心滤过。取1 mL滤液,加入0.4 mol/L 碳酸钠溶液5 mL,福林试液1 mL,蒸馏水2 mL,摇匀,置水浴锅中,40 ℃保温显色20 min。以试剂溶液为空白,于763 nm 波长处测定吸光度。 在40℃时每1min水解酪蛋白产生1g酪氨酸的酶量,定义为1个蛋白酶活力单位。

(植物中)淀粉酶活性的测定

(植物中)淀粉酶活性的测定 一实验目的 本实验的目的在于掌握淀粉酶的提取及活性的测定方法。 二实验原理 植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解为麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中,有α-淀粉酶及β-淀粉酶,其活性因植物生长发育时期不同而有所变化,其中以禾谷类种子萌发时淀粉酶活性最强。 α-淀粉酶和β-淀粉酶都各有其一定的特性,如β-淀粉酶不耐热,在高温下容易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下容易发生钝化。通常酶提取液中同时存在两种淀粉酶,测定时,可以根据他们的特性分别加以处理,钝化其中之一,即可以测出另一种酶的活性。将提取液加热到70℃维持15分钟以钝化β-淀粉酶,便可测定α-淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6的醋酸在0℃加以处理,钝化α-淀粉酶,以测出β-淀粉酶的活性。 淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原成3-氨基-5-硝基水杨酸的显色基团,在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比,故可以求出麦芽糖到含量。以麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性大小。 三实验材料 萌发的小麦、大麦或者豆类等(芽长1cm左右) 四实验仪器和试剂 1.仪器: 电子天平、研钵、100mL容量瓶(1个)、50mL量筒(1个)、刻度试管[25mL(9个)、10mL(1个)]、试管6支、移液管[1mL(2支)、2mL(2支)、10mL(2支)]、离心机、恒温水浴锅、7220型分光光度计 2.试剂: 1%淀粉溶液、0.4mol/LNaOH、 pH5.6的柠檬酸缓冲液:A、称取柠檬酸20.01g,溶解后稀释至1 000mL;B、称取柠檬酸钠29.41g,溶解后稀释至1 000mL;取A液13.70mL与B液26.30mL 混匀即是。 3,5-二硝基水杨酸:精确称取3,5-二硝基水杨酸1g溶于20mL1mol/LNaOH 中,加入50mL蒸馏水,在加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水稀释至100mL,盖紧瓶盖,勿让CO2进入。 麦芽糖标准液:称取化学纯麦芽糖0.100g溶于少量蒸馏水中仔细移入100mL 容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度。 五操作步骤 1.酶液的提取: 称取萌发的水稻种子0.5g(芽长1cm左右,置于研钵中加石英砂研磨成匀浆,移入25mL刻度试管中,用水稀释至刻度,混匀后在温室下放置,每隔数分钟振荡一次,放置20分钟后离心,取上清液备用。 2.α-淀粉酶活性的测定: (1)取三支试管,编号注明1支为对照管,2支为测试管。 (2)于每管中各加入酶提取液1mL,在70℃恒温水浴中(水文的变化不应该超过±0.5℃),准确加热15分钟,在此期间β-淀粉酶受热钝化,取出后迅速在自来水中冷却。

淀粉酶水溶液(1%,pH5.3)

淀粉酶水溶液(1%,pH5.3) 简介: 糖原染色是病理学中常规的染色方法之一,McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白,该法常用来显示糖原和其他多糖,该染色试剂盒不仅能够显示糖原,还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。PAS 技术是唯一可检测不同种类的黏液物质(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS 技术却不能区别黏蛋白和糖原。若要准确鉴别黏液物质(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步骤。大多数情况下可用α–淀粉酶或麦芽淀粉酶来催化糖原的糖苷键水解,形成水溶性的双糖-麦芽糖,在应用PAS 技术之前将糖原从组织切片上除去。 Leagene 淀粉酶水溶液(1%,pH5.3)由淀粉酶、磷酸盐组成,主要用于糖原PAS 染色之前切片处理。糖原消化时需要两张相同的切片,脱蜡后一张切片用a-淀粉酶水溶液(1%)处理,另一张仅用PBS 或蒸馏水处理,然后两张切片均用PAS 法染色,消化后染色消失表明存在糖原。 组成: 操作步骤(仅供参考): 1、两张相同切片,二甲苯脱蜡,梯度乙醇入水。 2、一张切片入淀粉酶溶液处理。另一张不用淀粉酶溶液处理,入水中作为对照。 3、流水冲洗两张切片。 4、进行糖原PAS 染色步骤 染色结果: 编号 名称 DG0014 Storage 淀粉酶水溶液(1%,pH5.3) 100ml 4℃ 使用说明书 1份 糖原、中性,唾液黏蛋白 红紫色 各种糖蛋白 红紫色 细胞核 蓝色 未处理的切片,糖原呈亮红色或红紫色;淀粉酶处理的切片,糖原阴性。

注意事项: 1、切片脱蜡应尽量干净,否则影响染色效果。 2、需使用一张阳性对照片验证酶的活性。 3、避免接触过多的阳光和空气,使用前最好提前取出恢复到在室温后,避光暗处使用。 4、冷冻切片染色时间尽量要短。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期:6个月有效。 相关: 编号名称 DC0032 Masson三色染色液 DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA) DH0006 苏木素伊红(HE)染色液 DK0022 尼氏染色液(焦油紫法) NR0040 RNase A(10mg/ml) PE0103 Acr-Bis(30%,29:1) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

探究温度对酶活性影响剖析

实验能力训练期末实验(实验设计方案) 课题:温度对酶活性腐乳影响

探究温度对酶活性影响 (一).背景资料 高中生物实验分两种类型,验证性实验和探究性实验(包括研究性课题),由于后者更能体现探究能力、实验设计能力和运用生物学知识和方法分析和解决实际问题能力;更能体现科学态度、科学精神和创新意识,是高考中为高校选拔人才的较好材料,近年来一直被沿用。由于缺乏实验设计的有关理论知识,平时的练习也偏少,因此,遇到这类题型,就会感到茫然。为解决这一问题,现将有关实验设计的基本理论、实验设计的思路方法和常见的类型作一介绍,以期增加理论知识,提高分析问题和解决问题的能力之目的。 “温度对酶活性的影响”是高中生物新教材人教版《分子与细胞》的第五章《细胞的能量供应与利用》第一节降低化学反应活化能的酶第三课时酶的特性中的探究实验《影响酶活性的条件》其中的一个。本实验是一个探索性实验,通过淀粉酶在不同的温度条件下催化淀粉的水解情况。加深对控制实验变量的了解。 探究性实验一般包括:课题、假设、设计实验、预期、完成实验、观察并记录结果(有时需收集数据)、分析结果(数据)并推导结论七个基本内容。 一.探究性实验的基本内容 (一)提出课题 人们对事物作缜密观察以后,常常由于好奇心或想作进一步的了解而提出问题,虽然任何人都能提出问题,但只有意义的问题才值得探讨,课题即为实验的题目,是实验要达到的具体目标,例如“蚯蚓如何借肌肉的收缩和舒张而移动身体?” (二)假设 科学方法的第三步是假设。假设,也称假说或猜测,指用来说明某种现象但未经证实的论题,也就是对所提出的问题所做出的参考答案。假设一般分为两个步骤:第一步,提出假设,即依据发现的事实材料或已知的科学原理,通过创造性思维,提出初步假定;第二步,做出预期(推断),即依据提出的假设,进行推理,得出假定性的结论;例如,新编高中生物的“动物激素饲喂小动物的实验”,其假设是:“甲状腺激素对动物的生长发育有影响”;其预期结果是:“用适量的甲状腺激素饲喂蝌蚪,将促使蝌蚪的生长发育加速”。实验预期是较具体的推断。 一个问题常有多个可能的答案,但通常只有一个是正确的。因此,假设是对还是错,还需要加以验证,即依据假设或预期,设计实验方案,进行实验验证。 (三)设计实验

淀粉酶活性的测定

淀粉酶活性的测定 一、原理 淀粉酶(amylase)包括几种催化特点不同的成员,其中α-淀粉酶随机地作用于淀粉的非还原端,生成麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉浆的粘度下降,因此又称为液化酶;β-淀粉酶每次从淀粉的非还端切下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶;葡萄糖淀粉酶则从淀粉的非还原端每次切下一个葡萄糖。淀粉酶产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。可以用麦芽糖制作标准曲线,用比色法测定淀粉生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。几乎所有植物中都存在有淀粉酶,特别是萌发后的禾谷类种子淀粉酶活性最强,主要是α-和β-淀粉酶。Α-淀粉酶不耐酸,在pH3.6以下迅速钝化;而β-淀粉酶不耐热,在70℃15min则被钝化。根据它们的这种特性,在测定时钝化其中之一,就可测出另一个的活力。本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶的活力,再与非钝化条件下测定的总活力(α+β)比较,求出β-淀粉酶的活力。 二、材料、仪器设备及试剂 (一)材料:萌发的小麦种子(芽长约1cm)。 (二)仪器设备:1. 分光光度计;2. 离心机;3. 恒温水浴(37℃,70℃,100℃);4.具塞刻度试管;5. 刻度吸管;6. 容量瓶。 (三)试剂(均为分析纯):1. 标准麦芽糖溶液(1mg/ml):精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100ml;2. 3,5-二硝基水杨酸试剂:精确称取1g3,5-二硝基水杨酸,溶于20ml2mol/L NaOH溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml。盖紧瓶塞,勿使CO2进入。若溶液混浊可过滤后使用;3.01mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液(0.1mol/L 柠檬酸):称取C6H8O7.H2O 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1L;B液(0.1mol/L 柠檬酸钠):称取Na3C6H5O7.2H2O 29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1L。取A液55ml与B液145ml混匀,即为0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液;4.1%淀粉溶液:称取1g淀粉溶于100ml0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。 三、实验步骤 (一)麦芽糖标准曲线的制作:取7支干净的具塞刻度试管,编号,按表(详教材)加入试剂。摇匀,置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20ml。以1号管作为空白调零点,在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横座标,吸光度值为纵座标,绘制标准曲线. (二)酶液制备:称取1g萌发3天的小麦种子(芽长约1cm),置于研钵中,加少量石英砂和2ml蒸馏水,研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管中,用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15~20min,每隔数min搅动1次,使其充分提取。然后在3000rpm 下离心10min,将上清液倒入100ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶原液。吸取上述淀粉酶原液10ml,放入50ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶稀释液。 (三)酶活力的测定:取6支干净的具塞刻度试管,编号,按表(详教材)进行操作。(四)结果计算:淀粉酶活力=C×V T/(W×V s×T)(mg/g/min)。式中,C为从标准曲线上查得的麦芽糖含量(mg);VT为淀粉酶原液总体积(ml);Vs为反应所用淀粉酶原液体积(ml);W为样品重量(g);t为反应时间(min)。

探究温度对酶活性影响的实验设计[参照模板]

探究温度对酶活性影响的实验设计 龙岩长汀一中曾宪琰 1 实验设计理念 由于在第一课时学生已经学习了酶的发现和酶的概念以及酶的特性,在此基础上,教师引导学生设计实验,提出预期,让学生分组进行实验探究,观察思考,进行讨论,由学生自己总结出结论。这样的实验设计能体现学生自主、探究、合作的学习方式,有利于培养学生科学的思维方法和研究方法,提高学生的实验设计探究能力和科学素养。 2 实验目标 2.1 知识目标理解温度对酶影响的实质。 2.2 能力目标①通过探究温度对酶活性影响的因素,发展学生的科学探究能力;②培养学生观察、分析问题,解决问题的能力;③培养学生实验操作能力;④提高学生收集资料和语言表达能力。 2.3 情感目标①通过探究温度对酶活性影响的因素,培养学生的探索精神、创新精神和合作精神;②培养学生实事求是和严谨的科学态度;③激发学生对生物科学的兴趣和热爱,培养学生理论联系实际。 3 课前准备 3.1 实验材料用具的准备①质量分数为2%的新配制的淀粉酶溶液;②质量分数为3%的可容性淀粉溶液;③热水,蒸馏水,冰块,碘液,菲林试剂。④试管,量筒,大烧杯,小烧杯,滴管,试管架,酒精灯,三脚架,石棉网,温度计,火柴。 3.2 寻找资料请同学上网或上图书馆找资料,内容为:除温度外还有哪些条件影响酶的活性?酶与社会的联系,酶与人类生活的关系,酶的活性与动物体内环境的相对稳定有什么关系。 4 实验过程 4.1 设置探究情景,提出探究课题教师设置探究情景:生活中的加酶洗衣粉的包装袋上,往往注明这种洗衣粉的适用温度范围,从而联想温度是否影响酶的活性,提出探究课题:设计一个探究温度影响淀粉酶活性的实验。 4.2 介绍科学探究的方法,引导学生设计探究实验方案因为我校学生的实验动手能力差,平时课上又很少进行探究实验,所以教师明确地把科学探究的步骤告诉学生:提出问题→作出假设→设计实验→实验探究→阐述和交流实验结果与结论。有利于学生按照正确的

影响淀粉酶活性因素

温度、PH值、金属离子等均能影响酶的活度,具体表现在以下几个方面: ①温度: 由于酶对热是不稳定的,所以在不同的温度下,酶的活度是不同的。低温时,酶的活度很低,随着温度的升高,酶的活度逐渐增加,在某一温度下,酶的活度表现最高,此温度称为这种酶的最佳温度。 所谓稳定温度是指酶在该温度范围内是稳定的,不发生或极少发生失活现象。 每种酶都有它的稳定温度和作用最佳温度。酶退浆应选择所用酶的最佳温度,以使酶的活性及活性的稳定性都具有较大的数值。 胰酶的耐热性较差,稳定温度若低于35℃,高于55℃,则即失活,它的最佳温度为40~55℃,而BF-7658淀粉酶的耐热性高,40~85℃活性较高,20℃时也有较高的活性,当温度为100℃时,其活性尚未完全消失。酶的最佳温度可因加入某些活化剂而提高。同时可因与淀粉作用的时间不同而不同。 表BF-7658淀粉酶的最佳温度与作用时间的关系 与淀粉作用时间(min)作用最佳温度(℃) 60 70 30 80 15 90 2-3 100

由表可知,BF-7658淀粉酶的最佳温度随反应时间的缩短而提高。在实际生产中,经常采用短时间高温的处理工艺。如BF-7658淀粉酶在55~60℃轧酶后,再用汽蒸或热浴处理来求得快速退浆,使生产连续化,其机理是酶的破坏瞬间也是酶发挥最大作用的时间。 ②pH值: pH值对酶的活性影响很大,不同PH值下测得酶的活度及稳定性是不同的。 酶具有最大活性与最大稳定性所需的PH值是不同的,但适当选择可兼顾活度与稳定性。BF-7658淀粉酶在PH6.0~6.5范围内,其活度与稳定性可以兼顾。胰酶在PH为6.8~7.3范围内,其活度与稳定性可兼顾。 ③活化剂与抑制剂: 淀粉酶对淀粉的消化作用常受到一些药品的影响而变得活泼或迟钝,这种现象叫活化(激化)或阻化(抑制),这种化学药品称为活化(激化)剂或阻化(抑制)剂。例如一些轻金属盐类,都是活化剂,其中较常用的是氯化钠和氯化钙。所以为了提高酶的活性,酶退浆时可用适当的硬水(含有一定量的Ca+、Mg1+等离子),而不必加软水剂。而一些重金属盐类如Fe3+、Cu2+、Hg2+、Ag+、Zn2+等离子的盐类能使活化作用减弱,所以称为抑制剂。另外,离子型的表面活性剂对酶也有抑制作用,因此,酶退浆液中若要使用表面活性剂时,只能用非离子型表面活性剂,如渗透剂JFC等。 pH值是影响酶活的主要因素。它影响酶分子构象 的稳定性,影响酶分子极性基团的解离状态,也影响 底物的解离。pH值不是酶的特定常数,它可随底物的 浓度和种类、酶的纯度、缓冲液的种类和浓度、温度、 反应时间长短以及抑制物的作用等而改变。

淀粉酶的提取要点

α-淀粉酶的提取、分离及测定 (生化试验小组-2005.4) 试验全程安排: 试验一、色谱分离淀粉酶 1.1 试剂及设备 离子交换树脂 -20℃冰箱 样品管(5-10ml试管) 1.5ml离心管 紫外分光光度计 α-淀粉酶样品 秒表 胶头吸管(进样用) 平衡缓冲液(pH8.0,0.01M磷酸盐缓冲液) 洗脱缓冲液(平衡缓冲液+0.1M,0.3M,0.5M,1.0M的氯化钠) 试剂瓶 1.2 离子交换色谱原理与方法 色谱(chromatography)是一种分离的技术,随着现代化学技术的发展应运而生。20世纪初在俄国的波兰植物化学家茨维特(Twseet)首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中,植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同因此在玻璃管中呈现出不同的颜色,这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。到1907年茨维特的论文用俄文公开发表,他把这种方法命名为chromatography, 即中文的色谱,这就是现代色谱这一名词的来源。

但由于茨维特当时没有知名度,而且能看懂俄文的人也不多,加之很快爆发了第一次世界大战,茨维特的分离方法一直被束之高阁。20世纪20年代,许多植物化学家开始采用色谱方法对植物提取物进行分离,色谱方法才被广泛地应用。自20世纪40年代以来以Martin为首的化学家建立了一整套色谱的基础理论使色谱分析方法从传统的经验方法总结归纳为一种理论方法,马丁等人还建立了气相色谱仪器使色谱技术从分离方法转化为分析方法。20世纪50年代以后由于战后重建和经济发展的需要,化学工业特别是石油化工得到广泛的发展,亟需建立快速方便有效的石化成分分析。而石化成分十分复杂,结构十分相似,且多数成分熔点又比较低,气相色谱正好吻合石化成分分析的要求,效果十分明显、有效。同样,石化工业的发展也使色谱技术特别是气相色谱得到广泛的应用。气相色谱的仪器也不断得到改进和完善,气相色谱逐渐成为一种工业分析必不可少的手段和工具。 20世纪80年代以后我国也大规模采用气相色谱和高效液相色谱。随着环境科学的发展,不仅需要对大量有机物质进行分离和检测,而且也要求对大量无机离子进行分离和分析。1975年美国Dow化学公司的H.Small等人首先提出了离子交换分离抑制电导检测分析思维 即提出了离子色谱这一概念离子。色谱概念一经提出便立即被商品化产业化由Dow公司组建的Dionex公司最早生产离子色谱并申请了专利。我国从20世纪80年代开始引进离子色谱仪器,在我国八五、九五科技攻关项目中均列有离子色谱国产化的项目,对其进行了重点技术攻关。 色谱的分类 色谱的分类有多种,主要按两相的状态及应用领域的不同可分为两大类 1. 按应用领域不同分类制备色谱半制备色谱 2. 以流动相和固定相的状态分类气相色谱、气固色谱、气液色谱、液相色谱、液固 色谱、液液色谱、超临界色谱、毛细管电泳 离子交换色谱 离子色谱分离主要是应用离子交换的原理,采用低交换容量的离子交换树脂来分离离子。它在离子色谱中应用最广泛,其主要填料类型为有机离子交换树脂,以苯乙烯二乙烯苯共聚体为骨架在苯环上引入磺酸基形成强酸型阳离子交换树脂,引入叔胺基而成季胺型强碱性阴离子交换树脂,此交换树脂具有大孔或薄壳型或多孔表面层型的物理结构以便于快速达到交换平衡。离子交换树脂耐酸碱,可在任何pH范围内使用,易再生处理,使用寿命长。缺点是机械强度差,易溶胀,易受有机物污染。 离子色谱基本流程图如下图所示:

急性胰腺炎患者的血清淀粉酶和脂肪酶的变化情况及临床价值分析

急性胰腺炎患者的血清淀粉酶和脂肪酶的变化情况及临床价 值分析 摘要:目的:探究急性胰腺炎患者的血清淀粉酶和脂肪酶的变化情况并分析其临床价值。方法:选取在我院接受急性胰腺炎治疗的146名患者,按照病因的不同将其分为三组:胆源性急性胰腺炎患者51例,酒精性急性胰腺炎患者28例,其他病因的急性胰腺炎患者67例。又按照病情的严重程度和CT检查结果将这些患者分为三组:轻度患者42例,中度患者73例,重度患者31例。通过分析患者的血清淀粉酶浓度、脂肪酶浓度以及脂肪酶浓度/血清淀粉酶浓度,得出实验结论。结果:酒精性急性胰腺炎患者的血清淀粉酶浓度明显低于胆源性和其他患者(P<0.05),三组患者的脂肪酶浓度相差不大,不具有统计学意义(P>0.05);轻度、中度、重度急性胰腺炎患者的血清淀粉酶浓度、脂肪酶浓度以及两种指标的比值均相差不大,不具有统计学意义(P>0.05)。结论:酒精性和非酒精性患者能够通过血清淀粉酶浓度来鉴别,而轻、中、重度患者则不能通过脂肪酶浓度/血清淀粉酶浓度来判定。 关键词:急性胰腺炎;血清淀粉酶;脂肪酶;临床价值 1.前言 急性胰腺炎(AP)是多种病因导致胰酶在胰腺内被激活后引起胰腺组织自身消化、水肿、出血甚至坏死的炎症反应。本次实验选取146例急性胰腺炎患者,将其按照病因(胆源性、酒精性、其他)分为三组,又按照病情程度(轻度、中度、重度)分为三组,然后分析各组患者的血清淀粉酶浓度、脂肪酶浓度、脂肪酶浓度/血清淀粉酶浓度,现报到如下。 2.资料与方法 2.1一般资料 此次实验选择2014年3月到2015年3月在我院进行过急性胰腺炎治疗的146例患者,从患者的记录资料可见,患者的年龄为20~76岁,平均年龄 47.23±0.69岁,其中男性患者有86例(58.9%),女性患者60例(41.1%)。按照《急性胰腺炎分类标准发展变迁与现状》所述的分类标准[2],按照病因将患者分为胆源性(51例)、酒精性(28例)、其他(67例)三组。另外按照病情严重情况和CT检查结果将患者分为轻度(42例)、中度(73例)、重度(31例)三组。 2.2方法 在患者入院当天,医护人员立即采集患者的筋脉血液,利用干化学法检测血液中含有的血清淀粉酶浓度(参考范围0~108U/L)、脂肪酶浓度(参考分为 23~300U/L),并分析两者的比值。 2.3观察指标 检测分析患者的血清淀粉酶浓度、脂肪酶浓度以及脂肪酶浓度/血清淀粉酶浓度。 2.4统计学分析 这次试验中,选择spss18.0对数据进行统计,采用均数±标准差( ±s)表示数据,采用t检验来比较均数,用χ2检验来比较计量资料。当P<0.05时,差异具有统计学意义。 3.结果 3.1不同病因患者的分析结果

淀粉酶活性测定实验报告

班级:植物092 姓名:徐炜佳学号:03 淀粉酶活性的测定 一、研究背景及目的 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白,几乎所有的生化反应都离不开酶的催化,所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色,因此对酶的研究有着非常重要的意义。酶的活力是酶的重要参数,反映的是酶的催化能力,因此测定酶活力是研究酶的基础。酶活力由酶活力单位表征,通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称,按照其水解淀粉的作用方式,可分为α-淀粉酶和β-淀粉酶等。α-淀粉酶和β-淀粉酶是其中最主要的两种,存在于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休眠的种子中,而α-淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。 α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,α-淀粉酶活性低的品种抗穗发芽,反之则易穗发芽。目前,关于α-淀粉酶活性的测定方法很多种,活力单位的定义也各不相同,国内外测定α-淀粉酶活性的方法常用的有凝胶扩散法、3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值法。这3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、萌动种子和面粉,获得的α-淀粉酶活性应该分别是延迟(内 二、实验原理 萌发的种子中存在两种淀粉酶,分别是α-淀粉酶和β-淀粉酶,β-淀粉酶不耐热,在高温下易钝化,而α-淀粉酶不耐酸,在下则发生钝化。本实验的设计利用β-淀粉酶不耐热的特性,在高温下(70℃)下处理使得β-淀粉酶钝化而测定α-淀粉酶的酶活性。 酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的,淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖,可用3,5-二硝基水杨酸试剂测定,由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的显色基团,将其颜色的深浅与糖的含量成正比,故可求出麦芽糖的含量。常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差,每组实验都做了相应的对照实验,在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。 在实验中要严格控制温度及时间,以减小误差。并且在酶的作用过程中,四支测定管及空白管不要混淆。

a-淀粉酶的生产与应用

α-淀粉酶的合成与应用 谷君 摘要:酶, 发酵,生产,合成,应用 关键词:生产应用 一,淀粉酶的产生菌及酶的特性 (1)淀粉酶可由微生物发酵产生,也可从植物和动物中提取,目前I业生产上都以微生物发酵法进行大规模生产淀粉酶。在 1 9 0 8年和 1 9 1 7年德国的 B o k i i n 和 F A f r o n t [ 日先后由细菌中生产出 d .淀粉酶,用于纺织品脱浆。1 9 3 7年日本的福本口获得了产生a 一淀粉酶的括革杆菌。第二次世界大战后,由干抗生素的发明,使得微生物I业大步前进, 1 9 4 9年Ⅱ - 淀粉酶开始采用深层通风培葬法进行生产。1 9 7 3年耐热性淀粉酶投入了生产r 4 3 。随淀粉酶的用途日蓝扩大,产量日见增多,生产水平也逐步提高。近些年我们国家的酶制剂行业发展较快,从 1 9 6 5年开始应用解淀粉芽孢杆菌B F 一7 6 5 8生产淀粉酶,当时仅无锡酶制剂厂独家生产,近年在国内生产酶制剂的厂家已发展到 l 2 O多个,其中约有 4 O 左右的I厂生产淀粉酶,产品也由单一的常温I业用 d 一淀粉酶,发展到现在有I业用也有食品鼓,既有常温也有耐热的,剂型上有固体的也有液体淀粉酶。酶制剂I业现已成为近代I业生产中不可缺少的组成部门,它对社会的贡献远远超过酶I业本身。 (2)世界上许多国家都以枯草杆菌,地衣芽孢杆菌生产细菌淀粉酶和米曲霉生产的真苗淀粉酶为主要产品,在工业生产中使用的菌种,最初都是从自然中得到的,通过筛选和诱变育种工作,可改变菌种的特性,提高 n 一淀粉酶的活力。O n t t r u p 以地衣芽孢杆苗AT C C 9 7 9 8为出发菌株,用 Y射线, N T G以及 uV反复 7次 诱变,使其 n 一淀粉酶的产量为原苗株的 2 5 倍。A n d r e e v a 等将枯草杆菌孢子悬浮液经 5 0 ℃加热处理 3 0分钟,酶合成速度提高了 2 —2 、 7倍,可见采用诱变育种是行之有效的方法,但也有一定的局限性和缺点,由于发生平顶效应使之育种效果降低,利用转化法改良菌种,在枯草杆菌 n 一淀粉酶的生产苗上已 取得可喜的结果 K a z u m a s a 等采用转化和诱变结合的方法.使 n 一淀粉酶产量比亲株高 l 5 0 0 - -2 0 0 0倍近年来,随生物工程技术的发展,基因工程技术已应用到菌种的改造方面。 P a l v a r 2 等把解淀粉芽孢杆菌n 一淀粉酶基因克隆到枯草芽孢杆菌中,其 n 一淀粉酶活力比其原始的野生型苗株高 5 0 0倍。 H e n a c h a n 又把地衣芽孢杆菌耐热淀粉酶基因克隆到枯草芽孢杆苗中,美国 C P C国 际公冠的 Mo f f c t 研究中心,已获得美国食品药品管理局( F DA) 的批准,可用其研制的基因工程菌生产淀粉酶,这是第一个由 F D A 批准用基因工程菌生产的酶髑剂。。我国在利用基因重组构建耐热性一淀粉酶方面已取得一定的进展,何超刚[ 3 等将脂肪嗜热芽孢杆菌淀粉酶基因质粒带人大肠杆菌,使后者具有生 产高淀粉酶能力。任大明0 将带有淀粉酶基因的克隆片段,在枯草杆菌中得到表达。朱卫民将枯草杆菌 a淀粉酶基因在大肠杆苗中的得表达。

酶标仪检测酸性 α-淀粉酶酶促动力学(DOC)

实验二酶标仪检测酸性α-淀粉酶酶促动力学 一实验目的 通过SpectraMax M5 酶标仪的演示使用,了解该型号酶标仪的结构;掌握酶标仪的操作步骤与softMax Pro v5.0.1版本软件的使用。 二实验指导要点 1.酶标仪仪器安装连接 2.仪器使用、保养注意事项 3.软件操作步骤 三仪器设备及实验材料 SpectraMax M5 酶标仪、softMax Pro v5.0.1版本软件、酸性α-淀粉酶提取液 四仪器检测参数设定 1 SpectraMax M5 酶标仪构造 酶标仪需要用专门连接线(仪器自带)与电脑连接,并有连接线两边插头、仪器背面的插口和电脑背面的9针串口(COM)。 2仪器使用、保养注意事项 电源要求:酶标仪对电源要求很高,我们要求的电源有接地,并通过不间断电源UPS来对仪器和电脑接点,防止:1)大电流的冲击,2)电压不稳,3)突然断电。 保养要求: 有良好的电源,保持24小时开机。 保持避光和干净的室内环境,维持一定的湿度(30%-80%)。 维持室内比较恒定的温度,以20-22度为最适宜。 适用6-384孔板。96孔微孔板内每孔可检测100-300ul溶液,最佳检测体积为200ul。 384孔微孔板内每孔可检测50-100ul溶液,最佳检测体积为80ul。 检测后的微孔板和比色皿不要长期置于仪器插槽中,检测完后就从仪器中取出,避免溶液蒸发腐蚀或损坏仪器内部光路系统。如果为有腐蚀性或挥发性溶液,请带盖检测。

对于可见光吸收检测,使用全透明微孔板;紫外光吸收检测,使用紫外可透全透明微孔板;荧光强度和荧光偏振,使用黑色不透明板,需要检测底读的用黑色底透微孔板;化学发光和时间分辨荧光,使用白色不透明微孔板。 3 softMax Pro v5.0.1版本软件使用 双击图标即可打开以下软件操作界面: 1)单击即可进入如下界面: 首次使用该软件,在该界面可以填写Reader的型号,包括Molecular Devices所有类型(单功能和多功能)的酶标仪。选择您所购买的那款酶标仪型号,本例为SpectraMax M5。 2)实验监测参数都设定完毕后,把微孔板或比色皿放入想对应的插槽,然后按 可以启动仪器进行监测。 3)仪器可以设定温度,均在室温以上加温。当开启温度控制后需使仪器的微孔板插槽置于关闭状态保持所设温度,如果处于打开状态,仪器会发出报警声,然后自动关闭微孔板插槽。4)该仪器有使用震荡功能,时间课设定1-999s。 4 仪器参数设定 所有对仪器的参数设定都可以在Settings 中完成。按住Settings键后出现如下对话框:

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