台盼蓝染色方法

合集下载

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝(Trypan Blue) 就是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞就是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960、82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞与死细胞。

台盼蓝就是组织与细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:
1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至0、
4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0、4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0、04%)
4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞与死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意:
1、保存条件:室温保存。

2、有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套与口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

1 / 22、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0.04%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

-----精心整理,希望对您有所帮助!。

台盼蓝染色法

台盼蓝染色法

材料:
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管;
2. 试剂:0.4%台盼蓝染液;
3. 台盼蓝(Trypan blue):0.4g;
4. 生理盐水:100ml;
操作步骤:
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液;
2. 用0.5%胰蛋白酶:0.2%EDTA=1:1混合液来消化培养的贴壁细胞;
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液;
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度(方法及浓度范围与细胞计数相同);
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴,室温下染3—5min;
6. 染色过的细胞材料,取一滴细胞悬液置玻片上,加盖玻片后放高倍镜下观察;
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大,无光泽。

活细胞不着色并保持正常形态,有光泽;
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目;
9. 统计未染色细胞。

可按公式计算出细胞活率。

细胞活率(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。

注意事项:
1. 染色时间不能太长,否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色,使监测结果偏低;
2. 另可结合细胞计数方法,同时进行细胞计数和活力检测。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0.04%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

Welcome To Download !!!欢迎您的下载,资料仅供参考!。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0.04%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色

台盼蓝染色

台盼蓝染色操作步骤
2011/5/5来源:上海泛柯生物科技有限公司
台盼蓝是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性。

还常用于细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,死细胞会被染成蓝色。

操作步骤:
1、制作4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至100ml,用滤纸过滤,4度保存。

使用时,用PBS 稀释至0.4%
2、胰酶消化单壁细胞,制备单细胞悬液,并适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合均匀。

(终浓度为0.04%)
4、计数:在三分钟内,分别计数活细胞盒和死细胞
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,活细胞拒染呈无色透明状
6、统计细胞活力:活细胞率(%)=活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%
PBS:磷酸缓冲液。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: ,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:
1、配制4%台盼蓝:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至
100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度%)
4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意:
1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和顺序

台盼蓝染色实验原理和顺序

台盼蓝染色实验原理和顺序蓝染是一种传统的织物染色工艺,其原理是利用蓝液中的染料与纤维物质发生化学反应,将染料牢固地固定在纤维素纤维上。

在蓝染过程中,主要包括浸泡、氧化和还原三个步骤。

下面将详细介绍蓝染色实验的原理和顺序。

实验原理:1.染料选择:蓝染色实验中一般选择天然蓝染料,如蓝靛。

这些染料在碱性条件下可以溶解并与纤维素纤维发生反应,形成稳定的染料-纤维素结合物。

2.碱性条件:蓝染实验中通常会添加碱液来改变染液的酸碱性,增强染料与纤维素纤维的反应性。

碱液还可以使染料变得更可溶于水,并提高染色的效果。

3. 氧化还原反应:蓝染实验中涉及到氧化还原反应。

染色初始阶段,染料经过氧化过程与纤维素发生反应,形成游离的蓝色阳离子离子(Indigo),此时纤维变为黄色。

接着,通过还原反应,将染料还原为无色的蓝靛并沉淀附着于纤维素上。

这个过程叫做“固定”。

实验顺序:1.准备:将天然蓝染料(如蓝靛)粉末溶解于适量水中,制成蓝液。

同时准备纱线、棉布等需要染色的织物。

2.处理织物:将织物酒精湿润,然后浸泡在碱性水溶液中,以增强织物吸收染料的能力。

3.浸泡:将处理好的织物放入蓝液中,使其完全浸泡。

浸泡时间根据需要染色的颜色深浅而定,一般为几分钟到几小时不等。

4.取出:将浸泡好的织物从蓝液中取出,让它自然晾干。

这个过程中,纤维上的染料阳离子会与氧发生氧化反应,生成蓝靛沉淀。

5.固定:取出已干燥的织物,将其暴露在空气中,蓝液中的染料阳离子会经过氧化还原反应,转化为稳定的靛蓝色素并与纤维素纤维牢固结合。

6.染色效果增强:染色后,如果需要加强染色效果,可将织物反复进行浸泡和晾干,直至达到理想的颜色深浅。

7.旋洗:完成染色后,可将织物用清水进行旋洗,以去除多余的染料。

8.干燥定型:最后将织物晾干,并进行烘干定型处理,以使染料与纤维更牢固地结合。

总结:蓝染色实验主要包括浸泡、氧化还原和还原三个步骤。

通过选择适当的蓝染料、调节酸碱度和控制染色时间,可以实现理想的染色效果。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤LEKIBM standardization office【IBM5AB- LEKIBMK08- LEKIBM2C】台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: ,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:1、配制4%台盼蓝:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤一、原理台盼蓝染色实验是利用台盼蓝(Toluidine Blue)染料与细胞或组织中的核酸结合,形成紫蓝色染色体。

台盼蓝染色的染料溶液带有酸性成分,其酸羧基在酸性条件下可与细胞核酸中的碱基形成氢键结合。

台盼蓝染料主要染色核酸,使得细胞核、细胞核周围的细胞质和一些细胞器着色,从而能够观察到细胞核结构、核仁和核膜的位置和形态,以及纤维蛋白、蛋白多肽和糖蛋白的酸性地带。

二、步骤1.组织固定:将需要染色的组织切片取出,用4%的冷醇固定液浸泡20分钟。

2. 渗透:将固定的组织切片用0.1%的Tween 20溶液处理3次,每次5分钟。

Tween 20可以增加细胞膜的通透性,有利于染料进入细胞内。

3.染色:用0.05%的台盼蓝染料溶液将组织切片浸泡5-10分钟,让染料与组织中的核酸结合形成染色体。

染色时间可以根据需要调整,一般情况下5分钟就足够。

4. 洗涤:用去离子水或者含有0.1%Tween 20的PBS缓冲液洗涤组织切片3次,每次5分钟。

这一步是为了去除多余的染料。

5.脱水:用70%、85%和95%的无水酒精将组织切片脱水,每个浓度的酒精浸泡3-5分钟。

6.透明化:将组织切片用苯酚-甲苯中透明化数小时。

透明化液一般是苯酚和甲苯的混合物,可以使组织切片变得透明,便于观察。

7.封片:将透明的组织切片取出,放到玻璃切片上,用封片胶将其封住,然后放置干燥。

8.观察:将封好的玻璃切片放在显微镜下观察,可以用不同倍数的物镜来观察不同部位的细胞和组织结构。

三、注意事项1.染色过程中注意避免阳光直射,避免光照会影响染色效果。

2.处理切片要轻柔,避免切片碎裂或变形。

3.实验操作要严格遵守安全规范,注意保护实验人员的安全。

4.封片时要避免出现气泡,以免影响观察。

综上所述,台盼蓝染色实验是一种常用的染色方法,通过与细胞核酸结合,可以使细胞和组织结构得到清晰可见。

实验步骤简单,但是在操作过程中需要注意一些细节,确保染色效果和实验安全。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤蓝染是一种传统的染色技术,起源于中国,在日本也有悠久的历史。

蓝染色实验是为了研究蓝染工艺的原理和步骤,以便更好地理解和应用蓝染技术。

下面是台盼蓝染色实验的原理和步骤。

一、实验原理:蓝染是利用大蓝(天然靛蓝)的还原性能,将其氧化为淡蓝或蓝紫色,再使其还原为不溶于水的颜料沉淀物质,直接着色于织物纤维上,形成美观、持久、不退色的蓝色。

二、实验步骤:步骤一:准备材料1.织物:选择一块白色的纯棉织物,洗净晾干。

2.大蓝:购买或制作大蓝溶液。

步骤二:还原大蓝1.在小瓶中加入约10毫升的浓度为2%的氧化还原剂,如明矾溶液。

2.将少量大蓝溶液加入小瓶中,摇动均匀,待溶液变为淡黄色。

步骤三:染色1.将纯棉织物完全浸泡在还原后的大蓝溶液中,确保织物彻底湿透。

2.取出织物,轻轻拧干,不要使其过于湿润。

3.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方,等待氧化。

步骤四:氧化1.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方,等待氧化。

2.等待数小时,直至织物逐渐变蓝。

步骤五:固色1.取出已经氧化的织物,以冷水冲洗,以去除未结合的颜料。

2.将固色剂溶液(如明矾溶液)浸泡在蓝染织物中,以固定颜色。

3.用清水冲洗织物,直至水清澈。

步骤六:晾干将蓝染织物晾干,确保颜料完全固定在织物上。

通过以上步骤,就可以进行台盼蓝染色实验,获得漂亮的蓝色织物。

补充说明:1.在进行实验中,需要注意安全,避免溶液溅入眼睛或皮肤。

2.在进行染色过程时,要尽量保持环境洁净,以避免杂质进入织物。

3.实验中使用的材料可以根据需要进行调整和替换,以探索更多的蓝染效果。

4.实验所述的步骤是一种基本的蓝染方法,实际应用中可能包括更多的步骤和技巧。

总结:台盼蓝染色实验可以帮助我们理解蓝染工艺的原理和步骤,从而更好地应用蓝染技术。

通过实验,我们可以亲自体验到蓝染的魅力,并了解到大蓝的还原性能和氧化过程,以及固色剂在蓝染工艺中的作用。

蓝染作为一种古老的染色技术,在现代仍然具有广泛的应用和价值,通过实验的学习和实践,我们可以更好地传承和创新蓝染技术。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理之老阳三干创作台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,经常使用于检测细胞膜的完整性,还经常使用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: 960.82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不克不及够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最经常使用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,而且操纵非常简单。

实验步调:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保管。

使用时用PBS稀释至0.4%。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0.04%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保管条件:室温保管。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操纵。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤一、实验原理:台盼蓝(TAE)是一种经典的缓冲液,在DNA电泳中具有良好的缓冲性能。

而台盼蓝染料则是能够与DNA结合形成复合物,在紫外线下发出蓝色荧光。

实验通过台盼蓝染色将DNA可视化,从而测量DNA的存在和浓度。

二、实验步骤:1.准备实验材料和设备:-台盼蓝染色缓冲液(TAE缓冲液)-加载缓冲剂-DNA样品(待测样品)-DNA分子量标准品-DNA电泳仪-薄胶片-吸取器-紫外线照射器2.准备电泳槽:在电泳槽中注入足够的TAE缓冲液,以覆盖电泳槽的整个底部,然后添加加载缓冲剂到电泳槽中。

3.准备DNA样品:将待测样品和DNA分子量标准品分别加入到不同的试管中。

通常,待测样品需要经过DNA提取和纯化等预处理步骤。

4.加载样品:取一定数量的待测样品和分子量标准品,分别加入到电泳槽中的凹槽中,在同一凹槽中加入适量的台盼蓝染色缓冲液。

5.进行电泳:将电泳槽盖上,并将其连接到电泳电源上。

设置电压和时间参数,开始电泳过程。

6.取出胶片:电泳结束后,将胶片从电泳槽中取出,将其放在薄胶片上。

然后在紫外线照射器下观察胶片上的DNA带。

7.获得结果:根据DNA带的迁移距离和颜色强度,可以判断DNA的存在和浓度。

通常,DNA带的迁移距离与分子量呈反比,而颜色强度则与DNA的浓度成正比。

需要注意的是,实验过程中需要严格控制实验的环境和操作,以避免DNA污染和损伤。

总结:台盼蓝染色实验是一种常用的染色实验,可以用于检测DNA的存在和浓度。

通过将DNA样品与台盼蓝染色缓冲液混合后进行电泳,然后观察电泳胶片上的DNA带,可以得出DNA的存在和浓度。

实验准备工作较为简单,但实验过程需要严格控制环境和操作,以确保实验结果的准确性。

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤

台盼蓝染色实验原理和步骤LG GROUP system office room 【LGA16H-LGYY-LGUA8Q8-LGA162】台盼蓝染色实验原理台盼蓝(Trypan Blue) 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O14S4Na4,分子量: ,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:1、配制4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度%)4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%注意:1.保存条件:室温保存。

2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
相关文档
最新文档