详细-WhatMan滤纸及应用
蛋白转膜
仪器及试剂电转槽，电泳仪，0.45um（适用于20KD以上蛋白）及0.22um（适用于20KD 以下蛋白）孔径的PVDF膜，切成略大于凝胶大小，两张Whatman 3MM 滤纸，切成与凝胶大小，甲醇（100%），DD水试剂配制CAPS电印迹缓冲液（母液）10×CAPS（100mmol/L）CAPS 22.13g加去离子水至900ml用2mol/L NaOH （约20ml）将pH值调至11.0，然后定容至1L，贮存于4ºC。
CAPS电印迹缓冲液（工作液，含10％甲醇的1×CAPS，临用前混合）10×CAPS 200ml甲醇200ml去离子水1600ml染色液0.1％考马斯亮蓝G-25040％甲醇/1％乙酸脱色液50%甲醇1 . 转膜操作1.1 制备足够的转移缓冲液以充满电转槽，一次大概1L就行。
1.2 从玻璃板上取下凝胶，去除所有浓缩胶。
1.3 将凝胶侵入电转缓冲液30min。
1.4 滤纸在电转缓冲液中浸泡1 min。
1.5 准备膜，在甲醇中浸泡15s，膜均匀地由不透明变成透明，然后将膜放于DD水中5min，再小心将放于转移缓冲液中平衡10min。
2. 组装转移叠层2.1 打开转移夹子，黑孔板朝下，放一块泡沫（纤维）垫子，泡沫垫子用缓冲液泡一下。
2.2 在泡沫垫上放一张滤纸。
2.3 将凝胶放在滤纸上。
2.4 将膜放在凝胶上。
（如果有气泡，可以用玻璃棒轻轻赶一下。
）2.5 在叠层上再放一层滤纸。
2.6 在滤纸上再放一块泡沫垫子。
2.7 合上转移夹子。
此操作最好放在转移缓冲液中进行3. 蛋白质转移3.1 将转移夹放入转移槽中，黑孔板面对准支撑板的负极（黑色），白孔板对准支撑板的正极（红色）。
3.2 在转移槽中加入适量缓冲液，确保将转移槽全部浸没。
3.3 将黑色阴极引线插入转移装置的阴极插孔，红色阳极插入阳极插孔。
3.4 连接阳极和阴极引线对应的电源输出端。
3.5 装置冷却单元，确保电转在低温下进行。
新华1-5号滤纸片
新华1-5号滤纸片WHATMAN定性滤纸用于定性分析技术中鉴定物质的性质。
折叠好的定性滤纸与相同型号平整的小组相比，回忆了流速和增加了负载力。
WHATMAN定性滤纸-标准级分类Grade1（1号）:11μm 在日常过滤中最经常使用的，中等保留力的流速。
非常广泛地用于实验室应用，澄清液体。
典型地用于沉淀物的定量分析分离，如硫酸铅、草酸钙和碳酸钙。
在农业方面，它用于土壤和种子测试：在食品方面，Grade1滤纸常用于从相关液体和抽离液体分离固体食品的常规方法。
并且广泛用于教学中简单的定性分析分离。
在空气污染监测方面，有圆片和卷状可供使用，从气流中收集大气灰尘然后用光度计测量；在气体探测中滤纸用发色剂浸湿，用光反射来定量。
Grade2（2号）:8μm 比Grade1保留力略强，但过滤时间却相对长些（即过滤速度相对慢些），吸附性比Grade1强，已折叠好的为Grade2V。
除8μm大小颗粒的普通过滤之外，它额外的吸附性能也派上用场，例如，在植物生长实验中截留土壤营养，也用于监测空气和土壤测试中的特殊污染物。
已折叠好的为Grade2V。
Grade3（3号）6μm 厚度是Grade1的两倍。
负载力好，颗粒保留较小。
由于其湿强度好适合放在布氏漏斗中使用。
其高吸附性能可用作为样品的载体。
Grade4（4号）：20-25μm 非常适用于分析中常规生物液体和有机浸出物澄清的快速过滤，空气污染监测中只要求高流速但对细小颗粒收集要求不严的采样。
Grade5（5号）:2.5μm 最高效的定性滤纸，用于收集小颗粒，流速慢。
适用于化学分析、澄清悬浮物和水/泥土分析。
Grade6（6号）:3μm 流速是Grade5的两倍，但颗粒保留度相等。
常被指定用于锅炉水分析。
双圈化学分析滤纸
双圈定性滤纸
被截留沉淀需烧灰，或
滤液需做精确成分测定？
否
是
双圈定量滤纸
有高湿强要求 /需要处理截留物质？
否
是
定性滤纸
加强型定性滤纸
要求高截留能力/高稳定性？
否
是Hale Waihona Puke 定量滤纸特级定量滤纸
沉淀物颗粒非常细小？
否
是
沉淀物粗或凝胶状？
否
是
沉淀物颗粒非常细小？
否
是
沉淀物颗粒非常细小？
否
是
沉淀物粗或凝胶状？ 定性慢速滤纸 加强型定性
≥1.80
湿耐破度 （mm水柱）
≥150
定量 （g/m2）
80.0±4.0
水抽提液 pH值 6.5~7.5
亮度 （%） ≥85.0
产品货号
产品名称 pH试纸原纸
宽度 kg
39cm 99-705-039
93cm 99-705-093
125cm 99-705-125
层析纸
双圈层析纸是由精心挑选的纯棉纤维素制成，无任何添加剂，表面平整、质地均匀、机械强度高、吸附能力强、 扩散效果好、背景干扰小，结果重现性好，非常适合各类“纸上层析法”的定性和定量实验，也可进一步加工为特种 检测用纸，适用范围极其广泛。
≥85.0 ≥85.0
产品货号
产品名称 层析纸
面积 1张
60×60cm 1# 99-812-952
60×60cm 3# 99-832-952
6
关于GE医疗集团
GE医疗集团通过提供革新性的医疗技术和服务，开创医疗护理的新时代。我们在医学成像、信息 技术、医疗诊断、患者监护系统、药物研发、生物制药技术、卓越运营和整体运营解决方案等领域拥 有广泛的专业技术，能够帮助客户以更低的成本为全世界更多的人提供更优质的服务。此外，我们还 和医疗行业领袖一道，正努力通过全球政策，打造成功的、可持续的医疗体系。
滤纸的过滤实验原理
滤纸的过滤实验原理滤纸是一种常见的过滤材料，它广泛应用于实验室、工业和家庭等各种领域。
滤纸的过滤实验原理是基于物质之间的相互作用力以及滤纸孔隙结构的原理。
以下以普通滤纸为例，详细介绍滤纸的过滤实验原理。
滤纸的主要成分是纤维素，它具有一定的孔隙结构。
在制作滤纸的过程中，通过纤维素纤维之间的交错和压制，形成了大量的微小孔隙。
这些孔隙大小均匀，相互之间连接，从而形成一个连续的孔道系统。
这样的孔道结构能够在保持一定的过滤速度的同时，有效地截留固体颗粒和悬浮物质。
在滤纸的过滤实验中，溶质（待过滤的混合物）和溶剂（用于将溶质分离的溶液）经由滤纸的孔道系统，发生了一系列的相互作用，从而实现了固液分离。
具体的过程如下：1. 机械拦截：滤纸具有一定的孔隙大小，比如0.1微米~10微米，这些孔隙大小与溶质颗粒或悬浮物质的大小相比较小。
当混合物经过滤纸时，较大的颗粒或悬浮物质会被滤纸的孔道所阻挡，无法通过孔隙进入滤液中。
2. 表面吸附：滤纸的纤维素表面会存在一定的吸附作用力。
当溶质中的颗粒经过滤纸表面时，会受到滤纸表面吸附力的作用，从而停留在滤纸上。
这种吸附作用力主要由静电作用力和分子间力等所引起。
3. 空隙滞留：滤纸的孔道结构中存在不规则和弯曲的微小孔道，这些孔道是由于纤维素纤维在制作过程中的交错和压制而形成的。
当溶质经过滤纸的孔道时，会发生空隙滞留现象，即颗粒倾向于沿着孔道流动方向停留在孔道之中，而不易通过。
4. 扩散：溶质颗粒或悬浮物质在溶液中的分子会通过热力不断做无规则的热运动。
这些颗粒与溶剂分子之间发生碰撞和扩散。
当颗粒经过滤纸孔道时，由于滤纸的孔道结构和表面吸附的作用，部分颗粒能够较长时间停留在孔道中，增加了与溶剂分子碰撞和扩散的机会，从而有利于溶质的分离。
综上所述，滤纸的过滤实验原理主要包括机械拦截、表面吸附、空隙滞留和扩散等过程。
在实际操作中，通过选择不同孔径和厚度的滤纸，调整滤液的流速和过滤时间，可以优化过滤效果，实现溶质的精确分离。
鞣质定实验报告
鞣质定实验报告引言鞣质是植物细胞壁中的一种重要成分，具有增强细胞壁的稳定性和抗病性的作用。
为了深入了解鞣质的特性和定量方法，本文进行了鞣质定实验。
本实验以青梅叶为材料，通过提取鞣质并使用铁氯化法定量，从而获得了青梅叶中鞣质的含量。
本文将详细介绍实验步骤、实验结果以及相关讨论。
实验步骤1.取青梅叶片50克，洗净并切碎成小片。
2.将青梅叶片加入300 mL的95%乙醇中，密封容器。
在60°C的水浴中反复提取8小时，并定期摇晃容器。
3.用Whatman No. 1滤纸过滤提取液，收集滤液。
4.取得的提取液中加入10% FeCl3溶液，溶液中铁离子与鞣质结合形成蓝黑色的沉淀。
5.通过Whatman No. 1滤纸过滤产生的沉淀，并用去离子水洗涤沉淀。
6.将滤纸上的沉淀干燥至恒定重量，称量记录干燥后沉淀的质量。
实验结果通过以上实验步骤，我们成功地从青梅叶中提取出鞣质，并使用铁氯化法定量。
实验样品的质量为50克，干燥后沉淀的质量为0.25克。
根据实验结果，计算出鞣质的含量为0.5%。
讨论本实验使用了铁氯化法对青梅叶中的鞣质进行定量分析。
铁氯化法是鞣质定性和定量的常用方法之一，其原理是铁离子与鞣质结合形成特征的沉淀。
实验结果显示，青梅叶中鞣质的含量为0.5%。
这证明了青梅叶具有较高的鞣质含量，表明青梅叶具有较好的抗氧化和抗病性能力。
这对于进一步研究青梅叶的药用价值和开发相关产品具有重要意义。
然而，本实验存在一些可改进的问题。
首先，实验中使用的提取时间较长，需要8小时，可以考虑优化提取方法以减少时间和提高效率。
其次，铁氯化法虽然常用且简便，但也有一定的局限性，可能会对样品产生一定的干扰平移现象。
总而言之，本实验成功地通过提取和定量方法获得了青梅叶中鞣质的含量。
这为进一步研究鞣质的特性和在医药领域的应用奠定了基础。
结论在本次鞣质定实验中，我们通过提取和使用铁氯化法成功地获得了青梅叶中鞣质的含量。
根据实验结果，青梅叶中的鞣质含量为0.5%。
实验目的】掌握dna印迹技术的基本原理，学习dna印迹技术的操作
实验目的】掌握DNA印迹技术的基本原理，学习DNA印迹技术的操作方法，了解DNA 印迹技术的应用范围。
【实验原理】DNA印迹是1975年由英国Southern创建的。
其基本原理是：DNA分子经限制性核酸内切酶酶切后，由琼脂糖凝胶电泳将所得DNA片段按分子质量大小分离，然后将DNA片段变性，并使凝胶中的单链DNA片段转移到尼龙膜、硝酸纤维素膜(NC)或其他固相支持物上，此法中DNA片段由液流携带通过虹吸作用由下向上抽吸，从凝胶转移印至滤膜表面。
然后与相对应结构的已标记的探针进行杂交反应，用放射性自显影或酶反应显色来鉴定待测DNA分子。
DNA印迹技术主要用于对基因组DNA的定性和定量分析、克隆基因的酶切图谱分析、基因突变分析及限制性片段长度多态性(RFLP)等。
【实验对象】待测DNA。
【试剂与器材】(1) 水平电泳装置，电泳仪，紫外灯，摇床。
(2) 待测DNA，琼脂糖，溴化乙啶，DNA探针，保鲜膜，缓冲液。
(3) 0.25 mol/L HCl(4) 变性液：1.5 mol/L NaCl; 0.5 mol/L NaOH (保存于室温)。
(5) 中和液：(pH 7.0) 5 mol/L NaCl; 0.5 mol/L Tris-HCI (保存于室温)。
(6) 转移液(20×SSC pH 7.0)：用800 ml H2O溶解175.3 g NaCl和88.2 g 柠檬酸钠，以浓HCI调pH至7.0，用双蒸水定容至1 L。
分装后高压灭菌。
(7) 2×SSC。
(8) 尼龙膜或硝酸纤维素(NC) 膜。
【实验方法与步骤】(1) 取适量已酶切充分的待测DNA (1 μg左右) ，于0.8%~1.25％的琼脂糖凝胶上与合适的DNA分子量标准一同进行稳压电泳。
(2) 切去凝胶一角以标记方向，用溴化乙啶染色后拍照记录电泳结果(拍照时，凝胶旁放一尺子，便于以后对照电泳带在膜上的位置) ，再切下一侧DNA 分子量标准带。
滤纸的有关知识
1．5．2过滤：在水质分析中，常用滤纸、玻璃砂芯滤器、古氏坩埚等过滤水样。
(1)滤纸分为定性滤纸与定量滤纸，用棉花等纤维制成。
常用的有直径为5．5，7，9，12．5及15cm等规格。
①定性滤纸：定性滤纸含硅、铁、铅等杂质，灼烧后灰分多，供一般过滤用，不能用于常规定量分析及微量金属分析。
常用的定性滤纸分快速、中速及慢速三种。
②定量滤纸：分为单洗及双洗两种。
单洗定量滤纸已经过盐酸处理，除去铁及无机盐等杂质，但灼烧后灰分仍较高，不适合精密分析用。
双洗定量滤纸是用盐酸和氢氟酸处理过的，除去了硅酸盐、金属等杂质，并用纯水洗净。
每一小张滤纸灼烧后，灰分一般<0．01mg，但因厂牌、批号不同，铅、铁等杂质的含量也有差异，用于测定微量金属，使用前还需用稀盐酸、稀硝酸及纯水依次洗涤。
定量滤纸分快速、中速、慢速三种；过去称为白带、蓝带与红带，孔径分别为80-120，30-50和1～3μm。
滤纸的选择应根据沉淀粒度而定。
过滤细微沉淀(如硫酸钡)不能用孔径大的滤纸，大颗粒沉淀亦不能用慢速滤纸。
选择滤纸大小系根据沉淀量而不依溶液体积多少，沉淀的体积不能超过滤液容积的一半。
如溶液体积大而沉淀又少时要用小滤纸。
对微量分析尽可能用较小的滤纸，以减少由滤纸沾污而引起的误差。
根据滤纸的大小选择合适的漏斗，放入的滤纸应比漏斗边缘约低1cm，不容许高出漏斗，以免因张力作用，使沉淀溢出漏斗而损失。
折叠滤纸时应避免沾污滤纸，这对微量分析更为重要。
强酸或强碱溶液不能用滤纸过滤。
(2)过滤与沉淀洗涤将漏斗置漏斗架上，接受滤液的清洁烧杯放在漏斗下面，使漏斗茎下端在烧杯口的边缘以下3-4cm处并与烧杯壁靠紧。
采用“倾注法”过滤，即待沉淀沉降于烧杯底部后，将上层清液沿一小玻棒小心倾人漏斗滤纸中，使清液先通过滤纸，尽可能不搅动沉淀。
在开始过滤时要不断察看是否有细小沉淀进入滤液中。
如有，应反复过滤。
因为滤纸的较大孔隙须待沉淀将其堵塞后方可克服。
洗涤沉淀也可采用倾注法。
详细WhatMan滤纸及应用
01
颗粒截留在表面和纤微基质内 深度滤器- 表面滤器- 预滤-
01
过滤术语
多孔过滤类型
深度过滤 不规则的随机纤维孔 过滤颗粒容量大 膜比较厚 多种颗粒通过 截流体积大 高结合度
表面过滤 均匀分布的多孔结构 过滤颗粒容量小 膜比较薄 精确的孔径 截流体积小
Herzberg 方法：将预除气的水放入水位为10CM有效面积为10平方厘米的测试滤器里进行测试
ASTM 方法：用扇形折叠滤器测试
负载力-在保持一定的流速和压力下，滤器负载颗粒的能力
01.
灰份-用900°C的温度燃烧纤维素滤纸来测试
02.
过滤术语
颗粒截留在表面
01
放在滤膜的上层除去大颗粒,使滤膜能更有效的过滤小颗粒
06
缺点： 非连续的纤维结构，介质易转移
07
碎片易脱落，容易污染过滤后的产品
08
截留与基质中的微生物会漫延生长而污染滤液
09
孔径不定，保留精度不高
10
会吸附和保留相当数量的液体产品
深度过滤——滤纸
过滤分离颗粒范围
标准参数——定性滤纸
标准参数——定量滤纸
Whatman滤纸
玻璃纤维
纤微素
定量
定性
Grade 588 快速滤纸。被许多标准和方法所引用，例如动物饲料中黄曲霉素的鉴定和泥土中水银含量测定
Grade 1573 - 12-25µm 快速滤纸，高湿强。表面十分光滑，非常利于将沉淀洗脱。耐受硫酸硝酸、盐酸和碱金属
Grade 1575 - <2µm 高湿强慢速滤纸
是
是
纤维素滤纸——定量
定量无灰级
Grade 40- 8 um（中等流速，典型应用：染料颗粒度检测） Grade 41- 20 - 25 um（流速最快，典型应用：石油中沉淀物检测） Grade 42- 2.5 um（常用于诸如硫酸钡、偏锡酸等细颗粒分析） Grade 43- 16 um （食品/土壤/空气中颗粒收集后荧光光谱分析 ） Grade 44- 3 um （Grade 42的薄型版本，截流更细小颗粒） Grade 589/1 - 12-25 um（水泥工业中的布莱因颗粒度检测） Grade 589/2- 4-12 um（造纸工业中水悬浮颗粒分析） Grade 589/3- 2 um（动物脂肪或者石油不溶物分析）
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素使用方法1.简介Whatman DE-52纤维素是一种常用的离子交换纤维素，用于分离和净化蛋白质和其他生物大分子。
本文档将详细介绍其详细使用方法。
2.材料准备●Whatman DE-52纤维素●缓冲液：根据实验需要选择适当的缓冲液。
●清洁的实验室仪器和设备：如瓶子、离心机、pH计等。
●实验用具：如滤纸、滤芯、吸引器等。
3.DE-52纤维素的制备过程●首先，在一个干燥的容器中称取适量的DE-52纤维素。
●将DE-52纤维素与缓冲液混合，并用搅拌棒搅拌均匀。
●观察混合物的颜色和质地，确保DE-52纤维素完全悬浮在缓冲液中。
●将混合物从容器中过滤出来，以除去任何残留颗粒。
●检查过滤的液体，确保没有任何不溶性物质。
4.样品预处理●检查待处理样品的pH值，确保其适合使用DE-52纤维素进行离子交换。
●如果需要，可以调整样品的pH值，以最大限度地提高DE-52纤维素的效果。
5.离子交换过程●将DE-52纤维素的适量加入到预处理样品中，并充分混合。
●让样品与DE-52纤维素充分反应，并保持一定的时间来完成离子交换作用。
●过滤样品，以除去DE-52纤维素和已经发生离子交换的物质。
●收集过滤液，这样您就可以分析或进一步处理纯净的样品了。
6.清洗和保存DE-52纤维素●每次使用后，将DE-52纤维素用适当的溶剂进行清洗，以去除任何残留的样品或杂质。
●定期检查DE-52纤维素的质量，并根据需要进行更换。
●储存DE-52纤维素在干燥、阴凉的地方，远离阳光和高温环境。
附件：●本文档没有附带任何附件。
法律名词及注释：●无。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明
荧光原位杂交实验具体步骤及详细说明用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。
由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。
1. 探针变性将探针在75℃恒温水浴中温育5 min，立即置0℃，5～10 min，使双链DNA探针变性。
2. 标本变性（1）将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2～3 h。
（经Giemsa 染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片）。
（2）取出玻片标本，将其浸在70～75℃的体积分数70% 甲酰胺/2x SSC的变性液中变性2～3 min。
（3）立即按顺序将标本经体积分数70%、体积分数90%和体积分数100%冰乙醇系列脱水，每次5 min，然后空气干燥。
3. 杂交将已变性或预退火的DNA探针10 uL 滴于已变性并脱水的玻片标本上，盖上18x18盖玻片，用Parafilm封片，置于潮湿暗盒中37℃杂交过夜（约15～17 h）。
由于杂交液较少，而且杂交温度较高，持续时间又长，因此为了保持标本的湿润状态，此过程在湿盒中进行。
4. 洗脱此步骤有助于除去非特异性结合的探针，从而降低本底。
（1）杂交次日，将标本从37℃温箱中取出，用刀片轻轻将盖玻片揭掉。
（2）将已杂交的玻片标本放置于已预热42～50℃的体积分数50%甲酰胺/2xSSC中洗涤3次，每次5 min。
（3）在已预热42～50℃的1xSSC中洗涤3次，每次5 min。
（4）在室温下，将玻片标本于2xSSC中轻洗一下。
（5）取出玻片，自然干燥。
（6）取200 uL复染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片标本上，盖上盖玻片。
5. 杂交信号的放大（适用于使用生物素标记的探针）（1）在玻片的杂交部位加150 uL封闭液I，用保鲜膜覆盖，37℃温育20min。
1、氨基酸的分离鉴定--纸层析法
实验一：氨基酸的分离鉴定--纸层析法一、目的：通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理：层析法也叫色谱法，是一种物理分离方法，它是利用混合物中各组分的物理、化学性质的差异，使各组分以不同的程度分布在两个相中，其中一个相为固定相，另一个相则流过此固定相（称流动相）并使各组分以不同的速度移动从而达到分离。
层析法是近代生物化学最常用的分析方法之一，运用这种方法可以分离性质极为相似而用一般化学方法难以分离的各种化合物。
如各种氨基酸、核苷酸、糖、蛋白质等。
层析法有许多种类，根据分离所依据的理化性质不同，可分为吸附层析、分配层析、离子交换层析等。
纸层析是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一中分离分析工具。
纸层析属于分配层析法。
分配层析法是一种连续抽提法，利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数的不同而得到分离。
纸层析以滤纸作为惰性支持物，滤纸纤维素上的羟基具有亲水性，能吸附一层水，把吸附在滤纸上的水作为固定相，展层用的有机溶剂为流动相。
水被吸附在纤维素的纤维之间形成固定相：由于纤维素上的羟基具有亲水性，和水以氢键相连，使这部分水不易扩散，所以能与跟水混合的溶剂仍然形成类似不相混合的两相。
当有机相沿纸流动经过层析点时，层析点上的溶质就在水相和有机相之间进行分配，有一部分溶质离开原点随有机相而进入无溶质的区域，这时，又重新分配，一部分溶质从有机相进入水相。
当有机相不断流动时，溶质就沿着有机相流动的方向移动，不断分配。
溶质中各组分的分配系数不同，移动速率也不同，因而可以彼此分开。
纸上层析法的一般操作是将混合物点到纸上，干后让溶剂从有样品的一端经毛细作用流到纸的另一端。
在密闭的容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向反复抽提，由于混合氨基酸在两相中的分配系数（当把一种物质在两种不相溶的溶剂中振荡时，它将在这两相中不均匀分配。
滤纸酶活力测定方法
滤纸酶活力测定方法1试剂(1)1 M柠檬酸缓冲液：称取柠檬酸（C6H8O7·H2O）210 g，加蒸馏水750 mL，再加氢氧化钠78 g，充分溶解并冷却后测pH值约为4.2，最后补水定容至1000 mL，得到1 mol/L的柠檬酸缓冲液，其pH值约为4.45。
(2)0.05 M柠檬酸缓冲液：将1 M的柠檬酸缓冲液稀释20倍即可。
量取1 M的柠檬酸缓冲液50 mL，加水定容至1000 mL，得到0.05 mol/L的柠檬酸缓冲液，其pH值为4.8。
(3)10 mg/mL标准葡萄糖母液（pH 4.8）：精确称量1.000 g无水葡萄糖（分析纯），或1.1009 g一水合葡萄糖（分析纯），用0.05 M的柠檬缓冲溶液（pH 4.8）定容至100 mL。
得到10 mg/mL、pH 4.8的标准葡萄糖溶液，分装小试剂瓶，置于–20 ℃冰冻保存。
用时按一定比例稀释成不同的浓度系列。
2葡萄糖标准曲线(1)将10 mg/mL的标准葡萄糖溶液用0.05 M的柠檬酸缓冲液稀释成一系列浓度梯度的糖液，分别为：0.20、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.60 mg/mL。
(2)上述不同浓度的糖液各取1.5 mL，置于已编号的10 mL具塞刻度试管中，空白对照为1.5 mL的0.05 M的柠檬酸缓冲液。
(3)每管中均加入2 mL DNS试剂并混匀，在沸水浴中保温5 min（注意：水沸腾时开始计时），迅速冷却，加水稀释至10 mL并充分摇匀。
(4)利用分光光度仪在540 nm波长下测定各管的吸光值，用空白管调零点。
(5)以吸光值为横坐标，葡萄糖含量（mg）为纵坐标，绘制标准曲线，并拟合回归方程：Y=A+B*X。
3测定步骤(1)在10 mL具塞刻度试管中，放入50 mg的Whatman No. 1滤纸条（1×6 cm），注意要先将滤纸条卷起并折叠。
(2)将待测定的酶液适当稀释，用微量进样器精确吸取50 l，小心地置于滤纸卷上；再加入1.45 mL的柠檬酸缓冲液（0.05 M，pH 4.8），将滤纸条充分浸没。
定量滤纸——精选推荐
Quantitative Filter Papers 定量滤纸Whatman定量滤纸是为重力和仪器分析中样品制备而设计的。
它们有3 种形式来满足你的特别需求。
无灰级：< 0.005 % ，非常纯的滤纸，是大多数主要分析过滤过程的理想用纸。
硬化低灰：< 0.015 % ，经过强酸处理去除了微量金属，产生了高的湿强度和化学抗性，这些滤纸特别适合用于布氏漏斗，滤纸坚硬的光滑表面使得它很容易回收沉淀物。
硬化无灰：< 0.006 % ，非常低的灰份含量，酸硬化增加了湿强度和化学抗性。
坚硬的表面使得这些滤纸适合于大多数主要过滤过程。
定量滤纸whatman 无灰级（灰分＜0.01 % ）定量滤纸以高质量的棉绒为原料，在严格控制下生产。
这些高纯滤纸是各种重要分析过滤步骤中理想用品。
Grade 40 : 8µm常规过滤用无灰滤纸，中等流速和颗粒保留度。
用于比重分析，原子吸收分光光度法测定前的溶液的过滤和空气污染中的采样。
Grade 41 : 20-25µm流速最快的无灰滤纸，推荐用于诸如氢氧化铝或氢氧化铁的分析过程中。
大颗粒或凝胶沉淀物的过滤，并川于空气污染定量分析中快流速测定气态化合物。
Grade 42 : 2.5µmwhatman 纤维素滤纸中保留颗粒鼓细小的中速滤纸。
常用于诸如硫酸钡、偏锡酸和碳酸钙等细颗粒沉淀物分析。
Grade 43 : 16µm中速滤纸，用于食品分析、土壤分析、空气污染监测中样品收集和建筑业、矿产和钢铁业的无机分析。
Grade 44 : 3µm无论尺寸大小如何，Grade 44 的灰分比木系列其他滤纸都低。
采集小颗粒的效率比Grade 42 略低，但流速则快些。
Grade 589 / 1 : 12-25µm“黑缎滤纸”一定量分析粗糙沉淀物的标准滤纸，是流速很高的无灰滤纸。
用于很多定量标准方法，特别是重力应用（如，食物中灰份含量的测定，或是水泥工业中的Blaine 布莱因细微颗粒度测定仪测试）。
Whatman快速诊断产品研发指南
反应膜
最重要的侧向流免疫层析组件恐怕就属反应膜了。检测的热力学和动力学特性很大程度上取决于蛋 白吸附和毛细管作用。而这些都与膜片的物理和化学性质密切相关。正因为如此，我们需要花费一 些时间对膜化学和膜结构的基础知识进行一定的了解。
膜的选择
46
条带分析检测的建立和优化
47
蛋白结合的优化
47
封闭481来自Whatman® Part of GE Healthcare
试纸检测法
48
纤维素试纸的选择
49
样品制备介绍
51
样品收集介绍
55
附录
58
逐步解析如何建立侧向流检测
58
参考文献
59
订购信息
60
调查表
64
2
免疫层析检测
Whatman® Part of GE Healthcare
蛋白吸附能力
与分子吸附机制不同，膜的吸附能力取决于与蛋白发生吸附作用的聚合物表面积大小。通过查阅每 种材料的比表面积率（SAR）可对不同孔径的膜的表面积进行近似估计。SAR是膜表面孔隙的实际表 面积与膜面积的比值（表1）。它取决于膜的厚度，孔径和孔隙度。内在的表面积很显然与厚度呈 线性递增关系，而厚度的增加可以简单地从体积增加来进行判断。孔径和内在表面积的关系表现为 表面积与孔径的平方根呈反比。这就意味着10μm孔径的膜其表面积仅为0.1μm孔径膜的十分之一。 内在表面积与孔密度呈非线性增加关系。孔密度是指膜上未填充聚合材料的部分所占比例（如干燥 膜上空气填充空间）。孔密度也被描述为膜上的空腔。了解孔径和孔密度是完全不相关的参数非常 重要。一张膜如果孔的数目较少，即使有大孔径的孔也只有非常低的孔密度。孔径更多地被解读为 “标称孔径”，因为这个参数值会因为孔径检测方法的不同而发生改变。
常规滤纸孔径
常规滤纸孔径
摘要：
一、常规滤纸的定义和用途
二、常规滤纸的孔径分类
三、常规滤纸孔径的选择与应用
四、常规滤纸孔径对实验结果的影响
五、总结
正文：
常规滤纸是一种常见的实验室材料，主要用于过滤实验样品中的固体颗粒或杂质。
它具有孔径均匀、过滤速度快、使用方便等优点，广泛应用于化学、生物学、环境科学等领域。
常规滤纸的孔径分为微孔滤纸、中孔滤纸和粗孔滤纸。
微孔滤纸的孔径在0.1μm-1μm之间，主要用于过滤病毒、细胞等微小颗粒；中孔滤纸的孔径在1μm-10μm之间，适用于过滤一般实验样品中的颗粒；粗孔滤纸的孔径大于10μm，主要用于过滤较大颗粒或沉淀物。
常规滤纸孔径的选择主要取决于实验需求。
例如，在生物实验中，需要使用微孔滤纸来过滤细胞培养液中的细胞；在化学实验中，根据实验样品的颗粒大小，可以选择不同孔径的滤纸进行过滤。
常规滤纸孔径对实验结果具有重要影响。
如果孔径过大，会导致样品中的固体颗粒通过滤纸，影响实验结果；如果孔径过小，滤纸的过滤速度会降低，增加实验时间。
因此，在实验过程中，选择合适的滤纸孔径至关重要。
总之，常规滤纸作为一种常用的实验室材料，其孔径的选择与应用对于实验结果具有重要意义。
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4/ GE Title or job number / 2014-5-16
过滤术语
• 深度滤器• 表面滤器• 预滤颗粒截留在表面和纤微基质内 颗粒截留在表面 放在滤膜的上层除去大颗粒, 使滤膜能更有效的过滤小颗粒
5/ GE Title or job number / 2014-5-16
多孔过滤类型
纤维素滤纸——定量
42号滤纸: 细颗粒保留
• 颗粒保留度: 2.5um
酸和精细沉淀碳酸钙等沉淀物的比重分析
34 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
43号滤纸:
• 颗粒保留度: 16um • 流速: 中速
特别适用于布氏漏斗过滤
30 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
硬化化无灰级
经过酸硬化，具有高湿强性和化学抗性
Grade 540 Grade 541 Grade 542
-
8 microns（中等流速） 20 - 25 microns（快流速） 2.7 microns（慢流速）
纤维素滤纸
纤维素 定性
标准级 湿强级
定量
无灰级 – 灰分 0.007% 强化低灰 – 灰分 0.015% 强化无灰 - 灰分 0.006%
12 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
• Whatman 棉纤维滤纸灰分含量为 0.06%
（木纤最低灰分含量为 0.2%） • 用增强湿强度的添加剂改进湿时纤微间的结 合力 • 因有增强湿强度的添加剂，不能用于灰份 法
标准参数——定量滤纸
10 / GE Title or job number / 2014-5-16
滤纸类别
Whatman滤纸
纤微素
玻璃纤维
定性
定量
含粘合剂
不含粘合剂
高 Alpha Cellulose棉纤维原料
100%硅硼酸玻璃
11 / GE Title or job number / 2014-5-16
29 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
硬化低灰级
灰分含量在无灰 & 定性级之间
Grade 50 Grade 52 -
2.7 microns（慢流速） 7 microns（中等流速）
Grade 54 -
20 - 25 microns（快流速）
纤维素滤纸——定性
113号滤纸：皱纹表面
• 颗粒保留度 - 30um
• 流速 - 快速 • 应用：
– 粗颗粒或凝胶沉淀过滤 – 粘性液体的真空过滤
26 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
114号滤纸：平滑表面
• 颗粒保留度 - 25um • 流速 - 快速 • 应用：粗颗粒和凝胶沉淀过滤
36 / GE Title or job number / 2014-5-16
沉淀物颗粒细微？ 否 是
是
用 2V号 滤 纸
用 111V， 113v， 114V
用 111， 113， 114滤 纸
沉淀物粗或凝胶状？ 是 用 4号 滤 纸
是
5， 6号 滤 纸
28 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
定量无灰级
Grade 40- 8 um（中等流速，典型应用：染料颗粒度检测） Grade 41- 20 - 25 um（流速最快，典型应用：石油中沉淀物检测） Grade 42- 2.5 um（常用于诸如硫酸钡、偏锡酸等细颗粒分析） Grade 43- 16 um （食品/土壤/空气中颗粒收集后荧光光谱分析 ） Grade 44- 3 um （Grade 42的薄型版本，截流更细小颗粒） Grade 589/1 - 12-25 um（水泥工业中的布莱因颗粒度检测） Grade 589/2- 4-12 um（造纸工业中水悬浮颗粒分析） Grade 589/3- 2 um（动物脂肪或者石油不溶物分析）
21 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
5号滤纸：最细小颗粒的定性过滤
• 保留度 - 2.5um
• 流速 - 慢速 • 应用：
澄清混浊的悬浮物和水 土壤分析
22 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
液体过滤 定性分析上的分离 土壤分析和种子测试 从液体中分离固体食料 空气污染监测 用试剂浸泡后测试气体
18 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
2号滤纸：
• 颗粒保留度 - 8um • 流速 - 中速 • 应用：
监测空气中的特异物 土壤测试 植物培育试验中保存土壤的养分 测定食物中的微生素C，罐装鱼中的组氨酸，肉中的全脂成份 收集和监测喷镀浴周围的铬酸雾 纺织染料质量检验
-
10 um
5 -10 um > 10 um 30 um 25 um
16 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
定性湿强级
Grade 588 快速滤纸。被许多标准和方法所引用，例如 动物饲料中黄曲霉素的鉴定和泥土中水银含量测定
Grade 1573 -
•
• •
多种颗粒通过
截流体积大 高结合度
深度过滤——滤纸
优点： 宽孔径分布，能在表面和整个纤维质中截流颗粒；
截流颗粒率大；费用低 应用: 适用于高流速、大量截流颗粒的应用
例如:污水分析、细胞受体测定、空气检测 以及预过滤
材质: 玻璃微纤维;纤维素纤维 缺点： 非连续的纤维结构，介质易转移 碎片易脱落，容易污染过滤后的产品 截留与基质中的微生物会漫延生长而污染滤液
32 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
41号滤纸:
• 颗粒保留度: 20-25um
• 流速:快速
• 应用:
– 过滤粗颗粒和凝胶沉淀物 – 比重分析空气污染时浸透纸条快速测定气体的化合物
33 / GE Title or job number / 2014-5-16
滤纸简介及应用
过滤介质
是一种使得某些颗粒物通过而另一些颗粒物 被截留的障碍物。
N. Lakshminarayanaiah Transport Equations in Biophysics
2/ GE Title or job number / 2014-5-16
过滤术语
• 颗粒保留度- 按98%的保留颗粒的大小而定 • 流速- 以每100毫升溶液流完需几秒钟来定
12-25µm
快速滤纸，高湿强。表面十分光滑，非常利于将沉淀 洗脱。耐受硫酸硝酸、盐酸和碱金属
Grade 1575
-
<2µm
高湿强慢速滤纸
17 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
1号滤纸：
• 颗粒保留度 - 11um • 流速 - 中速 • 规格 - 直径10mm到500mm圆片以及460*570mm的矩形 • 应用：
19 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
3号滤纸：高载力和高湿强度
• 颗粒保留度 - 6um • 流速 - 中速
• 应用：
布氏漏斗过滤 样品的载体，如分离前血样的收集 用闪烁计数的大分子物放射分析 测定（河，湖，阴沟里流出的)水流中的金属和有机废物, 空气中的多 环碳氢化合物）
13 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
标准级
Grade 1
Grade 2 Grade 3 Grade 4 Grade 5 Grade 6
-
11 um (实验室最常规过滤）
8 um ( 染料行业应用广泛） 6 um 20 - 25 um （烟囱排气采样） 2.5 um 3 um
92号滤纸：皱纹面
• 颗粒保留度 - 5-10um • 流速 - 中速
• 应用：甜菜糖分析
24 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定性
93号滤纸：平滑表面
• 颗粒保留度 - >10um
• 流速 - 中速 • 应用：甘 糖中的 糖分析
25 / GE Title or job number / 2014-5-16
孔径不定，保留精度不高
会吸附和保留相当数量的液体产品
7/ GE Title or job number / 2014-5-16
过滤分离颗粒范围
8/ GE Title or job number / 2014-5-16
标准参数——定性滤纸
9/ GE Title or job number / 2014-5-16
31 / GE Title or job number / 2014-5-16
纤维素滤纸——定量
40号滤纸: 中等颗粒保留
• 颗粒保留度: 8um • 流速: 中速
• 应用:
– 水泥,粘土,铁和钢产品成分的比重分析 – 常规土壤分析时从水相提取液中分离出固体物 – 牛奶沉积物的比重分析 – 原子光谱检测前溶液的澄清过滤 – 从大气中收集痕量原素和放射核素
27 / GE Title or job number / 2014-5-16