呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
线粒体呼吸链复合物 氧化应激
线粒体呼吸链复合物氧化应激线粒体是细胞内的细胞器，主要作用是产生细胞的能量。
线粒体内的呼吸链复合物是能量产生的重要组成部分。
然而，在生物体内，线粒体上的氧化应激现象是不可避免的，即线粒体呼吸链复合物的功能遭受到破坏，这种现象在某些情况下可导致疾病的产生。
下面就线粒体呼吸链复合物及氧化应激进行较为详细的介绍。
线粒体呼吸链是细胞能量产生的主要途径，其过程中存在5个复合物，即复合物Ⅰ至复合物Ⅴ，它们负责氧化葡萄糖、脂肪酸等能量基质，释放电子并产生ATP，供给细胞进行各种生物活动。
其中，复合物Ⅰ和Ⅲ是负责将电子传递到复合物Ⅳ的两个电子传递系统，复合物Ⅱ和Ⅳ各自也是独立的电子传递系统，复合物Ⅴ是ATP合成酶，它根据下落的质子梯度，在质膜上合成ATP并释放能量。
电子传递过程中产生的质子梯度是细胞内能量产生的重要来源，这种梯度驱动复合物Ⅴ上ATP合成酶通过化学步骤合成ATP，供给细胞使用。
复合物内膜上存在多种呼吸链底物，其中氧分子是最终接受电子的分子。
复合物在电子传递中形成的电位差会使质子在复合物内膜间移动，从而形成质子梯度。
梯度的形成和维持，以及ATP产生，是细胞内高能化合物的合成和各种生物活动的推动力。
二、氧化应激由于细胞内合成许多尤其是有毒的代谢产物，例如氢氧离子等，加上环境压力等原因，会导致线粒体呼吸链复合物功能的降低和甚至破坏。
这种情况被称为氧化应激。
氧化应激现象是细胞生理性过程中的一部分。
氧化应激对细胞的影响很大，如寿命缩短、神经退行性疾病的发生等都可能和氧化应激有关。
产生过多的氧化应激会导致细胞内脂质自由基和有毒物质与有效物质之间的平衡失调，这样就会产生一连串的自由基反应，导致线粒体内呼吸链的复合物受到严重损伤，并最终形成INA，导致细胞毁灭。
氧化应激会导致线粒体内呼吸链复合物受到破坏。
具体来讲，氧化应激可以导致线粒体外膜通透性的改变；导致线粒体内膜通透性的改变，从而影响电位差的分布和电子传递链反应的进行；氧化应激会破坏线粒体呼吸链复合物间的相互调节和配合作用，影响其有效率和系统稳定性；氧化应激还会影响复合物Ⅰ和IV的构象变化，从而使其在受到刺激时容易就失去其功能。
线粒体氧化应激机制 解释说明
线粒体氧化应激机制解释说明1. 引言1.1 概述线粒体是细胞中的重要器官，负责产生能量和维持生命活动的平衡。
然而，线粒体在能量生成的过程中会不可避免地产生氧化应激现象，即产生大量活性氧自由基与氮自由基。
这些自由基在高浓度时会对细胞结构和功能造成损伤，从而导致多种疾病的发生。
1.2 文章结构本文将首先介绍线粒体的结构和功能特点，并详细阐述氧化应激的定义及其机制。
接着，我们将探讨线粒体氧化应激机制在各种疾病中的作用和关联，包括心血管疾病、癌症和神经系统疾病。
随后，我们将介绍调控线粒体氧化应激的方法和策略，包括抗氧化剂、运动以及药物干预和营养方面的策略。
最后，通过总结重要性并展望未来的研究方向来结束全文。
1.3 目的本文旨在系统地介绍线粒体氧化应激机制的基本原理，探讨其与不同疾病之间的关系，并总结目前调控线粒体氧化应激的方法和策略。
通过深入探讨这一主题，我们希望能够加深对线粒体氧化应激机制的理解，并为研究人员提供有价值的参考，以便进一步阐明其在疾病发展中的作用，并探索新的治疗策略和预防手段。
2. 线粒体氧化应激机制的基本原理:2.1 线粒体结构和功能:线粒体是细胞中重要的细胞器之一，类似于细胞内的能量工厂，承担着生物化学过程中ATP合成的关键角色。
它具有独特的结构和功能，由内膜、外膜和基质组成。
内膜形成许多褶皱，称为线粒体内襞，增加了表面积以便更多的能量产生。
此外，内外膜间存在间隙空间。
2.2 氧化应激的定义和机制:氧化应激是指在细胞内产生过多活性氧种（ROS）时发生的一种失衡状态。
而ROS是由氧化还原反应生成的高度活性分子，如超氧阴离子（O2-）、羟基自由基（•OH）和过氧化氢（H2O2）。
正常情况下，细胞通过抗氧化系统来清除产生的ROS并维持红ox平衡。
然而，在某些情况下，身体无法有效地抵御ROS 积累而导致氧化应激。
在线粒体中也会发生氧化应激，主要是由于其作为ATP合成的主要地点而产生大量ROS。
细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)
细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细菌氧化应激活性氧高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在细菌氧化条件下，产生荧光，来定量检测细菌活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种实验用细菌菌株氧化应激活性氧的分析。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，滞留持久，荧光清晰。
技术背景细菌作为模式生物，是环境化学毒性研究的常用工具。
活性氧的检测可以用于诸如多环芳烃化合物或重金属的毒性作用以及修复（remediation）的评价指标。
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。
氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。
PH0630 活性氧检测试剂盒实验操作手册 Phygene
PH0630|活性氧检测试剂盒Reactive Oxygen Species Assay KitCatalog No：PH0603Size：☐100~500Tests Store at-20℃活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种基于荧光染料DCFH-DA（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate）的荧光强度变化，定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。
DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。
进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。
而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。
细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。
绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。
在最大激发波长480nm，最大发射波长525nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。
Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。
根据检测体系和检测方法的不同，本试剂盒可测定100~500次。
试剂存储冰袋运输。
-20℃干燥避光保存，有效期一年。
试剂组分编号组分规格保存方法PH0630-A DCFH-DA（10mM）0.1mL-20℃，避光保存PH0630-B活性氧阳性对照（Rosup,100mM） 1.0mL-20℃，避光保存使用说明检测步骤1.装载探针1.1原位装载探针（仅适用于贴壁细胞）①细胞准备：检测前一天进行细胞铺板，确保检测时细胞汇合度达到50~70%。
【注】：必须保证细胞状态健康，且检测时不会过度生长。
②药物诱导：去除细胞培养液，加入适量经合适的缓冲液或无血清培养基稀释到工作浓度的药物，于37℃细胞培养箱内避光孵育，具体诱导时间根据药物本身特性，以及细胞类型来决定。
（可选）阳性对照：先用无血清培养基等稀释阳性对照（Rosup,100mM）到常用工作浓度100μM，加入细胞，一般37℃避光孵育30min-4h 可显著看到活性氧水平提高，但依细胞类型会有比较明显差异。
MPT比色法检测试剂盒说明书
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 GMS10095.3 GMS10095.3A GMS10095.3B GMS10095.3C GMS10095.1 GMS10095.2 GMS10095.2 GMS12226
规格 10/50 次 10/50 次
10 次 50 次 50 次 10 次 100 次 20 次 20 次 10 次
3
GMS10014.1 GMS10014.2 GMS10014.3 GMS10014.4 GMS10014.5 GMS10014.6
GMS10015 GMS10016.1 GMS10016.2 GMS10016.3
吸光值比值降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强
9． 构建膜通道孔诱导开放曲线：纵座标（Y）为吸光值比值（A540/Initial A540），横座标（X）为时间（秒）
注意事项
1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 使用时，避免污染母液，尤其是 GENMED 缓冲液（Reagent A） 4． 线粒体样品中忌用磷酸盐、EDTA、钙镁离子等处理 5． 建议使用未经诱导或抑制处理的样品作为阴性对照 6． 建议孵育完成后，即刻进行检测分析 7． 可以使用 540nm 波长的滤波器或者 440nm 波长的滤波器 8． 可以使用分光光度仪检测，0.2 毫升比色皿替代酶标板 9． 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.8 为理想状态；而 540nm 波长的 0 分钟读数通常 0.2 为理想状态 10．样本测定 1 分钟或其它检测时间读数低于 0 分钟读数表明膜通道孔开放 11．如果膜通道孔为瞬时开放（transient），则吸光读数缓慢降低 12．GENMED 诱导液（Reagent B）含有氯化钙，用户可以使用其它诱导剂替代，例如磷酸盐，二氧化钾
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
索莱宝 BC0515 线粒体呼吸链复合体Ⅰ NADH-CoQ 还原酶活性检测试剂盒说明书
微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0515规格：100T/96S溶液的配制：1、 试剂二：临用前取一支加入1 mL 丙酮，充分溶解，2-8℃可保存1个月（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；2、 试剂三：临用前加入0.1mL 丙酮，丙酮易挥发，使用完毕后注意封口，-20℃可保存2个月；3、 试剂三工作液：临用前根据用量将试剂三：丙酮=5μL ：0.5mL （约50T ）混合备用，现用现配；4、 试剂四：临用前取一支加入1.6mL 蒸馏水（约100T ），充分溶解，-20℃可保存1个月，避免反复冻融（1瓶粉剂即可做100T ，为延长试剂盒使用时间，故此产品多给一支）；5、 工作液的配制：根据用量将丙酮：试剂二：试剂三工作液=250μL ：250μL ：500μL （约50T ）混合备用，现配现用。
产品说明：复合体Ⅰ（EC 1.6.5.3）又称NADH-CoQ 还原酶或NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。
该酶催化一对电子从NADH 传递给CoQ ，同时可使O 2还原生成O 2-，是呼吸电子传递链上产生O 2-的主要部位。
测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC ）状态，而且可以反映活性氧（ROS ）生成状态。
复合体Ⅰ能够催化NADH 脱氢生成NAD +，在340nm 下测定NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量石英比色皿/ 96孔UV 板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、丙酮、冰和蒸馏水。
NAD + + CoQH 2 NADH （340nm ） + H + + CoQ Mitochondrial Complex I操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液一，用匀浆器或研钵于冰上快速匀浆（约30次）。
纯化线粒体呼吸控制率RCR定量检测试剂盒说明书
植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒
活体细胞线粒体跟踪试剂盒 活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒
全血线粒体 DNA 萃取试剂盒 纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒 动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒 植物线粒体 DNA 萃取试剂盒 动物硬组织线粒体 DNA 萃取试剂盒 非突触体脑组织线粒体分离试剂盒 植物线粒体粗提分离试剂盒 植物活性线粒体分离试剂盒 植物高质纯化线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒 真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒 真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒 细胞 ATP 生物发光法定量检测试剂盒 纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒 动物血小板线粒体粗提分离试剂盒 动物血小板活性线粒体分离试剂盒 动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒 动物全血线粒体粗提分离试剂盒 动物全血活性线粒体分离试剂盒 动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 线粒体超氧化物歧化酶（Mn/Fe SOD）分离试剂盒 超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒 纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒 全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒
技术背景
线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。线粒体结构完 整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其 耗氧率大，为III态呼吸。ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。 呼 吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP） 的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
细胞线粒体分离试剂盒经验
细胞线粒体分离试剂盒经验
细胞线粒体分离试剂盒是用于分离纯化细胞线粒体的实验试剂盒。
在使用过程中，以下是一些经验：
1. 选择合适的细胞类型和细胞数量：不同细胞类型和数量可能需要不同的试剂浓度和处理时间，因此在开始实验前，需要根据实验目的和细胞类型确定合适的细胞数量。
2. 严格按照使用说明书进行操作：细胞线粒体分离试剂盒通常会提供详细的使用说明书，包括试剂的准备、离心条件、洗涤等步骤。
在操作过程中，要严格按照说明书的步骤进行操作，避免产生误差。
3. 细胞裂解条件的优化：细胞裂解是线粒体分离过程中的关键步骤。
在进行裂解之前，需要优化裂解缓冲液的浓度和温度，以确保细胞裂解充分并保持线粒体的完整性。
4. 离心条件的调整：离心是用于分离细胞线粒体的重要步骤。
在使用过程中，可以根据细胞类型调整离心条件，包括离心速度和离心时间，以获得最佳的线粒体分离效果。
5. 线粒体纯度的验证：在线粒体分离后，可以通过测定线粒体特异性标记物（如线粒体内膜蛋白等）的存在来验证线粒体的纯度。
如果发现其他细胞组分的污染，可以尝试调整试剂盒中的处理步骤，以提高线粒体纯化效果。
总的来说，合理选择细胞类型和数量，严格按照试剂盒的使用
说明进行操作，调整裂解和离心条件，并验证线粒体的纯度，可以获得较好的细胞线粒体分离效果。
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
线粒体呼吸链复合物I活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂，通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适合于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。
其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。
产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。
技术背景线粒体呼吸链复合物I，通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide coenzyme Q reductase；NADH-CoQ reductase），又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase；NADH dehydrogenase），是线粒体电子传递链中最大的结构成分：含有30至40多个多肽结构。
其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH－辅酶Q还原酶（NADH:Q Reductase）。
复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体（泛醌；ubiquinone）的能量转移反应，为整个呼吸链反应系统的第一步。
基于辅酶Q底物，在鱼藤酮存在与否的情况下，通过NADH－辅酶Q还原酶的催化，转化成还原型泛醌（CoQH2），同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），在分光光度仪下产生吸收峰值的变化（340nm 波长），由此定量测定NADH －辅酶Q还原酶的特异活性。
GENMED活体细胞线粒体损伤 氧化荧光测定试剂盒 产品说明书(中文版)
GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS10017.1 v.A GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途GENMED活体细胞线粒体损伤/氧化荧光测定试剂是一种旨在通过特异性染色剂分析线粒体膜心磷脂的变化来定性或定量测定线粒体内含质量以及自由基、氧化物等对细胞线粒体的毒性与损伤作用的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景心磷脂（Cardiolipin）是线粒体膜上的主要成分之一。
它对细胞氧化特别敏感。
线粒体脂类分解，致使心磷脂显著减少，最终造成线粒体的严重损害。
Nonyl-Acrydine Orange是一种可自由通过细胞膜的染色剂，特异性地染色线粒体上的心磷脂，并发出荧光。
一旦线粒体膜质量减少或受到损害以及被氧化，其荧光显著减弱。
产品内容GENMED清理液（Reagent A）毫升GENMED染色液（Reagent B）微升GENMED稀释液（Reagent C）毫升GENMED保存液（Reagent D） 毫升产品说明书 1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，避免光照，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMS12052）：用于细胞操作所需的培养基毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器毫升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析比色杯：用于细胞荧光分析的容器荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或酶标仪：用于细胞荧光定量分析实验步骤一、 脱离或悬浮细胞分析实验开始前，将 ℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，GENMED稀释液（Reagent C）放进 ℃恒温水槽里预热。
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说
植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物细胞氧化应激活性氧羟自由基原位荧光染色试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂羟苯基荧光素，与细胞内羟自由基的反应，产生绿色荧光，来测定细胞内羟自由基活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢等的研究。
其适用于各种新鲜植物组织（例如根尖、叶片等）和培养细胞等细胞内氧化应激活性氧羟自由基的分析。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定，荧光清晰。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。
其中羟自由基或氢氧基具有极度反应性和毒性，同时半衰期短（10－9至10－10秒）。
其产生主要是水分子受到高能量放射后裂解、过氧化物和次氯酸反应、过氧化氢的还原、超氧化物的歧化等形成。
在植物组织中，羟自由基将启动放射性诱导损伤、攻击植物蛋白和膜脂而引起氧化损伤。
羟苯基荧光素（Hydroxyphenyl fluorescein；2-[6-(4’-Hydroxy)phenoxy-3H-xanthen-3-on-9-yl]benzoic acid；HPF）是一种完全自由通过细胞膜的染色剂，一旦与羟自由基反应，产生脱苄基（o-dearylation）作用，生成强烈荧光的荧光素（fluorescein）。
线粒体功能检测指标
线粒体功能检测指标
线粒体是细胞内的一种细胞质器，负责细胞内的能量转换和调节细胞的代谢。
线粒体功能检测可以反映线粒体的健康状况，通常包括以下指标：
呼吸链酶活性：线粒体的能量转换主要依赖于呼吸链酶的作用，呼吸链酶活性可以反映线粒体的能量代谢状况。
线粒体膜电位：线粒体膜电位是线粒体内外电位差的大小，是维持线粒体功能的关键指标，可以反映线粒体内部环境的稳定性。
线粒体DNA含量：线粒体内含有独立的线粒体DNA，线粒体DNA含量可以反映线粒体数量的多少，进而反映线粒体功能状态。
活性氧水平：线粒体功能异常会导致产生过量的活性氧，活性氧水平可以反映线粒体的氧化应激状态。
ATP水平：ATP是细胞内的能量分子，线粒体是合成ATP的主要场所，ATP水平可以反映线粒体的能量代谢状态。
综上所述，线粒体功能检测指标多种多样，反映了线粒体不同方面的功能状态，可以用于评估细胞代谢和能量转换的正常性，同时也可以为研究线粒体相关疾病提供重要的参考依据。
线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)
线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)简介：线粒体(Mitochondria)是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。
制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体,跨膜蛋白承担各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。
Leagene线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)检测原理是ATP(Adenosinetr -iphosphatase，ATPase)可催化ATP水解生成ADP及无机磷，这一反应释放出大量能量以供需能生命过程，存在于细胞质膜、叶绿体类囊体及线粒体膜，50T试剂盒是指可以检测约50个样本或100次反应。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、液氮2、研钵或匀浆器3、离心管4、水浴锅5、比色杯6、分光光度计编号名称TE054350TStorage试剂(A): MP裂解液250ml 4℃试剂(B): 蛋白酶抑制剂混合液(100×) 2.5ml -20℃避光试剂(C): PMSF(100mM) 5ml -20℃试剂(D): 蛋白标准(1mg/ml) 1ml -20℃试剂(E): G250染色液50ml 4℃避光试剂(F): H+-ATP Assay buffer 60ml 4℃避光试剂(G): H+-ATP启动剂6ml -20℃试剂(J): 二硝基酚指示剂10ml RT 避光试剂(K): 碱性基液25ml RT试剂(L): H+-ATP显色液60ml 4℃避光说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、配制线粒体膜蛋白提取液：取适量的MP裂解液、蛋白酶抑制剂混合液(100×)、PMSF(100mM)置于室温溶解混匀，按MP裂解液：蛋白酶抑制剂混合液(100×)：PMSF(100mM)=。
线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)
线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)简介：线粒体(Mitochondria)是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进行的氧化所产生的能量来供应。
制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分离法获得，即先低俗出去细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体,跨膜蛋白承担各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。
Leagene线粒体膜H+-ATP酶检测试剂盒(ATP比色法)检测原理是ATP(Adenosinetr -iphosphatase，ATPase)可催化ATP水解生成ADP及无机磷，这一反应释放出大量能量以供需能生命过程，存在于细胞质膜、叶绿体类囊体及线粒体膜，50T试剂盒是指可以检测约50个样本或100次反应。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、液氮2、研钵或匀浆器3、离心管4、水浴锅5、比色杯6、分光光度计编号名称TE054350TStorage试剂(A): MP裂解液250ml 4℃试剂(B): 蛋白酶抑制剂混合液(100×) 2.5ml -20℃避光试剂(C): PMSF(100mM) 5ml -20℃试剂(D): 蛋白标准(1mg/ml) 1ml -20℃试剂(E): G250染色液50ml 4℃避光试剂(F): H+-ATP Assay buffer 60ml 4℃避光试剂(G): H+-ATP启动剂6ml -20℃试剂(J): 二硝基酚指示剂10ml RT 避光试剂(K): 碱性基液25ml RT试剂(L): H+-ATP显色液60ml 4℃避光说明书1份操作步骤(仅供参考)：1、配制线粒体膜蛋白提取液：取适量的MP裂解液、蛋白酶抑制剂混合液(100×)、PMSF(100mM)置于室温溶解混匀，按MP裂解液：蛋白酶抑制剂混合液(100×)：PMSF(100mM)=。
活性氧_精品文档
活性氧活性氧是一种高度反应性的氧化物，包括氧自由基和过氧化物自由基。
它们在正常代谢过程中产生，并且在维持生命中具有重要作用。
但是，当活性氧的产生量超过细胞能够承受时，就会导致氧化应激，这可能对细胞和组织造成损害。
氧是生命中不可或缺的元素，在呼吸过程中扮演着重要角色。
然而，氧也有一些负面影响，主要体现在其高度反应性的性质上。
在正常代谢过程中，氧自由基会形成，这是由于氧气发生还原反应而产生的。
氧自由基是不稳定的，具有未配对电子，极易与其他分子发生反应。
活性氧可以通过多种途径产生，其中包括线粒体呼吸链、细胞色素P450酶、氧化还原反应等。
一旦活性氧生成，它们会与细胞内的生物大分子（如DNA、蛋白质和脂类）发生反应，导致损伤。
这种损伤被称为氧化应激，它在多种疾病的发生和发展中起着重要作用，如心血管疾病、癌症、糖尿病和神经退行性疾病等。
活性氧的产生还受到多种因素的影响，包括环境因素、生活方式和遗传因素。
环境因素包括吸烟、辐射、污染物等，这些都可以增加活性氧的产生。
生活方式方面，不良的饮食习惯、缺乏运动、压力等都可能导致氧化应激。
此外，个体的遗传背景也可以影响活性氧的产生和清除。
为了应对氧化应激，细胞和组织有多种防御机制。
首先，细胞内存在多种抗氧化酶和分子，如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、维生素C和维生素E等。
它们可以中和活性氧，减少其对细胞的损伤。
其次，一些食物和草药中含有丰富的抗氧化物，如多酚类化合物、类黄酮和硫化合物等，可以通过饮食来摄取。
此外，一些治疗方法，如抗氧化剂的使用、体育锻炼等也可以帮助减少氧化应激的程度。
尽管活性氧可以对细胞和组织造成损伤，但它们在合适的量下也是必需的。
活性氧在正常代谢过程中参与多种细胞信号传导和生理功能调节，例如免疫反应、细胞增殖和凋亡等。
因此，关键是保持适当的平衡。
当活性氧的产生量超过清除量时，就会导致氧化应激，对细胞和组织产生负面影响。
总结起来，活性氧是一类高度反应性的氧化物，包括氧自由基和过氧化物自由基。
线粒体呼吸链复合体活性检测相关研究
线粒体呼吸链复合体活性检测相关研究⼀、线粒体呼吸链简介：线粒体呼吸链，在⽣物细胞中，接受代谢物上脱下的氢（或电⼦）的载体有三种—— NAD+、NADP+和FAD。
其中NADPH不进⼊呼吸链合成ATP，⽽是作为⽣物合成的还原剂；只有NADH和FADH2进⼊呼吸链。
⼆、线粒体呼吸链传递体顺序呼吸链中的电⼦传递有着严格的⽅向和顺序，即电⼦从氧化还原电位较低的传递体依次通过氧化还原电位较⾼的传递体逐步流向氧分⼦递氢体与电化学梯度的建⽴。
三、线粒体呼吸链复合体呼吸作⽤是⽣物体内zui基础的能量代谢活动之⼀，是由位于线粒体内膜上的四种呼吸链蛋⽩复合物分步完成的，这四种蛋⽩复合物分别为复合物 I（NADH 脱氢酶）、复合物 II（琥珀酸-辅酶 Q 还原酶）、复合物 III（细胞⾊素 c 还原酶）和复合物 IV（细胞⾊素 c 氧化酶）。
四、线粒体呼吸链复合体的⽣物学意义据统计，约有30-40%线粒体病是由于线粒体呼吸链酶复合体缺陷所致，通常采⽤线粒体基因组分析与线粒体呼吸链酶活性检测相结合的⽅式予以确诊。
帕⾦森病（Parkinson’s disease, PD）、亨廷顿舞蹈病（Huntington's disease，HD）等神经退⾏性疾病的线粒体功能障碍和能量代谢异常已成为当今共识的早期病理现象, Cardellach研究表明PD患者线粒体复合体I、IV酶活性功能受损； Lambert MP研究证明线粒体机能障碍在HD发病机制中扮演着重要⾓⾊，其线粒体复合体II酶活性丢失，铁硫中⼼和FAD两个亚基表达降低。
线粒体呼吸链复合体I/II/III/IV/V的结构和功能已被⼴泛研究。
⽬前临床上以营养⽀持对症治疗复合体缺陷或酶活性异常，从⽽改善患者症状及延缓病情发展，然⽽其确切的发病机制和特异性治疗⽅法仍亟待解决。
五、电⼦传递链相关研究⼯具CheKine™线粒体呼吸链复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测试剂盒（⽐⾊法）提供了⼀种更细致准确的复合体Ⅰ-Ⅴ活性检测⽅法，可以兼容检测多种类型的样本。
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1． 本产品为 20 次操作 2． 操作时，须戴手套 3． 孵育时，须避免光照 4． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析 5． 本公司提供膜电位依赖性活性氧检测试剂产品 6． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定 2． 本产品经鉴定荧光清晰
产品内容
缓冲液（Reagent A） 选择液（Reagent B） 补充液（Reagent C） 染色液（ Reagent D） 产品说明书
毫升 微升 毫升 微升 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent D），严格避免光照； 有：用于染色孵育 （共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光线粒体 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于测定线粒体荧光强度
技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基 （hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷 氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-） 次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等 细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二 氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是 取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种完全 自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧 化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定线粒体活性氧族的浓度。三氟甲氧基苯腙羧基氰化物（carbonyl cyanide 4-trifluoromethoxy henylhydrazone；FCCP）使线粒体膜化学离子梯度消失。
呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧高质荧光测定试剂盒产品说明书 （中文版）
主要用途
呼吸链依赖性纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染 色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，在线粒体氧化条件下，选择性阻止膜电位，所产生的荧光，来定量检 测线粒体内膜电位依赖性活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研 制、成功实验证明的。可以被用于线粒体功能、氧化激发和抑制机理等的研究。产品严格无菌，即到即用， 操作简易，活体检测，性能稳定。
a) 使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）： 1）移取 10 微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片 2）激发波长 490nm，散发波长 530nm―― 绿色荧光增强，表明活性氧族（ROS）含量高
b) 或使用荧光分光光度或荧光酶标仪检测（定量检测）： 1）直接放进荧光酶标仪：激发波长 490nm，散发波长 530nm―― 样品RFU－对照RFU＝实际线粒体RFU：增高，表明活性氧族（ROS）含量高
1
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体， 放进冰槽里融化。然后进行下列操作。
1． 准备 1 个 96 孔板，标记好背景对照孔和待测样品孔 2． 分别加入 xx 微升 缓冲液（Reagent A） 3． 分别加入 xx 微升 选择液（Reagent B） 4． 移取 xx 微升线粒体悬液（总量为 50 微克线粒体蛋白）到 96 孔板的相应待测样品孔里 5． 加入 xx 微升 补充液（Reagent C）到 96 孔板的相应背景对照孔里 6． 分别加入 xx 微升 染色液（Reagent D）到上述孔里 7． 放进 37℃恒温水槽孵育 15 分钟，避免光照 8． 选择下列方式之一进行操作：