分生试验技术(304页PPT课件)
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分生繁殖技术
分生繁殖技术(总7页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除分生繁殖技术一、分生繁殖基本知识㈠、分生繁殖概述：分生育苗是利用植物体的再生能力，把根（茎）蘖或丛生枝从母株上分割下来，另行栽植培育，使之形成新植株的一种繁殖方法。
该育苗方法具有简单易行、成活率高、成苗快、繁殖简便等优点，但繁殖系数低。
在生产中主要用于丛生性强、萌蘖性强和能形成球根的宿根花卉、球根花卉以及部分花灌木。
如菊花、八仙花、贴梗海棠、棣棠、郁李、玫瑰、绣线菊、紫荆等常采用分株繁殖方法。
㈡、分生方法球根花卉植株的地下能形成肥大的变态器官。
根据器官的来源不同可分为块根类、根茎类、块茎类、球茎类、鳞茎类等。
不同的球根类型，采用的分生方法不同。
1、分球繁殖方法⑴、块根类分生育苗块根通常成簇着生于根茎部，不定芽生于块根与茎的交接处，而块根上没有芽，在分生时应从根茎处进行切割，适用于大丽花、花毛茛等。
大丽花块根⑵、根茎类分生育苗用利器将粗壮的根茎分割成数块，每块带有2—3个芽，另行栽植培育。
适用于美人蕉、鸢尾等。
荷花根茎⑶、球茎类分生育苗鸢尾科的一些花卉，如唐菖蒲、球根鸢尾、小苍兰等，在其母球旁能产生多个更新球和子球，可在茎叶枯黄之后，整株挖起，将新球从母株上分离，并按球茎的大小进行分级，大球种植后当年可开花，中球可栽培一年后第二年开花，小的子球需经过3年培育后才能开花。
也可将老球茎分割数块，每块上都要有芽，再另行栽植。
生产上常用分栽小球的方法繁殖。
图8-4 百合地下部及地上部形态1、珠芽2、侧鳞茎3、茎出根4、母球5、新球6、去除母球鳞片后的形态⑷、鳞茎类分生育苗鳞茎是由肉质的鳞叶、主芽和侧芽、鳞茎盘等部分组成。
母鳞茎发育中期后，侧芽生长发育形成多个新球。
通常在植株茎叶枯黄以后将母株挖起，分离母株上的新球。
适用于百合、郁金香、风信子、朱顶红、水仙、石蒜葱兰、红花酢浆草等。
《有丝分裂实验》课件
1 数据分析
分析实验结果以确定是否达到预期的结论
2 异常情况
讨论可能导致异常结果的因素
3 讨论和观点
对实验结果进行进一步的思考和讨论，提出可能的观点和解释
实验的意义和应用
有丝分裂的研究对于多个领域有着重要的意义和广泛的应用。
生物医学
介绍有丝分裂在疾病研究和治疗中的应用
农业
说明有丝分裂在植物育种和改良中的重要性
《有丝分裂实验》PPT课 件
通过本次课件，我们将深入了解有丝分裂实验的过程和结果，探讨其在细胞 学研究中的意义和应用。
实验介绍
有丝分裂实验是一递。 • 介绍有丝分裂实验的重要性 • 解释为什么要进行这个实验 • 提出研究问题
实验背景和目的
了解细胞的分裂过程对于深入研究细胞的功能和遗传基础至关重要。
背景
介绍有丝分裂的定义和基本 原理
目的
了解为什么要研究有丝分裂 以及研究目标
重要性
说明有丝分裂的研究对于人 类健康和科学研究的意义
实验步骤和材料
有丝分裂实验需要使用特定的材料和遵循一系列步骤来观察和分析细胞的分裂过程。
1
准备工作
列出实验所需的仪器和试剂清单
2
标本制备
详细描述如何制备观察细胞分裂的标本
3
显微镜观察
介绍显微镜的使用和观察过程
4
数据收集
记录观察到的细胞分裂数据
实验结果和分析
通过观察和记录数据，我们可以得出有关细胞分裂过程和结果的相关结论。
分裂过程
描述有丝分裂的各个阶段以及细 胞的变化
染色体结构
讨论染色体的组成和功能
细胞分裂机制
解释细胞分裂过程中的关键步骤
实验讨论
实验实训六花卉的分生繁殖
实验实训六花卉的分生繁殖实验实训六花卉的分生繁殖一、目的要求分生繁殖是花卉无性繁殖的主要方式之一。
通过实训，使学生了解分生繁殖的类型、原理，掌握分生繁殖的方法。
二、原理分生繁殖是植物营养繁殖方式之一，是人为地将植物体分生出来的幼植物体（如吸芽、珠芽等），或者是植物营养器官的一部分（如走茎及变态茎等）与母株分离或分割，另行栽植而形成独立生活的新植株。
一些植物本身就具有自然分生能力，并借以繁殖后代。
三、材料及用具1.材料：萱草、一叶兰、大丽花、唐菖蒲、美人蕉、兰花等 .2.用具：枝剪、培养土、浇水壶、利刀、杀菌剂、木炭粉等。
四、内容与步骤（一）分株（以一叶兰为例）1.将待分株的植物从盆中取出，用枝剪剪去枯、残、病、老根，并抖落部分附土。
2.将根际发生的萌蘖与母株分开，并作适当修剪。
3.按新植株的大小选用相应规模的花盆，用碎盆片盖于盆底的排水孔上，将凹面向下，盆底用粗粒或碎砖块等形成一层排水物，上面再填入一层培养土，以待植苗。
4.用左手拿苗放于盆口中央深浅适当位置，填培养土于苗根的四周，用手指压紧，土面与盆口应留适当距离，土面中间高，靠盆沿低。
5.栽植完毕后，用喷壶充分喷水，置阴处数日缓苗，待苗恢复生长后，逐渐放于光照充足处。
（二）分球（以大丽花为例）取出贮藏的块根，将每一块根及附着生于根颈上的芽一起切割下来，用拌有杀菌剂的木炭粉涂抹伤口，阴干后，另行栽植。
若根颈部发芽少的品种，可每2～3条块根带一个芽而切割。
6.注意事项（1）分生繁殖一般于休眠期进行。
（2）新植株不宜过小，以免影响开花。
（3）分离植株时要小心操作，以免伤植株茎、叶；分株时注意保留块根上的发芽点，若发芽点不明显，可先于温室催芽。
（4）新栽植时尽量避免窝根。
五、思考与作业1.分生繁殖有哪几种形式？举例说明。
2.如何确定分生繁殖时间？3.记载实训过程。
分子生物学研究生分生实验(全部3次试验)1月10日课件
实验进度安排
11月7日 重组技术（一） RNA提取、RT-PCR 电泳鉴定、纯化
连接
11月14日 重组技术（二）
感受态制备、 转化 培养
11月21日 重组技术（三）
重组质粒提取 酶切鉴定
1、掌握实验原理包括RNA提取、逆转录、 PCR、琼脂糖凝胶电泳、感受态制备及 重组DNA转化、重组子的筛选和鉴定
• 1、按Binding Buffer/PCR产物=4：1比例加入Binding Buffer， 混匀；置于50-60 ℃水浴10min，使胶彻底融化
• 2、把混合液转移到收集管的UNIQ-10柱中，室温放置2min， 8000rpm离心1min
• 3、倒掉收集管中的废液，加500ul Wash Solution 到UNIQ-10柱 子中，8000rpm室温离心1min
重组质粒提取 酶切鉴定
实验二 感受态细胞的制备、转化、培养
一、实验目的
• 1、掌握感受态细胞的制备。 • 2、掌握DNA转化过程 • 3、掌握蓝白斑筛选的原理
二、实验原理
感受态制备的实验原理：
体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞（E.coli DH5α菌）才 能大量的进行复制、增殖和表达。细菌处于容易吸收外源DNA的状态 叫感受态。
• 5） 待菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，37℃培 养过夜，观察菌落。
四、注意事项
1、转化实验必须在低温中进行，温度波动严重影响转化效 率，所用的试剂均应冰浴，细菌保持在4℃以下；
细菌染色体
含有lacZ基因C端序列
β-半乳糖苷酶缺陷型菌株
生成 有活性的 β-半乳糖苷酶
载体
多克隆位点 LacZ’基因
β-半乳糖苷酶启动子
激活 IPTG
11月7日 重组技术（一） RNA提取、RT-PCR 电泳鉴定、纯化
连接
11月14日 重组技术（二）
感受态制备、 转化 培养
11月21日 重组技术（三）
重组质粒提取 酶切鉴定
1、掌握实验原理包括RNA提取、逆转录、 PCR、琼脂糖凝胶电泳、感受态制备及 重组DNA转化、重组子的筛选和鉴定
• 1、按Binding Buffer/PCR产物=4：1比例加入Binding Buffer， 混匀；置于50-60 ℃水浴10min，使胶彻底融化
• 2、把混合液转移到收集管的UNIQ-10柱中，室温放置2min， 8000rpm离心1min
• 3、倒掉收集管中的废液，加500ul Wash Solution 到UNIQ-10柱 子中，8000rpm室温离心1min
重组质粒提取 酶切鉴定
实验二 感受态细胞的制备、转化、培养
一、实验目的
• 1、掌握感受态细胞的制备。 • 2、掌握DNA转化过程 • 3、掌握蓝白斑筛选的原理
二、实验原理
感受态制备的实验原理：
体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞（E.coli DH5α菌）才 能大量的进行复制、增殖和表达。细菌处于容易吸收外源DNA的状态 叫感受态。
• 5） 待菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，37℃培 养过夜，观察菌落。
四、注意事项
1、转化实验必须在低温中进行，温度波动严重影响转化效 率，所用的试剂均应冰浴，细菌保持在4℃以下；
细菌染色体
含有lacZ基因C端序列
β-半乳糖苷酶缺陷型菌株
生成 有活性的 β-半乳糖苷酶
载体
多克隆位点 LacZ’基因
β-半乳糖苷酶启动子
激活 IPTG
《分生繁殖》课件
按照繁殖材料分类
分生繁殖可以分为有性繁殖和无性繁 殖两种类型。
02 分生繁殖的过程
分生繁殖前的准备
01
02
03
04
确定繁殖时间选择适宜的季节和ຫໍສະໝຸດ 气，确保 温度、湿度等环境条件适宜。
选择繁殖材料
选择健康、无病虫害的母株， 准备好所需的分生繁殖材料。
准备工具和场地
准备好铲子、刀具、盆土等必 要的工具和适宜的种植场地。
分生繁殖时，如果母株带有病虫害 ，子株很可能会继承这些病虫害， 导致整个繁殖群体受到威胁。
资源消耗大
为了获得更多的分株，需要大量的 母株材料，因此对资源的消耗较大 。
如何克服分生繁殖的缺点
选择健康母株
在分生繁殖前，应选择健康的母 株，确保子株的健康状况。
加强病虫害防治
定期对母株和子株进行病虫害检 查和防治，防止病虫害的传播。
分生繁殖在农业中的应用
分生繁殖在农业上主要用于薯类、葱蒜类等植物的繁殖，这些植物通常采用分株法 进行繁殖。
分生繁殖可以快速获得大量植株，并且遗传性状一致，有利于提高产量和品质。
在分生繁殖过程中，需要注意防治病虫害，加强田间管理，确保植株生长良好。
分生繁殖在生物研究中的应用
分生繁殖在生物研究中具有重 要应用，可以用于研究植物的 生长发育规律、遗传变异等。
分生繁殖的特点
分生繁殖是一种低成 本、快速、高效的繁 殖方式，适合于大量 繁殖。
分生繁殖的繁殖材料 易得，操作简单，易 于掌握。
分生繁殖的子代与亲 代遗传性相同，能够 保持亲本的优良性状 。
分生繁殖的分类
按照繁殖方式分类
按照繁殖材料来源分类
分生繁殖可以分为分裂繁殖和分株繁 殖两种类型。
观察根尖分生组织细胞的有丝分裂课件
谢谢您的聆听
THANKS
通过实验，学生能够深入 理解有丝分裂的实质，掌 握有丝分裂过程中染色体、 纺锤体的变化规律。
实验操作过程中，学生学 会了显微镜的使用技巧和 制片技术，提高了实验技能。
对实验的思考和改进建议
9字
实验过程中，部分学生未能 成功观察到某些分裂期细胞， 可能与制片质量、显微镜调 节等因素有关，建议加强实 验前的培训和指导。
9字
为了提高实验效果，可以尝 试采用不同浓度的药物处理 或改变培养条件等方法，促 进根尖分生组织细胞的分裂。
9字
在观察过程中，可以引导学 生更加关注染色体形态、数 目、分布等特征，加深对有 丝分裂过程的理解。
9字
建议在实验结束后增加对实 验结果的分析和讨论环节， 引导学生思考实验中出现的 问题和解决方法，提高实验 效果。
形态。
准备实验材料：显微镜、根 尖分生组织、醋酸洋红染液、
显微操作工具等。
01
用体积分数为70%的酒精冲
洗并保存卡诺氏液固定的材料。
02
03
将处理过的材料放在载玻片 上，用显微镜观察并记录细
胞分裂的不同时期。
04
05
使用醋酸洋红染液对染色体 进行染色，以便更清楚地观
察分裂过程。
02
实验材料和试剂
实验材料
05
参考文献
参考文献 参考文献列表
[2] 王金发. 细胞生物学实 验教程[M]. 北京: 科学出 版社, 2015.
[1] 李雷, 王卫国. 植物学 实验教程[M]. 北京:实验教程[M]. 北京: 科学 出版社, 2014.
[4] 许智宏, 薛红卫. 植物 学研究方法[M]. 北京: 高 等教育出版社, 2010.
分生实验
① 提取的模板核酸中含有杂蛋白质、酚－氯仿、 SDS、乙醇EDTA等抑制了Taq酶活性；
② 模板的浓度过低；
引物：
①选一个好的引物合成单位。
②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，两引物带的亮度应大体一致，如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
②抑制内源性RNase 活性： RNase 抑制剂
RNA分离的关键因素：避免RNA酶的污染。
13.RNA的用途及几种提取otting测序；
③用于RT PCR反应的模版。
4.引物设计的基本原则？
答：引物设计的总原则就是提高引物与模板结合的特异性。
(1)利用PCR钓取同源基因时需要利用基因的保守序列；
(2)长度:特异性序列一般15-18bp.常18-27bp，应≤ 38bp；
(3)碱基分布:嘌呤,嘧啶随机分布;避免出现堆积现象。GC比值为45-55%。3'端和5'端 引物具有相似的Tm值。Tm=4(G+C)+2(A+T)；
不能有连续5个碱基的互补。引物末端一般不达到3bp;
(8)引物间不应存在互补序列:
尤其应避免3'端的互补，以免形成引物二聚体;
(9)比较引物与基因组的同源性:
引物的碱基序列不应与非扩增区域有同源性。与模板之间的特异性结合序列一般不少于15-18bp。
引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。
c.将细胞膜、核膜破坏；对核酸酶有抑制作用;
TE饱和酚:去除蛋白等杂质。酚对蛋白有强烈的变性作用，可使样品中的蛋白质变性，通过离心去除。为防止其对后续实验的影响，一般再用氯仿抽提去除残留的酚;
② 模板的浓度过低；
引物：
①选一个好的引物合成单位。
②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，两引物带的亮度应大体一致，如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。
②抑制内源性RNase 活性： RNase 抑制剂
RNA分离的关键因素：避免RNA酶的污染。
13.RNA的用途及几种提取otting测序；
③用于RT PCR反应的模版。
4.引物设计的基本原则？
答：引物设计的总原则就是提高引物与模板结合的特异性。
(1)利用PCR钓取同源基因时需要利用基因的保守序列；
(2)长度:特异性序列一般15-18bp.常18-27bp，应≤ 38bp；
(3)碱基分布:嘌呤,嘧啶随机分布;避免出现堆积现象。GC比值为45-55%。3'端和5'端 引物具有相似的Tm值。Tm=4(G+C)+2(A+T)；
不能有连续5个碱基的互补。引物末端一般不达到3bp;
(8)引物间不应存在互补序列:
尤其应避免3'端的互补，以免形成引物二聚体;
(9)比较引物与基因组的同源性:
引物的碱基序列不应与非扩增区域有同源性。与模板之间的特异性结合序列一般不少于15-18bp。
引物设计完成以后，应对其进行BLAST检测。如果与其它基因不具有互补性，就可以进行下一步的实验了。
c.将细胞膜、核膜破坏；对核酸酶有抑制作用;
TE饱和酚:去除蛋白等杂质。酚对蛋白有强烈的变性作用，可使样品中的蛋白质变性，通过离心去除。为防止其对后续实验的影响，一般再用氯仿抽提去除残留的酚;
6,1 实验：观察根尖分生组织细胞有丝分裂 课件-高一生物上学期同步课件(人教版必修1)
4.(江苏生物)在完成了观察洋葱根尖分生区细胞有丝分裂实验后， 教师给学生提供了2份资料。 资料一 一份“实验报告”的部分内容 （一）解离：剪取洋葱根尖5cm，放入盛有质量分数为15%的盐 酸和体积分数为95%的酒精混合液（体积比为1:1）的玻璃皿中， 在室温下解离3～5min。 （二）染色：把根尖放在盛有0.01g/mL龙胆紫溶液的玻璃皿中 染色3～5cm。 （三）漂洗：将根尖放入盛有清水的玻璃皿中漂洗约10min。 （四）制片：将根尖放在载玻片上，加一滴清水，并用镊子把根 尖弄碎，盖上载玻片，用拇指轻轻按压载坡片……
③制片时压片力量不合适 ④解离时间不合适
⑤视野选择不合适
A.②③
B.②⑤
C.①②⑤
D.①③④
解析 此实验需找到呈正方形、排列紧密的分生区细胞，该视野
中细胞多呈长方形，可能原因是取材位置不合适、取材时间不恰
当或没有找到分生区。
2.(2019·海南卷，22)若要观察植物细胞有丝分裂中期的染色体。
适宜的材料和染液组合是( A )
镜检结果分析
间期的细胞最多。因为间期时间最长。
每一时期的时间=洋葱的细胞周期(如:12 h) X每一时期的细胞 数占计数细胞总数的比例
间前 期期
中期
后期
末期
前期
中期
后期
末期
(四)绘图
某植物细胞共有2条染色体，请在作业本上绘出其 有丝分裂细胞周期中各时期的示意图？
间期 前期 中期 后期 末期
[思考] 1.解离和染色时间要严格控制的原因是什么？
(1)操作：见教材P116页
(2)目的： _使_细__胞__分__散__(_成__一_层__细__胞_)_，__避__免__细__胞__重__叠_，__便__于观察
园艺植物的繁殖压条分生繁殖组培 ppt课件
优点： 较易生根。 适用于扦插难于生根的树种、品种。
缺点 繁殖系数低。
压条方法
直立压条（垂直压条或培土压条） 曲枝压条 空中压条
直立压条
曲枝压条
适用范围 葡萄、猕猴桃、醋栗、穗状醋栗、树莓、 苹果、梨和樱桃等果树以及丁香等观赏树木。
时间：春季萌芽前进行，或生长季节枝条己半木质 化时进行。
仙 客 来
仙客来
仙客来
菊芋
2. 变态根的繁殖
块根（tuberous roots）由不定根（营养繁 殖的植株）或侧根经过增粗生长而形成的肉质 贮藏根。
即可用整个块根如大丽花的繁殖，也可将块根 切块繁殖。
压条繁殖
压条（layerage）繁殖——是在枝条 不与母株分离的情况下，将枝梢部分埋 于土中，或包裹在能发根的基质中，促 进枝梢生根，然后再与母株分离成独立 植株的繁殖方法。
在解剖镜下剖取茎尖，去掉叶原基，露出生长点，通 常切下顶端0.1-0.2mm（一两个叶原基）长的部分 作培养材料。如果是脱毒，则茎尖要尽量小。
培养方法和程序
2、接种与继代培养 多数茎尖培养均用MS培养基，或修改，
或补加其它物质。常用的培养基还有 White，Heller，Gautheret等。
▪ 叶腋中有腋芽，由此发育为地上枝，并产生不定 根。
▪ 一般于春季发芽之前进行分植。
▪ 莲、毒尾、美人蕉、香蒲、紫苑等多用此法繁殖
虎 尾 兰
(8)块茎(tuber)
繁殖方法有整个块茎繁殖如山药、秋海 棠的小块茎，可于秋季采下，贮藏到第 2年春季种植。亦可将块茎分割繁殖。
如仙客来、马铃薯、菊芋等。
1、组织培养的类型与应用
按其外植体来源及特性不同，植物组织培养可分为7种:
分生实验
注意： RNA沉淀的溶解一定要耐心充分，一 定要用加样器反复多次吹打方可。但由于溶液 体积非常小，要避免出现气泡影响RNA的溶解。 判断溶解程度： 吹打时液体流动不拐弯 避免气泡的方法： a. 用加样器的第一挡 b. 每次吹打都不要打出气体
13)吸出9 l RNA ,放到冰上备用（将用于RT-PCR）. 剩余4.5l RNA,放到冰上备用 (将用于电泳).
RNA电泳结果分析
分析本次实验结果：28S、 18S和5S的比例。
上午实验结束， 下午1：30上课。
实 验 内 容
2、RNA的变性琼脂糖凝胶电泳 3、以总RNA为模板的逆转录反应 4、PCR
5、PCR产物的电泳及回收
RNA提取的注意事项
RNA酶：a. 广泛存在—灰尘、人体唾液、实验器材表面。 b. 生物活性非常稳定—耐热、耐酸、耐碱。
1、 尽量避免外源性RNase 污染
A. 操作环境空气洁净（带手套、口罩） B. 用新开封的化学试剂（试剂应该专用） C. 一次性塑料器材最好是新开封， (DEPC水处理后）高压灭菌。 D. 玻璃器材、水都应该经过去RNase 处理。 对玻璃器材还应该进行高温烘烤。 2、抑制内源性RNase 活性： RNase 抑制剂。
一、小鼠肝脏组织RNA提取的实验操作
5) 加入200 l氯仿， 震荡混匀20-30s， 室温放置5 min 此期间液体开始分层， 不要轻易搅动液体
Protein 注意！
RNA (清澈透明) DNA
６)
10000rpm 离心 5min。
7)
将清澈透明的上层水相转移至另一离心管中。
沉淀 RNA
8) 加0.5ml异丙醇，上下颠倒混匀，室温10 min。 10, 000rpm，4C，离心10 min．弃上清。 9) 加1ml 75%乙醇洗涤管壁。
13)吸出9 l RNA ,放到冰上备用（将用于RT-PCR）. 剩余4.5l RNA,放到冰上备用 (将用于电泳).
RNA电泳结果分析
分析本次实验结果：28S、 18S和5S的比例。
上午实验结束， 下午1：30上课。
实 验 内 容
2、RNA的变性琼脂糖凝胶电泳 3、以总RNA为模板的逆转录反应 4、PCR
5、PCR产物的电泳及回收
RNA提取的注意事项
RNA酶：a. 广泛存在—灰尘、人体唾液、实验器材表面。 b. 生物活性非常稳定—耐热、耐酸、耐碱。
1、 尽量避免外源性RNase 污染
A. 操作环境空气洁净（带手套、口罩） B. 用新开封的化学试剂（试剂应该专用） C. 一次性塑料器材最好是新开封， (DEPC水处理后）高压灭菌。 D. 玻璃器材、水都应该经过去RNase 处理。 对玻璃器材还应该进行高温烘烤。 2、抑制内源性RNase 活性： RNase 抑制剂。
一、小鼠肝脏组织RNA提取的实验操作
5) 加入200 l氯仿， 震荡混匀20-30s， 室温放置5 min 此期间液体开始分层， 不要轻易搅动液体
Protein 注意！
RNA (清澈透明) DNA
６)
10000rpm 离心 5min。
7)
将清澈透明的上层水相转移至另一离心管中。
沉淀 RNA
8) 加0.5ml异丙醇，上下颠倒混匀，室温10 min。 10, 000rpm，4C，离心10 min．弃上清。 9) 加1ml 75%乙醇洗涤管壁。
实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂 ppt课件
①培养根尖：应每天换水 (防止水中缺氧烂根) 实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
解离
②取材： 取生长旺 盛、带有 分生区的 根尖，长 度为根尖 的2-3mm。
③解离：解离液（15%盐酸∶95%酒精溶液＝1∶1）； 时间：室温3-5分钟，至根尖酥软；
目的：使组织细胞分实离验观开察根，尖分生杀组织死细胞并的有丝固分裂定细胞
漂 洗
④漂洗：用清水漂洗10min，目的是洗去组织中的解 离液，便于实染验观察色根尖(分防生组织止细胞酸的有碱丝分裂中和)。
染 色
⑤染色：染液（0.01g/mL的龙胆紫或0.02g/mL的醋酸洋 红）;时间为3－5分钟；目的是使染色体或染色质被碱性 染料染成深色，便于观察。 实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
实验：观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
Ⅰ、实验原理
根尖、茎尖的分生区、茎形成层、可观察到有 丝分裂。 染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液）着色
Ⅱ、方法步骤 （1）根尖培养 （2）装片制作：解离→漂洗→染色→制片 （3）观察：低倍镜观察 →高倍镜观察 （4）绘图：
实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
根 尖 的 培 养
制 片
⑥压片：目的是使细胞分散开。方法（用镊子弄碎 根尖，盖上盖玻片，再放上一块载玻片，压片） （压片过重过猛可能将组织压碎、压烂；过轻则细 胞未充分分散开而重叠。） 实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
⑦低倍镜观察：找到分生区细胞（特点：细 胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂）
⑧高倍镜观察：找各时期细胞。可见处于间 期的细胞最多，中期最少。不能看到某个细 胞连续分裂的过程，因细胞在解离时已被杀 死。
实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
实验观经过解离、漂洗、染色、 制片过程，制成临时装片，放在显微镜下观察。欲 观察到细胞有丝分裂的前、中、后、末几个时期
解离
②取材： 取生长旺 盛、带有 分生区的 根尖，长 度为根尖 的2-3mm。
③解离：解离液（15%盐酸∶95%酒精溶液＝1∶1）； 时间：室温3-5分钟，至根尖酥软；
目的：使组织细胞分实离验观开察根，尖分生杀组织死细胞并的有丝固分裂定细胞
漂 洗
④漂洗：用清水漂洗10min，目的是洗去组织中的解 离液，便于实染验观察色根尖(分防生组织止细胞酸的有碱丝分裂中和)。
染 色
⑤染色：染液（0.01g/mL的龙胆紫或0.02g/mL的醋酸洋 红）;时间为3－5分钟；目的是使染色体或染色质被碱性 染料染成深色，便于观察。 实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
实验：观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
Ⅰ、实验原理
根尖、茎尖的分生区、茎形成层、可观察到有 丝分裂。 染色体容易被碱性染料（如龙胆紫溶液）着色
Ⅱ、方法步骤 （1）根尖培养 （2）装片制作：解离→漂洗→染色→制片 （3）观察：低倍镜观察 →高倍镜观察 （4）绘图：
实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
根 尖 的 培 养
制 片
⑥压片：目的是使细胞分散开。方法（用镊子弄碎 根尖，盖上盖玻片，再放上一块载玻片，压片） （压片过重过猛可能将组织压碎、压烂；过轻则细 胞未充分分散开而重叠。） 实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
⑦低倍镜观察：找到分生区细胞（特点：细 胞呈正方形，排列紧密，有的细胞正在分裂）
⑧高倍镜观察：找各时期细胞。可见处于间 期的细胞最多，中期最少。不能看到某个细 胞连续分裂的过程，因细胞在解离时已被杀 死。
实验观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
实验观经过解离、漂洗、染色、 制片过程，制成临时装片，放在显微镜下观察。欲 观察到细胞有丝分裂的前、中、后、末几个时期
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例
第一轮筛选
第二轮筛一定条 件下所表达的全部mRNA经逆转录而合成的 cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形 式贮存着该组织细胞的基因表达信息。
第四节
生物芯片技术
Biological Chip Technique
• RT-PCR是目前从组织或细胞中获得目的基因 以及对已知序列的RNA进行定性及半定量分 析的最有效方法。
（二）原位PCR技术
• 原位PCR(in situ PCR)是在组织切片或细胞涂片 上的单个细胞内进行的PCR反应，然后用特异 性 探 针 进 行 原 位 杂 交 ， 即 可 检 出 待 测 DNA 或 RNA是否在该组织或细胞中存在。
（二）基因突变
利用PCR技术可以随意设计引物在体 外对目的基因片段进行嵌和、缺失、点突 变等改造。
（三）DNA和RNA的微量分析
PCR 技 术 高 度 敏 感 ， 对 模 板 DNA 的 量要求很低，是DNA和RNA微量分析的 最好方法。
（四）DNA序列测定
将PCR技术引入DNA序列测定，使测序 工作大为简化，也提高了测序的速度；
二、印迹技术的类别及应用
（一）DNA印迹 (Southern blotting)
用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。
（二）RNA印迹 (Northern blotting)
用于RNA的定性定量分析。
（三）蛋白质的印迹 (Western blotting)
用于蛋白质性定量及相互作用研究。
其他： 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip)
一、分子杂交与印迹技术的原理
核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链
分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。
三 种 印 迹 技 术 的
比 较
② ③ ①
分子杂交实验
放 射 自 显 影 照 片
DNA芯片 技术
第二节
PCR技术的原理与应用
The Principle and Application of PCR Technology
一、PCR技术的工作原理
Template DNA
5
5
5
Cycle 1
Primer 1 5 Primer 2
5 5
5 5
5 5
5 5
Cycle 2
5 5
5 5
5 5
5 5
Cycle 3
5
5
5
5
5
5
5
5
5 5
5 5
25～30 次循环后，模板DNA的含量 可以扩大100万倍以上。
PCR技术原理示意图
PCR的基本反应步骤
变性 95˚C
延伸 72˚C
退火 Tm-5˚C
PCR体系基本组成成分
• 模板DNA • 特异性引物 • 耐热DNA聚合酶 • dNTPs • Mg2+
的克隆群体。• 基因组DNA (genomic DNA librar的编码区和非编码区）以DNA 片段形。
一、基因芯片
基因芯片(gene chip)
是指将许多特定的DNA片段有规律地紧密排 列固定于单位面积的支持物上，然后与待测的荧 光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等 对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一位点的 荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出 定性和定量的结果。该技术亦被称作DNA微阵列 (DNA microarray)。
• 原位PCR方法弥补了PCR技术和原位杂交技术 的不足，是将目的基因的扩增与定位相结合的 一种最佳方法。
（三）实时PCR技术
实时PCR(real-time PCR)技术通过动态 监测反应过程中的产物量，消除了产物堆积 对定量分析的干扰，亦被称为定量PCR。
实时PCR技术原理
荧光标记引物
3'
上游 5' 引物
R
Q
R
Q
3'
5'
5' 下游 3' 引物
5' 3'
实时PCR分类：
非探针类
实时PRC
探针类
1. TaqMan探针法 2. 分子信标探针法 3. FRET探针法
图20-3 TaqMan探针法实时P含了某一生物体全部DNA序列
待测DNA片段既可克隆到特定的载体后 进行序列测定，也可直接测定。
（五）基因突变分析
PCR与其他技术的结合可以大大提高基 因突变检测的敏感性 。
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术
• 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RTPCR)是将RNA的逆转录反应和PCR反应联合 应用的一种技术。
常用分子生物学技术的 原理及应用
The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology
第一节
分子杂交与印迹技术
Molecular Hybridization and Blotting Technique
二、PCR技术的主要用途
（一）目的基因的克隆
• 利用特异性引物以cDNA或基因组DNA为模板获 得已知目的基因片段, 或与逆转录反应相结合，直 接以组织和细胞的mRNA为模板获得目的• 利用随机引物从cDNA或基因组中克隆 基因。复性
RNA
DNA
（一）印迹技术
利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因 此称之为“blotting”，译为印迹技术。
（二）探针技术
用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 “探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷 酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。
第一轮筛选
第二轮筛一定条 件下所表达的全部mRNA经逆转录而合成的 cDNA序列的克隆群体，它以cDNA片段的形 式贮存着该组织细胞的基因表达信息。
第四节
生物芯片技术
Biological Chip Technique
• RT-PCR是目前从组织或细胞中获得目的基因 以及对已知序列的RNA进行定性及半定量分 析的最有效方法。
（二）原位PCR技术
• 原位PCR(in situ PCR)是在组织切片或细胞涂片 上的单个细胞内进行的PCR反应，然后用特异 性 探 针 进 行 原 位 杂 交 ， 即 可 检 出 待 测 DNA 或 RNA是否在该组织或细胞中存在。
（二）基因突变
利用PCR技术可以随意设计引物在体 外对目的基因片段进行嵌和、缺失、点突 变等改造。
（三）DNA和RNA的微量分析
PCR 技 术 高 度 敏 感 ， 对 模 板 DNA 的 量要求很低，是DNA和RNA微量分析的 最好方法。
（四）DNA序列测定
将PCR技术引入DNA序列测定，使测序 工作大为简化，也提高了测序的速度；
二、印迹技术的类别及应用
（一）DNA印迹 (Southern blotting)
用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。
（二）RNA印迹 (Northern blotting)
用于RNA的定性定量分析。
（三）蛋白质的印迹 (Western blotting)
用于蛋白质性定量及相互作用研究。
其他： 斑点印迹 (dot blotting) 原位杂交 (in situ hybridization) DNA点阵 (DNA array) DNA芯片技术 (DNA chip)
一、分子杂交与印迹技术的原理
核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链
分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。
三 种 印 迹 技 术 的
比 较
② ③ ①
分子杂交实验
放 射 自 显 影 照 片
DNA芯片 技术
第二节
PCR技术的原理与应用
The Principle and Application of PCR Technology
一、PCR技术的工作原理
Template DNA
5
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5
Cycle 1
Primer 1 5 Primer 2
5 5
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Cycle 2
5 5
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Cycle 3
5
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5 5
5 5
25～30 次循环后，模板DNA的含量 可以扩大100万倍以上。
PCR技术原理示意图
PCR的基本反应步骤
变性 95˚C
延伸 72˚C
退火 Tm-5˚C
PCR体系基本组成成分
• 模板DNA • 特异性引物 • 耐热DNA聚合酶 • dNTPs • Mg2+
的克隆群体。• 基因组DNA (genomic DNA librar的编码区和非编码区）以DNA 片段形。
一、基因芯片
基因芯片(gene chip)
是指将许多特定的DNA片段有规律地紧密排 列固定于单位面积的支持物上，然后与待测的荧 光标记样品进行杂交，杂交后用荧光检测系统等 对芯片进行扫描，通过计算机系统对每一位点的 荧光信号做出检测、比较和分析，从而迅速得出 定性和定量的结果。该技术亦被称作DNA微阵列 (DNA microarray)。
• 原位PCR方法弥补了PCR技术和原位杂交技术 的不足，是将目的基因的扩增与定位相结合的 一种最佳方法。
（三）实时PCR技术
实时PCR(real-time PCR)技术通过动态 监测反应过程中的产物量，消除了产物堆积 对定量分析的干扰，亦被称为定量PCR。
实时PCR技术原理
荧光标记引物
3'
上游 5' 引物
R
Q
R
Q
3'
5'
5' 下游 3' 引物
5' 3'
实时PCR分类：
非探针类
实时PRC
探针类
1. TaqMan探针法 2. 分子信标探针法 3. FRET探针法
图20-3 TaqMan探针法实时P含了某一生物体全部DNA序列
待测DNA片段既可克隆到特定的载体后 进行序列测定，也可直接测定。
（五）基因突变分析
PCR与其他技术的结合可以大大提高基 因突变检测的敏感性 。
三、几种重要的PCR衍生技术
（一）逆转录PCR技术
• 逆转录PCR(reverse transcription PCR，RTPCR)是将RNA的逆转录反应和PCR反应联合 应用的一种技术。
常用分子生物学技术的 原理及应用
The Principle and Application of Common Used Techniques in Molecular Biology
第一节
分子杂交与印迹技术
Molecular Hybridization and Blotting Technique
二、PCR技术的主要用途
（一）目的基因的克隆
• 利用特异性引物以cDNA或基因组DNA为模板获 得已知目的基因片段, 或与逆转录反应相结合，直 接以组织和细胞的mRNA为模板获得目的• 利用随机引物从cDNA或基因组中克隆 基因。复性
RNA
DNA
（一）印迹技术
利用各种物理方法使电泳胶中的生物大分子 转移到NC等各种膜上，使之成为固相化分子。 这一技术类似于用吸墨纸吸收纸张上的墨迹，因 此称之为“blotting”，译为印迹技术。
（二）探针技术
用放射性核素、生物素或荧光染料标记其 末端或全链的已知序列的多聚核苷酸链被称为 “探针”，探针可以与固定在NC膜上的核苷 酸结合，判断是否有同源的核酸分子存在。