细胞粘附因子
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48 36 24 72 24 66 72 72 72 24 24
4-6
6 12 12 6 4-6 6 6 6 8 4-8 4-8
IL-4
IL-5 IL-5 IL-5 IL-5 IL-7 IL-9 IL-11 SCF （干细胞因子） TGF-β GM-CSF M-CSF/G-CSF
TS1 T10 UT-7 CCL-64* DA3.15, IF M14/NES60.4
为待测品活性的定量测定基础。
本法常用于TNF等的测定
三、抗病毒活性测定法
WISH、Hep2/c 人干扰素 L929 小鼠干扰素 Ratec 大鼠干扰素 A549 MDBK 多种族的IFN-α和IFN-γ VSV、EMCV及Sindbis virus等
细胞病变效应(CPE)、 抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量
TNF IL-2 IL-3
二、细胞毒活性测定法
对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死 亡。因此，待测细胞因子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测 培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性呈正比。 试验时，与细胞增殖或抑制方法一样，以已知活性的细胞因子标准品为对 照。死、活细胞情况可用同位素51Cr释放法判断，或应用台盼兰染色死细 胞后直接计数。也可通过结晶紫、萘酚蓝黑、MTT、NBB等着染活细胞，再 用脱色液脱出染料后酶标仪比色测定吸光值。死细胞数、51Cr释放量越高 或比色测定的吸光值越低，表明待测细胞因子的细胞毒活性则越高。应用 系列稀释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系的标准曲线，以此作
பைடு நூலகம்
生物学测定法原理
根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指
示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中
细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/ml)表示
刺激细胞增殖或集落形成的活性 有助于细胞因 子检测的活性 作用包括 维持细胞生长和存活的特性抑制 细胞生长或破坏细胞的效应促进 细胞趋化或抗病毒作用
本法常用于IFN等的测定，IFN可诱导细胞产生抑制病毒RNA和DNA合成 的酶，保护细胞不受病毒感染，产生细胞病变效应（CPE）。
三、抗病毒活性测定法
细胞病变抑制法结果判断举例*
细胞病变程度分为5个等级 即： “0”，表示无明显CPE； “1+”，CPE≤25％； “2+”，CPE为25～50％； “3+”，CPE为50～75％； “4+”，CPE为75～100％。 根据病变程度找出CPEI50的 标本稀释范围，并以此计算 出距离比例和确定IFN效价。 该法操作复杂、影响因素 较多，在试验前应对所用的 病毒进行滴定。
生物学测定法原理
一、促进细胞增殖和增殖抑制法
以细胞因子依赖性细胞株为靶向，通过观 察特定的细胞因子刺激或抑制依赖性细胞株增 殖来评估细胞因子的活性水平。
一、促进细胞增殖和增殖抑制法
细胞增殖检测方法分类
直接计数法 简便、直观、费时、主观因素影响大、难以标准化 和自动化 细胞代谢活性测定方法 3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT 细胞代谢产物测定法 代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可 溶性分子测定法
(1) 同位素掺入法（3H-TdR）
通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的 增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将 核苷标记上可以示踪的同位素（3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含 量，则可反映细胞增殖的程度。
结果客观易于自动化；适 用于大标本量的测定
标本稀释度 log4 3 4 5 6 7 8 两孔平均 CPE 0 0 0 1.5 2.5 0 细胞病变 抑制程度 4 4 4 2.5 1.5 0 细胞病变 抑制积累 16 12 8 4 1.5 0 细胞病变 积累 0 0 0 1.5 4 8 细胞病变 抑制率 16/16 (100%) 12/12 (100%) 8/8 (100%) 4/5.5 (73%) 1.5/5.5 (27%) 0/8(0%)
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
细胞株/原代细胞
B9，MH60,BSF2,TTD1 B9-11 B9-1-3 KYM-1D4 MV-3D9 WEHI-164/clone13 32D/Mp110S L929 CTLL-2 小鼠基质细胞, 32DCL-27
方法的特异性受依赖细胞株 影响；放射性污染
常见细胞因子3H-TdR掺入检测法所需细胞及参考试验条件
细 胞 株
D10G4.1 L929 CTLL-2
FDC-P1,32DCL-27
所需浓度（细胞数/ml）
2×105 2×105 105 5×104
3H-TdR前培养时间
3H-TdR后培养时间
检测细胞因子
第十六章 细胞因子与细胞粘附因子的测定
基本概念
细胞因子：
是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌 的高活性、多功能、小分子多肽
细胞粘附因子：
介导细胞间或细胞与细胞外基质间粘附作用 的膜性或可溶性分子
第一节 生物学测定方法
分
类
基于DNA检测的分子生物学测定法：
DNA扩增法 RNA印迹法 原位杂交法 核酸酶保护分析生物活性测定法
细胞终浓度（细胞数/ml）
5×104/2×105 5×104 5×104 2×103 5×103 2×103 1×103 2×105 105 1.5×105
加入MTT前温育时间（h）
96/48 96 96 72 120 72 44 56 22-24 72
检测细胞因子
IL-6 IL-11 IL-13
TGF-β TNF
IL-1 IL-1 IL-2 IL-3
48 56 24 24
18-20 16 4-6 4-8
CT.4S
CH12 B13 T88-M BCL1
Clone-K,I×N/2bx
105
5×103 5×104 1×105 105 105 3×104 105 1.5×105 5×108 5×104 5×104
24
4-6
6 12 12 6 4-6 6 6 6 8 4-8 4-8
IL-4
IL-5 IL-5 IL-5 IL-5 IL-7 IL-9 IL-11 SCF （干细胞因子） TGF-β GM-CSF M-CSF/G-CSF
TS1 T10 UT-7 CCL-64* DA3.15, IF M14/NES60.4
为待测品活性的定量测定基础。
本法常用于TNF等的测定
三、抗病毒活性测定法
WISH、Hep2/c 人干扰素 L929 小鼠干扰素 Ratec 大鼠干扰素 A549 MDBK 多种族的IFN-α和IFN-γ VSV、EMCV及Sindbis virus等
细胞病变效应(CPE)、 抑制病毒蚀斑形成或抑制病毒的产量
TNF IL-2 IL-3
二、细胞毒活性测定法
对指示细胞具有破坏作用的细胞因子，若与细胞共育将会导致细胞死 亡。因此，待测细胞因子作一系列稀释后加至指示细胞培养体系，以检测 培养细胞的死细胞数作为判断指标，死细胞数量与细胞因子的活性呈正比。 试验时，与细胞增殖或抑制方法一样，以已知活性的细胞因子标准品为对 照。死、活细胞情况可用同位素51Cr释放法判断，或应用台盼兰染色死细 胞后直接计数。也可通过结晶紫、萘酚蓝黑、MTT、NBB等着染活细胞，再 用脱色液脱出染料后酶标仪比色测定吸光值。死细胞数、51Cr释放量越高 或比色测定的吸光值越低，表明待测细胞因子的细胞毒活性则越高。应用 系列稀释的细胞因子标准品，制作其活性与剂量关系的标准曲线，以此作
பைடு நூலகம்
生物学测定法原理
根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指
示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中
细胞因子的活性水平,一般以活性单位(U/ml)表示
刺激细胞增殖或集落形成的活性 有助于细胞因 子检测的活性 作用包括 维持细胞生长和存活的特性抑制 细胞生长或破坏细胞的效应促进 细胞趋化或抗病毒作用
本法常用于IFN等的测定，IFN可诱导细胞产生抑制病毒RNA和DNA合成 的酶，保护细胞不受病毒感染，产生细胞病变效应（CPE）。
三、抗病毒活性测定法
细胞病变抑制法结果判断举例*
细胞病变程度分为5个等级 即： “0”，表示无明显CPE； “1+”，CPE≤25％； “2+”，CPE为25～50％； “3+”，CPE为50～75％； “4+”，CPE为75～100％。 根据病变程度找出CPEI50的 标本稀释范围，并以此计算 出距离比例和确定IFN效价。 该法操作复杂、影响因素 较多，在试验前应对所用的 病毒进行滴定。
生物学测定法原理
一、促进细胞增殖和增殖抑制法
以细胞因子依赖性细胞株为靶向，通过观 察特定的细胞因子刺激或抑制依赖性细胞株增 殖来评估细胞因子的活性水平。
一、促进细胞增殖和增殖抑制法
细胞增殖检测方法分类
直接计数法 简便、直观、费时、主观因素影响大、难以标准化 和自动化 细胞代谢活性测定方法 3H-TdR、125I-UdR掺入法或MTT 细胞代谢产物测定法 代谢产物荧光强度测定法和指示细胞表面标记或可 溶性分子测定法
(1) 同位素掺入法（3H-TdR）
通过检测细胞DNA合成的增加或减少来判断细胞增殖的方法。在细胞的 增殖过程中，DNA合成的增加使得指示细胞对核苷或碱基的需求增多，若将 核苷标记上可以示踪的同位素（3H/125I ），通过检测细胞内的同位素含 量，则可反映细胞增殖的程度。
结果客观易于自动化；适 用于大标本量的测定
标本稀释度 log4 3 4 5 6 7 8 两孔平均 CPE 0 0 0 1.5 2.5 0 细胞病变 抑制程度 4 4 4 2.5 1.5 0 细胞病变 抑制积累 16 12 8 4 1.5 0 细胞病变 积累 0 0 0 1.5 4 8 细胞病变 抑制率 16/16 (100%) 12/12 (100%) 8/8 (100%) 4/5.5 (73%) 1.5/5.5 (27%) 0/8(0%)
(2) MTT 比色法
特点：不使用放射性核素， 以细胞代谢变化为增殖指征 指示细胞的增殖情况与线粒体代谢活性相关
与同位素掺入法相比
测定步骤类似
掺入物：MTT而非3H-TdR； 反应条件：选用的细胞及其浓度、 培养时间不同
细胞株/原代细胞
B9，MH60,BSF2,TTD1 B9-11 B9-1-3 KYM-1D4 MV-3D9 WEHI-164/clone13 32D/Mp110S L929 CTLL-2 小鼠基质细胞, 32DCL-27
方法的特异性受依赖细胞株 影响；放射性污染
常见细胞因子3H-TdR掺入检测法所需细胞及参考试验条件
细 胞 株
D10G4.1 L929 CTLL-2
FDC-P1,32DCL-27
所需浓度（细胞数/ml）
2×105 2×105 105 5×104
3H-TdR前培养时间
3H-TdR后培养时间
检测细胞因子
第十六章 细胞因子与细胞粘附因子的测定
基本概念
细胞因子：
是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌 的高活性、多功能、小分子多肽
细胞粘附因子：
介导细胞间或细胞与细胞外基质间粘附作用 的膜性或可溶性分子
第一节 生物学测定方法
分
类
基于DNA检测的分子生物学测定法：
DNA扩增法 RNA印迹法 原位杂交法 核酸酶保护分析生物活性测定法
细胞终浓度（细胞数/ml）
5×104/2×105 5×104 5×104 2×103 5×103 2×103 1×103 2×105 105 1.5×105
加入MTT前温育时间（h）
96/48 96 96 72 120 72 44 56 22-24 72
检测细胞因子
IL-6 IL-11 IL-13
TGF-β TNF
IL-1 IL-1 IL-2 IL-3
48 56 24 24
18-20 16 4-6 4-8
CT.4S
CH12 B13 T88-M BCL1
Clone-K,I×N/2bx
105
5×103 5×104 1×105 105 105 3×104 105 1.5×105 5×108 5×104 5×104
24