植物分子生物学实验技术
分子生物学实验技术
分子生物学实验技术分子生物学实验技术是分子生物学研究领域中使用的一系列实验技术的总称，它们主要用于分析和操作生物体内分子水平的结构和功能。
这些技术的发展与进步，在分子生物学研究中具有重要意义，为科学家们提供了更加高效、准确和精细的实验方法和手段。
本文将着重介绍分子生物学实验技术的一些常用方法和原理。
一、聚合酶链式反应（PCR）PCR是一种通过DNA扩增技术在体外合成目标DNA的方法。
它通过引物与待扩增DNA片段的互补配对，在DNA复制酶（如Taq聚合酶）的催化下，经过一系列的温度循环（包括解链、退火和扩增）反复进行，从而使得目标DNA不断扩增，达到检测和分析的目的。
PCR技术广泛应用于基因检测、疾病诊断、犯罪分析等领域。
二、DNA测序技术DNA测序是指通过测定DNA的碱基序列，以获取基因信息的一种手段。
传统的DNA测序技术包括Sanger测序和Maxam-Gilbert测序。
随着高通量测序技术（NGS）的发展，如Illumina测序、Ion Torrent测序等，使得大规模、快速、低成本的DNA测序成为可能。
DNA测序技术在基因组学和遗传学研究中扮演着关键角色。
三、蛋白质分析技术蛋白质是生物体内功能最为重要的分子之一，研究蛋白质的组成、结构和功能对于理解生物体的生理过程具有重要的意义。
蛋白质分析技术主要包括SDS-PAGE凝胶电泳、Western Blotting、质谱分析等。
SDS-PAGE凝胶电泳可用于蛋白质的分子量测定和纯化，Western Blotting则可以用来检测特定蛋白质的存在及其相对量，质谱分析则可以用来确定蛋白质的氨基酸序列。
四、基因克隆技术基因克隆是指将DNA片段插入到载体DNA（如质粒）中，并利用细胞的自我复制机制，将其复制并表达出来的技术。
这个技术广泛应用于基因工程、药物研发、植物育种等领域。
基因克隆技术的核心是DNA片段的连接和转化。
连接可通过限制性内切酶切割DNA片段，并使用DNA连接酶进行连接；转化则是将重组质粒转入宿主细胞中，使其进行复制和表达。
分子生物学实验技术.pptx
DNA 是具有一定结构的物质，一些特殊的环 境会导致DNA的变性，如加热、极端pH值、 有机溶剂、尿素、酰胺试剂等，而适宜的环 境又可以使DNA复性。
SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞 裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌 细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒 DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放 出来的DNA遇到强碱性（NaOH）环境，就会变性。 然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中 性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分 子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中， 而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底 部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出 来。
2. 启始复制子（ori, Origin of
replication)； 3. 多克隆位点(MSC, Multiple cloning
site or polylinker)； 4. 标பைடு நூலகம்基因(Marker gene, such as
LacZ gene)。
Ampr抗性基因
Ampr抗性基因编码一种周质酶（β-内酰胺酶）可特异地 切割Amp的β-内酰胺环，从而使其失去杀菌能力
分子生物学实验
目录
实验一、植物染色体DNA的提取及纯度鉴定 实验二、大肠杆菌质粒DNA的提取 实验三、琼脂糖凝胶电泳 实验四、ＤＮＡ的限制性酶切 实验五、大肠杆菌感受态细胞的制备及外源DNA
的转化 实验六、PCR基因扩增技术
实验一、植物染色体DNA的提取 及纯度鉴定
一、实验目的
• 掌握真核植物基因组染色体DNA的一种提 取方法
P(BLA) ApaLI (2367)
APr
pUC19
2686 bp
植物分子生物学的研究对象和实验技术
植物分子生物学的研究对象和实验技术植物分子生物学是研究植物基因、基因表达、基因调控等方面的科学，它通过分析和解析植物基因组的结构和功能来揭示植物的生物学过程。
随着科学技术的不断发展，研究植物分子生物学的方法和实验技术也在不断更新。
本文将介绍植物分子生物学的研究对象以及一些常用的实验技术。
一、植物分子生物学的研究对象植物分子生物学主要研究的对象包括植物的基因组、基因、DNA、RNA和蛋白质等分子。
通过对这些分子的结构、功能和相互作用进行研究，可以深入了解植物的遗传特征和生物学过程。
1. 植物基因组植物基因组是指植物所有基因的集合，是植物分子生物学研究的起点和基础。
通过分析植物基因组的大小、组成、结构和功能，可以了解植物基因的数量和特征，进而揭示植物的基因组结构、进化和调控机制。
2. 植物基因植物基因是指能够编码蛋白质或功能RNA的DNA序列。
通过对植物基因的研究，可以了解植物的遗传特征、基因功能和调控机制。
此外，植物基因的突变和表达的变化还可以揭示植物的亲缘关系和适应环境的方式。
3. 植物DNA和RNA植物DNA是植物细胞中存储遗传信息的分子，植物RNA则是基因转录和表达的产物。
通过对植物DNA和RNA的序列、结构和功能的研究，可以了解植物基因的表达和调控机制，揭示基因转录、剪接、翻译等过程，以及植物的遗传变异和表型差异。
4. 植物蛋白质植物蛋白质是植物细胞中具有功能的分子，参与调控生物学过程。
通过研究植物蛋白质的结构、功能和相互作用，可以了解植物的代谢途径、信号传导和生物学功能。
二、植物分子生物学的实验技术为了研究植物分子生物学，科学家们利用多种实验技术进行研究。
下面将介绍几种常用的实验技术。
1. PCR（聚合酶链式反应）PCR是分子生物学中最常用的技术之一，它能够通过扩增DNA序列来获取足够的DNA样本进行后续实验。
在研究植物分子生物学中，PCR被广泛应用于基因克隆、基因组测序、基因表达分析以及遗传标记等方面。
植物分子生物学研究中的新技术与方法
植物分子生物学研究中的新技术与方法植物分子生物学是一门重要的学科领域，它研究植物的基因组结构、功能以及与环境的相互作用关系。
近年来，随着科技的不断进步，新的技术与方法不断涌现，为植物分子生物学研究提供了强有力的工具与手段。
本文将介绍其中一些新技术与方法，并探讨它们在植物分子生物学研究中的应用。
一、单细胞测序技术单细胞测序技术是一种能够对单个细胞进行基因组学研究的新技术。
传统的测序方法通常需要上千甚至上万个细胞的样本，而单细胞测序技术则可以对细胞进行个体化的研究。
这种技术的出现，促进了我们对细胞异质性的理解，揭示了细胞间的功能差异，尤其适用于研究复杂的植物组织和器官。
二、基因编辑技术基因编辑技术是通过对细胞基因组的精确修改，实现对指定基因的操控。
CRISPR/Cas9技术是一种近年来广泛应用的基因编辑技术，它具有高效、精准和经济的特点。
在植物研究中，CRISPR/Cas9技术被广泛应用于基因功能研究、新品种培育以及抗病虫害等方面。
它为植物分子生物学研究提供了一种更为便捷和可操作的工具。
三、转录组学技术转录组学技术是指对细胞或组织中全体转录产物进行系统分析的技术。
RNA测序技术的发展，使得我们能够对全转录组进行广泛而深入的研究。
转录组学技术为我们提供了了解植物基因表达调控机制、基因功能和信号传导网络的途径。
它在植物分子生物学研究中发挥着重要的作用，促进了植物的基因发现和功能注释。
四、代谢组学技术代谢组学技术是对细胞或组织中全部代谢产物进行系统分析的技术。
通过代谢组学技术，我们能够了解植物在不同生理状态下的代谢物组成和代谢途径的变化规律。
代谢组学技术在植物分子生物学研究中具有广阔的应用前景，可以揭示植物代谢的调控机制，以及植物与环境因子之间的相互作用。
五、蛋白质组学技术蛋白质组学技术是对细胞或组织中全体蛋白质的系统研究。
蛋白质水平的研究对于揭示植物的生物学过程和功能具有重要的意义。
蛋白质质谱技术的发展，使得我们能够高通量地鉴定和定量蛋白质组成。
分子生物学实用技术实验操作教程
实验一 CTAB法提取植物基因组总DNA及分析一、实验目的分离纯化植物DNA是植物分子生物学和基因工程的基本技术要求，CTAB法是提取植物基因组DNA的一种新型方法，可以抽提许多其它方法难以抽提的植物材料（如含多酚较多的植物材料、干燥后的茶叶、老树根等）中的DNA，得率高，质量好，用于PCR、Southern杂交、分子标记、DNA文库构建等。
二、基本原理植物材料在液氮中研磨可以迅速破坏其细胞壁，游离出细胞器和原生质，并防止DNA降解。
采用CTAB （十六烷基三甲基溴化胺，一种非离子型去污剂）抽提液抽提（65℃）上述研磨物，在高盐条件下不但溶解细胞膜相物质，而且CTAB与核酸形成可溶性的复合物，采用离心可以将变性的蛋白质和多酚、多糖等杂质（沉淀相）去除，水相中含有核酸与CTAB的复合物及其它可溶性的杂质。
直接向水相中加入异丙醇则导致核酸的沉淀，CTAB和其它多数杂质留于异丙醇与水的混合相中，吸出核酸沉淀团经过多次乙醇漂洗和沉淀、TE溶解得到DNA粗提物。
粗提的DNA一般可用于粗略PCR等。
用于精细PCR、Southern杂交和DNA文库构建的DNA则应进一步纯化。
用RNase水解RNA，用酚/氯仿/异戊醇和氯仿/异戊醇抽提去除蛋白杂质等，经乙醇沉淀后可获得较为纯净的植物总DNA。
三、实验材料甘蓝型油菜(Brassica napus L.)幼叶。
四、主要仪器设备及耗材Eppendorf 5804R低温离心机，Hettich Universal 32R低温离心机，Eppendorf Minispin离心机，Sanyo SIM-F124制冰机，TOMY SS-325自动灭菌锅，Millipore Elix纯水系统，Eppendorf research微量移液器系列，GingTian JA2003A电子天平，Satorius PB-10 pH计，HH·S21-4-S恒温水浴锅，UVP GDS8000自动高效紫外透视成像仪，DYY-8C型双稳定时电泳仪及水平电泳槽，Gene spec I快速核酸蛋白自动分析仪，长岭BCD-239家用冰箱，TNZ-30-50液氮生物容器及液氮，微波炉，研钵，离心管（15ml、1.5ml），枪头（10、200和1000μl），两面板，枪头盒，离心管盒（1.5ml）等。
分子生物学常用实验技术
一CTAB 法微量提取植物总DNA1. CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）的作用：CTAB是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性，在这种条件下，蛋白质和中性多聚糖仍留在溶液里，在高离子强度的溶液里，CTAB 与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
因此，CTAB可以用于从大量产生粘多糖的有机体如植物以及某些革兰氏阴性菌（包括E.coli的某些株）中制备纯化DNA 。
2. β-巯基乙醇的作用：巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚轻易去除基因组DNA。
巯基乙醇有消泡的作用。
3. EDAT（乙二胺四乙酸）的作用：是一种重要的络合剂，抑制某些金属蛋白酶的活性，防止DNA被DNase 酶解。
4. 为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA 很安全，因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA 周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。
因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。
但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。
也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。
一般在室温下放置15－30分钟即可。
2.在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc 或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。
植物分子生物学技术与应用
植物分子生物学技术与应用现代科技的发展深刻地影响了植物研究领域，特别是在分子生物学技术方面的突破，为研究植物的生命现象和利用植物的各种功能性成分提供了强大的工具和方法。
本文将介绍植物分子生物学技术的一些常见应用，并探讨其在农业、医药和环境保护等领域的重要作用。
一、基因工程技术在植物生物学研究中的应用基因工程技术的出现革命性地改变了植物生物学研究的方法和手段。
通过基因工程技术，研究人员可以插入、删除或改变植物基因序列，进而改变植物的性状和功能。
例如，转基因技术可以用来提高农作物的产量和抗病性，改善植物的逆境适应能力等。
此外，基因工程技术还有助于揭示植物基因功能和调控网络的机制，从而深入了解植物生命的奥秘。
二、PCR技术在植物遗传分析中的应用聚合酶链反应（PCR）是一种强大的分子生物学技术，可用于扩增和复制DNA片段。
在植物遗传分析中，PCR技术被广泛应用于植物基因型分析、种质资源鉴定和变异检测等方面。
通过PCR技术，研究人员可以快速准确地检测和分析植物品种间的遗传差异，为植物育种和种质资源保护提供有力支持。
三、植物基因组学研究的新进展随着高通量测序技术的不断发展，植物基因组学研究取得了巨大的进展。
通过测序植物基因组，研究人员可以获得关于植物基因组结构、功能和进化的全面信息。
此外，越来越多的植物基因组测序数据被公开发布，为植物分子生物学研究和应用提供了宝贵的资源和参考。
四、植物代谢组学技术在植物化学研究中的应用植物代谢组学技术是一种研究植物代谢物谱的方法，可以全面、高通量地检测和分析植物代谢产物的组成和变化。
植物代谢组学技术广泛应用于发现和鉴定植物中的次生代谢产物、植物化学成分的变异和代谢途径的调控等方面。
这些信息对于植物药物开发、天然产物合成和植物逆境适应机制的研究具有重要意义。
五、植物分子生物学技术在生物安全和环境保护中的应用植物分子生物学技术在生物安全和环境保护中起到了重要作用。
例如，植物检疫和转基因植物的监管需要快速准确地鉴定植物基因型，这就需要应用PCR技术和基因组学方法。
植物分子生物学研究植物分子结构功能和相互作用
植物分子生物学研究植物分子结构功能和相互作用植物分子生物学是一门研究植物分子结构、功能和相互作用的学科。
通过对植物细胞和分子水平的研究，可以深入了解植物的生物化学过程、代谢途径以及与其他生物的相互关系。
本文将对植物分子生物学的研究内容和意义进行探讨。
一、植物分子结构的研究植物由多种分子组成，包括蛋白质、核酸、碳水化合物和脂质等。
植物分子生物学研究的首要任务是确定和描述这些分子的结构。
通过使用分子生物学技术，研究人员可以解析植物分子的组成和空间结构，从而深入探究其功能和相互作用。
在植物分子结构研究中，核酸和蛋白质是两个重要的研究对象。
核酸包括DNA和RNA，是植物遗传信息的主要载体。
通过对植物DNA和RNA的序列分析和结构确定，可以了解植物基因组的组成和调控机制。
而蛋白质在植物中具有重要的功能，包括参与代谢途径、调控生长发育和响应环境胁迫等。
对植物蛋白质的结构和功能研究，对于深入理解植物生物学过程具有重要意义。
二、植物分子功能的研究植物分子生物学的另一个重要方向是研究植物分子的功能。
通过确定分子的结构，可以推测其功能和参与的生物学过程。
在植物分子功能研究中，关注的重点包括酶的催化机制、激素的信号传导和基因的表达调控等。
酶是植物代谢途径中的关键催化剂。
植物分子生物学的研究揭示了多个酶的结构和功能，为深入了解植物代谢途径提供了基础。
激素在植物生长发育和应对环境胁迫过程中起到重要作用。
研究人员通过研究激素受体的结构和信号传导途径，深入了解了激素参与的生物学过程。
此外，植物基因的表达调控是植物生物学研究的热点领域。
研究植物基因的启动子、转录因子和表达抑制因子等分子的结构和功能，可以进一步揭示植物基因调控的分子机制。
三、植物分子相互作用的研究植物分子之间的相互作用对于植物生物学的理解至关重要。
植物分子生物学的研究揭示了多个重要分子间相互作用的机制，包括蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-核酸相互作用和激素-受体相互作用等。
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植物分子生物学实验技术班级：研122班专业：作物生物技术姓名：陕建国学号：20122419授课教师：红英老师实验一：植物DNA和RNA提取方法的讨论一、提取植物DNA和RNA的用处提取植物组织的DNA和RNA，分析其序列，了解序列的排列顺序可以更好的从分子水平上进行研究，从分子水平上改良植物或者说农作物的一些性状、品质等。
（一）提取植物DNA的用处DNA的提取在植物基因工程以及植物分子生物学研究中占有重要地位，DNA 的提取效率直接决定着后续实验的成败。
另外，提取植物DNA在分子育种方面也有很重要的用处。
（二）提取植物RNA的用处提取RNA 可以进行 Northern 杂交、原位杂交、RT-PCR 以及 cDNA 文库构建等很多分子生物学实验。
提取RNA也是进行基因表达分析及基因克隆等分子生物学研究的基础。
二、植物组织DNA的提取方法提取植物DNA的试验原理：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid，DNA）是一切生物细胞的重要组成成分，主要存在于细胞核中，盐溶法是提取DNA的常规技术之一。
从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA，其中还含有大量RNA，即核糖核蛋白。
如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。
DNA不溶于0.14mol/L 的NaCl溶液中，而RNA则能溶于0.14mol/L 的NaCl 溶液之中，利用这一性质就可以将二者从破碎细胞浆液中分开。
制备过程中，细胞破碎的同时就有Dnase释放到提取液中，使DNA因被降解而影响得率，在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸盐和EDTA，既可抑制酶的活性又可使蛋白质变性而与核酸分离，再加入阴离子去垢剂0.15％的SDS，经过2h搅拌，或用氯仿－异醇除去蛋白，通过离心使蛋白质沉淀而除去，得到的是含有核酸的上清液。
然后用95％的预冷乙醇即可把DNA从除去蛋白质的提取液中沉淀出来。
（一）植物DNA的SDS提取法：（来自You are so late的新浪空间）试验试剂：1、研磨缓冲液：称取59.63gNaCl，13.25g柠檬酸三钠，37.2gEDTA－Na分别溶解后合并为一，用0.2mol/L 的NaOH调至pH7.0，并定容至1000ml。
2、10×SSC溶液：称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠，分别溶解，一起定容至1000ml。
3、1×SSC溶液：用10×SSC溶液稀释10倍。
4、0.1×SSC溶液：用1×SSC溶液稀释10倍。
5、Rnase溶液：用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml 的酶液，用1mol/L HCl，pH至5.0，使用前经80℃水浴处理5min（以破坏可能存在的Dnase）。
6 氯仿－异戊醇：按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。
7、 5mol/L 高氯酸钠溶液：称取NaClO4．H2O7 0.23g，先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。
8、SDS（十二烷基硫酸钠）化学试剂的重结晶：将SDS放入无水酒精中达到饱和为止，然后在70～80℃的水浴中溶解，趁热过滤，冷却之后即将滤液放入冰箱，待结晶出现再置室温下凉干待用。
9、1mol／L HCl。
10、0.2mol/L NaOH。
11、二苯胺乙醛试剂：1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中，添加1.5ml浓硫酸，装入棕色瓶，贮存暗处，使用时加0.1ml乙醛液［浓乙醛：H2O＝1：50（V／V）］。
12. 1.0mol/L 高酸溶液（HClO4）。
13、高氯酸溶液。
14、0.05mol/L NaOH。
15、DNA标准液：取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中，再用0.05mol/L NaOH定容至25ml，后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中，加5.0ml 1mol/L HClO4，混合冷却后用0.5mol/L HClO4定容至刻度，则得100μg/ml 的标准溶液。
实验步骤：1、称取植物幼嫩组织10g剪碎置研钵中，加10ml预冷研磨缓冲液并加入0.1g左右的SDS，置冰浴上研磨成糊状。
2、将匀浆无损转入25ml刻度试管中加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，加上塞子，剧烈振荡30s，转入离心管，静置片刻以脱除组织蛋白质。
以4000rpm离心5min。
3、离心形成三层，小心地吸取上层清液至刻度试管中，弃去中间层的细胞碎片、变性蛋白质及下层的氯仿。
4、将试管置72℃水浴中保温3min（不超过4min），以灭活组织的DNA酶，然后迅速取出试管置冰水浴中冷却到室温，加5mol/L 高氯酸钠溶液［提取液：高氯酸钠溶液＝4：1（V／V）］，使溶液中高氯酸钠的最终浓度为1mol/L。
5、再次加入等体积氯仿－异戊醇混合液至大试管中，振荡1min，静置后在室温下离心（4000rpm）5min，取上清液置小烧杯中。
6、用滴管吸95％的预冷乙醇，慢慢地加入烧杯中上清液的表面上，直至乙醇的体积为上清液的两倍，用玻璃棒轻轻搅动。
此时核酸迅速以纤维状沉淀缠绕在玻璃棒上。
7、然后加入0.5ml左右的10×SSC，使最终浓度为1×SSC。
8、重复第6步骤和第7步骤即得到DNA的粗制品。
9、加入已处理的Rnase溶液，使其最后的作用浓度为50～70μg/ml，并在37℃水浴中保温30min，以除去RNA。
10、加入等体积的氯仿－异戊醇混合液，在三角瓶中振荡1min，再除去残留蛋白质及所加Rnase蛋白，室温下以4000rpm离心5min，收集上层水溶液。
11、再按6、7步骤处理即可得到纯化的DNA液。
（二）植物DNA的CTAB提取法：（来自You are so late的新浪空间）试验步骤：1、称取新鲜叶片2-3g，剪碎放入研钵中，在液氮中研磨成粉末。
2、将粉末转移到加有7ml经预热的15×CTAB提取缓冲液15ml离心管中，迅速混匀后置于65℃水浴中，温育30min。
3、取出离心管,冷却至室温，加入氯仿/异戊醇(24:1)，充分混匀，室温下2300转离心20min。
4、将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。
充分混匀，2300rpm离心20min。
5、转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。
1000rpm离心10min，使DNA沉淀于管底。
6、加入1.5-2ml的1mol/L NaCl及5μl RNase置于56℃水浴中过夜。
7、待DNA完全溶解后，加2-3ml 4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀，挑出DNA，置于15ml离心管中，用70%乙醇清洗30min。
8、离心机甩5s，倒出70%乙醇，再用95%乙醇浸泡5min，倒出95%乙醇，在超净工作台上吹干。
. . .9、将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μl TE溶液中于-20℃保存.（三）植物叶片ＤＮＡ的提取步骤（来自/Invite/23b2c5d6 b04a 43e2 bbfc d1e1a002dc21）实验步骤1、在50ml带盖离心管（放在-20度预冷）中加入20ml提取缓冲液I，60℃水浴预热。
2、水稻幼苗或叶子5~10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30~60分钟（时间长，DNA产量高），不时摇动。
3、加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止损伤皮肤），室温下静止5~10分钟，使水相和有机相分层（必要时可重新混匀）。
4、室温下5000rpm离心5分钟。
5、仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6、在1.5ml eppendorf 管中加入1ml TE。
用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含TE的离心管中，DNA很快溶解于TE。
7、如DNA不形成絮状沉淀，则可用5000rpm离心5分钟，再将沉淀移入TE管中。
这样收集的沉淀，往往难溶解于TE，可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。
8、将DNA溶液3000rpm离心5分钟，上清液倒入干净的5ml离心管。
9、加入5μlRNaseA（10μg/μl）,37℃ 10分钟，除去RNA（RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。
10、加入1/10体积的3mol/L NaAc 及2×体积的冰乙醇，混匀，-20℃放置20分钟左右，使DNA形成絮状沉淀。
11、用玻璃捞出DNA沉淀，70%乙醇漂洗，再在干净吸水纸上吸干。
12、将DNA重新溶解于1 ml TE中，－20℃贮存。
三、植物RNA的提取植物细胞含有细胞质RNA、细胞核RNA和细胞器RNA。
细胞质RNA包括mRNA、rRNA、tRNA。
细胞核RNA主要有细胞质RNA的前体及小分子细胞核RNA(snRNA)、染色质RNA(chRNA)等。
细胞器RNA主要指线粒体RNA及叶绿体RNA。
这些RNA统称细胞总RNA，其中大量的是rRNA，占80％左右。
基因转录产物mRNA在总RNA中只占1％～5％。
不同的mRNA在分子大小、核苷酸序列，以及在细胞转录水平等方面各不相同，但真核细胞mRNA 3ˊ末端都具有20～200个不等的多聚腺苷酸的尾，称为poly(A)结构。
利用poly(A)结构可以把mRNA 从总RNA中分离出来。
对于Northern杂交可以使用植物细胞总RNA，也可以使用由总RNA 中分离出的mRNA。
植物细胞RNA提取中的主要问题是防止RNA酶的降解作用。
RNA酶是一类水解核糖核酸的切酶，它与一般作用于核酸的酶类有着显著的不同，不仅生物活性十分稳定，耐热、耐酸、耐碱，作用时不需要任何辅助因子，而且它的存在非常广泛，除细胞含有丰富的RNA 酶外，在实验环境中，如各种器皿、试剂、人的皮肤、汗液、甚至灰尘中都有RNA酶的存在。
因而，生物体源、外源RNA酶的降解作用是导致RNA提取失败的致命因素。
源RNA酶来源于材料的组织细胞，提取自始至终都应对RNase活性进行有效抑制。
RNA 提取过程中将蛋白质变性剂与RNase抑制剂联合使用效果较理想。
蛋白质变性剂包括酚、氯仿、SDS、Sarkosyl(十二烷酰肌氨酸钠)、DOC(脱氧胆酸钠)、盐酸胍、异硫氰酸胍、4—氨基水酸钠、三异丙基萘磺酸钠等；RNA酶抑制剂有RNasin(RNase阻抑蛋白)、氧钒核糖核苷复合物等。
外源RNA酶的抑制主要是使用DEPC(焦碳酸二乙酯C2HsOCOOCOOCxH5)，它能与RNase分子中的必需基团组氨酸残基上的咪唑环结合而抑制酶活性，用于水、试剂及器皿的RNase灭活。
DEPC与肝素合用效果增强，值得注意的是DEPC在Tris溶液中很不稳定，很快分解成CO2 及C2H5OH，因而不能用于Tirs溶液的RNase灭活。