实验三 孚尔根染色法
植物染色体的孚尔根染色法(2021精选文档)
玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色
玉米染色体核型图(2n=20+2B)
玉米染色体核型图(2n=20+4B) /mnl/79/18rosado.htm
Rye, Secale cereale, 2n=2x=14+2B (standard B), metaphase I pairing with 5II ring + 2II rod + 1B rod, FEULGEN staining
– 在细胞内只有DNA才具有这种反应, 故可定性地鉴定细胞核内 DNA的存在。
– 这一染色方法是Feulgen和Rossenbeck于1924年首先发现和确定的, 故称孚尔根染色法。
二、实验目的
• 在熟悉火焰干燥法制片的基础上, 掌握弗尔 根染色法, 并观察有丝分裂的各个时期
三、材料、方法、器具、药品
• 当滤液冷却至26C时, 再加入10ml的1M盐酸和0.5g亚硫酸氢钠 或偏重亚硫酸钠(钾), 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 置于黑暗 低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。
• 若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动, 在4C下பைடு நூலகம்置过夜, 然 后过滤脱色。
2. 染色过程
① 取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖 材料2-3分钟。
② 将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在600.5℃的条件下水 解8-10分钟。
③ 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。 ④ 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可
过夜。 ⑤ 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 ⑥ 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45醋酸, 然后盖上盖片。 ⑦ 压片、观察。
实验三 DNA的Feulgen染色法
四、实验材料及实验器材
1. 材料 Carnoy液固定的大蒜根尖 液固定的大蒜根尖 洋葱根尖纵切永久制片 马蛔虫卵切片永久制片 2. 实验器材 显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、 显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、 剪 冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、 刀、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、镜头 青霉素瓶、吸管、烧杯、量筒。 纸、青霉素瓶、吸管、烧杯、量筒。
植物细胞的细胞质分裂
洋葱根尖纵切永久制片观察（同大蒜根尖） 2 洋葱根尖纵切永久制片观察（同大蒜根尖） 3 马蛔虫受精卵切片永久制片观察 马蛔虫是真核生物中染色体数目最少的物种， 马蛔虫是真核生物中染色体数目最少的物种，二倍体马 蛔虫的染色体数目为2条或4 三倍体为6 蛔虫的染色体数目为2条或4条，三倍体为6条。在观察切 片时要注意所观察卵的染色体数目的不同。 片时要注意所观察卵的染色体数目的不同。 注意 ： 1)马蛔虫受精卵是动物细胞，在细胞分裂过程中与植物细 马蛔虫受精卵是动物细胞， 马蛔虫受精卵是动物细胞 胞有所不同。首先最明显的不同就是， 胞有所不同。首先最明显的不同就是，植物细胞的赤道板 在后期可形成细胞板，而动物细胞却不能。 细胞的整体 在后期可形成细胞板，而动物细胞却不能。2)细胞的整体 分裂形式也不太一样，植物细胞是细胞板的缢裂， 分裂形式也不太一样，植物细胞是细胞板的缢裂，动物细 胞是细胞膜中部向内凹陷缢裂成两个子细胞。 再有 再有， 胞是细胞膜中部向内凹陷缢裂成两个子细胞。3)再有，高 等植物细胞内没有中心体。马蛔虫的细胞内有中心体， 等植物细胞内没有中心体。马蛔虫的细胞内有中心体，在 有丝分裂过程中，中心体会进行复制，然后发出星射线ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 有丝分裂过程中，中心体会进行复制， 引染色体等等。 引染色体等等。
植物染色体的孚尔根染色法
四、实验步骤
1. 希夫试剂的配制
• 将0.5g碱性品红徐徐加入煮沸的 碱性品红徐徐加入煮沸的100ml蒸馏水中 用玻璃棒搅拌 蒸馏水中, 碱性品红徐徐加入煮沸的 蒸馏水中 用玻璃棒搅拌, 使之充分溶解, 待溶液冷却至58°C左右 过滤于棕色瓶中。 使之充分溶解 待溶液冷却至 ° 左右, 过滤于棕色瓶中。 左右 • 当滤液冷却至 °C时, 再加入 当滤液冷却至26° 时 再加入10ml的1M盐酸和 盐酸和0.5g亚硫酸氢钠 的 盐酸和 亚硫酸氢钠 或偏重亚硫酸钠(钾 摇动, 溶解后密封于棕色瓶中, 或偏重亚硫酸钠 钾), 摇动 溶解后密封于棕色瓶中 置于黑暗 低温处。次日检查溶液颜色, 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 低温处。次日检查溶液颜色 须呈无色透明或淡茶色才可使用。 • 若稍呈红色可加入 若稍呈红色可加入0.5g活性炭连续摇动 在4°C下静置过夜 然 活性炭连续摇动, 下静置过夜, 活性炭连续摇动 ° 下静置过夜 后过滤脱色。 后过滤脱色。
2. 染色过程
① 取固定好的根尖, 用水洗2-3分钟, 放入室温条件下的1N HCl处理根尖 材料2-3分钟。 ② 将根尖换入60℃预热的HCl, 置于恒温水浴中, 在60±0.5℃的条件下水 解8-10分钟。 ③ 吸出热HCl, 换入室温1N HCl再处理1-2分钟, 然后水洗2-3次。 ④ 吸净水分, 加入Schiff试剂, 盖上盖子, 在黑暗条件下染色30分钟, 也可 过夜。 ⑤ 用水漂洗, 去掉细胞中残存的一些有色的品红分子。 ⑥ 取根尖置载玻片上, 用镊子夹碎后, 加一滴45%醋酸, 然后盖上盖片。 ⑦ 压片、观察。
玉米染色体核型图(2n=20), Feulgen 染色
玉米染色体核型图(2n=20+2B)
玉米染色体核型图(2n=20+4B) /mnl/79/18rosado.htm
DNA的原位显示—Feulgen染色法
Carnoy固定液：3份95%酒精加入1份冰醋酸。固定显 示DNA、RNA的效果好
，否则会使染色剂浓度降低。
• 漂洗时，所用的亚硫酸水，最好在每次实验前
临时配制，以便保持较浓的SO2。
• 加盖玻片时，切勿用力过大。
『其他固定液』
Flemming固定液：1%铬酸水溶液 25ml，1%冰醋酸 （用前加入）10ml，蒸馏水 60ml
Champy固定液：3%重铬酸钾 70ml，1%铬酸 70ml，2% 锇酸 40ml
『实验原理』 DNAຫໍສະໝຸດ 弱酸（1M的HCL）水解，其上的嘌呤碱和脱氧
核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛 基，这些醛基在原位与Schiff试剂（无色品红亚硫酸 溶液）反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA 的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应 产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具
『思考题』
欲得到一张好的Feulgen反应制片，制片过程 中应注意些什么？
• 水解是本实验成败关键之一。水解时间和温度
一定要合适，如果温度过高或时间过长，造成 水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流 失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基， 都不能呈现颜色反应。
• 用Schiff试剂染色前，蒸馏水的残留不宜过多
4、Schiff液黑暗条件下染色30-50min（避光: 因为生成不稳定的物质，见光很容易分 解）。
5、用新配制的亚硫酸氢钠溶液洗3次，每次 约5min。（洗去无色品红，在自然条件下 易还原为碱性品红）
6、用清水洗2次，每次2min。 7、取一根尖置于载玻片上，切下生长区部位
孚尔根染色
孚尔根染色法中Schiff试剂配方的研究一、实验目的1、进一步深入了解孚尔根染色的基本原理2、探究尝试用非传统的方法配置Schiff试剂并观察其染色效果二、实验原理DNA是遗传的物质基础，应用Feulgen反应法显示细胞DNA是常用的组化染色技术，其中Sehitt试剂是染色成败的关键因素。
Sehiit试剂(希夫试剂)，又称品红醛试剂，与醛类反应呈紫红色。
它有多种不同的配制方法，归结起来有经典热配法以及冷配法。
实验室经常采用的热配法，配制过程繁琐，常会因一个步骤的偏差而造成配制失败，实验中尝试改用冷配法，可收到与热配法同样的染色效果。
Schiff试剂的主要成分是碱性品红，属三氨基三苯甲烷类，它由副品红、品红、二号碱性品红组成四。
碱性品红在酸性环境下与亚硫酸盐作用，生成无色品红。
其配制方法有2种：热配法(将碱性品红加热煮沸)是通过热效应来加速分子运动，使染料溶解与脱色；冷配法(室温下采用振荡或搅拌的方法)是通过增加分子间的碰撞，促进染料溶解与脱色。
2种方法的反应机制相同。
三、实验器材实验材料：蚕豆根尖实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、电炉、滤纸、烧杯、纱布、量筒、锥形瓶、标签、刀片、容量瓶实验药品：蒸馏水、卡诺氏液、0.1mol/L的盐酸、碱性品红、盐酸、偏重亚硫酸钠、活性炭。
四、实验方法1.浸种催芽选择无虫、饱满、大小均匀的蚕豆种子50粒放入蒸馏水的烧杯中， 25℃浸泡24h,其中换水1次。
种子吸胀后，在培养皿中铺一层脱脂棉，倒入足量的蒸馏水，将种子置于其中25 ℃培养2至3天，期间随时补充水分，大部分初生根长至1～2cm左右。
2.不同试剂配置1. 热配法（常规法）称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角瓶），时时振荡，继续煮5min（勿使之沸腾），充分溶解。
然后冷却致50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/L HCl，冷却致25℃时，加入0.5g偏重硫酸钠，充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h（有时需要2至3天），使其颜色退至淡黄，然后加入0.5g 活性碳，用力振荡一分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。
实验三孚尔根染色法
实验三孚尔根染色法一、实验原理染色体是遗传物质的载体，它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol?1-1HCl处理后，不仅使分生组织的细胞彼此分离，而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，脱氧核糖上的醛基暴露，形成含醛基的无嘌呤结构物，醛基与希夫试剂反应显紫红色。
细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DN A)的存在，并广泛应用于核及染色体的研究中。
二、实验目的学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。
三、实验材料、用具及药品1．材料：洋葱或大蒜的根尖2．用具显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、烧杯、量筒、3．药品希夫氏试剂(无色碱性品红液)、漂洗液、1m ol?1-1 HCl、45％醋酸等。
四、实验步骤1. 取材与固定：待大蒜根尖长1cm时，于上午8时剪下根尖，经过预处理后投入卡诺固定液中固定2-24h。
固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。
2.水解试管1：取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，换1N H Cl洗一次，倾去，换入预热60℃的1NHCl 浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟（视材料而定，水解时间可以从10分钟延长至30分钟）。
然后吸去热1N HCl，换入冷1N HCl洗一次，再用清水将根尖洗三次。
试管2（对照）取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，入预热60℃的蒸馏水浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟。
《孚尔根核染色》课件
染色过程
孚尔根核染色包括几个关键步骤：细 胞固定、细胞通透性处理、DNA氧化 、染色和观察。
染色过程需要在弱酸条件下进行，以 促进DNA的氧化和后续的染色反应。
在染色过程中，需要使用特定的染料 ，如Giemsa染料或巴尔巴土染料，这 些染料能够与DNA-蛋白质加合物结 合，产生明显的染色效果。
染色效果
政策支持
政府可以出台相关政策， 支持孚尔根核染色技术的 研发和应用，促进其发展 壮大。
感谢您的观看
THANKS
该技术可用于DNA多态性分析 ，有助于研究基因变异与疾病 的关系。
技术局限性
1 样本量要求
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
2 交叉污染风险
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
3 假阳性结果
孚尔根核染色技术需要一定量的样本才能进行检测，对 于微量样本可能存在限制。
减少人工操作误差。
降低成本
通过优化试剂和设备， 降低检测成本，使更多 实验室和医疗机构能够
应用该技术。
05
孚尔根核染色技术的未来发展
技术发展趋势
自动化与智能化
随着机器人技术和人工智能的发展，孚尔根 核染色技术将逐渐实现自动化和智能化，提 高染色效率和准确性。
环保与可持续发展
随着环保意识的提高，未来的孚尔根核染色 技术将更加注重环保和可持续发展，减少对 环境的污染和资源消耗。
《孚尔根核染色》PPT课件
目录
• 引言 • 孚尔根核染色技术原理 • 孚尔根核染色技术的应用 • 孚尔根核染色技术的优缺点 • 孚尔根核染色技术的未来发展
01
引言
核染色技术简介
孚尔根反应
实验九 孚尔根反应（Feulgen Reaction）Feulgen反应（Feulgen reaction）是显示DNA的最典型的组织化学反应，是学者Feulgen和Rossenbeck 在1924年首次发明出来的，简称为Feulgen法。
因对DNA的显示反应具有高度专一性，因此常常被用来显示细胞内DNA的分布情况。
实验目的1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法2. 对细胞的免疫组化研究方法有一初步的认识实验原理自Feulgen等发明出显示DNA的Feulgen反应方法以来，其作用机制也久经研究和讨论，现已基本取得共识。
其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。
Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。
也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。
其反应机制如下图所示。
2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3实验用品一、材料 香柏油5瓶，擦镜纸5本，镊子5把，盖玻片20片，用carnoy's固定液固定的肝脏和精巢切片20片。
二、试剂1. schiff氏试剂将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中，时时摇动玻璃瓶，煮沸5min 使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)无水亚硫酸钠(NaHSO3)，在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天)，使其颜色退至淡黄色，密封瓶口，藏于暗处，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。
在使用前加入0.5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤，滤液应为无色；若液体颜色变为粉红色，便不能再用。
2. 亚硫酸水(洗涤剂) 用200ml普通自来水(不要用蒸馏水, 以免引起误差)、10ml 10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，现用现配。
富(孚)尔根(Feulgen)核染色
立即投入固定剂中，借助化学药品的作
用，使细胞保持原有形态结构的一种手 段。
固定的目的
迅速防止细胞的死后变化，防止自溶、腐败，
尽量保持生长状态结构。 使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变 为不溶性物质，以保持生前状态。 使组织内各种物质成分产生不同的折射率，便 于鉴定、观察。 使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于 染色。 防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结 构。
实验 二 植物有丝分裂的孚尔根 (Feulgen)核染色观察
实验目的
掌握孚尔根核染色的方法。 了解孚尔根染色的原理。
有丝分裂
实验原理
浮尔根染色法是鉴别细胞中DNA的组织
化学方法. DNA—１ＮHCl,60OC水解,部分地破坏核 糖与嘌呤之间的糖苷键—嘌呤碱脱掉—核 糖的C1上的醛基呈游离态—与Schiff试剂 的无色亚硫酸品红分子反应——呈现为紫 红色的化合物。
能减少细胞质着色对观察的影响。在细胞学研
究中普遍采用
Schiff试剂 的组成及配制
Schiff试剂 ：即无色亚硫酸品红。 配制方法：溶解1g碱性品红于200ml煮沸的重蒸
水中，轻轻摇动，继续煮5min使其完全溶解，
冷却至55-50℃时过滤到棕色带塞子的玻璃瓶中，
加入1N HCl 20 ml，继续冷却至25 ℃左右，再
根尖形态与结构成熟区H XI UNIVERSITY伸长区
分生区
根冠
注意事项
Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取
Schiff试剂的吸管。
黑暗条件下染色。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝
分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
孚尔根(FEULGEN) 染色
Schiff 试剂的配置
称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶）， 时时振荡，继续煮 5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。然 后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1N HCl，冷却至 25℃时，加入0.5g Na2S2O5（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡 后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24小时（有时需2～3天）， 使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力振荡1分钟， 最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应 为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不 能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之 再转变为无色时，仍可再用
反应原理
样品经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤 碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛 基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应， 形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色 团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经 稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用， 可与无色品红结合形成紫红色化合物，从 而显示出DNA的分布。
操作方法及步骤
以Feulgen染色法观察洋葱根尖有丝分裂为例
•1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1N HCl中， 加热到60℃水解8～10 min。 • 2．蒸馏水水洗。 •3．Schiff试剂遮光染色30min。 •4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次 1min。 • 5．水洗5min。 •6．将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖 玻片，压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。 • 7．显微镜检查。 结果：细胞中凡有DNA的部 位应呈现紫红色的阳性反应。
孚尔根染色法的反应原理主要与Schiff试剂的化学性质有关，此试剂的基本 成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸.碱性品红的主要成分是 三氨基三苯甲烷氯化物。
实验三、DNA的原位显示--福尔根染色法
实验三、DNA的原位显示--福尔根染色法一、实验目的1 了解和学习两类核酸显示的原理及操作程序。
2 了解细胞中DNA和RNA的分布。
二、反应原理1．Feulgen反应：DNA经弱酸（1mol/L HCl）水解后，嘌呤碱与脱氧核糖间的糖苷键被打开，并且使脱氧核糖与磷酸间的磷酯键断开，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。
醛基在原位与Schiff（无色品红亚硫酸溶液）试剂结合，形成紫红色化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。
紫红色的产生是因为反应产物的分子内有醌基（醌基是一个具有颜色的发色团），所以凡含有DNA的部位，就呈紫红色。
而RNA用此法处理后则分解。
反应式如下：2．Unna染色法：1899年Pappenheim 首创了甲基绿-哌洛宁（mehtyl-green-pyronim）染色法。
1902年Unna对这一方法进行了改良。
1940年Brachet研究证明用甲基绿—哌洛宁对DNA和RNA有选择性的染色效果。
碱性的甲基绿-哌洛宁混合染料处理细胞后，由于DNA、RNA对染料具有的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。
DNA被甲基绿染成绿色，RNA 被哌洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。
三、材料、试剂和仪器1．材料洋葱根尖，洋葱鳞茎表皮细胞2．试剂1）Carnoy固定液：无水乙醇：冰醋酸 = 3：12）95% 乙醇3）70% 乙醇： 95% 乙醇 70mL 加水 25 mL4) 5% 三氯乙酸(TCA)：固体TCA 5g，加水溶解到100 mL。
5) 1N HCl (当量盐酸)6) Schiff 试剂：煮沸200mL 水，稍冷放入1g 碱性品红，充分搅拌有助溶解，50℃时过滤，置磨口棕色瓶内，向滤液中加1N HCl 20mL ，待25℃时加亚硫酸氢钠或亚硫酸钾 1g ，盖严放暗处，静止勿动，几天后，红色稍退，溶液呈无色或淡黄色，即可使用，如有红色，可加一勺活性炭，振荡过滤，黑布罩好。
期末实验 孚尔根染色法和植物染色体标本的制备
期末实验孚尔根染色法和植物染色体标本的制备207.12.1 6.结果与分析6.1结果（1）孚尔根染色结果图1.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×10倍）图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色结果（10×40倍）①结果描述：在光学显微镜下，洋葱根尖细胞被均匀地压成了单层细胞，细胞分布较为均匀，变形细胞较少。
DNA成功被染上紫色，染色较深，视野背景为白色无红色颗粒较为清晰，视野中无气泡。
处于分裂时期的细胞约占10％，分裂期的细胞染色体染色较深，而分裂间期的染色较浅，中间有1-3个白斑为核仁。
②结果评价：较成功③结果分析：在物镜10倍观察下可以清晰反映出压片的结果与染色的情况。
在压片前要注意用亚硫酸水把染液冲洗干净，防止背景一片红，不利于观察，压片时先把根尖捣碎，防止细胞堆积；在压片时要固定好盖玻片防止盖玻片与载玻片之间发生摩擦，防止细胞变形，同时也要注意力度的把握和敲击的方向，垂直敲打，且从中间到边缘。
染色的时间要足够长，这是我实验时制作的第二张装片，染色时间为18min,第一张为10min，染色较浅，不利于观察。
视野中，由于分裂期的染色质高度螺旋为染色体，DNA浓度较高，所以分裂期的染色体染色较深，而分裂间期的细胞，DNA分裂较为均匀，所以染色较为均匀且相对浅，中间的白斑为核仁，因为核仁中主要为rRNA，所以不被染成紫色。
A B C DE F G HI J K LM N O P图2.洋葱根尖分生区孚尔根DNA染色有丝分裂过程（10×40倍）①结果描述：A间期:DNA均匀分部于细胞核中，核仁明显，为透明发亮圆形，可见1—3个。
B-E前期：细胞核膨大，染色质缩短变粗，晚前期（D、E）核仁、核膜消失。
F-G中期：染色体缩短变粗，形成姐妹染色单体，整齐排列与赤道板上。
H-L后期：着丝粒分裂，姐妹染色单体分离，分别移向细胞两极。
M-P末期：染色体解旋为染色质，核仁核膜重新出现，细胞中间形成细胞板。
孚尔根
课程名称：细胞生物学指导老师：成绩：__________________实验名称：孚尔根染色同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、实验材料与试剂（必填）四、实验器材与仪器（必填）五、操作方法和实验步骤（必填）六、实验数据记录和处理七、实验结果与分析（必填）八、讨论、心得一、实验目的1.以Feulgen染色法为例学习细胞化学方法检测细胞核DNA的原理和方法；2.观察DNA在细胞内的分布。
二、实验原理孚尔根反应分为水解和显色两个步骤。
在水解过程中，细胞中DNA经1N60℃盐酸水解后，DNA双螺旋结构中的嘌呤与脱氧核糖之间的连接打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff氏试剂作用，形成紫红色的三苯甲烷衍生物。
Schiff试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。
紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。
因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。
但是，细胞中除了DNA酸解会产生醛基之外，多糖等物质也会产生醛基，此外细胞中可能还有自由醛基，但多糖的醛基不会再该反应条件下裸露，而且自由醛基可被盐酸消除；此外，细胞中的RNA也不被染色。
目前认为，RNA的N-糖苷键较为稳定，在孚尔根反应的酸解条件下，其嘌呤碱基不会易被脱去。
故只有DNA不完全水解出来的醛基才能与Schiff试剂反应生成紫红色产物；由于线粒体，叶绿体的结构原因，内部的DNA也不被染色。
从而，孚尔根反应时对细胞中核DNA高度专一的一种检测手段。
材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
三、实验材料与试剂器材：显微镜、盖玻片、染色缸、眼科剪、解剖刀、镊子、水浴锅试剂：Schiff试剂，亚硫酸水溶液，1mol/L HCl，5%三氯醋酸材料：洋葱鳞茎四、实验步骤1.撕取小块洋葱内表皮，放入10mL预热的60°C的1mol/L HCl中温育水解8-10分钟。
实验三孚尔根反应
实验三孚尔根反应实验三孚尔根(Feulgen)反应⼀、实验⽬的：（1）熟悉并掌握孚尔根反应得原理及实验操作⽅法。
（2）对细胞的免疫组织化学研究⽅法有⼀初步的认识。
⼆、实验原理：标本经稀盐酸⽔解后，DNA分⼦中的嘌呤碱基被解离，从⽽在核糖的⼀端出现了醛基。
Schiff试剂中的⽆⾊品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分⼦，因醌基为发⾊团，故可呈现出紫红⾊。
也就是说，DNA经稀酸⽔解后产⽣的醛基，具有还原作⽤，可与⽆⾊品红结合成紫红⾊化合物，从⽽显⽰出DNA的分布。
三、实验⽤品：1、材料：镊⼦、盖玻⽚、⽤carnoy固定液固定的肝脏切⽚。
2、试剂：（1）schiff试剂1瓶。
（2）亚硫酸⽔（洗涤剂）3瓶。
（3）1mol/L HCl(⽔解)1瓶。
（4）1％亮绿1瓶。
（5）30％，50％，70％，85％，95％，100％的酒精各1瓶，100%的酒精2瓶。
（6）⼆甲苯3瓶。
3、器材：显微镜、⽴式染⾊缸。
四、实验⽅法：1、脱⽔：依次经过95%酒精两次，每次20-30分钟；100%酒精两次，分别为30分钟、40分钟。
2、制⽚：⼆甲苯透明，⽯蜡包埋，切⽚6-7µm，动物胶（明胶）贴⽚，烘⼲。
在贴⽚时应滴加1-2滴10%甲醛予以固定，否则很容易脱⽚。
（以上两部实验前已经准备完成）3、脱蜡：将制⽚经⼆甲苯Ⅰ（20分钟）和⼆甲苯Ⅱ（10分钟）将⽯蜡脱净。
4、复⽔：将制⽚分别放⼊100％Ⅰ，95％，85％，70％，50％，30％的酒精各5分钟，再放⼊蒸馏⽔中10分钟，然后⽤1mol/L HCl冲洗⼀下。
5、⽔解：将制⽚放⼊已温浴⾄60℃的1mol/L HCl溶液⽔解8分钟（对照不⽔解），然后⽤蒸馏⽔洗3次。
6、染⾊：⽤schiff试剂染⾊1个⼩时。
7、洗涤：⽤亚硫酸溶液⽔洗3次，每次3分钟。
8、⽔洗：⽤蒸馏⽔洗3-5次。
9、复染：⽤1％亮绿复染数秒（3个制⽚所⽤时间依次为20s、30s、50s），然后⽤蒸馏⽔洗2次，每次5分钟。
孚尔根反应
孚尔根反应实验目的1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法2. 对细胞的免疫组化研究方法有一初步的认识实验原理标本中DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与Schiff试剂中无色品红结合形成紫红色化合物（含醌基），从而显示出细胞中DNA的分布。
2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3实验用品一、器材显微镜、立式染色缸、水浴锅二、材料香柏油，擦镜纸，镊子，盖玻片，用carnoy's固定液固定的肝脏切片。
三、试剂1. schiff氏试剂2. 亚硫酸水(洗涤剂，现配现用) 用200ml普通自来水(不要用蒸馏水, 以免引起误差)、10ml 10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合。
3. 1mol/L HCl(水解用) 取82.5ml比重为1.19的盐酸加蒸馏水1000ml即成(应将盐酸缓缓加入水中)。
4. 1%亮绿(light green) 亮绿1g，溶于100ml蒸馏水中。
5. 30%、50%、70%、85%、95%、100%的梯度酒精及二甲苯。
实验方法1. 取材与固定2. 脱水3. 制片（已完成）4. 脱蜡将制片经二甲苯I(20 min)和二甲苯II(分别10 min、12min、14min)将石蜡脱净，再经100%、95%、85%、70%、50%、30%的酒精5各min，最后放入蒸馏水中（10 min）。
5. 水解先将制片放入一盛有1 mol/L HCl的染色缸内，清洗一下，然后将载片放入已温浴至60℃的1 mol/L HCl溶液中水解8 min。
水解后很快将标本取出，放入室温1 mol/L HCl 溶液中。
注意: 这个步骤非常重要，必须用1 mol/L稀盐酸冲洗，因为它可以洗去贴在切片上的试剂的痕迹。
如用蒸馏水冲洗，则试剂本身也可以水解，所释放出的碱性品红，可以使切片内一切嗜碱性物质皆染色从而引起严重的错误。
若切片较厚，可延长其水解时间，而且每次均需更换洗涤剂。
feulgen染色法
feulgen染色法Feulgen染色法是一种细胞核染色的技术，是由德国生物学家弗朗西斯·费尔根（Robert Feulgen）在1914年发明的。
该技术的主要原理是利用増感反应特异性亲合性使DNA成为已知物质之一的二硫化物发生比较强的发色反应，因而得名 Feulgen 染色法。
Feulgen染色法以弗洛分离作为基础原理，对细胞内的核酸进行染色，并通过显微镜观察、分析和研究细胞发生分裂的相关特征。
该方法能够比较准确的区分细胞核与其他成分，尤其是有机质成分。
因此，Feulgen染色法在细胞学、细胞遗传学、组织学等领域中都有广泛的应用。
下面是 Feulgen 染色法的步骤：1. 细胞固定将要检测的细胞固定于载玻片上， Feulgen 染色法通常使用3.7%的甲醛作为固定液，使DNA在细胞和载玻片上不再发生运动和变化。
2. 酸解样品的酸解可以利用鹰嘴豆素和酸来进行。
这一步旨在剥离细胞的蛋白质并让核酸暴露在表面上，使其改变成醛基结构，以便接下来的染色成分与核酸相互作用。
3. 饱和无水硝酸样品用饱和无水硝酸处理，以去除酸中不必要的离子，同时也可以使其完成DNA的醛基反应。
4. Feulgen 组合液染色细胞样品将在染色溶液中放置2至10分钟，然后被放置于高氯酸中洗涤。
洗后，样品将被去水、除脂和用玻片覆盖。
5. 显微镜下观察使用荧光显微镜观察样品，利用目镜下特殊荧光物质的作用，可以使核酸发亮，显露出来并被直接观察到。
总的来说，Feulgen 染色法是一种快速、准确的核酸染色方法，可用于在细胞组织学、细胞遗传学和生物亚细胞学等领域中快速、准确地检测DNA的含量，为对生命现象的研究提供了有效的工具。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、实验原理
染色体是遗传物质的载体，它的主要化学成分是脱氧核糖核酸(DNA)，DNA系核苷酸的多聚体，核苷酸又由碱基脱氧核糖和磷酸所组成，当细胞经60℃、1mol?1-1HCl处理后，不仅使分生组织的细胞彼此分离，而且可以破坏核内DNA链上的嘌呤碱与脱氧核糖之间的糖苷键，嘌呤脱下，脱氧核糖上的醛基暴露，形成含醛基的无嘌呤结构物，醛基与希夫试剂反应显紫红色。细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应，因此所以根据紫红色出现的部位就可鉴定脱氧核糖核酸(DNA)的存在，并广泛应用于核及染色体的研究中。
四、实验步骤
1. 取材与固定：待大蒜根尖长1cm 时，于上午8时剪下根尖，经过预处理后投入卡诺固定液中固定2-24h。固定后，保存在70%的酒精中，放入冰箱中冷藏供用。
2.水解 试管1：取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，换1N HCl洗一次，倾去，换入预热60℃的1N HCl 浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟（视材料而定，水解时间可以从10分钟延长至30分钟）。然后吸去热1N HCl，换入冷1N HCl洗一次，再用清水将根尖洗三次。试管2（对照）取大蒜根尖数条，投入试管，先用清水洗3次，入预热60℃的蒸馏水浸没根尖，放入恒温水浴锅中在60±0.5℃下水解10分钟。以下各步骤两试管相同。（水解是本实验成败的关键之一。重要的是温度，应保持在60±0.5℃之间。如果温度过高或时间过长，造成水解过度，醣与醛基之间的键被破坏，醛基流失到水解液中，反之，不能出现潜在的醛基，都不能呈现颜色反应。）
2.比较根尖经盐酸水解处理与否所获称1g碱性品红于200ml煮沸的蒸馏水中，5分钟后断电使其冷却至55～50℃，过滤到一个棕色的试剂瓶中，加入1N HCl 20ml，继续冷却至25℃，加入3g偏重亚硫酸钠，摇动瓶子使其溶解。密闭瓶口，置黑暗低温处或冰箱内（4℃左右），18～24小时后检查，试剂如透明无色或呈浅黄色时即可使用。如有不同程度的红色未褪，可加入1g活性炭，强烈震荡一分钟，仍在低温下静置过夜，然后用滤纸过滤后使用。密封瓶口，包以黑纸，在5℃以下冰箱内可以保存半年。
2．漂洗液 在200ml蒸馏水中，加入10ml 1N HCl 和10ml 10%亚硫酸钠溶液。此液在临用前配制。
3．1N HCl 准确量取86.2ml浓盐酸（比重1.18）加入到913.8ml蒸馏水中。
二、实验目的
学习和掌握孚尔根反应染色法，鉴定植物细胞核内染色体上DNA的存在。
三、实验材料、用具及药品
1．材料：洋葱或大蒜的根尖
2．用具 显微镜、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、冰箱、温箱、天平、载玻片、盖玻片、吸水纸、吸管、烧杯、量筒、
3．药品 希夫氏试剂(无色碱性品红液)、漂洗液、1mol?1-1 HCl、45％醋酸等。
3. 染色 两试管中均滴加希夫试剂，浸没根尖，立即置于暗处处理0.5—1h，然后用漂洗液换洗3次，每次2min；再用蒸馏水换洗2次，每次2min。
4. 压片镜检。分别取上述两试管中的根尖，置于载玻片上，滴加1滴45%醋酸，然后压片镜检。
〖注意事项〗 注意水解时间和温度。
五、作业
1.经孚尔根染色的压片，用指甲油将盖玻片的四周封固成临时片，储于冰箱中。